磷酸化真核细胞始动因子4E结合蛋白1表达水平与乳腺癌患者淋巴结转移的关联性

目的:研究磷酸化真核细胞始动因子4E结合蛋白1(p-4EBP1)表达水平与乳腺癌患者淋巴结转移的关联性。方法:选取2018年6月-2019年6月本院乳腺癌患者134例,检测癌组织、癌旁组织中p-4EBP1表达阳性率,并分析其与临床病理学特征、淋巴结转移的相关性。结果:癌组织p-4EBP1表达阳性率为65.67%,高于癌旁组织的11.94%,差异有统计学意义(P<0.05);不同年龄、TNM分期、肿瘤直径、组织学分级、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体-2(Her-2)表达的患者乳腺癌组织中p-4EBP1表达情况比较差异无统计学意义(P>0.05);乳腺癌p-4EBP1阳性患者中淋巴结转移占比62.50%,高于阴性患者的37.50%(P<0.05);淋巴结转移p-4EBP1阳性患者中淋巴结转移≥4枚占比54.55%,高于阴性患者的11.76%(P<0.05)。经Pearson相关性分析,p-4EBP1表达水平与淋巴结转移呈正相关(r=0.589,P<0.05),且当淋巴结转移≥4枚时,相关性最显著(r=0.654,P<0.05)。结论:p-4EBP1在乳腺癌组织中阳性表达增高,且与淋巴结转移具有关联性,转移枚数越多,相关性越强,有助于临床诊断与治疗。

eIF4E与磷酸化eIF4E结合蛋白1在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)及磷酸化eIF4E结合蛋白1(p-4EBP1)在甲状腺乳头状癌组织中的表达,并探讨其与甲状腺乳头状癌的侵袭、转移等临床病理特征间的关系。方法采用免疫组化EnVinsion法检测66例乳头状癌(经典型乳头状癌37例,滤泡型乳头状癌29例)、20例结节性甲状腺肿伴乳头状增生及上述病例的肿瘤旁正常甲状腺组织中eIF4E与p-4EBP1的表达。结果在肿瘤旁正常甲状腺组织、甲状腺肿伴乳头状增生及乳头状癌中,eIF4E的阳性率分别为11.6%(10/86)、50.0%(10/20)和84.8%(56/66)(P<0.01);p-4EBP1的阳性率分别为8.1%(7/86)、40.0%(8/20)和66.7%(44/66)(P<0.01),并且p-4EBP1在滤泡型乳头状癌中的表达显著高于其在经典型乳头状癌中的表达(P<0.01)。eIF4E在有腺外侵袭和淋巴结转移的病例中的阳性率分别为96.7%(29/30)和100.0%(29/29),分别高于无腺外侵袭和无淋巴结转移的病例,后者阳性率分别为75.0%(27/36)和73.0%(27/37)(P<0.05)。而p-4EBP1在这两组病例中的表达差异则无显著性意义(P>0.05)。结论和正常甲状腺及甲状腺良性病变相比,eIF4E和p-4EBP1在乳头状癌中存在过表达;eIF4E的过表达与乳头状癌的侵袭与转移关系密切,在乳头状癌的进展中可能发挥了重要作用。

C-myb蛋白、4E-BP1蛋白在NK/T细胞淋巴瘤中的表达与预后的关系

目的探讨转录激活因子Myb(C-myb)、真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白-1(4E-BP1)蛋白在NK/T细胞淋巴瘤中的表达及与预后的关系。方法回顾性选取2017年12月至2019年12月在秦皇岛市第一医院治疗的NK/T细胞淋巴瘤患者34例作为观察组,同时选取腺样体肥大组织30例作为对照组。采用免疫组织化学法检测C-myb、4E-BP1表达,比较两组患者C-myb、4E-BP1表达情况,分析观察组C-myb、4E-BP1表达与临床病理关系。采用Spearman秩相关分析C-myb和4E-BP1表达相关性。随访患者总体生存时间,分析C-myb、4E-BP1表达与预后的关系。结果观察组C-myb和4E-BP1阳性表达率分别为55.88%和61.76%,明显高于对照组(10.00%、6.67%),差异均有统计学意义(P<0.05)。临床分期Ⅲ~Ⅳ患者C-myb阳性表达率为91.67%,明显高于Ⅰ~Ⅱ患者(36.36%),差异有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄、原发部位、B症状、国际预后指数(IPI)指数及淋巴结侵犯患者C-myb阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。IPI指数≤2分患者4E-BP1阳性表达率为76.00%,明显高于IPI指数>2分患者(22.22%),差异有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄、原发部位、B症状、临床分期及淋巴结侵犯患者4E-BP1阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);C-myb和4E-BP1表达呈正相关(r_(s)=0.642,P<0.05);C-myb阳性表达和阴性表达患者中位总生存时间比较,差异无统计学意义(P>0.05);4E-BP1阳性表达患者中位总生存时间为24个月(95%CI:21.15~26.85),明显短于4E-BP1阴性表达患者的33个月(95%CI:32.20~33.80),差异有统计学意义(P<0.05)。结论NK/T细胞淋巴瘤中C-myb和4E-BP1蛋白表达上调,与临床分期、IPI指数有一定关系,其中4E-BP1表达与患者预后可能有一定联系。

磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白和磷酸化真核细胞翻译启示因子4E结合蛋白1在病理性瘢痕中的表达

目的 探讨磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）和磷酸化真核细胞翻译启始因子4E结合蛋白l（p-4EBP1）在病理性瘢痕、非病理性瘢痕及正常皮肤组织中的表达水平,了解其在病理性瘢痕形成中的意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测p-mTOR、p-4EBP1在20例瘢痕疙瘩、20例增生性瘢痕、20例非病理性瘢痕及20例正常皮肤组织中的表达水平,分析其在不同组织中表达阳性率及病理性瘢痕中两者相关关系.结果 瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中p-mTOR、p-4EBP1蛋白阳性表达率分别为75.0％（15/20）和60.0％（12/20）、60.0％（12/20）和50.0％（10/20）,高于非病理性瘢痕20％（4/20）和10％ （2/20）及正常皮肤10％ （2/20）和5％ （1/20） （P＜0.05）;p-mTOR与p-4EBP1表达相关（r=0.338,P＜0.05）.结论 p-mTOR和p-4EBP1可能共同参与了病理性瘢痕的形成过程,且两者具有协同作用.

RIP3/MLKL通过激活4EBP1-eIF4E通路诱导程序性坏死

目的:程序性坏死是一种由受体相互作用蛋白3(receptor interacting protein 3,RIP3)和混合谱系激酶域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)介导的细胞死亡形式,有研究指出哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路可能参与程序性坏死的调控,真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(eukaryotic translation initiation factor 4Ebinding protein 1,4EBP1)-真核起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)通路是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白最重要的下游分子通路之一,然而此通路是否参与程序性坏死的发生,目前尚无相关研究。本研究旨在探索4EBP1-eIF4E通路在程序性坏死中是否发生改变。方法:首先向小鼠上皮样成纤维细胞系L929细胞中加入程序性坏死诱导剂TSZ(TNF-α/SM-164/Z-VAD-FMK),在光学显微镜下观察细胞坏死情况;进一步向敲除RIP3和MLKL基因的L929细胞中加入TSZ,采用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色观察细胞坏死情况,实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测4EBP1和eIF4E的mRNA和蛋白质表达水平。结果:野生型L929细胞用TSZ处理后,坏死细胞增加,4EBP1的mRNA和蛋白质表达水平明显下调且磷酸化的4EBP1(phosphorylated 4EBP1,p-4EBP1)/4EBP1值增加(P<0.05或P<0.01),eIF4E的mRNA表达水平明显上调且磷酸化的eIF4E(phosphorylated eIF4E,p-eIF4E)/eIF4E值增加(均P<0.01);在敲除L929细胞中的RIP3和MLKL基因后,PI阳性坏死细胞明显减少,4EBP1的mRNA和蛋白质表达水平明显上调且p-4EBP1/4EBP1值下降(P<0.05或P<0.01),eIF4E的mRNA表达水平明显下调且p-eIF4E/eIF4E值下降(均P<0.01)。结论:4EBP1-eIF4E通路在RIP3/MLKL介导的程序性坏死中发生活化。

鼻咽癌组织p-eIF4E和p-4EBP1高表达与预后不良正相关

目的探讨磷酸化的真核细胞翻译起始因子4E(p-eIF4E)和磷酸化的eIF4E结合蛋白1(p-4EBP1)与鼻咽癌(NPC)临床病理特征和预后的相关性。方法免疫组织化学染色法检测314例NPC组织中p-eIF4E和p-4EBP1蛋白表达,利用SPSS16.0软件分析p-eIF4E和p-4EBP1蛋白表达与NPC临床病理特征及预后的相关性。结果 NPC组织中存在p-eIF4E和p-4EBP1蛋白异常高表达,阳性表达率分别为74.2%(233/314)、72.9%(229/314);p-eIF4E和p-4EBP1蛋白表达在淋巴结转移NPC组织中阳性表达率显著高于无淋巴结转移NPC组织,但与性别、年龄、临床分期和组织类型无关;NPC组织中p-eIF4E与p-4EBP1蛋白表达呈正相关,且p-eIF4E和p-4EBP1蛋白阳性的NPC患者生存时间明显短于p-eIF4E和p-4EBP1阴性患者,是NPC判断预后的独立因素。结论 p-eIF4E和p-4EBP1蛋白过表达可能与NPC的发生、发展及不良预后密切相关,p-eIF4E和p-4EBP1有望成为NPC临床诊治和判断预后的分子标志物。

食管癌组织中p-4EBP1、p-S6K1表达及意义

目的探讨p-4EBP1和p-S6K1在食管癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化SP法检测45份食管癌组织及20份正常食管组织中p-4EBP1及p-S6K1表达。结果食管癌组织中p-4EBP1和p-S6K1表达阳性率分别为71.1%和66.7%,正常食管组织中阳性率分别为25.0%和35.0%,P均<0.05;二者在食管癌组织中的表达呈正相关P<0.05(r=0.381)。结论 p-4EBP1和p-S6K1在食管癌发生、发展中起促进作用;二者可作为食管癌诊断、靶向治疗及预后判断的重要生物学标记物。

艾灸治疗后帕金森病大鼠黑质p-mtor、p-4EBP1及α-syn表达变化

目的观察艾灸治疗对帕金森病大鼠黑质磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mtor)、磷酸化真核细胞起始因子4E结合蛋白1(p-4EBP1)及α-突触核蛋白(α-syn)表达的影响,探讨艾灸治疗帕金森病的作用机制。方法健康雄性SD大鼠60只,随机分为正常组、假手术组、帕金森病组、帕金森病艾灸组,每组15只。帕金森病组、帕金森病艾灸组采用颈背部皮下注射鱼藤酮法制备帕金森病模型,假手术组注射等浓度不含鱼藤酮的葵花油乳液,正常组不做处理。正常组、假手术组、帕金森病组不予艾灸;帕金森病艾灸组造模成功后选取足三里(双侧)、关元、风府穴施予艾灸治疗,1次/d,每次10 min,7 d为1个疗程,连续治疗2个疗程。然后对各组大鼠进行行为学评分;Western blotting检测各组大鼠黑质p-mtor、p-4EBP1,免疫组化法检测各组大鼠黑质α-syn。结果帕金森病组大鼠行为学评分与正常组和假手术组相比明显升高(P均<0.01);帕金森病艾灸组大鼠行为学评分较帕金森病组显著降低(P<0.01)。与正常组、假手术组相比,帕金森病组大鼠黑质p-mtor、p-4EBP1、α-syn表达量明显升高(P均<0.01);与帕金森病组相比,帕金森病艾灸组大鼠黑质p-mtor、p-4EBP1、α-syn表达量明显下降(P均<0.01)。结论艾灸足三里、关元、风府穴治疗帕金森病的作用机制可能是抑制了雷帕霉素靶蛋白/真核细胞起始因子4E结合蛋白通路的过度活化,遏止α-syn的过度表达,从而减轻过度表达的α-syn对多巴胺能神经元的毒性。

苦参碱抑制宫颈癌HeLa细胞增殖作用及机制

目的探讨苦参碱对人宫颈癌HeLa细胞体外增殖的抑制作用及其分子机制。方法以不同浓度(0.5、1.0、1.5、2.0g/L)的苦参碱分别处理HeLa细胞24、48、72h后,应用MTT法检测细胞增殖抑制率,WesternBlot方法检测培养48h细胞中真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)、4E结合蛋白1(4E-BP1)蛋白表达情况;1.0g/L的苦参碱作用HeLa细胞1、3、6、12h后,Western Blot方法测其eIF4E、4E-BP1蛋白磷酸化水平。结果苦参碱明显抑制HeLa细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性:在相同时间内,随着苦参碱浓度的增加,HeLa细胞的增殖抑制率明显升高(F=235.035,P<0.05);在同一浓度时,随着苦参碱作用时间的延长,HeLa细胞的增殖抑制率也明显升高(F=320.207,P<0.05);2.0g/L苦参碱作用72h对HeLa细胞增殖抑制率最大,为(65.30±2.17)%。不同浓度苦参碱处理HeLa细胞48h后,eIF4E、4E-BP1蛋白的表达均无明显变化(F=0.171、0.932,P>0.05)。1.0g/L苦参碱作用于HeLa细胞不同时间后,细胞中eIF4E、4E-BP1蛋白磷酸化水平均降低,且呈时间依赖性(F=43.48、107.23,P<0.01)。结论苦参碱可以明显抑制体外培养宫颈癌HeLa细胞的增殖,其作用可能是通过抑制eIF4E以及4E-BP1的磷酸化,从而抑制蛋白翻译来实现的。

基于mTOR/p70S6K/4EBP1通路探讨白花丹素对糖尿病肾病大鼠足细胞凋亡的影响

目的:探究白花丹素对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞凋亡及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)/真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)通路的影响。方法:SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、雷帕霉素2 mg/kg组、白花丹素50、100 mg/kg组、白花丹素100 mg/kg+自噬抑制剂2 mg/kg组,每组12只。除正常对照组外,其余各组采用高脂高糖饲料喂养联合链脲佐菌素腹腔注射的方法建立DN大鼠模型,造模成功后,各组给予相应药物处理,1次/d,连续给药8 w。每日观察大鼠的一般状态,并比较给药前后大鼠的体质量变化;检测大鼠24 h尿微量白蛋白(U-mAlb)含量,并检测空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)含量;过碘酸雪夫染色观察肾组织病理学变化;免疫组织化学法检测足细胞标志蛋白足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)、肾母细胞瘤基因1(WT-1)的表达;透射电镜观察肾小球足细胞超微结构变化;蛋白印迹法检测肾脏组织凋亡、自噬和mTOR/p70S6K/4EBP1通路相关蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠的一般状态较差,出现肾小球基底膜增厚、系膜基质增多等肾脏病理损伤以及肾小球足细胞足突倒伏、足突相互融合、部分足突消失,24 h U-mAlb、FBG、Scr、BUN含量、肾组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)蛋白和mTOR(p-mTOR)/mTOR、p70S6K(p-P70S6K)/P70S6K、4EBP1(p-4EBP1)/4EBP1蛋白比值明显升高(P<0.05),肾组织Nephrin、WT-1、B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)、自噬相关基因12(Atg12)蛋白和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-II/LC3-Ⅰ蛋白比值明显降低(P<0.05);与模型对照组比较,白花丹素50、100 mg/kg组大鼠的一般状态、肾脏病理和肾小球足细胞损伤明显改善,24 h U-mAlb、FBG、Scr、BUN含量、肾组织Caspase-3、BAX蛋白、p-mTOR/mTOR、p-P70S6K/p70S6K、p-4EBP1/4EBP1蛋白比值明显降低(P<0.05),肾组织Nephrin、WT-1、BCL-2、Atg12蛋白、LC3-II/LC3-Ⅰ蛋白比值明显升高(P<0.05);自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤能减弱白花丹素100 mg/kg对DN大鼠的改善作用(P<0.05)。结论:白花丹素可能通过抑制mTOR/P70S6K/4EBP1信号通路,激活自噬,抑制足细胞凋亡,进而减轻DN大鼠肾脏损伤。

下调miRNA-99b表达对脑胶质瘤细胞侵袭及mTOR／4E-BP1信号通路调控的影响

目的探讨下调微小RNA（miRNA）-99b表达对脑胶质瘤细胞侵袭的影响及其作用机制。方法体外常规培养脑胶质瘤U251细胞。（1）将U251细胞分为空白对照组、无义序列对照组和miRNA．99b抑制物组，后2组分别转染无义序列和miRNA-99b抑制物，空白对照组不做任何处理。采用RT-PCR检测U251细胞中miRNA-99b、哺乳动物雷帕霉素靶分子（mTOR）mRNA的表达，采用Westernblotting检测U251细胞中mTOR、真核翻译起始因子4E结合蛋白1（4E-BP1）及磷酸化（p）-4E-BP1蛋白的表达，采用Transwell侵袭实验检测U251细胞的侵袭能力。（2）将U251细胞分为无义序列对照组、mTORsiRNA组，分别转染无义序列和mTORsiRNA。采用RT—PCR检测U251细胞中miRNA-99b、mTORmRNA的表达，采用Westernblotting检测U251细胞中mTOR、p-4E-BPl蛋白的表达。f3）将U251细胞分为miRNA-99b抑制物＋无义序列对照组、miRNA-99b抑制物＋mTORsiRNA组，分别转染miRNA-99b抑制物＋无义序列、miRNA-99b抑制物＋mTORsiRNA。采用Westcrnblotting检测U251细胞中P-4E-BP1蛋白的表达，采用Transwell侵袭实验检测U251细胞的侵袭能力。结果（1）与空白对照组、无义序列对照组比较，miRNA-99b抑制物组U251细胞中miRNA-99bmRNA表达明显降低，mTORmRNA及蛋白表达明显升高．P-4E．BPl蛋白表达明显升高，穿膜细胞数明显增多，差异均有统计学意义（P〈0．05），而4E-BP1蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）与无义序列对照组比较，mTORsiRNA组U251细胞中mTORmRNA及蛋白表达明显降低，P-4E-BP1蛋白表达明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．05），而miRNA-99bmRNA表达差异无统计学意义（P〉O．05）。（3）与miRNA-99b抑制物＋无义序列对照组比较，miRNA-99b抑制物＋roTORsiRNA组U251细胞中P-4E．BP1蛋白表达明显降低．穿膜细胞数明显减少，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论下调miRNA．99b表达可促进脑胶质瘤细胞侵袭，其作用机制与mYOR／4E-BP1信号通路调控有关。

磷酸化4E—BPl与恶性肿瘤研究进展

4E—BPl是真核细胞翻译起始因子4E（eIF4E）的特异性抑制物，近年研究显示，磷酸化形式的4E—BPl（P-4E．BPl）在多种恶性肿瘤如乳腺癌、宫颈癌、甲状腺、前列腺癌、大肠癌等中存在过表达，并且其表达与肿瘤的大小、侵袭、转移能力、预后等临床病理特征密切相关。因此，阐明P-4E—BPl的表达与肿瘤的生物学行为将有助于全面了解恶性肿瘤的发生、发展、侵袭及转移机制，同时对指导临床诊断和治疗，判断预后有重大意义。更重要的是，P-4E—BPl有可能成为治疗肿瘤的新靶点，为临床治疗肿瘤提供新思路。

益气化瘀清热方及其拆方对IgA肾病大鼠肾组织mTOR信号通路的影响

目的:探讨益气化瘀清热方及其拆方干预IgA肾病的作用机制及IgA肾病的发生发展机制。方法:将90只雄性Wistar大鼠随机分为6组,即空白组、模型组、益气组、化瘀组、清热组、复方组,采用牛血清白蛋白+四氯化碳+脂多糖的方法制备IgA肾病模型;运用免疫组化技术检测mTOR信号通路下游信号蛋白磷酸化核糖体蛋白S6(pS6)、磷酸化真核细胞启动因子4E结合蛋白1(p-4EBP1)的表达部位,并对其进行半定量分析;运用Western blot检测各组大鼠肾皮质pS6、p-4EBP1的蛋白表达量。结果:pS6、p-4EBP1主要在IgA肾病模型大鼠肾组织中肾小球足细胞及壁层上皮细胞中表达,肾小管中散在表达。免疫组化结果显示,pS6表达量模型组最高(P﹤0.05),益气组次之(P﹤0.05)。各实验组p-4EBP1蛋白表达量模型组最高(P﹤0.05),复方组、空白组最低(P﹤0.05)。Western blot结果同免疫组化结果一致。结论:益气化瘀清热方及其拆方可通过抑制mTOR下游信号蛋白pS6、p-4EBP1的表达发挥治疗作用。