锰对PC12细胞的增殖抑制及其MAPKs活化表达的实验研究

目的 筛选锰对PC12细胞增殖抑制作用的时间及剂量效应关系 ,观察在此条件下细胞MAPKs信号通路活化表达的特点 ,探讨锰作为PD相关危险因子神经毒性作用的分子机制。方法 取对数生长期PC12细胞株 ,用 2 0 0、4 0 0、6 0 0、80 0 μmol LMnCl2 培养液分别培养 1、2、3、4天 ,噻唑蓝 (MTT)比色试验和平板集落形成实验筛选锰的毒性剂量 ,台盼蓝染色法绘制细胞生长曲线 ;western blot法检测p Erk ,p p38。结果 MTT和平板克隆结果显示 2 0 0～ 80 0 μmol LMnCl2 作用 1、2、3、4天对PC12细胞有抑制作用 ,且呈剂量和时间依赖趋势 ,6 0 0 μmol LMnCl2 作用 4天对PC12细胞的抑制率达 5 0 %以上。Western blot结果显示 6 0 0 μmol LMnCl2 作用 1～ 4天 ,p Erk2逐渐降低 ,作用 2天时较对照降低了 75 % (n =3,P <0 .0 5 ) ,2 0 0、4 0 0、6 0 0 μmol LMnCl2 分别作用 4天时 ,p Erk逐渐降低 ,4 0 0 μmol LMnCl2 作用 4天较对照降低了 78% (n =3,P <0 .0 1) ;6 0 0 μmol LMnCl2 作用 1～ 4天可见p p38逐渐升高 ,作用 3天时较对照组增加 6 .6倍 (n =3,P <0 .0 5 ) ,2 0 0、4 0 0、6 0 0 μmol LMnCl2 分别作用 4d时 ,p p38逐渐升高 ,当 4 0 0 μmol LMnCl2 作用 4天时较对照组升高了 4 .7倍(n =3,P <0 .0 5 )。