脉冲射频降低NF-κB磷酸化水平治疗腰椎间盘突出症病人的疼痛

流行病学显示腰椎间盘突出症发病率呈逐年增高趋势,由此产生了巨大社会负担与经济负担[1]。脉冲射频疗法作为一种新型治疗腰椎间盘突出症技术,与传统开放手术相比,具有简便、安全、经济、微创等优点,已显示出良好的应用前景[2,3]。核转录因子(nuclear factor kappa B,NF-κB)作为多种基因表达调控的关键性转录因子,是一种具有启动基因转录功能的蛋白质及诱导多形核白细胞释放大量细胞因子,其磷酸化是导致炎性反应的关键[4,5]。

低氧预适应小鼠脑组织内P38 MAPK磷酸化水平增高

目的探讨P38丝裂原激活蛋白激酶（mitogen．activatedproteinkinase，P38MAPK）在小鼠脑低氧预适应形成过程中的作用。方法用成年雄性BALB／c小鼠制备小鼠整体低氧预适应模型，小鼠随机分为正常对照（H0）、早期（H1～H4）和延迟性（F15～H6）低氧预适应等7组；应用Westernbolt并结合GelDoc凝胶成像系统，定量检测小鼠脑组织内P38MAPK磷酸化水平和蛋白表达量。结果与H0组小鼠相比，H2～H6组的海马和皮层及H3～H6组的下丘脑中P38MAPK磷酸化水平明显增高（P〈0．05，每组n=6）；H1～H6组的皮层、海马和下丘脑中P38MAPK蛋白表达量无明显变化。结论P38MAPK磷酸化激活而非蛋白表达量的变化可能参与了小鼠脑低氧预适应的发生、发展过程。

低氧预适应小鼠脑内ERK1/2磷酸化水平和蛋白表达量的改变

目的:初步探讨细胞外信号调节激酶(Extracellularsignal-regulatedkinases,ERK1/2)在脑低氧预适应发生发展过程中的作用。方法:按已建小鼠整体低氧预适应模型,将BALB/C小鼠(18～22g,雌雄不限)随机分为正常对照(H0)、早期(H1-H4)和延迟性(H5-H6)低氧预适应等7组(每组至少6只动物)。应用SDS-PAGE和Westernblot等生化技术,并结合GelDoc凝胶成像系统,半定量检测小鼠脑组织内ERK1/2的磷酸化水平和蛋白表达量。结果:①早期低氧预适应形成过程中,随低氧暴露次数的增加(H1-H4),小鼠海马和皮层组织内ERK1/2磷酸化水平显著降低(P<0.05,n=6),而ERK1/2蛋白表达量并无显著变化;②延迟性低氧预适应中(H5-H6),小鼠大脑皮层和海马组织内ERK1/2的蛋白表达量显著降低(P<0.05,n=6)。结论:ERK1/2的活性降低(磷酸化水平降低),以及ERK1/2蛋白表达量下调可能分别参与了脑早期低氧预适应和晚期延迟性低氧预适应的发生发展过程。

P38MAPK磷酸化水平增高参与HPC降低MCAO所致小鼠缺血性脑损伤

目的探讨P38丝裂原激活蛋白激酶(P38 MAPK)磷酸化和蛋白表达水平在低氧预适应(HPC)降低脑中动脉阻塞(MCAO)所致缺血性脑损伤中的变化。方法利用已建小鼠HPC-MCAO模型,将健康雄性BALB/c小鼠随机分为常氧假手术(H0 Sham)、HPC假手术(H4 Sham)、常氧缺血(H0)和HPC缺血(H4)4组,应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色、N issl染色等方法观察脑损伤情况,应用W estern b lot并结合Gel Doc凝胶成像系统,定量检测小鼠脑组织内P38 MAPK磷酸化和蛋白表达水平的变化。结果HPC可明显减小MCAO所致的脑梗死体积(P<0.05)。与H0 sham相比,缺血组小鼠皮层缺血核心区和半影区P38 MAPK磷酸化水平显著升高(P<0.05,n=6),HPC可进一步增加缺血半影区和对侧皮层组织中P38 MAPK磷酸化水平(P<0.05,n=6)。各组间P38MAPK蛋白表达量水平无明显变化。结论P38 MAPK可能参与了HPC降低MCAO所致小鼠缺血性脑损伤的作用。

糖尿病大鼠动脉血管内皮型一氧化氮合酶丝氨酸磷酸化水平降低

由内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）催化产生的一氧化氮（nitric oxide,NO）在维持血管内皮功能稳态上起着重要作用。

大运动量和减量训练对大鼠骨骼肌Akt及其下游信号磷酸化水平的影响

目的:研究与骨骼肌蛋白合成相关的信号Akt及其下游信号GSK3β、mTOR磷酸化水平在大运动量和减量训练过程中的变化特点。方法:SD雄性大鼠72只,随机分为12组,安静对照组6组(C1-C6),运动组6组(E1-E6),每组6只。建立3周大运动量和2减量训练跑台运动模型,在训练期间定期随机选取对照组和运动组,测试大鼠体重、腓肠肌湿重;采用脲酶UV法测试血尿素(BUN);采用Western Blot法测试骨骼肌Akt(Ser 473)、mTOR(Ser 2448)和GSK3β(Ser 9)磷酸化水平。结果:1)大运动量训练期间,与同期对照组相比,E1组体重显著降低、BUN显著升高(P<0.01);E2组体重显著降低(P<0.05),mTOR磷酸化水平显著降低(P<0.01);E3组体重显著降低、腓肠肌湿重显著降低,BUN显著升高(P<0.05),Akt磷酸化水平显著降低(P<0.05),mTOR磷酸化水平显著降低(P<0.01)。2)减量训练期间,与同期对照组相比,E4组腓肠肌湿重显著降低(P<0.05),BUN显著升高(P<0.01);E5组腓肠肌湿重显著降低(P<0.05),BUN显著升高(P<0.01),mTOR磷酸化水平显著升高(P<0.05);E6组各指标无显著差异。结论:大运动量和减量训练影响骨骼肌蛋白的合成能力,主要由Akt/mTOR信号通路调节。

代谢综合征大鼠肠系膜动脉eNOS磷酸化水平的变化

代谢综合征（metabolic syndrome,MS）主要表现腹型肥胖、血脂异常、高血压及糖代谢紊乱等,均可导致血管内皮功能紊乱（endothelial cell dysfunction,ECD）。ECD是多种心血管疾病发生发展的病理生理学基础,而e NOS/NO功能障碍又是ECD的发生关键环节。

力竭运动后大鼠脑皮质运动区谷氨酸受体NR2A蛋白含量及酪氨酸磷酸化水平的变化

目的:观察力竭运动前后大鼠脑皮质运动区NR2A蛋白含量及其自身酪氨酸磷酸化水平变化,分析二者之间的相关关系,为探讨中枢兴奋信号在运动中的传递机理以及运动性疲劳的中枢机制提供实验依据。方法:SD大鼠进行一次性力竭跑台运动。采用抗NR2A抗体和抗磷酸酪氨酸单抗以免疫沉淀法和免疫印迹法检测皮质运动区NR2A蛋白含量及酪氨酸磷酸化水平。结果:力竭运动后即刻,大鼠脑皮质运动区NR2A蛋白含量与安静组相比无显著性变化,运动后1小时与安静组和运动后即刻比较显著升高(P<0.05,P<0.01),运动后3小时NR2A蛋白含量下降,运动后恢复24小时大鼠脑皮质中NR2A蛋白含量显著低于安静组和运动后即刻组(P<0.01,P<0.05)。NR2A酪氨酸磷酸化水平力竭运动后与对照组相比呈升高趋势但无显著性差异,NR2A酪氨酸磷酸化水平与NR2A蛋白含量变化无显著相关。结论:(1)大鼠在力竭运动后即刻及恢复期过程中,大脑皮质运动区NR2A蛋白含量变化表现为下降,上升,再下降,表明运动过程中NR2A蛋白含量变化具有较敏感的可调控性,力竭运动后即刻NR2A蛋白含量的下降可能是导致中枢抑制的一个因素。(2)NR2A酪氨酸磷酸化水平在力竭运动后呈升高趋势,可能有利于维持中枢的兴奋性,提示运动过程中NR蛋白含量的变化可能是多方面原因造成的,受体蛋白含量与受体活性之间可能存在较为复杂的关系。

外感寒湿对小鼠丝裂原蛋白活化激酶磷酸化水平的影响

目的:探讨外感寒湿对小鼠丝裂原蛋白活化激酶磷酸化水平的影响。方法:SPF级昆明小鼠60只,随机分为正常对照组、外感寒湿组、外感湿邪组、药物组,每组各15只。放入人工气候箱,连续7 d后取材。应用免疫组织化学方法检测丝裂原蛋白活化激酶磷酸化水平,Western blot检测丝裂原蛋白活化激酶磷酸化水平表达。结果:与正常对照组比较,外感寒湿组小肠组织丝裂原蛋白活化激酶磷酸化水平表达明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:外感寒湿能加重丝裂原蛋白活化激酶磷酸化水平的表达。

流式细胞术分析慢性髓性白血病细胞酪氨酸磷酸化水平

目的：探讨慢性髓性白血病（CML）患者骨髓细胞酪氨酸磷酸化水平（p-Tyr），探讨甲磺酸伊马替尼（商品名：格列卫）治疗对p-Tyr水平的作用和影响。方法：对38例CML患者（其中16例接受格列卫治疗）及5例健康对照者的骨髓细胞进行细胞膜CD45和细胞质内PTyr（PY99）荧光标记，应用流式细胞术（FCM）分析不同病期CML各群细胞p-Tyr水平。结果：①未经甲磺酸伊马替尼治疗的慢性期（CP）、加速期（AP）患者骨髓各群细胞p-Tyr水平高于健康对照者，而CP与AP之间p-Tyr水平差异无统计学意义；②CP患者应用甲磺酸伊马替尼治疗〉12个月者的骨髓细胞p-Tyr水平低于用药〈12个月者；AP期用药≥40个月者的幼稚细胞群p-Tyr水平亦低于用药〈12个月者；③随CML病程延长，幼稚细胞群p-Tyr水平增高，但无明显影响；年龄对p-Tyr水平无明显影响。结论：①应用FCM测定细胞p-Tyr水平可作为快速、敏感的方法检测BCR-ABL（＋）细胞；②CML各期细胞的p-Tyr水平均高于正常对照；③甲磺酸伊马替尼对慢性期白血病细胞p-Tyr水平的降低程度随用药时间延长而增强。

MCM2S27位点的磷酸化水平对卵巢癌侵袭、转移和凋亡的影响及其分子机制探究

微小染色体维持蛋白2(MCM2)在DNA复制、修复过程中发挥重要作用,同时也与多种肿瘤的发生密切相关。MCM2包含多个磷酸化位点,其生物学功能的发挥可通过自身的磷酸化和去磷酸化进行调节。我们首先在淋巴道高低转移的细胞系中发现其转移能力与MCM2S27位点的磷酸化程度有关,这一点同时在卵巢癌临床样本中得到了验证。我们通过在卵巢癌细胞系H08910pm和SKOV3中引入MCM2S27位点去磷酸化突变后发现,该位点去磷酸化后可抑制细胞在Transwell、划痕实验中的侵袭、迁移能力,并通过Westernblot实验发现去磷酸化组EMT过程受到抑制。

乳腺癌术后生存期与表皮生长因子受体磷酸化水平的关系

有研究表明，表皮生长因子受体（EGFR）在许多肿瘤中被磷酸化激活，而激活的EGFR蛋白具有酪氨酸激酶活性，能将一系列细胞外生长因子信号传导到细胞内，是维持癌细胞增殖、侵袭、转移、复发的重要条件。本研究旨在检测腺癌组织中EGFR蛋白表达及其磷酸化活性水平，探讨其与乳腺癌患者术后生存期的关系。

多发性骨髓瘤PTEN蛋白表达与Akt磷酸化水平的关系

多发性骨髓瘤（MM）是B细胞起源的恶性肿瘤，发病机制仍不清楚。研究表明，10号染色体丢失的磷酸酶-张力蛋白同源基因／磷脂酰肌醇3激酶／丝苏氨酸蛋白激酶（PTEN／P13K／Akt）信号转导异常在肿瘤的发生、发展中起重要作用，也是当前血液肿瘤发病机制研究的热点。我们应用流式细胞仪（FCM）分析MM细胞中PTEN与Akt-磷酸化（p-Akt）水平的相关性，以探讨MM的发病机制。

氯胺酮对小鼠海马脑片ERK1、ERK2和CREB磷酸化水平的影响

海马组织神经元细胞外信号调节激酶（ERK）参与调节突触可塑性和记忆的形成；活化的ERK从胞浆易位到胞核，激活核糖体s6蛋白激酶，然后使转录因子cAMP反应元件结合蛋白（CREB）在133位的丝氨酸磷酸化被激活，活化的CREB参与了长时程增强的维持和记忆形成。有研究表明，氯胺酮可抑制记忆功能。ERK和CREB是否与氯胺酮抑制记忆功能的机制有关尚不清楚。本研究拟通过观察氯胺酮对小鼠海马脑片ERK1、ERK2和CREB磷酸化水平的影响，从分子水平探讨其抑制记忆功能的机制。

质谱技术解析磷酸化蛋白质组

蛋白质磷酸化是生物体内存在的一种普遍的调节方式 ,在细胞信号传递中占有极重要的地位 .质谱已逐渐被人们认为是挑战这一领域的有利工具 .综述了目前利用质谱技术分析磷酸化蛋白质的方法 ,包括利用固定化的金属亲和层析柱、抗体和化学标签技术富集目的分子 ,肽片段质量图和前体离子扫描 ( precusorionscans)等技术检测磷酸化肽段 ,串联质谱对磷酸化肽段测序鉴定磷酸化位点 ,以及引入质量标签对蛋白质的磷酸化水平进行定量等 .虽然现在已经有很多可行的方法用于分析磷酸化蛋白质 。

A2AR活化在脑创伤后tau蛋白过度磷酸化中的作用与机制研究

目的探讨A2AR活化在脑创伤后tau蛋白过度磷酸化中的作用与机制。方法用无特定无特定病原体的小鼠进行实验研究,在小鼠左侧顶叶皮层位置,采应用可控皮质打击法建立脑创伤模型,在致伤后15 min于小鼠腹部注射A2AR特异性抑制剂ZM241385或使用A2AR基因敲除小鼠,检测各脑区神经元丢失情况及tau蛋白磷酸化水平;使用特异性激动剂CGS21680激活原代海马神经细胞及人神经母细胞瘤细胞的A2AR,用免疫细胞化学及免疫荧光技术检测tau蛋白磷酸化水平变化,观察轴突对线粒体的运输功能。结果免疫组化结果积累光密度分析显示,抑制A2AR活化可以显著降低脑创伤后tau蛋白Ser404位点磷酸化水平,减轻tau蛋白过度磷酸化伴随的神经病理改变;A2AR活化后tau蛋白在Ser404位点的磷酸化水平明显升高,神经元轴突单位长度突起内线粒体数量明显减少,从而导致轴浆运输功能障碍;激活原代海马神经细胞及人神经母细胞瘤细胞的A2AR后,tau蛋白Ser404位点磷酸化水平明显升高。结论脑创伤后A2AR活化对tau蛋白磷酸化水平有明显的影响,可能是通过影响轴浆运输功能,最终形成认知功能障碍。

伊马替尼对慢性髓性白血病酪氨酸磷酸化的影响

目的研究伊马替尼对慢性髓性白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)患者骨髓细胞酪氨酸磷酸化(tyrosine phosphorylation,p-Tyr)水平的影响。方法对2011年1月至2014年12月于本院就诊的47例CML患者(其中24例接受伊马替尼治疗)及6例健康对照者的骨髓细胞进行胞膜CD45和胞质内p-Tyr(PY99)荧光标记,应用流式细胞计量术(flow cytometry,FCM)分析不同病期CML患者的各群细胞p-Tyr水平。结果未经伊马替尼治疗的慢性期(chronic phase,CP)和加速期(accelerated phase,AP)患者的骨髓各群细胞p-Tyr水平均高于对照组,除CP患者的(偏)成熟粒细胞群较对照组的增高差异无显著性(P>0.05)外,其余差异均具有显著性(P<0.05)。应用伊马替尼治疗时间≥12个月的CP患者其骨髓细胞p-Tyr水平低于用药时间<12个月者;用药时间≥12个月的AP患者其幼稚细胞群p-Tyr水平亦低于用药时间<12个月者。结论 CML患者各病期细胞的p-Tyr水平均较高,伊马替尼对CML细胞p-Tyr水平的降低程度随用药时间延长而增强。