磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α在脂肪变性人肝癌HepG2细胞中的表达及其意义

目的观察腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)α磷酸化在Hep G2细胞脂变模型中的表达及意义。方法 Hep G2细胞予油酸和棕榈酸组成的0.3 mmol/L游离脂肪酸(FFA)诱导24 h后,建立脂肪变性Hep G2细胞模型,并设置对照组比较。诱导成功后,采用油红O染色观察细胞内脂滴蓄积状态;采用全自动生化仪检测细胞上清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量和细胞内甘油三酯(TG)含量;采用生物试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量的变化,运用Western印迹法检测各组细胞AMPKα和磷酸化AMPKα(p AMPKα)蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组细胞内橘红色脂滴大量形成,且细胞内TG和MDA含量明显升高(P<0.01),SOD含量水平明显下降(P<0.01),p AMPKα蛋白表达均显著降低(P<0.01)。结论 FFA诱导的脂肪变性Hep G2细胞模型可以出现脂质代谢紊乱和氧化应激状态,其机制可能与细胞内p AMPKα蛋白的激活减少有关。

调节磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶活性对氧糖剥夺再灌注损伤后小胶质细胞的影响

目的 探讨调节腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）对氧糖剥夺再灌注（OGD/R）损伤后小鼠小胶质细胞BV2存活的影响.方法 应用BV2细胞系建立氧糖剥夺6h再灌注24 h的离体模型,设置正常对照组和OGD/R组,将细胞无血清同步化处理12h后,分别给予5-氨基4.甲酰胺咪唑核糖核苷酸（AICAR）5、50、100 μmol,Compound C 0.1、1、10 μmol.通过不同浓度AICAR及Compound C分别激活及抑制AMPK活性后,应用四甲基偶氮唑蓝方法观察调节AMPK活性对OGD/R损伤后BV2细胞存活率的影响,应用流式细胞仪方法检测BV2细胞的细胞凋亡率.结果 各浓度AICAR及Compound C对正常培养的BV2细胞无明显影响（P＞0.05）;与正常培养比较,OGD/R损伤能够明显减低BV2细胞存活率[（70.8±13.6）％比（100.0±0.0）％,P＜0.01];应用AICAR（5、50、100μmol）能够轻度增加OGD/R后BV2细胞存活率,分别为（84.8±5.4）％,（83.3±1.3）％,（82.8±2.6）％;而应用Compound C 10 μmol能够降低BV2细胞存活率至（28.7±5.3）％.流式细胞仪检测显示,OGD/R组BV2细胞凋亡率较对照组高,差异有统计学意义[（17.3±1.9）％比（2.7±0.5）％,P＜0.01],Compound C 10μmol能够明显增加OGD/R后BV2细胞的凋亡率,为（47.6±4.4）％,与OGD/R组比较差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 抑制AMPK的活性能够加重OGD/R后BV2细胞损伤.

二甲双胍对血管内皮细胞磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶和一氧化氮含量的影响

目的观察二甲双胍(降血糖药)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(P-AMPK)表达和一氧化氮含量的影响。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞分为6组:①空白对照组(常规培养);②二甲双胍(Met)2 mmol·L-1组;③软脂酸(PA)300μmol·L-1组;④软脂酸300μmol·L-1+二甲双胍2 mmol·L-1组;⑤5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷酸(AIC-AR)1 mmol·L-1组及⑥软脂酸300μmol·L-1+AICAR 1 mmol·L-1组,经孵育24 h后,收集细胞和培养上清液,用Western blot方法,测定各组的AMPK的表达;用硝酸盐还原法,观察各组培养上清液中的一氧化氮的含量。结果与空白对照组比较,Met组AMPK的磷酸化表达水平升高,培养上清液中NO生成增加。(Met+PA)组AMPK的磷酸化表达水平升高,NO生成增加。结论二甲双胍通过激活AMPK使NO生成增加,改善HUVECs的内皮功能,从而起到抗动脉粥样硬化的作用。

高血糖经抑制磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶加重脑缺血再灌注损伤

目的:探讨磷酸化的腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)在高血糖加重脑缺血再灌注损伤中的作用。方法:通过注射链脲佐菌素制备糖尿病高血糖模型,线栓法制备大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型;分为假手术组(sham组),正常血糖脑缺血再灌注24 h组(NM I/R 24 h组)、72 h组(NM I/R 72 h组),高血糖脑缺血再灌注24 h组(HM I/R 24 h组)以及72 h组(HM I/R 72 h组),采用组织学、免疫组织化学及免疫印迹等方法,比较观察脑组织的损伤及p-AMPK的表达。结果:NM I/R 24 h组、NM I/R 72 h组大鼠均可见神经功能缺失的表现,HM组大鼠神经功能缺失评分明显高于NM组。NM I/R 24 h组梗死区脑组织疏松水肿,神经元固缩;HM组大鼠脑组织疏松水肿及固缩神经元较NM组大鼠明显增加;与NM I/R 72 h组比较,HM组大鼠仍存在脑组织疏松水肿,较多固缩神经元。免疫组织化学显色和免疫印迹结果可见,I/R 24 h和I/R 72 h,HM组p-AMPK相对蛋白量明显低于NM组。p-AMPK定位观察可见,p-AMPK与神经元共表达,但不与星形胶质细胞共表达。结论:糖尿病高血糖加重大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,可能与神经元磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶减少有关。

中医药通过调控腺苷酸活化蛋白激酶干预非酒精性脂肪性肝病研究进展

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)已成为世界上患病率最高的慢性肝病,但是目前临床上仍没有公认的治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的西药。中医学作为我国的传统医学,在治疗非酒精性脂肪肝病有一定优势。腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)在调节细胞能量稳态及维持糖脂代谢方面起重要作用,是治疗肥胖、2型糖尿病、NAFLD等多种代谢性疾病的重要靶点。然而目前尚未见中医药通过AMPK调控NAFLD的系统综述,故本文对中医药通过AMPK通路调控NAFLD的研究进展进行综述。

基于腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路探讨柚皮素对视网膜微血管内皮细胞的损伤机制研究

目的 基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路探讨柚皮素(NAR)对人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)的损伤机制。方法 将HRMECs随机分为对照组、高糖(HG)组、HG+NAR组(3 mg/L NAR)、HG+激活剂(AICAR)组(1 mmol/L AICAR)、HG+NAR+AICAR组(3 mg/L NAR+1 mmol/L AICAR);除对照组向培养基中加入5 mmol/L的D-葡萄糖处理外,其他各组均向培养基中加入30 mmol/L的D-葡萄糖处理。采用CCK-8及Transwell分别检测细胞增殖及迁移情况;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测自噬因子LC3 mRNA、p62 mRNA表达水平;采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测AMPK/mTOR通路及自噬相关蛋白表达水平。结果 与对照组相比,HG组细胞活力,迁移数,IL-1β、IL-6和TNF-α水平,p-AMPK/AMPK,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,LC3 mRNA表达增加,p-mTOR/mTOR、p62蛋白及p62 mRNA表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);与HG组相比,HG+NAR组细胞活力,迁移数,IL-1β、IL-6和TNF-α水平,p-AMPK/AMPK,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,LC3 mRNA表达下降,p-mTOR/mTOR、p62蛋白及p62 mRNA表达增加,但HG+AICAR组细胞活力,迁移数,IL-1β、IL-6和TNF-α水平,p-AMPK/AMPK,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达增加,p-mTOR/mTOR、p62蛋白及p62 mRNA表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);与HG+NAR组相比,HG+NAR+AICAR组细胞活力,迁移数,IL-1β、IL-6和TNF-α水平,p-AMPK/AMPK,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,LC3 mRNA表达增加,p-mTOR/mTOR、p62蛋白及p62 mRNA表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);与HG+AICAR组相比,HG+NAR+AICAR组细胞活力,迁移数,IL-1β、IL-6和TNF-α水平,p-AMPK/AMPK,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,LC3 mRNA表达下降,p-mTOR/mTOR、p62蛋白及p62 mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NAR可减轻HG诱导的HRMECs损伤,其机制可能与抑制AMPK/mTOR通路介导的自噬有关。

橘皮素通过腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路调控细胞自噬促进大鼠腹主动脉瘤发生发展的机制

目的探讨橘皮素通过腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路调控细胞自噬促进大鼠腹主动脉瘤(AAA)发生发展的机制。方法选取无特定病原体级SD雌性大鼠45只,其中20只大鼠皮下埋植0.9%氯化钠注射液缓释泵(对照组),剩余25只大鼠皮下埋植血管紧张素Ⅱ缓释泵(AAA组)构建AAA模型。造模过程中AAA组大鼠死亡5只,共20只造模成功。对照组予0.9%氯化钠注射液灌胃,AAA组予橘皮素灌胃1次/d,持续7 d。观察大鼠主动脉血管平滑肌细胞活力、细胞凋亡率、细胞迁移率,比较2组细胞蛋白水平、自噬细胞基因表达量、细胞因子水平及AMPK/mTOR信号通路表达量。结果AAA组细胞活力高于对照组,细胞凋亡率、细胞迁移率均低于对照组(均P<0.05);β-连环蛋白、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)相关X蛋白水平均低于对照组,细胞周期蛋白D1、Bcl-2水平均高于对照组(均P<0.05);Beclin1、Atg4b、Bnip3、Vps34、LC3基因表达量均低于对照组(均P=0.001);白细胞介素6、正常T淋巴细胞表达和分泌的细胞因子、转化生长因子β、胰岛素样生长因子1、单核细胞趋化蛋白1水平均低于对照组(均P<0.05);AMPK、mTOR表达量均高于对照组[(1.61±0.35)比(1.10±0.21)、(2.11±0.14)比(1.13±0.06)](均P=0.001)。结论橘皮素对AAA大鼠细胞蛋白水平、自噬细胞水平及转化生长因子水平有调节作用,其作用机制可能与AMPK/mTOR信号通路调控相关。

腺苷酸活化蛋白激酶在炎症性肠病的研究进展

炎症性肠病(IBD)是一种与炎症及免疫相关的慢性肠道疾病,发病率逐年递增,是全球卫生问题的重大挑战。但是目前IBD确切的发病机制仍未十分清楚。腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)是一种高度保守的细胞能量保护器,在维持体内能量平衡中发挥了十分重要的作用。近年来研究发现,AMPK可通过增强肠道屏障功能、抑制炎症反应、抗纤维化、增强自噬等方面延缓炎症性肠病疾病的进展。该文对以上方面进行综述,为IBD提供新的治疗靶点。

Compound C抑制腺苷酸活化蛋白激酶的磷酸化后对缺氧预处理的影响及其机制

【目的】探讨Compound C抑制腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的磷酸化后对缺氧预处理的影响。【方法】筛选合适的Compound C浓度。将细胞分为Compound C组和non-Compound C组,以上两组再各自分为3个亚组:对照组(control);缺氧预处理+缺氧组(Hyp+OGD);单纯缺氧组(OGD);噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞活性。ATP荧光检测试剂盒测定胞内的ATP水平。Western Blot法测定各组细胞内AMPKα,磷酸化的AMPKα(P-AMPKα),过氧化物酶体增生激活受体-γ共刺激因子-1α(PGC-1α)的蛋白表达水平。【结果】OGD后Compound C组(0.418±0.021)和non-Compound C组(0.640±0.028)相比,细胞活性下降更明显(P<0.01),经预处理后细胞活性均增加(P均<0.05),加入Compound C后,control组细胞活性下降3.5%(P=0.473),OGD组细胞活性下降34.6%(P<0.01),而缺氧预处理后细胞活性下降21.1%(P<0.05)。OGD后Compound C组(0.042±0.001)和non-Compound C组(0.051±0.001)相比,ATP下降更明显(P<0.05),经预处理后ATP水平分别增加了21.5%及28.0%(P均<0.05)。Compound C 3组AMPKα蛋白的表达与non-Compound C对应的3组相比差异无统计学意义(P均>0.05)。OGD后,Compound C组与non-Compound C组细胞P-AMPKα蛋白的表达均明显增加(与各自的对照组比较,P均<0.05)。经预处理后,non-Compound C组P-AMPKα蛋白的表达较单纯OGD组增加(P<0.05),但Compound C组P-AMPKα蛋白的表达与单纯OGD组间的差异无统计学意义(P=0.935)。Compound C组细胞PGC-1α蛋白的表达与non-Compound C组对应的3组比较明显下降(P均<0.05),其中control组下降了68.1%,Hyp+OGD组下降了24.7%,OGD组下降了39.6%,Hyp+OGD及OGD相对于各自control组均上调其表达(P均<0.05),且预处理组的上调更明显(与OGD组比较,P均<0.05)。【结论】Compound C抑制AMPK的激活后,PGC-1α的表达下调,AMPK为缺氧预处理或缺氧处理上调PGC-1α的其中一条途径,抑制其活体P-AMPKα后其他的途径仍然在缺氧预处理中发挥重要的细胞保护作用。

运动介导腺苷酸活化蛋白激酶防治慢性阻塞性肺疾病的作用机制

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种以持续存在的呼吸道症状和气流受限为主要特征的、常见的、可预防和治疗的慢性气道疾病。目前,我国COPD的患病率仍呈不断增长的趋势,已成为仅次于高血压、糖尿病的中国第三大常见慢性病,给患者家庭和国家卫生系统带来巨大的负担。研究证实,肺部炎症、肺细胞衰老、肺线粒体功能障碍和肺代谢失调是COPD发生与发展的主要病理原因,腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)可以改善肺部炎症反应、延缓肺细胞衰老、纠正肺线粒体功能障碍及调节肺细胞代谢紊乱。但就目前而言,通过运动手段上调AMPK的表达防治COPD的潜在机制仍不清楚。因此,通过中国知网(CNKI)、PubMed、Web of Science、WHO等官网与数据库,检索并梳理相关文献资料,综述COPD的发病机制、运动对AMPK表达的影响及运动介导AMPK防治COPD的可能机制,以期为COPD提供新的治疗靶点。

Anisomycin过度激活丝裂原活化蛋白激酶使tau发生过度磷酸化(英文)

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的病理特征之一是神经元内存在神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs),后者是由过度磷酸化的微管相关蛋白tau形成的双股螺旋细丝(pairedhelical filaments,PHFs)构成。为了探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)在微管相关蛋白tau磷酸化中的作用及机制,本实验用0.1μg/mL、0.2μg/mL和0.4μg/mL三种不同浓度的MAPK激动剂anisomycin处理小鼠成神经瘤细胞株(mouse neuroblastoma cells,N2a),检测MAPK活性的变化及其与tau蛋白多个AD相关位点过度磷酸化的关系,并检测糖原合酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)的活性变化。结果显示,anisomycin以剂量依赖的方式激活MAPK活性,但免疫印迹结果显示tau蛋白的Ser-198/199/202位点和Ser-396/404位点的过度磷酸化只在anisomycin浓度为0.4μg/mL时出现,三种浓度的anisomycin均未引起tau蛋白Ser-214位点磷酸化的改变;同时,GSK-3活性在anisomycin为0.1μg/mL时没有明显变化,当anisomycin浓度升高到0.2μg/mL和0.4μg/mL时出现明显增高,而PKA的活性没有明显的改变。使用GSK-3的特异性抑制剂氯化锂(LiCl)则完全阻断MAPK被过度激活导致的tau蛋白磷酸化水平的增高,而同时MAPK活性不受影响。以上结果提示:过度激活MAPK可以导致tau蛋白Ser-198/199/202和Ser-396/404位点过度磷酸化,其机制可能涉及MAPK激活GSK-3的间接作用。

增生性瘢痕中磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶和c-Jun蛋白的表达特征及其与瘢痕形成的关系

目的 观察磷酸化 P38丝裂原活化蛋白激酶 (P38MAPK)和 c- Jun蛋白在增生性瘢痕组织中的表达特征及其影响瘢痕形成和成熟的机制。 方法 取 16例住院的增生性瘢痕患者的瘢痕组织 ,并将其分为生长活跃期组(形成时间在 1年以内 ,含 1年者 )、生长稳定期组 ,每组各 8例 ;另取正常皮肤 8例。所有取材均未经任何治疗。用免疫组织化学方法和常规病理技术检测磷酸化 P38MAPK和 c- Jun两种蛋白 ,在增生性瘢痕组织和正常皮肤组织中的表达和分布规律。 结果 正常皮肤组织中 ,磷酸化 P38MAPK主要分布于表皮基底层细胞的胞浆和胞核内 ,c- Jun蛋白则主要定位于表皮细胞和内皮细胞中 ,两种蛋白的阳性细胞率分别为 2 1.3%± 3.6 %和 33.4 %± 3.5 %。在处于生长活跃期的增生性瘢痕组织中 ,磷酸化 P38MAPK和 c- Jun的阳性信号主要定位于表皮细胞和部分成纤维细胞内 ,阳性细胞率分别上升至 6 9.5 %± 3.3%和 5 9.6 %± 4 .3% ,明显高于正常皮肤组织 (P<0 .0 1) ;而在成熟稳定的增生性瘢痕中 ,两种蛋白表达有所下降 ,但仍高于正常皮肤组织。 结论 增生性瘢痕的形成和成熟可能与激活 P38MAPK信号传递通路 ,影响c- Jun蛋白表达有关。

电针干预自发性高血压大鼠主动脉丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1及磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白的表达

背景:近年来大量临床研究表明针刺风池、太冲、曲池等穴位能有效降低血压,可用于高血压,但对其治疗的分子机制尚未阐明。目的:观察针刺大鼠风池、太冲、曲池等穴位对丝裂原活化蛋白激酶信号转导调控系统的影响,从而探讨针刺治疗高血压的分子机制。方法:选取8月龄自发性高血压雄性Wistar大鼠14只,随机分为针刺组和模型组,每组7只;另选取同月龄正常血压雄性Wistar-Kyoto大鼠7只作为对照组。对针刺组大鼠采用电针针刺双侧风池、曲池和三阴交穴,毫针刺太溪和太冲穴。3周后采用RT-PCR方法检测各组大鼠主动脉组织丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1mRAN的表达,Western blot方法检测丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达。结果与结论:与对照组比较,模型组主动脉组织磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达水平升高,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1mRNA及其蛋白表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,针刺组主动脉组织磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达水平降低,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1mRNA及其蛋白表达水平升高(P<0.05)。提示针刺治疗自发性高血压大鼠可能是通过调控丝裂原活化蛋白激酶信号转导途径,增强磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达,降低丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1蛋白表达,从而改善血管重塑,降低血压。

电针夹脊穴在佐剂性关节炎大鼠镇痛过程中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶的变化及作用

目的:观察电针夹脊穴对佐剂性关节炎大鼠背根神经节(dorsalrootganglion,DRG)内磷酸化p38MAPK表达的影响,从信号转导的角度研究电针镇痛的机制。方法:以完全福氏佐剂(CFA)佐剂性关节炎大鼠为疼痛模型,采用免疫组化技术,分别检测空白对照组、模型组、及电针治疗组SD大鼠DGG内磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinki-nase,MAPK)表达特征。结果:与空白对照组犤(7.65±0.72)s犦相比,造模后24,48h及7d后,模型组大鼠痛阈下降分别为(6.67±0.59),(6.53±0.73),(6.64±0.76)s,同时DRG内p38MAPK磷酸化明显增多(P<0.05),尤以48h后增加明显;电针治疗组大鼠在电针夹脊穴治疗后,24,48h及7d后痛阈检测发现其痛阈回升,分别为(7.31±0.79),(7.42±0.93),和(7.44±0.89)s,DRG内p38MAPK磷酸化水平下降(P<0.05)。结论:p38MAPK可能为电针镇痛中一个重要的信号转导分子,其磷酸化在疼痛及电针镇痛过程中其重要作用。

腺苷酸活化蛋白激酶在哈萨克族食管鳞癌组织中的表达及意义

目的:研究腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)在哈萨克族食管鳞癌患者癌组织中的表达水平,及其与患者临床病理指标和预后的关系,探讨AMPK在哈萨克族食管鳞癌脂质代谢重编程中的作用。方法:选取65例哈萨克族食管鳞癌患者。采用qPCR方法检测食管鳞癌及癌旁正常组织中AMPK mRNA的表达水平。免疫组织化学法检测食管鳞癌组织及癌旁正常组织中AMPK蛋白表达水平。Kaplan-Meier法绘制生存曲线分析食管鳞癌组织中AMPK表达与患者预后的相关性。Cox比例风险回归分析影响食管鳞癌患者不良预后发生的危险因素。在食管癌细胞株KYSE150中稳定敲低AMPK,通过超高效液相色谱-质谱法进行脂质定性定量分析。结果:食管鳞癌组织中AMPK的mRNA及蛋白表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。AMPK表达水平与癌组织分化程度、淋巴结转移情况、TNM分期相关(P<0.05),AMPK的阳性表达是哈萨克族食管鳞癌患者不良预后的危险因素。通过对食管癌细胞脂质含量的定量分析,发现不同脂质等级中脂质含量及变化趋势不同。共鉴定出10种脂质亚类,由脂肪酸类(7.88%)、甘油脂类(60.77%)、甘油鞘脂类(21.35%)、鞘脂类(9.62%)和固醇脂类(0.38%)组成。AMPK诱导食管癌细胞发生明显的脂质代谢变化,共发现76个差异脂质代谢物,其中37个上调,29个下调,其中甘油三酯(TAG)上调和鞘磷脂(SM)、甘油二酯(DAG)和磷脂酰乙醇胺(PE)下调,推测这些分布的变化有助于阐明食管癌中脂质积累的原因和可能的致癌分子机制。结论:AMPK在食管鳞癌组织中高表达,可能参与了食管鳞癌的发生与发展,对食管鳞癌的预后具有重要意义;AMPK可能通过介导脂质代谢重编程参与哈萨克族食管鳞癌的进展。

糖尿病大鼠肾脏组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶的表达特征及意义

目的 :探讨糖尿病 ( DM)大鼠肾组织 p38丝裂原活化蛋白激酶 ( MAPK)及其下游转录因子 c AMP反应元件结合蛋白 ( CREB)的表达特征及与肾小球肥大、细胞外基质积聚的关系。方法 :70只雄性 Wistar大鼠 ,行右肾切除术 2周后 ,随机分为两组 :右肾切除对照组 ( CN)和 DM组。 DM组经腹腔注射链脲佐菌素( STZ,6 5 mg/kg)诱发 DM。 CN组注射等量枸橼酸缓冲液。两组分别于注射后第 1、2、4、8和 12周各取 6只大鼠 ,收集 2 4 h尿液 ,测定尿蛋白 ( Upro)、肌酐 ( UCr) ;股动脉放血分离血清 ,测血糖 ( Glu)、血肌酐 ( SCr)、尿素氮( BU N) ,并计算肌酐清除率 ( CCr) ;免疫组化法检测肾皮质磷酸化 p38MAPK( P p38MAPK)及其磷酸化CREB( P CREB)的表达特征 ,并检测转化生长因子 β1 ( TGFβ1 )、纤维粘连蛋白 ( FN)及层粘连蛋白 ( L N)的表达 ,应用图像分析系统进行定量分析。流式细胞术检测 P p38MAPK和 P CREB蛋白的表达。结果 :与 CN组比较 ,DM组 P p38MAPK在第 1、2、4和 8周升高 ( P均 <0 .0 1) ,第 12周降至正常。DM组 P CREB在第2、4和 8周增高 ( P均 <0 .0 1) ,在 12周时降至正常。 TGFβ1 、FN、L N分别于第 2、4周开始升高。结论 :肾小球p38MAPK及其下游转录因子 CREB活性在早期糖尿病肾病大鼠肾组织中升高 。

磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶与转化生长因子β1在正常和腰椎间盘退变组织中的表达

背景:研究表明p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路与椎间盘退变过程中炎症反应密切相关。目的:检测腰退变椎间盘组织和正常腰椎间盘组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1的表达。方法:选取经手术切除的36例退变椎间盘组织和10例正常椎间盘组织为对象,应用免疫组织化学法检测两组中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1的表达,并应用真彩色病理图像分析系统进行分析。结果与结论:腰退变椎间盘组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1的阳性表达率均高于正常椎间盘组织(P<0.05),证实磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1在退变椎间盘组织中呈高表达。

紫草素对糖尿病周围神经病变大鼠的治疗作用及对腺苷酸活化蛋白激酶/核因子E2相关因子2信号通路的影响

目的:探究紫草素对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠的治疗作用及对腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响。方法:构建DPN模型,将建模成功的48只大鼠随机分为模型组、紫草素低剂量组、紫草素高剂量组和甲钴胺片组,每组12只。另取12只大鼠作为对照组。紫草素低、高剂量组大鼠分别给予12.5、25 mg/kg紫草素灌胃,甲钴胺片组大鼠给予0.14 mg/kg甲钴胺片灌胃,对照组和模型组大鼠给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,每日给药1次,连续8周。观察各组大鼠坐骨神经病理学变化。检测大鼠坐骨神经感觉神经传导速度(SNCV)和运动神经传导速度(MNCV),血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β,坐骨神经超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、AMPK、Nrf2 mRNA和蛋白水平。结果:对照组大鼠坐骨神经结构正常;模型组大鼠坐骨神经髓鞘变薄,出现白色结缔物质,间隙加宽,可见明显炎症细胞浸润;紫草素低、高剂量组大鼠坐骨神经病变程度依次减轻;甲钴胺片组和紫草素高剂量组大鼠坐骨神经病理学变化无明显差异。与对照组比较,坐骨神经SNCV和MNCV、血清SOD水平以及坐骨神经AMPK、Nrf2 mRNA和蛋白水平显著降低,血清TNF-α、IL-6及坐骨神经MDA水平显著升高(均P<0.05)。与模型组比较,坐骨神经SNCV和MNCV、血清SOD水平以及坐骨神经AMPK、Nrf2 mRNA和蛋白水平依次升高,血清TNF-α、IL-6及坐骨神经MDA水平依次降低(均P<0.05)。甲钴胺片组和紫草素高剂量组上述各项指标比较差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:紫草素能抑制DPN大鼠炎症反应和氧化应激,保护大鼠坐骨神经,其机制可能与激活AMPK/Nrf2信号通路有关。

角蛋白及p38丝裂原活化的蛋白激酶磷酸化对角质形成细胞增殖抑制的调控

目的:研究抗角蛋白抗体对角蛋白及p38丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)磷酸化的影响。方法:提取抗体作用过的人舌鳞状细胞癌(Tca)细胞角蛋白,以未经抗体作用的细胞作阴性对照。角蛋白经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离、转膜,用抗酪氨酸磷酸化抗体作用和显色。超声裂解抗体作用细胞,设置阴性对照。经SDS-PAGE分离、转膜后用抗磷酸化p38MAPK抗体作用,化学发光剂发光显影。结果:角蛋白在分子质量大约为58ku处出现阳性条带;阴性对照未出现条带。抗磷酸化p38MAPK抗体作用后在分子质量大约44ku处有阳性条带;阴性对照在相应处未出现条带。结论:角蛋白及p38MAPK磷酸化是Tca细胞增殖抑制的重要调控方式。

骨骼肌腺苷酸活化蛋白激酶在高脂饮食诱导小鼠肥胖易感性差异中的作用

目的:通过观察高脂饮食诱导的肥胖倾向(DIO)及肥胖抵抗倾向(DIO-R)两种小鼠的血糖、血脂变化,探讨腺苷酸活化蛋白激酶活性水平在高脂饮食诱导小鼠肥胖易感性差异中的作用。方法:雄性ICR小鼠随机分为普通饮食对照组和高脂饮食组。喂养5周后,将高脂饮食组体重增加最大的10只判定为肥胖倾向小鼠,体重增加最小的10只判定为肥胖抵抗倾向小鼠。小鼠摘眼球取血后,检测血糖、血脂浓度。采用免疫印迹(Western Blot)法测定小鼠骨骼肌组织磷酸化的腺苷酸活化蛋白激酶α2(AMPKα2)、过氧化物酶增殖物激活受体γ共化合物1α(PGC-1α)、雌激素受体相关受体α(ERRα)和肉毒碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)蛋白表达。结果:(1)高脂饮食喂养5周后,DIO小鼠体重显著高于对照组和DIO-R小鼠(P<0.05)。(2)与普通饮食对照组小鼠相比,DIO小鼠和DIO-R小鼠血糖、血脂均有显著性差异(P<0.01),而DIO小鼠与DIO-R小鼠之间血脂四项无显著性差异。(3)高脂饮食喂养5周后,DIO小鼠骨骼肌pAMPKα2蛋白表达水平较普通饮食对照组显著减少(P<0.05)。结论:(1)对同一批小鼠采用同样高脂饮食喂养5周后,DIO和DIO-R小鼠体重增长显著不同,而血糖和血脂变化无明显差异。(2)在高脂饮食刺激下,小鼠骨骼肌AMPKα2活性差异可能导致骨骼肌内脂肪酸氧化水平不同,诱导出现DIO和DIO-R。