辣椒素对大鼠脊髓背角中磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白表达的影响

目的观察辣椒素对大鼠脊髓背角中磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)表达的影响,探讨延髓外侧网状核(LRN)对心脏伤害性感受的下行紧张性调控作用。方法将30只雄性Sprauge Dawley大鼠随机分为空白组、溶媒组、辣椒素组、LRN电损毁组和LRN电损毁+辣椒素组,每组6只。空白组大鼠麻醉后不做手术处理,其余各组大鼠均行心包内插管术,LRN电损毁组和LRN电损毁+辣椒素组大鼠于心包内插管术后行双侧LRN电损毁。各组大鼠心包插管1 h后,回抽心包积液,溶媒组大鼠心包内注射0.2 mL溶媒(含有0.1 mL的吐温80和0.1 mL无水乙醇),辣椒素组和LRN电损毁+辣椒素组大鼠心包内注射0.2 mL辣椒素(0.01 g·L-1),LRN电损毁组大鼠心包内不注射任何溶液。心包内注射药物的同时,记录大鼠背斜方肌超出基线活动10%的肌电(EMG)反应数目,空白组于维持麻醉1 h后记录EMG反应数目。各组大鼠经心包内注射药物30 min后,灌注固定液并取T3~T5脊髓,采用免疫组织化学染色法检测各组大鼠脊髓背角中pCREB免疫阳性细胞数目。结果空白组、溶媒组、LRN电损毁组大鼠背斜方肌无超出基线活动10%的EMG反应。辣椒素组和LRN电损毁+辣椒素组大鼠背斜方肌EMG反应数目和脊髓背角中pCREB免疫阳性细胞数目均显著高于空白组、溶媒组和LRN电损毁组(P<0.05)。LRN电损毁+辣椒素组大鼠背斜方肌EMG反应数目和脊髓背角中pCREB免疫阳性细胞数目均显著高于辣椒素组(P<0.05)。结论大鼠心包内注射辣椒素能诱发背斜方肌EMG反应且脊髓背角中pCREB免疫阳性细胞数目增加。LRN对大鼠心脏伤害性感受具有下行紧张性抑制作用。

磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白在小鼠海马发育中的表达

目的：观察胚龄（E）18 d以及生后日龄（P）为1、3、7、14、21d和28 d的小鼠海马磷酸化的cAMP反应元件结合蛋白（pCREB）的分布,从而为深入研究海马发育机制提供基础实验依据.方法：取E18d、P1d、P3d、P7d、P14d、P21d和P28d的小鼠胎鼠和仔鼠海马组织.利用免疫组织化学、免疫印迹结合图像分析技术对pCREB的表达变化进行系统的定性和定量分析.结果：免疫组织化学检测显示,pCREB主要表达在海马阿蒙角锥体细胞层和齿状回颗粒细胞层神经元的细胞核中.E18d,海马pCREB阳性细胞稀疏,染色浅,光密度低;E 18 d～P 7 d,pCREB阳性细胞逐渐密集,染色逐渐加深,光密度逐渐增高,P7d达高峰.P 14 d～P 21 d,pCREB阳性细胞密集程度逐渐降低,染色逐渐变浅,光密度逐渐降低;P28d表达与P21d相近,趋于稳定.免疫印迹检测显示,E18d～P7d,pCREB表达逐渐增高,P7d达高峰;P 14d～P21d,表达逐渐降低,P28d表达稳定.结论：pCREB与小鼠海马发育有关,pCREB可能参与了小鼠海马发育中的细胞增殖.

大麻素受体2激动剂JWH-015对骨癌痛大鼠脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白的影响

目的探讨腹腔注射大麻素受体（cannabinoid receptor，CB）2激动剂对骨癌痛大鼠脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（phosphorylated cyclic AMP respons eclement binding protein，pCREB）表达的影响。方法运用随机数字表法将63只雌性SD大鼠分为3组：肿瘤给药组（J组，15只）、肿瘤对照组（D组，24只）和假手术对照组（S组，24只）。J组、D组的大鼠左侧胫骨上端骨髓腔被注入5μl Walker256大鼠乳腺癌细胞制备骨癌痛模型；S组则注入等量的生理盐水。在造模后第10天，J组腹腔注射JWH-015（100μg/500μ1），D组、s组注射等量JWH-015溶剂二甲基亚砜（dimethylsulfoxide，DMSO）。每组大鼠于造模前1d，造模后4、7、10d，腹腔注射后2、6、24、48、72h，检测手术侧机械刺激缩足阈值（paw withdrawal mechanical threshold，pwMT）和行走痛行为学评分。D组和S组大鼠于造模后4、7d，J组、D组和S组大鼠于造模后10d及腹腔注射后6、24、72h，取脊髓腰膨大进行免疫印迹分析。结果与S组比较，J组和D组大鼠造模后7d PWMT开始降低（P〈0.05），造模后10d行走痛行为学评分增加（P〈0.05），脊髓背角pCREB表达水平于7、10d上调（P〈0.05）.与D组比较，腹腔注射JWH-015后24h，J组PWMT（8.7±1.6）g显著上升（P〈0.05），行走痛行为学评分（1.0±0.6）分和pCREB的表达（0.56±0.10）明显下降（P〈0.05）。结论腹腔注射JWH-015可能通过下调脊髓背角pCREB的表达改善骨癌痛大鼠的痛行为。

骨癌痛小鼠痛行为及脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白和脑源性神经营养因子表达的改变

目的 通过观察骨癌痛小鼠痛行为学的变化,磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（phosphorylated cAMP response element binding protein,pCREB）和脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）在脊髓背角中表达的变化,探讨pCREB和BDNF在骨癌痛产生和维持中的作用. 方法 52只雄性C3H/HeJ小鼠,采用随机数字表法分为骨癌痛组（T组）和假手术组（S组）,每组26例.T组小鼠右侧股骨骨髓腔内注射含2×10^5个纤维肉瘤细胞的20μl最小必须培养基（α-minimal essence medium,α-MEM）,而S组注入不含肿瘤细胞的20μ1α-MEM,分别于接种肿瘤细胞前1d、接种后第4、7、10、14、21天测定自发抬足次数（spontaneous lifting times,SLTs）和机械缩足阈值（paw withdrawal mechanical threshold,PWMT）.按照分组在相应时间点处死小鼠,用免疫印迹法测定小鼠L3～5脊髓背角pCREB和BDNF的蛋白表达水平. 结果 与术前基础值和S组比较：接种后7、10、14、21d,T组小鼠SLTs[（4.43±0.91）,（7.10±1.03）,（11.27±1.35）,（13.03±0.58）次]显著增加（P＜0.05）;接种后10、14、21 d,T组小鼠PWMT[（0.63±0.20）、（0.32±0.12）、（0.24±0.12）g]明显下降（P＜0.05）,脊髓背角pCREB[（3.78±0.58）、（3.92±0.46）、（4.92±0.37）]和BDNF[（2.13±0.31）、（2.88±0.15）、（2.58±0.41）]的表达显著增加（P＜0.05）. 结论 骨癌痛小鼠脊髓背角pCREB和BDNF表达增加,并且与痛行为学的改变具有相关性,提示其可能参与了骨癌痛的产生和维持.

环磷酸腺苷反应元件结合蛋白调控耐药性癫痫大鼠海马内脑源性神经营养因子的表达

背景:耐药性癫痫的形成机制尚不清楚,其中环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element-binding protein,CREB)及脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)在耐药性癫痫形成过程中的作用已被广泛研究。目的:使用慢病毒转染法调控正常大鼠海马CREB表达水平,探究其对耐药性癫痫形成过程及海马内BDNF表达的影响。方法:使用过表达慢病毒或干扰慢病毒调控大鼠海马中CREB表达水平,检测病毒转染结果;大鼠注射病毒7 d后构建氯化锂-匹罗卡品癫痫模型,随后使用苯妥英钠和苯巴比妥进行耐药性筛选,筛选出耐药性癫痫大鼠,分为过表达组、过表达对照组、干扰组、干扰对照组,观察筛药过程中大鼠癫痫发作次数变化,使用蛋白质免疫印迹法及实时荧光定量PCR法检测大鼠海马中CREB及BDNF表达水平。结果与结论:①病毒转染后14 d,大鼠海马区满布绿色荧光,病毒转染水平较好;②药筛前过表达组大鼠癫痫发作次数多于过表达对照组,干扰组大鼠癫痫发作次数少于干扰对照组;药筛后过表达组大鼠癫痫发作次数多于过表达对照组,干扰组大鼠癫痫发作次数少于干扰对照组;③过表达组大鼠CREB、BDNF表达水平高于过表达对照组,同样干扰组大鼠CREB、BDNF水平低于干扰对照组;④结果表明,调控大鼠海马内CREB表达水平会影响大鼠癫痫发作及耐药性癫痫的形成,通过调控CREB表达可能会对耐药性颞叶癫痫大鼠海马内BDNF表达水平产生影响。

奥氮平介导环磷酸腺苷反应元件结合蛋白/脑源性神经营养因子/酪氨酸蛋白激酶受体B通路对精神分裂模型大鼠的神经修复作用

目的 探讨奥氮平通过对环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)通路的影响对精神分裂模型大鼠的神经修复作用。方法 将60只大鼠纳入对照组、模型组、奥氮平低、中、高剂量组,各组均10只。模型组、奥氮平低、中、高剂量组大鼠进行MK-801腹腔注射0.2 mg/(kg·d),对照组注射等量生理盐水。模型建立成功24 h后,奥氮平低、中、高剂量组分别以0.5、1.0、1.5 mg/(kg·d)奥氮平溶液灌胃,对照组、模型组同剂量生理盐水灌胃。按照共济失调和刻板行为标准对大鼠行为学进行评分;Morris水迷宫实验评定大鼠认知功能及学习能力;ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;观察海马组织病理学变化;检测海马区细胞凋亡及CREB/BDNF/TrkB通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠共济失调、刻板行为评分、TNF-α、IL-6表达、细胞凋亡率极显著增加(P<0.01),奥氮平低、中剂量组显著增加(P<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠跨越平台次数、目标象限停留时间、CREB、磷酸化CREB(p-CREB)、磷酸化TrkB(p-TrkB)、TrkB、BDNF蛋白相对表达极显著减少(P<0.01),奥氮平低、中剂量组显著减少(P<0.05)。与模型组比较,奥氮平低、中剂量组跨越平台次数、目标象限停留时间显著增加(P<0.05),奥氮平高剂量组极显著增加(P<0.01)。模型组以及奥氮平低剂量组中海马细胞肿大明显、细胞核破碎分裂、固缩,组织排列杂乱;奥氮平中、高剂量组大鼠海马细胞中少见破碎分裂以及核固缩现象,整体组织与对照组大鼠相似。结论 奥氮平对精神分裂症模型大鼠的神经修复作用机制涉及到改善大鼠认知功能受损、保护大鼠海马神经细胞以及激活CREB/BDNF/TrkB信号通路的表达。

激活γ-氨基丁酸B型受体对糖尿病神经痛大鼠脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白和N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基表达的影响

目的利用1-氨基丁酸B型受体（GABA。）受体激动剂（巴氯芬）和拮抗剂（CGP55845），探讨激活GABA。受体对糖尿病神经痛大鼠脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（p-CREB）和N-甲基-D-天冬氨酸：受体2B亚基（NMDA4B、NR2B）表达的影响。方法6，2只SD雄性大鼠随机分为两组：正常对照组（C组）和糖尿病神经痛模型组（D组），腹腔分别注射生理盐水或链脲佐菌素（STZ，60mg／kg）。50只大鼠腹腔注射STZ，4周后36只大鼠成功制备成糖尿病神经痛（DNP）模型并鞘内置管，根据鞘内给药（共20u1）随机分为3组（m=12）：DNP对照组（D1组）：生理盐水10ul＋生理盐水10ul；巴氯芬组（D2组）：生理盐水10u1＋巴氯芬0．5ug；CGP5845＋巴氯芬组（D3组）：CGP5584510ug＋巴氯芬0．5ug；12只同周龄正常大鼠腹腔注射生理盐水并鞘内置管作为C组，鞘内注射生理盐水10ul＋生理盐水10ul。4组大鼠两次鞘内注射间隔15min，连续4d，每天鞘内注射前、后30min测定大鼠50％机械缩足阈值（PwT），各时点分别为：T1、T2、13、T4，最后1次测完后取大鼠脊髓背角，采用分子生物学方法测定p-CREB、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（CREB）和NR2B受体表达变化。结果与C组比较，D1、D3两组大鼠T1-T4各时点PwT明显降低（P〈0．05），p-CREB和NR2B蛋白表达及NR2BmRNA表达明显增多（P〈0．05）；与D1组比较，D2组大鼠各时点PwT显著升高（P〈0．05）；与D1组p-CREB（0．76±0．13）、NR2B（1．28±0．14）蛋白表达、NR2BmRNA表达（0．83±0．10）比较，D2组p-CREB（0．45±0．08）和NR2B（0．88±0．13）蛋白表达及NR2BmRNA表达（O．53±0．08）显著降低（P〈0．05）。4组间比较，CREB蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论激活GABA。受体可使糖尿病神经痛大鼠脊髓背角p-CREB、NR2B蛋白表达下调，抑制糖尿病神经痛。

神经生长因子与降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB的上调作用

目的:探讨外源性神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响。方法:用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Western印迹法和图像分析方法检测大鼠手术侧顶叶皮质CREB和p-CREB表达。结果:缺血再灌注组手术侧顶叶皮质CREB表达较假手术组减少,p-CREB表达高于假手术组;NGF组和CGRP组顶叶皮质CREB和p-CREB表达均高于缺血再灌注组;NGF组和CGRP联合应用时CREB与p-CREB的表达更高。结论:NGF与CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的,NGF和CGRP有协同作用。

滋肾益脑方对肾阴虚抑郁模型大鼠磷酸化的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白表达的影响

目的：探讨中药复方滋肾益脑方对抑郁大鼠磷酸化的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（p-CREB）表达的影响。方法：制备肾阴虚抑郁动物模型后，随机分为空白组，模型组，氟西汀组，滋肾益脑方中、高剂量组，采用免疫组织化学检测p-CREB表达。结果：与空白组比较，抑郁模型大鼠海马内p-CREB表达降低；药物组中以滋肾益脑方高剂量组海马内pCREB表达方面最明显。结论：滋肾益脑方具有抗抑郁、保护神经元的作用。

脑源性神经营养因子经由环磷酸腺苷反应元件结合蛋白磷酸化对缺氧大鼠胚脑皮质神经元细胞的保护作用

转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（Cyclic AMP response element-binding protein，CREB）是胚脑皮质神经元细胞内脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor，BDNF）诱导基因表达的重要调节因子。我们前期的研究表明BDNF对缺氧性神经元损伤具有保护作用，为了阐明BDNF对缺氧性神经元损伤的保护作用是否经过了核蛋白CREB的磷酸化，本研究采用蛋白质免疫印迹法检测单纯缺氧组和BDNF干预组胚脑皮质神经元细胞内CREB及Ser^133磷酸化CREB在不同时间点表达水平的变化。结果显示缺氧及BDNF均能刺激胚脑皮质神经元细胞内Ser^133磷酸化CREB表达增加，在不同缺氧时间点BDNF干预组Ser^133磷酸化CREB表达水平较单纯缺氧组明显增强（P〈0．01），BDNF干预组1h后Ser^133磷酸化CREB表达至高峰，以后持续表达维持6h以上，维持时间较单纯缺氧组明显延长；在缺氧0～3h，BDNF干预组细胞内总CREB表达水平与单纯缺氧组基本一致；随着缺氧时间的延长，单纯缺氧组细胞内CREB表达明显减少，以第5～6h最明显。结果表明，BDNF对缺氧性神经元损伤的保护作用经过了核蛋白CREB的磷酸化。

鞘内注射右美托咪定对吗啡戒断大鼠脊髓磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白表达的影响

目的探讨鞘内注射右美托咪定对吗啡戒断大鼠脊髓磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)表达的影响。方法 40只雄性成年SD大鼠随机均分为吗啡依赖组(MD组)、吗啡戒断组(MW组)、右美托咪定组(DEX组)和对照组(C组)。MD、MW、DEX组建立吗啡依赖模型。MW组和DEX组腹腔注射纳洛酮4mg/kg激发吗啡戒断反应。注射纳洛酮前30min,DEX组鞘内注射右美托咪定3μg/kg。注射纳洛酮后1h内观察大鼠戒断反应和痛觉异常反应。处死大鼠,取脊髓组织,采用免疫组化法和Western blot法检测p-CREB的表达。结果与MW组比较,DEX组戒断症状评分和促诱发痛评分均降低(P<0.05);与C组比较,MW组大鼠脊髓背角p-CREB表达上调(P<0.05);与MW组比较,DEX组大鼠脊髓p-CREB表达下调(P<0.05)。结论鞘内注射右美托咪定可能通过抑制脊髓p-CREB的表达而减轻吗啡依赖大鼠戒断反应。

磷酸化环磷腺苷反应元件结合蛋白对持续惊厥后海马细胞凋亡调控基因表达的影响

目的观察外源性磷酸环磷腺苷反应元件结合蛋白(p CREB)抗体对惊厥持续状态(SC)后海马细胞凋亡调控基因Bcl-2和c-Jun表达的影响,探讨p CREB在惊厥性脑损伤中的作用及其调控机制。方法成年Wistar鼠48只随机分为正常对照组(NC组,n=24)和惊厥持续状态组(SC组,n=24)。SC组采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射诱发SC模型。两组均根据脑室注射内容分为无注射组、生理盐水注射组(NS组)和抗p CREB注射组(抗p CREB组)3个亚组,每个亚组8只。注射后6 h处死动物。取双侧海马采用免疫组化和原位杂交(ISH)观察Bcl-2蛋白/m RNA、c-Jun蛋白/m RNA的分布,并进行半定量分析。结果 NC组中,3个亚组注射侧Bcl-2蛋白/m RNA表达均无显著性差异(P>0.05),SC组中抗p CREB组低于无注射组和NS组(P<0.05)。NC组和SC组中,3个亚组注射侧c-Jun蛋白/m RNA表达均有非常高度显著性差异(P<0.001),NS组和抗p CREB组c-Jun蛋白/m RNA表达高于无注射组(P<0.05),抗p CREB组高于NS组(P<0.05)。结论 SC后脑室内注射外源性抗p CREB抗体可下调SC后海马Bcl-2蛋白/m RNA表达,上调c-Jun蛋白/m RNA表达。

缺氧缺血再灌注新生鼠磷酸化的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白、神经生长因子对神经元的保护作用

目的探讨神经元的抗凋亡保护机制,评价环磷酸腺苷(cAMP)反应元件结合蛋白(CREB)、神经生长因子(NGF)对神经元损伤后的保护作用。方法7日龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血性脑损伤(HIBD)未治疗组、小干扰RNA(siRNA)治疗组、siRNA加NGF治疗组。按照改良的Rice法制备HIBD再灌注模型,各治疗组于再灌注后开始予1次siRNA干预治疗(10mg/kg);siRNA加NGF组予NGF(15μg/kg),1次/d。于治疗的不同时间通过免疫组织化学和Western blot法检测磷酸化的CREB、NGF在仔鼠HIBD再灌注后海马、丘脑神经元的表达变化。通过Thionine染色检测神经元凋亡。结果HIBD未治疗组3h仔鼠右侧海马CA1区磷酸化的CREB(p-CREB)表达达高峰,7d后降至假手术对照水平。3hNGF表达开始增加,12h持续达高峰,7d后仍明显高于假手术组(P<0.05)。siRNA治疗组p-CREB与NGF表达随时间逐渐下降。HIBD再灌注未治疗组24h右侧海马CA1区已有明显的凋亡,7d神经元凋亡与假手术组相比无统计意义。siRNA治疗组神经元有大量的丢失;而siRNA加NGF治疗组神经元与假手术组比较无明显丢失。结论CREB经信号转导调节大鼠NGF的表达,从而促进其神经元损伤后修复,减少神经元死亡。

电针神庭、百会对脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力和海马CA1区环磷酸腺苷效应元件结合蛋白及其磷酸化水平的影响

目的探讨电针神庭、百会治疗脑卒中后认知功能障碍的机制。方法 45只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组15只。后两组线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注模型。电针组于造模后24 h开始电针神庭和百会,共7 d。每天电针后行Morris水迷宫测试。治疗后,取大鼠脑组织TTC染色测量脑梗死体积,免疫组化检测海马CA1区环磷酸腺苷效应元件结合蛋白(CREB)及其磷酸化水平(p-CREB)的表达。结果从第4天开始,与模型组相比,电针组大鼠逃避潜伏期及游泳路程缩短(P<0.05);穿越平台次数增多(P<0.05)。电针组大鼠脑梗死体积小于模型组(P<0.05);海马CA1区CREB、p-CREB表达量较模型组增加(P<0.05)。结论电针神庭、百会后,脑缺血再灌注大鼠海马CA1区CREB、p-CREB表达量增加,从而保护神经元,改善学习记忆功能。

调肝解毒方对慢性癫痫大鼠学习记忆及海马组织环磷酸腺苷反应元件结合蛋白表达的影响

目的观察调肝解毒方对慢性癫痫大鼠学习记忆与海马组织环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)表达的影响。方法60只大鼠腹腔注射印防己毒素制作慢性癫痫模型后,随机分为模型组,调肝解毒方低剂量组、调肝解毒方高剂量组,丙戊酸钠组,每组15只,与正常组(15只)同期观察或治疗60天,以Morris水迷宫观察大鼠空间学习和记忆能力,应用RT-PCR方法检测大鼠海马组织CREBmRNA表达变化,免疫组织化学方法检测海马组织磷酸化的CREB水平变化。结果调肝解毒方低、高剂量组大鼠空间记忆能力高于模型组(P<0.01),海马组织CREBmRNA相对吸光度值增高,pCREB免疫阳性细胞的表达有不同程度增强,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.05,P<0.01)。结论调肝解毒方可在一定程度上改善反复癫痫大鼠的学习记忆能力,可能与调节海马CREB表达有关。

转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白在紫杉醇诱导HeLa细胞周期阻滞中的作用及其机制

目的探讨转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)在紫杉醇诱导宫颈腺癌HeLa细胞周期阻滞中的作用及其分子机制。方法 MTT法确定紫杉醇的最佳浓度和处理时间;PCR技术构建pCI neo/CREB(PN)重组质粒及pCI neo/CREB-M(PM)定点突变质粒;流式细胞术检测细胞周期,Western blotting检测磷酸化CREB(pCREB)、CREB、cyclins以及CDKs蛋白表达。结果紫杉醇抑制HeLa细胞增殖的有效条件为0.1μmol/L处理24 h。0.1μmol/L紫杉醇诱导G2/M细胞数量增加,并呈时间依赖性;cyclin A表达量下调,cyclin B1、D1和pCREB表达量上调。此外,紫杉醇的处理对cyclin E、CDK1、CDK2、CDK4和CREB表达量并无显著性改变。然而,PM联合紫杉醇处理后显著性地反转了紫杉醇单独处理引起的cyclin A下调、cyclin B1和cyclin D1的上调,并且细胞周期G2/M期阻滞显著性减少。结论转录因子CREB介导的靶向细胞周期蛋白表达在紫杉醇诱导的细胞周期阻滞过程中扮演重要角色。

环磷酸腺苷反应元件结合蛋白在儿童急性淋巴细胞白血病中表达的意义

目的探讨环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及意义。方法1.实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测ALL患儿骨髓单个核细胞CREB的mRNA表达量,以非白血病(NL)患儿10例作对照,对9例ALL患儿进行动态测定。2.ELISA法测定ALL患儿骨髓单个核细胞CREB总蛋白和蛋白磷酸化水平表达。结果1.高危组(HR)CREB的mRNA表达量明显高于NL组、低危组(LR)、中危组(MR),分别为8.49±12.24、1.13±0.81、1.47±1.02、1.24±0.60,Pa<0.05;而其他各组无明显差异。2.HR组CREB总蛋白量(ng/106个细胞)明显高于LR、MR组,分别为0.99±0.43、4.40±4.60,Pa<0.05;HR组CREB蛋白磷酸化的量(U/106个细胞)明显高于LR、MR组,分别为1.95±1.82、8.67±8.19,Pa<0.05。3.MICM分型与CREB高表达相结合,HR-ALL患儿的诊断符合率可达85.0%。4.CREB的mRNA表达量升高提示ALL未缓解或复发。结论CREB在儿童HR-ALL中呈高表达。CREB的表达量及其动态监测对ALL患儿的临床分型和疗效判断有一定的意义。

miR-182靶向作用环磷酸腺苷反应元件结合蛋白1调控人黑素瘤A375细胞的增殖和侵袭

目的探讨miR-182对人皮肤黑素瘤细胞系A375细胞的增殖与侵袭能力的影响,及miR-182影响黑色素细胞增殖的机制。方法利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将miR-182模拟物或抑制剂转染人黑素瘤A375细胞,以使miR-182过表达或低表达,采用MTT方法检测细胞活力变化,应用Transwell小室法检测A375细胞侵袭能力的变化,同时通过Real-time PCR检测核转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白1(CREB1)mRNA的表达情况,采用Western blotting检测CREB1蛋白的表达水平。结果与对照组相比,miR-182沉默能够显著增强A375细胞增殖和侵袭能力,P<0.01,显著降低CREB1蛋白与mRNA的表达水平,P<0.01;miR-182过表达的作用与之相反。结论 miR-182沉默增强A375细胞增殖和侵袭能力可能与降低CREB1蛋白相关。

镧对大鼠海马CA1区环磷酸腺苷应答元件结合蛋白磷酸化的影响

目的探讨镧的神经毒性作用机制。方法 40只Wistar孕大鼠通过自由饮水的方式随机分为正常对照组,LaCl30.25%,0.5%和1.0%染毒组。染毒组仔鼠在断乳前通过母乳染毒,断乳后通过自由饮水的方式染毒1个月。电感耦合等离子体质谱法检测海马CA1区镧含量;磷酸二酯酶法检测海马CA1区钙调蛋白(CaM)活性;Western印迹法检测磷酸化钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅳ(p-CaMKⅣ),磷酸化环磷酸腺苷应答元件结合蛋白(p-CREB)和c-jun蛋白表达;RT-PCR法检测c-jun mRNA表达水平。结果与正常对照组相比,LaCl30.25%,0.5%和1.0%染毒组海马CA1区镧含量显著高于正常对照组,分别为正常对照组的7.3,12.0和20.0倍(P<0.05);海马CA1区CaM活性显著降低,分别为正常对照组的80.7%,59.9%和30.6%(P<0.05);海马CA1区p-CaMKⅣ表达降低,分别为正常对照组的83.0%,57.4%和27.7%(P<0.05),p-CREB表达显著降低,分别降低了24.4%,36.6%和73.2%(P<0.05),c-jun蛋白表达显著降低,分别降低了36.1%,45.9%和83.6%(P<0.05),c-jun mRNA表达显著降低,分别降低了14.8%,27.2%和76.5%(P<0.05)。结论镧可能与钙竞争结合于CaM,造成海马CA1区CaM活性和CaMKⅣ,CREB磷酸化以及c-jun基因转录和蛋白表达水平下降,从而损害大鼠的学习记忆能力。

芍药苷调控环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白通路对脑卒中大鼠的影响

目的探讨芍药苷调控环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)通路对脑卒中大鼠的影响。方法该研究起止时间为2019年12月至2020年12月。40只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、芍药苷组(灌胃30 mg/kg芍药苷)、H89组[腹腔注射1 mg/kg H89(PKA抑制剂)]、芍药苷+H89组(灌胃芍药苷后腹腔注射H89),除假手术组仅进行动脉分离,其余各组均构建缺血性脑卒中模型,模型构建成功后进行药物干预,持续给药2周,模型组、假手术组以生理盐水代替。根据Zea Longa评分法对各组大鼠进行神经功能缺损评分,Morris水迷宫测定大鼠记忆行为学能力,酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测大鼠血清炎性因子水平,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠脑组织病理学变化,蛋白质印迹法检测大鼠脑组织cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组脑组织受损严重,大鼠神经功能缺损评分、血清中炎性因子水平显著升高(P<0.05),记忆行为学能力、脑组织中cAMP[(0.31±0.05)比(1.03±0.23)]、PKA[(0.30±0.06)比(1.05±0.24)]、磷酸化CREB[(0.29±0.08)比(1.02±0.23)]蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组相比,芍药苷组脑组织受损得到缓解,神经功能缺损评分、血清中炎性因子水平显著降低(P<0.05),记忆行为学能力、脑组织中cAMP[(0.79±0.20)比(0.31±0.05)]、PKA[(0.75±0.19)比(0.30±0.06)]、磷酸化CREB[(0.77±0.23)比(0.29±0.08)]蛋白表达显著升高(P<0.05);与芍药苷组相比,芍药苷+H89组大鼠脑组织受损加重,神经功能缺损评分、血清中炎性因子水平显著升高(P<0.05),记忆行为学能力、脑组织中cAMP[(0.60±0.13)比(0.79±0.20)]、PKA[(0.53±0.12)比(0.75±0.19)]、磷酸化CREB[(0.55±0.14)比(0.77±0.23)]蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论芍药苷可保护脑卒中大鼠的神经功能,可能是通过激活cAMP/PKA/CREB通路实现的。