弥散张量成像联合血清白细胞介素-1β、磷酸化高分子量神经微丝蛋白诊断脊髓损伤

目的观察弥散张量成像(DTI)联合血清白细胞介素-1β(IL-1β)、磷酸化高分子量神经微丝蛋白(pNF-H)诊断脊髓损伤的价值。方法回顾性分析69例脊髓损伤(C1~T1水平损伤)患者(观察组)和100名健康体检者(对照组)DTI资料,记录其表观弥散系数(ADC)、各向异性分数(FA)值,以及血清IL-1β、pNF-H水平。根据美国脊髓损伤协会(ASIA)残损分级法对观察组脊髓损伤程度进行分级(D/C/B/A级);比较组间及观察组内不同脊髓损伤分级患者DTI参数及血清指标的差异,分析DTI参数及血清指标与脊髓损伤严重程度的相关性。以受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)评估ADC、FA、IL-1β、pNF-H值单独及联合诊断脊髓损伤的效能。结果相比对照组,观察组FA值降低,ADC值及血清IL-1β、pNF-H水平升高(P均=0.001)。随ASIA分级由D级至A级,观察组FA值逐渐降低,ADC值及血清IL-1β、pNF-H水平逐渐升高(P均<0.05);脊髓损伤严重程度与FA值呈负相关(r=-0.489,P<0.001),与ADC值及血清IL-1β、pNF-H水平呈正相关(r=0.542、0.599、0.596,P均<0.001)。FA值、ADC值及血清IL-1β、pNF-H单独诊断脊髓损伤的AUC分别为0.747、0.809、0.794、0.741,联合诊断为0.845(P均=0.01)。结论DTI联合血清IL-1β、pNF-H有助于诊断脊髓损伤。

磷酸化高分子量神经微丝蛋白在脊髓损伤评定中的研究进展

目前脊髓损伤诊断方法主要包括神经功能学评价、影像学评价、组织形态学观察、神经电生理检查等宏观评价方法 ,而研究表明在脊髓损伤早期,特别是在脊髓损伤休克期,脊髓损伤的基础损伤程度及治疗效果很难评价。分子生化标志物研究为目前脊髓损伤评价领域新兴的方法 ,特别是磷酸化的高分子量神经微丝蛋白(pNF-H)具有更明显的优势。本文比较了脊髓损伤传统评价方法 ,并介绍了目前国际上pNF-H在脊髓损伤领域的研究进展。

急、慢性吗啡处理对大鼠大脑皮层tau蛋白和神经微丝磷酸化水平的影响

目的:观察急、慢性吗啡处理对大鼠大脑皮质细胞骨架蛋白磷酸化水平的影响,探讨吗啡导致细胞周期依赖性蛋白激酶-5(cyclin dependent kinase-5,CDK5)过度表达与细胞骨架蛋白过度磷酸化的关系。方法:雄性SD大鼠40只,随机均分为急性对照组、急性吗啡处理组、慢性对照组、慢性吗啡处理组。急性吗啡处理组腹腔注射吗啡30mg/kg1次,慢性吗啡处理组腹腔注射吗啡10mg/kg,每天2次(时间8:00、20:00)共10d。采用免疫印迹法测定大鼠大脑皮质tau蛋白和神经微丝的磷酸化水平及CDK5、p35表达水平。结果:(1)与急性对照组比较,急性吗啡处理组tau蛋白和神经微丝磷酸化水平升高,CDK5的表达增加;(2)与慢性对照组比较,慢性吗啡处理组tau蛋白和神经微丝磷酸化水平升高,CDK5的表达无明显变化;(3)与急性吗啡处理组比较,慢性吗啡处理组tau蛋白和神经微丝蛋白磷酸化水平降低;(4)各组间p35表达水平无明显改变。结论:急、慢性吗啡处理可导致大鼠大脑皮质tau蛋白和神经微丝的异常过度磷酸化,但这种变化可能与CDK5的过度表达无关。

钙蛋白酶抑制剂calpeptin对丙烯酰胺所致神经丝磷酸化及相关激酶异常表达的拮抗作用

目的通过制备神经干细胞(NSC)丙烯酰胺(ACR)中毒模型,探讨钙蛋白酶抑制剂calpeptin(CP)对ACR中毒的拮抗作用。方法将新生24 h内Wistar乳大鼠的脊髓背根神经节(DRG)培养48 h制备原代NSC,用抗巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)单抗,采用免疫荧光染色法鉴定。原代NSC培养至第4天,将其分为细胞对照组、CP组(CP 4μmol·L-1)、ACR染毒组(ACR760μmol·L-1)和ACR+CP组(ACR 760μmol·L-1+CP 4μmol·L-1),培养48 h。采用Western蛋白印迹法检测NSC中蛋白激酶A(PKA),PKC和磷酸化高相对分子质量神经丝(p-NF-H)蛋白表达水平,应用免疫荧光法在荧光显微镜下观察PKA,PKC和p-NF-H蛋白在NSC中的分布和表达。结果经免疫荧光染色法鉴定,制备的原代NSC巢蛋白免疫反应阳性,NSC纯度>90%;经维生素A诱导,该原代NSC可分化成NSE阳性的神经元和GFAP阳性的神经胶质细胞。Western蛋白印迹实验结果表明,与细胞对照组相比,CP组NSC中PKA,PKC和p-NF-H蛋白表达水平无明显变化;ACR组PKA和PKC蛋白表达分别下降41.6%和29.4%(P<0.05),p-NF-H蛋白表达升高66.4%(P<0.05)。与ACR组相比,ACR+CP组PKA和PKC蛋白表达升高68.9%和34.4%(P<0.05),p-NF-H蛋白表达降低18.6%(P<0.05)。免疫荧光法实验结果表明,与细胞对照组相比,CP组NSC中PKA,PKC和p-NF-H荧光强度相近,ACR组PKA和PKC荧光强度减少且分布不均匀,p-NF-H荧光强度增加;与ACR组相比,ACR+CP组NSC中PKA和PKC荧光强度升高且分布均匀,p-NF-H荧光强度减弱。结论 ACR可导致NSC中PKA和PKC蛋白表达降低,p-NF-H蛋白表达升高;CP对ACR导致的上述变化有拮抗作用。

蒙药黑苏嘎-25促进神经元骨架蛋白表达提高神经递质含量改善阿尔茨海默病小鼠症状

目的探讨蒙药黑苏嘎-25治疗阿尔茨海默(AD)小鼠的效果及机制。方法6月龄快速老化模型SAMP8小鼠分为模型组、[360 mg/(kg·d)]黑苏嘎-25处理组、[90 mg/(kg·d)]黑苏嘎-25处理组、多奈哌齐对照组[0.92 mg/(kg·d)],每组15只,另选择15只6月龄正常衰老SAMR1小鼠作为空白对照组。模型组和空白对照组小鼠常规喂养,生理盐水灌胃,其他给药组按照给药剂量灌胃,所有组灌胃均每天1次,共15 d。给药完成后第1天~第5天,各组取3只小鼠采用Morris水迷宫试验检测各组小鼠逃避潜伏期,穿越平台次数和停留时间。尼氏染色观察尼氏体数量,免疫组织化学染色法检测微管相关蛋白2(MAP-2)、低分子量神经丝蛋白(NF-L)表达和分布,Western blot法检测MAP-2、NF-L蛋白水平。ELISA检测小鼠脑组织(皮层、海马)中神经递质乙酰胆碱(ACh)、五羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)的含量。结果与空白对照组相比,模型组逃避潜伏期延长,穿越平台次数和停留时间减少,尼氏体减少,MAP2和NF-L蛋白表达减少;与模型组比较,黑苏嘎-25给药组逃避潜伏期缩短,穿越平台次数和停留时间增加,尼氏体数量增加,MAP-2和NF-L蛋白表达增加。[360 mg/(kg·d)]黑苏嘎-25处理对上述指标的影响更明显。与空白对照组比较,模型组海马及皮层中ACh、NE、DA及5-HT的含量明显减少,与模型组比较,低剂量组、高剂量组、多奈哌齐对照组ACh、NE、DA及5-HT含量显著增加。结论蒙药黑苏嘎-25治疗可改善AD模型小鼠学习记忆能力,保护小鼠神经功能,可能与促进神经元骨架蛋白表达并提高递质含量有关。

神经生长颗粒含药血清对大鼠背根神经节生长的影响

目的:研究神经生长颗粒(NGG)含药血清对体外培养新生大鼠背根神经节生长及高分子量神经丝蛋白(NF-H)和生长相关蛋白43(GAP43)表达的影响。方法:采用体外大鼠背根神经节(DRG)植块培养,通过免疫荧光细胞化学法,观察不同剂量的含药血清对DRG神经突起生长的影响;采用DRG单细胞分离培养,通过实时荧光定量PCR和免疫印迹法分别观察不同剂量的含药血清对DRG细胞NF-H和GAP43基因及蛋白表达的影响。结果:免疫荧光细胞化学法提示NGG含药血清能促进DRG神经突起的生长;实时荧光定量PCR和免疫印迹法结果提示NGG含药血清能增加体外培养的DRG细胞NF-H、GAP43mRNA和蛋白的表达。结论:NGG含药血清能促进体外培养DRG神经突起的生长并促进NF-H和GAP43的表达,表明NGG对发育期感觉神经元具有一定的神经营养作用。

安定对高皮质激素血症小鼠绝望样行为的改善作用及其机制探讨

目的观察安定对高皮质激素血症小鼠绝望样行为的改善作用,并探讨其可能机制。方法将50只C57BL/6N小鼠随机分为A、B、C、D、E组各10只,A、B、C、D组均制备高皮质激素血症模型,E组不作任何处理。制模后,D、E组以蒸馏水灌胃,A、B、C组分别以0.1 mg/kg安定、0.2 mg/kg安定、3.6 mg/kg盐酸氟西汀灌胃,1次/d,连续4周。观察各组小鼠绝望样行为(悬尾不动时间、游泳不动时间),Western blotting法检测海马组织神经微丝蛋白轻链(NF-L)和突触素(SYP)。结果与E组比较,D组悬尾不动时间短,游泳不动时间长;与D组比较,A、B、C组悬尾不动时间长,游泳不动时间短;P均<0.05。与E组比较,D组NF-L、SYP相对表达量降低;与D组比较,A、B、C组的NF-L、SYP相对表达量升高;P均<0.05。结论安定可改善高皮质激素血症小鼠绝望样行为,其机制可能与上调NF-L、SYP表达有关。

老年髋部骨折患者血清pNF-H、HMGB1表达水平及其对全麻术术后认知功能障碍的预测价值

目的探讨老年髋部骨折患者血清神经丝蛋白H磷酸化亚型(pNF-H)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达水平及其对全麻术术后认知功能障碍(POCD)的预测价值。方法选择2022年3月—2023年3月于陆军军医大学附属第二医院收治的96例老年髋部骨折全麻术术后患者的病例资料进行分析,按是否发生POCD分为POCD组(n=30)和非POCD组(n=66)。检测并比较2组受试者血清pNF-H、HMGB1表达水平差异;采用Pearson相关性分析方法,分析老年髋部骨折全麻术术后患者的血清pNF-H、HMGB1水平与蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清pNF-H、HMGB1水平对老年髋部骨折全麻术患者POCD的预测价值。结果POCD组血清pNF-H、HMGB1表达水平均高于非POCD组(P<0.05),MoCA评分低于非POCD组(P<0.05)。二元多因素Logistic回归分析发现,血清pNF-H、HMGB1水平升高均为老年髋部骨折患者全麻术POCD的独立危险因素(P<0.05)。Pearson相关分析发现,血清pNF-H、HMGB1水平与MoCA评分呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清pNF-H、HMGB1水平对老年髋部骨折患者全麻术POCD均有预测效能(P<0.05),其曲线下面积(AUC)分别为0.763、0.765。结论老年髋部骨折全麻术患者的血清pNF-H、HMGB1异常高表达与POCD的发生发展存在相关性,有望通过监测患者血清pNF-H、HMGB1水平预测患者术后认知功能。

创伤性脊柱骨折合并脊髓损伤患者血清pNF-H动态变化及其与脊髓损伤程度的相关性

目的探讨创伤性脊柱骨折合并脊髓损伤患者血清磷酸化高分子量神经微丝蛋白(pNF-H)动态变化与脊髓损伤程度的相关性。方法回顾性分析2017年1月—2019年1月平煤神马医疗集团总医院脊柱外科收治的创伤性脊柱骨折患者94例,其中合并脊髓损伤48例(脊髓损伤组),男性35例,女性13例;年龄18~60岁,平均50.7岁;致伤原因道路交通伤20例,摔伤16例,高处坠落伤7例,砸伤5例。单纯脊柱骨折46例(单纯骨折组),男性30例,女性16例;年龄18~60岁,平均50.8岁;致伤原因道路交通伤18例,摔伤13例,高处坠落伤8例,砸伤7例。选取同期笔者医院进行体检的健康者40例作为健康对照组,男性30例,女性10例;年龄18~60岁,平均50.8岁。比较各组间伤后12h、24h、3d、7d、14d血清pNF-H浓度变化;并分析脊髓损伤组不同美国脊髓损伤协会(ASIA)神经功能分级患者12h、24h、3d、7d、14d时血清pNF-H浓度变化,采用Spearman检验分析血清pNF-H动态变化与ASIA神经功能分级的相关性。结果伤后12h、24h、3d、7d、14d,脊髓损伤组血清pNF-H浓度高于相应时间点单纯骨折组、健康对照组(P<0.05),单纯骨折组血清pNF-H浓度高于相应时间点健康对照组(P<0.05)。不同ASIA分级患者不同时间点血清pNF-H浓度比较差异有统计学意义(P<0.05);在12h、24h、3d、7d、14d时A级患者血清pNF-H浓度高于B、C、D级(P<0.05),B级患者血清pNF-H浓度高于C、D级(P<0.05),C级患者血清pNF-H浓度高于D级(P<0.05);血清pNF-H与ASIA分级存在负相关(r=-0.951,P<0.05)。结论创伤性脊柱骨折合并脊髓损伤患者血清pNF-H浓度随时间变化,而ASIA分级越严重血清pNF-H浓度越高。

天麻素对脑缺血再灌注模型小鼠大脑及纹状体髓鞘的保护作用

目的 探讨天麻素（gastrodin,GAS）对脑缺血再灌注模型小鼠神经功能的保护作用及纹状体髓磷脂碱性蛋白（myelin basic protein,MBP）和高分子量神经丝蛋白（neurofilament high molecular weight,NF-H）水平的影响.方法 将36只昆明小鼠按照随机数字表法分为对照组（Sham）、模型组（MCAO）和天麻素组（GAS）.Sham组进行假手术（皮肤切开,分离颈动脉）,MCAO组及GAS组通过右侧颈内动脉栓线术,建立大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）,Sham组和MCAO组术后即刻腹腔注射生理盐水,GAS组则注射天麻素（100 mg/kg）,并在随后6d同一时间接受相同剂量的盐水或天麻素.术后第7天进行神经功能评分及氯化三苯基四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色;应用免疫组化观察小鼠纹状体内MBP和NF-H的表达情况.结果 （1）模型组小鼠出现明显的神经功能障碍,天麻素组神经功能评分[（3.13±0.64）分]明显高于模型组[（1.38±0.52）分],差异具有统计学意义（P＜0.05）.（2）TTC检测提示,模型组脑组织损伤侧出现明显梗死灶,给予天麻素干预后脑梗死容积明显减少,差异具有统计学意义（P＜0.05）.（3）模型组MBP和NF-H染色的积分光密度（272 968.14± 1215.23,121 427.32±44.16）显著低于对照组（43 855.23±2434.16,275 321.00±926.15）,天麻素组MBP和NF-H染色的积分光密度（321 531.20±2376.14,206 135.73±598.15）均高于模型组,差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论 天麻素可以改善MCAO模型小鼠神经功能,并且对纹状体髓鞘和神经纤维具有保护作用.

乌灵菌粉对脑缺血再灌注模型小鼠纹状体髓鞘的保护作用

目的探讨乌灵菌粉水提物对脑缺血再灌注模型小鼠神经功能的保护作用及纹状体髓磷脂碱性蛋白（MBP）和高分子量神经丝蛋白（NF-H）水平的影响。方法将40只昆明小鼠随机分为对照组、模型组、乌灵菌粉低剂量组和乌灵菌粉高剂量组。对照组进行假手术（皮肤切开，分离颈动脉），模型组及乌灵菌粉组通过右侧颈内动脉栓线术，建立大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，对照组和模型组术后即刻腹腔注射生理盐水，乌灵菌粉组则注射不同剂量的乌灵菌粉水提物（0.3g/kg和0.6g/kg），术后24h进行神经功能评分及2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色；应用免疫组化观察小鼠纹状体内MBP和NF-H的表达情况。结果（1）模型组小鼠出现明显的神经功能障碍，乌灵菌粉高剂量组神经功能评分明显高于模型组（P〈0.01）。（2）TTC结果提示，模型组脑组织损伤侧出现明显梗死灶，给予乌灵菌粉水提物（0.6g/kg）干预后脑梗死容积明显减少，差异有统计学意义（P〈0.05）。（3）模型组MBP和NF-H染色的吸光度显著低于对照组，乌灵菌粉高剂量组MBP和NF-H染色的吸光度均高于模型组，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论乌灵菌粉可以改善MCAO模型小鼠神经功能，并对髓鞘和神经纤维具有保护作用。