三氧化二砷通过毛细血管扩张性共济失调突变和RAD3相关激酶通路上调KG1a细胞UL16结合蛋白1的表达

目的观察三氧化二砷(ATO)对急性髓系白血病细胞KG1a细胞表面NKG2D配体UL16结合蛋白1(ULBP1)表达的影响,探讨其调节ULBP1表达的分子机制。方法常规体外培养KG1a细胞,采用细胞增殖/毒性检测试剂(CCK8)检测不同浓度ATO对KG1a细胞的增殖抑制率;应用实时荧光定量反转录(RT)-PCR方法检测KG1a细胞ULBP1 mRNA表达的影响;流式细胞术检测ATO对KG1a细胞表面ULBP1蛋白表达的影响。加入毛细血管扩张性共济失调突变和RAD3相关激酶(ATM/ATR)抑制剂咖啡因,观察其是否影响ATO对KG1a细胞ULBP1 mRNA及蛋白的表达。采用Western blot法观察ATO对KG1a细胞中CHK1、CHK2蛋白及其磷酸化表达的影响。结果不同浓度(1、2、3、4、5μmol/L)ATO均可抑制KG1a细胞的增殖,呈浓度依赖性,其对KG1a细胞的半数抑制浓度(IC50值)为2.7μmol/L。荧光定量RT-PCR法检测结果示ATO可使KG1a细胞ULBP1 mRNA的相对表达水平升高,ATO在浓度分别为1、2、3、4、5μmol/L时,与未加药组比较,ULBP1 mRNA相对表达水平分别升高至(1.86±0.30)倍、(3.02±0.71)倍、(3.16±0.75)倍、(4.80±0.70)倍、(3.70±0.89)倍,差异均有统计学意义(均P<0.05);与未加药组相比,当ATO浓度分别为1、2、3、4、5μmol/L时,ULBP1蛋白相对表达水平均显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。咖啡因预先处理KG1a细胞2 h再联合ATO共同孵育KG1a细胞24 h,ULBP1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低。在咖啡因浓度为8 mmol/L时,ULBP1 mRNA相对表达水平由不用咖啡因处理组的(9.55±0.38)倍降为(6.36±0.93)倍,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测结果发现,当咖啡因浓度分别为2、4、8 mmol/L时,ULBP1蛋白相对表达水平由不用咖啡因处理组的(3.50±0.08)倍分别降为(2.17±0.07)倍、(2.02±0.06)倍、(1.75±0.06)倍,差异均有统计学意义(均P<0.05)。CHK1和CHK2蛋白相对表达水平均随ATO浓度的升高而降低,而CHK1和CHK2磷酸化蛋白的相对表达水平均随ATO浓度的升高而升高。结论ATO诱导上调KG1a细胞ULBP1 mRNA及蛋白的表达,ATM/ATR-CHK1/CHK2通路可能参与这一过程。

蛋白质体外磷酸化方法的建立

蛋白质的磷酸化与去磷酸化调节方式在细胞信号传递过程中占有极其重要的位置 .建立鉴定蛋白质磷酸化的可靠方法具有重要意义 .毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白 (ataxia telangiectasiamutated ,ATM)是直接感受DNA双链断裂损伤 ,并起始诸多DNA损伤信号反应通路的主开关分子 .电离辐射 (IR)细胞学反应中 ,ATM激酶可通过磷酸化活化 p5 3蛋白 ,原核表达 p5 3融合蛋白 ,免疫沉淀IR活化的野生型ATM蛋白 ,进行蛋白质的体外磷酸化反应 .实验验证了ATM对 p5 3蛋白的磷酸化作用 .这一方法的建立可为研究细胞信号转导途径中蛋白激酶对底物的磷酸化作用及筛查激酶底物提供标准化的技术手段 .

DNA损伤修复相关因子在宫颈癌组织中表达的研究

目的探讨DNA损伤修复相关因子组蛋白H2AX和毛细血管扩张性共济失调突变因子(ataxia telangiectasia mutation,ATM)在宫颈癌组织中的表达水平及诊断意义。方法选取2016年1月~2017年7月我科宫颈癌30例(宫颈癌组),同时选取非宫颈癌18例为对照组,对宫颈癌组和对照组宫颈组织进行HE染色和免疫组化染色,在mRNA水平检测H2AX和ATM的表达情况,以磷酸化抗体检测磷酸化H2AX(γH2AX)与磷酸化ATM(phospho-ataxia telangiectasia mutation,p ATM)水平。结果荧光定量PCR分析宫颈癌组ATM mRNA为2.8546±0.8881,明显高于对照组1.0018±0.4980(t=9.256,P=0.000);宫颈癌组H2AX mRNA为2.4312±0.8224,显著高于对照组0.7896±0.4791(t=8.738,P=0.000)。γH2AX和p ATM主要在细胞核中表达,γH2AX阳性率80.0%(24/30),显著高于对照组11.1%(2/18)(Z=-3.381,P=0.000);宫颈癌组p ATM阳性率83.3%(25/30),显著高于对照组16.7%(3/18)(Z=-4.031,P=0.000)。结论γH2AX和p ATM在宫颈癌中高表达,作为DNA损伤修复因子对宫颈癌的早期诊断有一定的临床意义。

β-紫罗兰酮通过NF-κB途径抑制乳腺癌细胞增殖

目的探讨β-紫罗兰酮(β-Ionone,BI)通过调节核因子-κB(Nuclear factor kappa-B,NF-κB)对乳腺癌细胞增殖过程的抑制作用及其可能的机制。方法采用亚甲基蓝(Methylene blue,MB)法和MTT法测定人乳腺癌BT549细胞和MCF-7细胞活性,孔雀石绿磷酸盐法检测蛋白磷酸酶2A(Protein phosphatase 2A,PP2A)活性、免疫印迹法检测磷酸化P65(p-P65)(s536和s311)、PP2A(A、B和C)和磷酸化共济失调毛细血管扩张突变基因(Phosphorylation-ataxia telangiectasia-mutated gene,p-ATM)(s1981)蛋白水平。结果BI可明显抑制人乳腺癌BT549细胞和MCF-7细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性,差异具有统计学意义(P<0.01)。MCF-7细胞经BI处理后,NF-κB活性被显著抑制,表现为磷酸化P65(s536和s311)的蛋白水平显著降低,PP2A的蛋白水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。此外,BI还显著地降低PP2A抑制剂冈田酸(Okadaic acid,OA)对MCF-7细胞中P65蛋白和ATM蛋白的磷酸化作用。结论该研究表明BI通过抑制NF-κB活性来抑制乳腺癌细胞的增殖,其机制可能是BI通过增加PP2A活性调节NF-κB通路。

DNA损伤修复相关因子在宫颈癌组织中的表达研究

目的探究DNA损伤修复相关因子[毛细血管扩张性共济失调突变因子(pATM)、磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)]在宫颈癌组织中的表达及其诊断意义。方法选取2018年2月至2019年8月于我院就诊的50例宫颈癌患者设置为试验组,另选择同期我院体检健康者50例作为对照组。两组研究对象均进行免疫组化染色,检验pATM、γH2AX的表达情况;通过磷酸化抗体检测手段检测两组研究对象的pATM、γH2AX水平。结果试验组的pATM、γH2AX mRNA的相对表达量明显高于对照组(P<0.05)。试验组pATM、γH2AX的阳性表达率明显高于对照组(P<0.05)。pATM、γH2AX高表达与宫颈癌的临床分期相关(P<0.05),与年龄、病理分化程度、化疗周期无关(P>0.05)。结论DNA损伤修复相关因子pATM、γH2AX在宫颈癌中高表达有利于疾病的的早期诊断和临床分期诊断,具有一定的临床价值。

miRNA-21对结直肠癌耐药细胞ATM/CHK2/CDC25A信号通路的影响

目的 探讨miRNA-21在结直肠癌奥沙利铂(L-OHP)耐药细胞株HCT116/L-OHP中对毛细血管扩张性共济失调突变基因(ATM)/细胞周期检测点激酶(CHK)2/细胞分裂周期素(CDC)25A信号通路的影响。方法 应用细胞转染技术干扰HCT116/L-OHP细胞中miRNA-21的表达,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HCT116/L-OHP中ATM、CHK2、CDC25A和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)2 mRNA表达,Western印迹检测该细胞株中miRNA-21表达变化后ATM、CHK2、CDC25A和CDK2蛋白表达。结果 转染miRNA-21 mimic使miRNA-21表达升高时,ATM、CHK2、CDC25A和CDK2 mRNA和蛋白的表达均随之升高,且与未转染组和阴性转染组相比较差异均具有统计学意义(P<0.05);转染miRNA-21 inhibitor使miRNA-21表达降低时,ATM、CHK2、CDC25A和CDK2 mRNA和蛋白的表达均随之降低,且与未转染组和阴性转染组相比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 在结直肠癌耐药细胞株HCT116/L-OHP中,miRNA-21对ATM/CHK2/CDC25A信号通路有调控作用,抑制miRNA-21的表达可阻断ATM/CHK2/CDC25A信号通路,进而抑制耐药细胞的无限增殖。

卵巢癌相关易感基因的研究进展

目前卵巢癌的治疗主要局限于手术和化疗,由于缺乏早期检测手段和药物敏感性低,复发率、死亡率多年来仍居高不下。因此,开发新的治疗策略至关重要。随着基因检测技术在卵巢癌患者中的广泛应用,研究发现细胞骨髓细胞癌基因、毛细血管扩张性共济失调突变基因、转移相关基因1、乳丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的异常改变可作为促癌或抑癌基因在卵巢癌的发生、发展及耐药中发挥重要作用。现针对上述易感基因在卵巢癌中的作用机制进行综述,为今后卵巢癌基因编辑和基因表达调节技术的应用提供一定的理论依据。

在DNA损伤修复信号传导通路中ATM介导的BRCA1及RAD51作用机理的研究

为阐明毛细血管扩张性共济失调突变基因(Ataxia telangiectasia mutated,ATM)介导的乳癌基因1 (Breast cancer gene 1,Breal)磷酸化及其下游DNA修复相关蛋白(DNA damage repair protein 51,RAD51) 在DNA损伤修复信号传导通路中作用机理,以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM细胞(Originated from human skin fibroblast GM Cell,GM0639)为对照,用免疫共沉淀与Western blot方法,观察60Coγ射线照射后共济失调症(Ataxia telangiectasia,AT)细胞、ATM转染的AT细胞(ATM+-AT)和GM细胞的BRCA1及 RAD51蛋白表达的变化。经0、5、10、20Gy辐照后,AT细胞通过免疫共沉淀及Western Blot法分析其中 ATM和BRCA1蛋白以及BRCA1和RAD51蛋白之间的相互作用以及PI3K抑制剂对ATM磷酸化其下游基因的影响。0Gy照射ATM+-AT和GM细胞未出现BRCA1表达条带;照射后,GM细胞、ATM细胞BRCA1 和RAD51蛋白均有表达,而AT细胞无表达;PI3 K抑制剂Wortmannin对经电离辐射照射后的AT、ATM+-AT 和GM细胞中BRCA1蛋白表达具有抑制作用;照射后ATM+-AT和GM细胞中BRCA1和RAD51蛋白均有表达。因此,电离辐射照射后,BRCA1由ATM介导磷酸化后可进一步与RAD51相互作用,这是信号通路传导过程中的—个级联反映,从而修复损伤的DNA,保持基因组的稳定性。

拓扑异构酶抑制剂通过ATM/ATR和NF-κB途径上调乳腺癌细胞MICA/B的表达

目的:分析常用化疗药物对免疫识别乳腺癌细胞重要的靶标主要组织相容性复合体Ⅰ类相关分子A和B(major histocompatibility complex classⅠ-related chain A and B,MICA/B)的影响,探讨其调节MICA/B表达的分子机制。方法:用荧光定量RT-PCR法检测化疗药物对乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA表达的影响,流式细胞术检测化疗药物对MICA/B表面蛋白表达的作用。加入咖啡因抑制毛细血管扩张性共济失调突变和Rad3相关激酶(ataxia telangiectasia mutated and Rad3-related kinase,ATM/ATR),加入吡咯烷二硫氨基甲酸酯(pynolidine dithiocarbamate,PDTC)抑制核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB),观察其是否能够抑制化疗药物中拓扑异构酶抑制剂对乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA及蛋白的表达。凝胶阻滞实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测药物是否影响乳腺癌细胞NF-κB与MICA/B启动子区的结合。结果:三种拓扑异构酶抑制剂足叶乙甙、拓扑替康和阿霉素可使乳腺癌MCF-7细胞的MICA和MICB mRNA水平升高。足叶乙甙在浓度为5、20、100μmol/L时,与不加药处理组相比,MICA mRNA水平分别升高到(1.68±0.17)、(2.54±0.25)、(3.42±0.15)倍(P<0.05);MICB mRNA水平分别升高到(1.82±0.24)、(1.56±0.05)、(5.84±0.57)倍(P<0.05)。拓扑替康和阿霉素在特定浓度时也使MCF-7的MICA和MICB mRNA水平显著升高(P<0.05)。拓扑异构酶Ⅱ抑制剂足叶乙甙和拓扑替康处理另一乳腺癌细胞系SK-BR-3后,MICB mRNA的表达也轻度升高(P<0.05)。足叶乙甙和拓扑替康还增加MCF-7细胞表面MICA/B蛋白的表达(P<0.05),且存活和凋亡细胞MICA/B蛋白的表达均增高。用不同浓度的咖啡因处理足叶乙甙损伤的乳腺癌细胞,MICA/B mRNA和蛋白表达均显著降低,当咖啡因浓度为1、5、10 mmol/L时,MICA mRNA相对表达水平由不用咖啡因处理组的(3.75±0.25)倍分别降为(0.89±0.05)、(0.81±0.02)、(0.48±0.04)倍(P<0.001),MICB mRNA由(6.85±0.35)倍降为(1.36±0.13)、(0.76±0.06)、(0.56±0.03)倍(P<0.05),MICA/B蛋白表达由(3.42±0.05)倍降为(1.32±0.03)、(1.21±0.06)、(1.14±0.03)倍(P<0.001),表明足叶乙甙对MICA/B的上调作用能够被ATM/ATR抑制剂所抑制。同样,加入不同浓度的NF-κB的强抑制剂PDTC(10、50、100μmol/L),MICA/B mRNA和蛋白的表达均明显受到抑制(P<0.05),提示NF-κB也参与这一过程。EMSA实验显示,MCF-7细胞用足叶乙甙处理后,NF-κB与MICA/B基因启动子区的结合活性增强。结论:拓扑异构酶抑制剂诱导并上调乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA及表面蛋白的表达,表明化疗药物有可能增强免疫系统对乳腺癌的识别和杀伤,ATM/ATR和NF-κB途径参与了这一过程。

塞来昔布对胶质瘤U251细胞株放射敏感性的影响

目的:探讨环氧化酶-2抑制剂塞来昔布(celecoxib)对胶质瘤放射治疗的增敏作用及可能的作用机制。方法:体外培养胶质瘤U251细胞株并将其分为5组,分别加入不同浓度的塞来昔布,并采用60Go照射,噻唑蓝检测细胞的抑制率,免疫组织化学法测细胞表皮生长因子受体(EGFR)的表达,RT-PCR检测毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白(ATM)的表达变化。结果:随着塞来昔布浓度的增加,细胞生长的抑制率明显上升,肿瘤细胞中ATM和EGFR蛋白的表达明显减弱。结论:塞来昔布能够通过降低ATM和EGFR蛋白的表达,增强胶质瘤的放疗敏感性,对胶质瘤的治疗具有重要意义。

外源性ATM基因对辐射诱导AT细胞端粒酶逆转录酶mRNA表达的影响

通过观察外源性毛细血管扩张性共济失调症突变基因(Ataxia-telangiectasiamutation,ATM)对毛细血管扩张性共济失调症(Ataxia-telangiectasia,AT)患者皮肤的成纤维细胞系AT5BIVA(AT细胞)端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)mRNA表达的影响,探讨ATM对hTERT的调控作用。采用RT-PCR法,对比ATM基因转染前、后AT细胞hTERTmRNA表达的变化及与源自正常人皮肤的成纤维细胞系GM0639(GM细胞)相比的差异;以及细胞经3Gy60Coγ射线照射后其hTERTmRNA表达的变化。结果显示,未照射时,GM细胞hTERTmRNA表达呈阴性,AT细胞hTERTmRNA表达呈阳性,转染ATM基因后的ATM+-AT细胞其hTERTmRNA的表达明显下降(p<0.05);60Coγ射线照射后,GM细胞hTERTmRNA表达呈阳性,AT细胞、空载体AT细胞(PEBS7-AT细胞)和ATM+-AT细胞hTERTmRNA的表达量比未照射时明显增加(p<0.05),ATM+-AT细胞hTERTmRNA相对表达量的增加低于AT细胞和空载体AT细胞(p<0.05)。提示ATM可下调hTERTmRNA的表达;电离辐射可诱导细胞hTERTmRNA表达;端粒酶参与DNA损伤修复。

ATM基因单核苷酸多态性与食管癌易感性的研究

目的食管癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一;毛细血管扩张性共济失调症突变基因(ATM)是导致毛细血管扩张性共济失调症发生的致病基因,与肿瘤的发生密切相关;本研究旨在探讨ATM基因单核苷酸多态性与食管癌发生的相关性。方法收集2009年9月至2010年12月期间江苏省淮安市楚州医院就诊的135例食管癌患者标本以及135例健康体检者作为健康对照组。ATM基因单核苷酸多态性分型检测采用Taqman技术,应用Logistc回归统计分析ATM单核苷酸多态性与食管癌发生的相关性。结果吸烟者食管癌的发生率明显高于不吸烟者,差异有统计学意义(χ2=10.252,P=0.001,P<0.05);有肿瘤家族史者患食管癌的概率明显高于没有肿瘤家族史者,差异有统计学意义(χ2=12.199,P=0.000,P<0.05);在食管癌患者组中,A/A基因型占31.9%,A/G基因型占38.5%,G/G基因型占29.6%;而健康对照组中相应的数值分别为25.9%、48.9%和25.2%。以A/A基因型相比,A/G基因型的OR值为0.798(95%CI:0.418-1.521,P=0.493);G/G基因型的OR值为0.534(95%CI:0.265-1.079,P=0.080)。结论 ATM单核苷酸多态性可能与淮安地区的食管癌有关,为食管癌的保护性因素。

广西地区鼻NK/T细胞淋巴瘤p-ATM和CHK2表达及其临床意义

目的探讨广西地区鼻NK/T细胞淋巴瘤(NKTCL)组织磷酸化共济失调毛细血管扩张突变(p-ATM)蛋白和磷酸化检测点激酶2(checkpoint kinase 2,CHK2)蛋白表达及其临床意义。方法收集2010-01~2016-12该院49例鼻NKTCL组织(研究组)及患者的临床资料,另取30例同期鼻咽黏膜良性淋巴样增生(NBLP)组织作为对照组。比较p-ATM蛋白和CHK2蛋白在鼻NKTCL组织和NBLP组织间的表达差异。分析NKTCL组织p-ATM蛋白和CHK2蛋白表达水平与患者临床特征及预后的关联性。结果研究组p-ATM蛋白高表达者23例(46.94%),低表达者26例(53.06%);CHK2蛋白高表达者24例(48.98%),低表达者25例(51.02%)。对照组p-ATM蛋白和CHK2蛋白均为低表达者,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。鼻NKTCL组织CHK2高表达组临床分期为Ⅰ/Ⅱ期的比例低于CHK2低表达组(P<0.05)。Kaplan-Meier分析结果显示,鼻NKTCL组织p-ATM高表达组的中位生存时间为6个月,p-ATM低表达组中位生存时间为21个月,低表达组生存预后优于高表达组(P=0.011);鼻NKTCL组织CHK2高表达组的中位生存时间为7个月,低表达组中位生存时间为21个月,低表达组生存预后优于高表达组(P=0.025)。鼻NKTCL组织p-ATM蛋白和CHK2蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论ATM和CHK2蛋白的异常表达在广西地区鼻NKTCL的发生和发展中具有重要作用。检测鼻NKTCL组织p-ATM和CHK2蛋白表达水平有助于评估患者预后。

Down综合征与DNA修复机制缺陷

作者注意到Down综合征(DS)患者均有Alzheimer病(AD)的神经病理学特征,且白血病的发病率显著增高:通过对DS和AD患者淋巴细胞株经X射线处理后生存能力的研究,发现两者均对X线有异常敏感(P<0.0001和0.004),对其它某些原发性神经元变性性疾病如着色性干皮病(XP)、毛细血管扩张性共济失调症和Cockayne综合征等作了比较,这些细胞均显示对DNA损伤因子异常敏感。在XP病人中这些现象可能反映着对诱发性DNA损伤的修复缺陷。因此,本病也可能是对损伤的DNA存在着修复的缺陷而导致白血病的发病率增高以及象AD那样的神经细胞的过早死亡。

辐射诱导的染色质拓扑关联结构域层级变化及其在细胞辐射响应中的作用

基因组三维结构在基因表达调控中发挥重要作用,染色质拓扑关联结构域(topologically associated domain,TAD)是DNA复制和基因转录的基本功能单位,也是DNA损伤修复的功能单元,在辐射诱导的DNA损伤修复中发挥重要作用。近期研究表明,TAD并非是完全独立的结构单元,其内部常呈现多层级结构,对基因表达具有重要调控作用。为探究TAD多层级结构在细胞辐射响应中的作用,本研究使用TAD层级结构识别算法OnTAD对Gene expression omnibus数据库中5Gy X射线照射的淋巴细胞、成纤维细胞和毛细血管扩张性共济失调突变(ataxia telangiectasia mutated,ATM)基因缺陷的成纤维细胞,共26个样本的Hi-C(high-through chromosome conformation capture,Hi-C)数据进行分析,发现辐射后细胞的TAD层级结构出现规律性变化,高层级TAD缺失较多,低层级TAD相对保守;辐射诱导的TAD层级结构变化通过调节基因表达参与细胞辐射响应;ATM是辐射诱导TAD层级结构变化和恢复的重要因子。本研究为从TAD多层级结构角度理解基因组三维结构在细胞辐射响应中的作用提供了新思路。

脱氧氮杂胞苷诱导HepG2细胞表达主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A

目的观察主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A（MICA）在HepG2与L02细胞株中表达的差异及脱氧氮杂胞苷（5-aza-dC）对HepG2细胞株MICA表达的影响，探讨毛细血管扩张眭共济失调突变蛋白（ATM）依赖的DNA损伤途径与5-aza-dC调节MICA表达的关系。方法同时接种并培养L02和HeDG2细胞，在同一时间点收取细胞，流式细胞仪检测细胞膜MICA蛋白表达水平；不同浓度5-aza—dC（0．1、1．0、5．0mmol／L）作用于HepG2细胞不同时间（24、48、72、96h）后，定量PCR检测MICA mRNA水平以寻找5-aza-dC最佳作用浓度和时间；ATM特异性抑制剂咖啡因或RNA干扰技术干扰ATM表达，定量PCR检测细胞mRNA水平，流式细胞术检测细胞膜MICA蛋白表达水平。结果数据比较采用Kruskal-Wallis和Mean-Whitney U方差分析。结果流式细胞结果显示，HepG2细胞高水平表达MICA，而正常肝细胞L02几乎不表达MICA；5-aza—dC处理可上调HepG2细胞MICA的表达（x^2=7．20，P〈0．05），这种上调作用可被ATM特异性阻滞剂咖啡因和ATM特异的小分子干扰RNA所阻断（U=0．00，P〈0．05）。结论MICA在正常肝细胞株中无表达，在肝癌细胞株中高表达；5-aza-dC可诱导HepG2细胞MICA的表达，其机制可能与5-aza-dC引起的ATM依赖的DNA损伤途径有关。

胃癌患者血浆中miR-203a及其靶基因的表达差异与临床意义

目的探讨血浆miR-203a及其靶基因在胃癌患者手术前后的表达变化及其与临床病理的相关性。方法选取在昆明医科大学第一附属医院接受手术治疗的胃癌患者和健康体检者各120例,收集胃癌患者手术前后的血浆和健康志愿者的血浆。利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血浆中miR-203a、E2F转录因子3(E2F3)、毛细血管扩张性共济失调症突变基因(ATM)和转录因子蜗牛同源物2(SNAI2)的表达量。统计分析其与胃癌患者病理特征和手术疗效的相关性。结果与健康对照组比较,胃癌患者血浆中miR-203a的表达量显著上升(P<0.01),而E2F3、ATM和SNAI2的表达量则显著下降(P<0.01)。手术后,miR-203a的表达量显著下调(P<0.01),而E2F3、ATM和SNAI2的表达量则显著上调(P<0.05)。miR-203a、E2F3、ATM和SNAI2的相对表达量与胃癌分化程度和TNM分期均显著相关(P<0.05)。miR-203a低表达组患者的术后生存率优于高表达组(P<0.05),而E2F3、ATM和SNAI2高表达组患者的术后生存率较高。结论胃癌患者血浆中miR-203a与其靶基因的表达呈负调控关系,手术前后表达差异显著,与临床病理特征和治疗预后有显著相关性。

不同ATM基因表达水平的小脑幕上弥漫性胶质瘤中放射治疗剂量与生存预后的关系

目的探讨不同毛细血管扩张性共济失调突变(ATM)基因表达水平的小脑幕上弥漫性胶质瘤患者的放射治疗剂量与生存预后的关系。方法回顾性分析中国脑胶质瘤基因组图谱计划数据库中87例小脑幕上弥漫性胶质瘤患者的转录组数据和临床资料,所有患者均接受三维适形放射治疗或调强适形放射治疗。通过转录组测序检测ATM基因的表达量,按ATM基因表达量的中位数将患者分为高表达组和低表达组。采用单因素和多因素Cox回归分析法判断年龄>40岁、男性、星形细胞瘤、异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变型、染色体1p/19q联合缺失以及放射治疗剂量是否为两组患者生存预后的独立影响因素。结果87例患者ATM基因表达量的中位数(四分位数)为15.0(11.1,20.8)。ATM基因低表达组(n=44)患者的放射治疗剂量中位数(四分位数)为54.0(50.4,55.8)Gy;单因素分析结果显示,星形细胞瘤是无进展生存期的危险因素(P=0.036),放射治疗剂量是无进展生存期和总生存期的保护性因素(均P<0.05);多因素Cox回归分析结果显示,星形细胞瘤(HR=4.775,95%CI:1.104~20.652,P=0.036)是无进展生存期的独立危险因素,放射治疗剂量是无进展生存期(HR=0.847,95%CI:0.761~0.942,P=0.002)和总生存期(HR=0.844,95%CI:0.739~0.963,P=0.012)的独立保护性因素。ATM基因高表达组(n=43)患者的放射治疗剂量的中位数(四分位数)为54.0(50.4,57.6)Gy;单因素和多因素Cox回归分析结果均未观察到放射治疗剂量影响无进展生存期和总生存期(均P>0.05)。结论对于ATM基因低表达的患者,增加放射治疗剂量可以改善小脑幕上弥漫性胶质瘤患者的生存预后。

煤工尘肺ATM基因表达分析及功能性单核苷酸多态性位点筛选

目的对煤工尘肺(CWP)的毛细血管扩张性共济失调症突变基因(ATM)的基因表达量及其功能性单核苷酸多态性(SNP)位点的基因型进行分析,探讨CWP发生发展与ATM的关联。方法于2020年10月,收集贵阳市公共卫生救治中心职业病科2019年1月至2020年9月职业健康体检或就诊的264名研究对象的相关信息。选择无职业危害因素接触史者作为健康对照组,共67人;具有10年以上煤尘接触史且肺部有小阴影但达不到诊断标准的煤矿工人为接尘对照组,共66人;具有同样煤尘接触史且已确诊的壹期CWP患者为煤工尘肺壹期组,共131人。采用逆转录-聚合酶链反应对各组ATM表达量进行检测。通过质谱仪对ATM rs189037、rs1801516进行基因分型。结果各组间ATM表达量差异有统计学意义(P<0.05);与健康对照组比较,接尘对照组患者的ATM表达明显升高(P<0.05)。随着CWP的发生发展,rs189037野生型GG减少,突变杂合子GA和纯合子AA增加,但差异无统计学意义(P>0.05);rs1801516野生型GG和突变杂合子GA无明显变化(P>0.05)。rs189037型各组间年龄、中性粒细胞以及嗜碱性粒细胞差异均有统计学意义(均P<0.05),各组间血压、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞以及烟酒史差异无统计学意义(均P>0.05)。与野生型GG型比较,突变杂合子和纯合子OR上升,但各组差异均无统计学意义(P>0.05)。结论ATM可能是煤工尘肺发生发展的早期活化基因之一,rs189037可能是影响其基因表达的功能性位点;ATM与炎症反应可能有关,中性粒细胞和嗜碱性粒细胞对CWP的发生发展有影响。