益肾喘宁汤干预肾气虚哮喘大鼠Jak-STAT信号通路磷酸化抗体芯片分析

目的:研究肾气虚哮喘发生发展过程中以及益肾喘宁汤干预后,Jak-STAT信号通路主要信号分子的磷酸化水平变化,初步探讨验方干预机制。方法:建立肾气虚哮喘大鼠模型后,取出各组大鼠肺组织,应用Jak-STAT信号通路磷酸化抗体芯片技术检测各组大鼠Jak-STAT信号通路蛋白磷酸化水平并筛选出调变磷酸化位点。结果:成功建立肾气虚哮喘大鼠模型,Jak-STAT信号通路磷酸化抗体芯片检测结果显示,与正常组相比,肾气虚哮喘组大鼠有3个位点上调,5个位点下调;与肾气虚哮喘组相比,中药组有2个位点上调。结论:通过Jak-STAT信号通路磷酸化抗体芯片检测分析,获得益肾喘宁汤干预肾气虚哮喘大鼠的Jak-STAT信号通路磷酸化位点变化。

初发与复发鼻咽癌组织中磷酸化蛋白芯片的差异表达分析

[目的]分析复发鼻咽癌和初发鼻咽癌的蛋白质磷酸化表达差异,以期为复发鼻咽癌的发生机制提供分子依据。[方法]选择4例复发鼻咽癌患者和4例初发鼻咽癌患者的组织标本,实验室提取总蛋白,应用磷酸化抗体蛋白质芯片与提取蛋白进行杂交,检测两者之间的差异磷酸化位点。通过phosphosite在线网络数据库分析蛋白质磷酸化位点变化及在信号通路中的作用。[结果]复发鼻咽癌和初发鼻咽癌的蛋白质磷酸化表达不同,共筛选出16个差异磷酸化位点,15个差异蛋白,复发鼻咽癌组织中上调蛋白8个,下调蛋白7个。[结论]初发鼻咽癌和复发鼻咽癌组织之间存在蛋白质磷酸化水平差异,可能与鼻咽癌复发机制有关。

大鼠骨髓间充质干细胞成牙本质向分化中Wnt信号通路磷酸化抗体芯片分析

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)成牙本质向分化过程中,Wnt信号通路主要信号分子的磷酸化变化,初步探讨其作用机制。方法全骨髓贴壁法培养大鼠BMSC,利用新生大鼠牙胚制备牙胚细胞条件培养基,诱导大鼠BMSC向成牙本质向分化,应用Wnt信号通路磷酸化抗体芯片技术检测诱导组与对照组Wnt信号通路蛋白磷酸化水平并筛选出调变磷酸化位点,应用蛋白印迹法(Western blot)验证芯片结果。采用SPSS 20.0软件进行统计分析,采用独立样本t检验和校正t检验分析组间差异。结果全骨髓贴壁法获得自我更新和多向分化潜能的BMSC,经牙胚细胞条件培养基诱导2 d后,细胞形态开始转变为梭形,7 d后形成长梭形并螺旋状排布生长,成牙本质相关蛋白DSPP(t=3.700,P=0.021)、DMP1(t=3.237,P=0.032)、RUNX2(t=12.09,P<0.000)、ALP(t=62.83,P<0.001)表达水平上调,成功诱导BMSC向成牙本质向分化,Wnt信号通路磷酸化抗体芯片检测发现27个磷酸化调变位点,Western blot检测结果显示核内β-catenin表达上调(t=4.588,P=0.044),PKCδ磷酸化水平上调(t=5.438,P=0.032)、AKT磷酸化水平下调(t=30.85,P=0.001),与芯片结果一致。结论通过Wnt信号通路磷酸化抗体芯片分析,获得BMSC成牙本质向分化过程中,Wnt信号通路磷酸化位点变化。

c-Jun在鼻咽癌组织中的表达以及对鼻咽癌复发的影响

目的 分析c-Jun在鼻咽癌组织中的表达以及对鼻咽癌复发的影响。方法 选择2003年1月-2005年9月在温州医学院附属第一医院耳鼻喉科行放疗的4例复发鼻咽癌（复发鼻咽癌组）和4例初发鼻咽癌患者（初发鼻咽癌组）的组织标本,应用磷酸化抗体蛋白质芯片筛选初发鼻咽癌组与复发鼻咽癌组患者鼻咽癌组织中的差异磷酸化蛋白,并进行聚类。并选取其中的差异磷酸化蛋白进行免疫组化试验验证,用于免疫组化验证的初发及复发鼻咽癌组织40例取自2003年8月-2010年5月温州医学院附属第一医院病理科,将其分为初发鼻咽癌组（n=20）和复发鼻咽癌组（n=20）。结果 在复发鼻咽癌组和初发鼻咽癌组中筛选出包括c-Jun（P=0.030）、Histone H2A（P=0.044）、SEK1（P=0.048）、KIT（P=0.042）、ATP1A1（P=0.007）和Synapsin（P=0.023）共6个差异蛋白,复发鼻咽癌组中Histone H2A（上调比率为1.08）、SEK1（上调比率为1.14）、KIT（上调比率为1.22）、ATP1A1（上调比率为1.22）和Synapsin（上调比率为1.22）磷酸化水平较初发鼻咽癌组患者上调,复发鼻咽癌组中c-Jun磷酸化水平较初发鼻咽癌组患者下调（下调比率为0.87）。其中c-Jun、Histone H2AX、SEK1及KIT蛋白质的磷酸化水平改变可能与鼻咽癌复发机制有关。通过免疫组化验证了c-Jun在复发鼻咽癌组低于初发鼻咽癌组,差异有统计学意义（P=0.048）。结论 磷酸化c-Jun在复发鼻咽癌组织中低表达,c-Jun磷酸化涉及调控基因、抑制细胞凋亡、促细胞增殖等信号转导通路,可能与肿瘤复发有关,还可提示预后及提供治疗靶点。

基于胰岛素通路探讨益肾喘宁汤治疗肾气虚哮喘的作用机制

目的:基于胰岛素通路应用磷酸化抗体蛋白芯片技术探索益肾喘宁汤治疗肾气虚哮喘的作用机制。方法:将24只清洁级Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药组,每组8只,分别予以相应措施进行处理,之后取出各组大鼠肺组织,运用磷酸化抗体蛋白芯片技术检测各组大鼠胰岛素通路相关位点蛋白的磷酸化水平,筛选出组间比较具有显著差异的蛋白。结果:与正常组比较,模型组大鼠IRS1、ELK1、GSK3β、EIF4EBP1、RPS6KB1、PRKAA1、BAD、LIPE等磷酸化水平均有所变化;用药后,IRS1、GSK3β、RPS6KB1、PRKAA1等的指标明显升高。结论:通过磷酸化抗体芯片分析,筛选出了益肾喘宁汤干预后哮喘大鼠胰岛素通路中磷酸化水平具有显著差异的位点蛋白,为进一步探讨其作用机制指明了方向。