中药菩人丹对OLETF大鼠视网膜磷酸化c-Jun氨基末端激酶和半胱氨酸天冬氨酸激酶-3表达的干预作用

目的探讨菩人丹超微粉(PRD)对糖尿病大鼠视网膜磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)和半胱氨酸天冬氨酸激酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法以自发性雄性2型糖尿病大鼠模型OLETF大鼠和其同系非糖尿病对照鼠LETO雄性大鼠为实验对象,血糖峰值>16.7 mmol/L和负荷后120 min血糖>11.1 mmol/L作为成模标准,将24只成模雄性OLETF大鼠随机分为模型组、菩人丹超微粉治疗组,每组12只,同周龄12只雄性LETO大鼠为空白对照组。模型成功建立后,菩人丹超微粉治疗组大鼠给予菩人丹超微粉[1.8 g·(kg·d)-1]灌胃2个月。HE染色观察视网膜形态结构的变化;采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测大鼠视网膜神经细胞的凋亡情况;SP免疫组织化学染色法和Western blot法检测视网膜磷酸化JNK(p-JNK)、Caspase-3蛋白的表达;采用逆转录聚合酶链法(RT-PCR)检测大鼠视网膜Jnk、caspase-3 mRNA的表达。结果糖尿病模型组大鼠视网膜出现明显的病理变化,神经细胞凋亡指数p-JNK、Caspase-3蛋白及mRNA的表达明显高于正常对照组大鼠(P<0.01)。菩人丹超微粉治疗组大鼠视网膜的病理变化明显减轻,神经细胞凋亡指数、p-JNK、Caspase-3蛋白及mRNA的表达明显低于模型组大鼠(P<0.01)。结论菩人丹超微粉可以改善糖尿病视网膜病变中神经组织的损伤,表现为神经细胞凋亡的减少,这可能与下调p-JNK、Caspase-3的表达相关。

丹参酮ⅡA对帕金森病大鼠黑质内磷酸化c-Jun氨基末端激酶表达的影响

摘要目的：研究丹参酮ⅡA对帕金森病（PD）模型大鼠中脑黑质内酪氨酸羟化酶（TH）、p-JNK和caspase-3表达的影响，探讨丹参酮ⅡA（TSA）对帕金森病模型大鼠的作用及机制。方法：SD雄性大鼠随机分为正常对照组、假手术组（sham组）和模型组。模型组又分为生理盐水组（NS组）和处理组（TSA组）。模型组大鼠采用颈背部皮下注射鱼藤酮制备PD模型；假手术组，在与模型组大鼠相同部位注射等量的不含鱼藤酮的葵花油乳化液；正常组不作处理。模型组在大鼠腹腔内注射生理盐水1m1和丹参酮ⅡA20mg／kg，连续注射14d。免疫组织化学检测正常对照组、NS组和TSA组大鼠中脑黑质内TH、p-JNK和caspase-3的表达。结果：与正常对照组及假手术组比较，模型组大鼠出现典型的PD样症状；与正常对照组比较，生理盐水组大鼠中脑黑质内TH的表达降低，矿JNK和caspase-3的表达增多；与生理盐水组比较，处理组大鼠中脑黑质内TH的表达增多，p-JNK和caspase-3的表达降低，差异均有统计学意义。结论：丹参酮ⅡA可在一定程度减轻PD模型大鼠多巴胺能神经元的损伤，其作用机制可能与JNK信号转导途径有关。

IgA肾病中磷酸化c-Jun氨基末端激酶与肾小管上皮细胞转分化关系的研究

目的检测IgA肾病(IgAN)患者肾小管间质中转化生长因子β(1TGF-β1)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)在体内对肾小管上皮细胞转分化的调控作用。方法参考IgAN病理类型HASS分级标准,把39例IgAN患者的肾活检标本,分为轻度增生组(HaasⅠ、Ⅱ型)、局灶增生组(HaasⅢ型)和增生硬化组(HaasⅣ、Ⅴ型)。据Katafuchi半定量积分标准评估肾小管间质损伤指数,用免疫组织化学技术检测TGF-β1、p-JNK、α-SMA在肾小管间质的表达。结果 IgAN各病变组肾小管间质损伤指数和TGF-β1、p-JNK、α-SMA表达均增高,且p-JNK与TGF-β1、α-SMA表达和肾小管间质损伤指数正相关。结论在IgAN患者肾组织中,JNK可能是调控TGF-β1介导的肾小管上皮细胞转分化的关键细胞内信号。

脑缺血预适应大鼠脑内c-Jun氨基末端激酶磷酸化水平和蛋白表达量的改变

目的初步探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)在大鼠脑缺血预适应中(IPC)的作用。方法将大鼠随机分为正常对照(control)、假手术(SI)、缺血预适应或缺血耐受(IT)、单纯蜜蜂毒(BV)、外周伤害耐受(PNT)5组。应用SDS-PAGE、Western blot等实验方法,借助GelDoc和Versa Doc凝胶成像系统,半定量检测大脑躯体感觉皮层、海马组织内JNK的磷酸化水平和蛋白表达量的变化。结果IPC大鼠大脑躯体感觉皮层内JNK46KD的磷酸化水平(激活程度)增高(P<0.05),JNK54KD及海马组织内JNK46KD和JNK54KD的磷酸化水平无明显变化。IPC大鼠躯体感觉皮层JNK46KD蛋白表达量回落(P<0.05),JNK54KD及海马组织内JNK46KD和JNK54KD的蛋白表达量均无明显变化。结论大鼠躯体感觉皮层内JNK46kDa磷酸化水平的增高及其蛋白表达量的回落可能参与了脑缺血预适应的形成。

微小核糖核酸-146a、c-Jun氨基末端激酶在成人过敏性紫癜患者外周血单个核细胞中的水平及临床意义

目的探究微小核糖核酸(miR)-146a与c-Jun氨基末端激酶(JNK)在成人过敏性紫癜(HSP)患者外周血单个核细胞中的水平及临床意义。方法选取2020年1月至2022年12月开封市人民医院收治的50例成人HSP患者作为研究组(HSP组)。选取同期与HSP组性别、年龄组成相匹配,且于医院体检的健康成年人50例作为正常对照组(Normal组)。收集HSP组与Normal组人群外周血样本,检测两组外周血免疫球蛋白(Ig)A、IgG、IgM水平。分离外周血单个核细胞,通过实时荧光定量聚合酶链式反应检测HSP组与Normal组外周血单个核细胞中miR-146a、JNK表达情况,通过流式细胞术检测淋巴细胞亚群。通过相关性分析,探究miR-146a与JNK水平的相关性以及miR-146a、JNK与淋巴细胞亚群、IgA、IgG、IgM等免疫学指标的相关性。结果与Normal组相比,HSP组患者外周血单个核细胞中miR-146a水平降低,JNK水平升高(P<0.05),miR-146a水平与JNK水平呈负相关(P<0.05);HSP组IgA水平、CD8^(+)T细胞比率、Th2细胞比率、Th17细胞比率高于Normal组(P<0.05),CD4^(+)T细胞比率、Th1细胞比率、Treg细胞比率低于Normal组(P<0.05);HSP组患者外周血单个核细胞中miR-146a水平与IgA水平、CD8^(+)T细胞比率、Th2细胞比率、Th17细胞比率呈负相关(P<0.05),与CD4^(+)T细胞比率、Th1细胞比率、Treg细胞比率呈正相关(P<0.05)。JNK水平与CD4^(+)T细胞比率、Th1细胞比率、Treg细胞比率呈负相关(P<0.05),与IgA水平、CD8^(+)T细胞比率、Th2细胞比率、Th17细胞比率呈正相关(P<0.05)。结论miR-146a在成人HSP患者外周血单个核细胞中呈低表达,JNK呈高表达,二者呈负相关,两者可能通过相互作用,在HSP的发病中发挥重要作用。

一氧化氮激活应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶及p38MAP激酶诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡

目的研究脑缺血区周边组织一氧化氮合酶(NOS)的表达与应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶(SAPK/JNK)及p38MAP激酶(p38MAPK)激活的关系;探讨一氧化氮(NO)诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡的可能机制。方法采用TUNEL染色法观察脑缺血再灌注不同时段模型鼠缺血区周边组织凋亡的阳性神经元数量;免疫组织化学、蛋白免疫印迹方法检测活化型Caspase-3、神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和SAPK/JNK,p38MAPK及其磷酸化组分的表达。结果再灌注后1h、2h缺血区周边组织nNOS表达明显增强;自1h起iNOS开始表达,12 h达到高峰。1h p-SAPK/JNK表达较强,以后逐渐减弱;p38MAPK各时段表达均明显增强,以6h为著,p-p38MAPK表达高峰亦在6h。6h活化型Caspase-3开始表达,12 h达到高峰;12 h开始出现TUNEL阳性神经元,24 h达到高峰。结论缺血区周边组织NOS表达的增强可能通过激活SAPK/JNK及p38MAPK诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡。

加味脑泰方对卵巢摘除脑缺血大鼠海马细胞外信号调节蛋白激酶1/2和c-Jun氨基末端蛋白激酶蛋白活化的影响

目的探讨加味脑泰方对卵巢摘除脑缺血大鼠神经细胞凋亡的影响及其机制。方法雌性Sprague-Dawley大鼠40只随机分为假手术组(n=10)、模型组(n=10)、雌激素组(n=10)和加味脑泰方组(n=10)。模型组、雌激素组、加味脑泰方组大鼠摘除卵巢。去卵巢术后11 d,雌激素组、加味脑泰方组分别予雌激素和加味脑泰方灌胃3 d;术后14 d,模型组、雌激素组、加味脑泰方组线栓法制备局灶性脑缺血模型。缺血24 h后取脑组织,TUNEL法观察神经细胞凋亡率,Western blotting检测海马细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)蛋白活化程度。结果与模型组比较,加味脑泰方组和雌激素组神经细胞凋亡率显著降低(P<0.001),ERK1/2蛋白活化程度明显升高(P<0.01),p-JNK蛋白活化程度明显降低(P<0.01)。结论加味脑泰方可能通过提高p-ERK1/2蛋白活化,降低p-JNK蛋白活化,降低脑缺血后神经细胞凋亡率。

c-Jun氨基末端激酶信号通路在不同剂量舒芬太尼预处理大鼠肝脏缺血-再灌注损伤中的作用

目的研究舒芬太尼预处理对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤的作用及其与c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路的关系。方法健康SD大鼠162只,雌雄不拘,体重250-300g,采用随机数字表法将其分为七组：假手术组（S组,n=30）、肝脏缺血-再灌注组（IR组,n=30）、1μg/kg舒芬太尼预处理组（SF1组,n=30）、5μg/kg舒芬太尼预处理组（SF5组,n=30）、10μg/kg舒芬太尼预处理组（SF10组,n=30）、阻断剂SP600125组（SP组,n=30）及二甲基亚砜组（DMSO组,n=6）。舒芬太尼预处理组分别在缺血前30min静脉输注不同剂量（1、5、10μg/kg）舒芬太尼,S组及IR组给予等体积生理盐水,SP组于缺血前30min腹腔注射15mg/kg JNK阻断剂SP600125,DMSO组于缺血前30min静脉注射与溶解SP600125等体积的DMSO;S、IR、SF1、SF5、SF10组于再灌注即刻（T1）、1h（T2）、2h（T3）、4h（T4）、6h（T5）,SP、DMSO组于T3时取肝组织及腹主动脉血2ml;测定血清ALT和AST活性;观察肝组织MDA和SOD的变化;HE染色观察肝组织病理学改变;免疫组化法测定p-JNK;Western blot法测定肝组织p-JNK的蛋白表达水平。结果 T1-T5时IR、SF1、SF5、SF10组,T3时SP、DMSO组血清ALT、AST明显高于S组（P〈0.05）;T1-T5时SF1、SF5、SF10组,T3时SP组血清ALT、AST明显低于IR组（P〈0.05）;T1-T5时IR、SF1、SF5、SF10组,T3时SP、DMSO组肝组织MDA、SOD水平明显高于S组（P〈0.05）;T1-T5时SF1、SF5、SF10组,T3时SP组肝组织MDA、SOD水平明显低于IR组（P〈0.05）;T4时SF10组MDA、SOD水平明显低于SF1、SF5组（P〈0.05）。与T1时比较,T3时IR组p-JNK表达明显升高（P〈0.05）;T3时IR、SF1、SF5、SF10、SP、DMSO组p-JNK表达明显高于S组（P〈0.05）,SF1、SF5、SF10、SP组p-JNK表达明显低于IR组（P〈0.05）,SF5、SF10组p-JNK表达明显低于SF1组（P〈0.05）,SF10组p-JNK表达明显低于SF5组（P〈0.05）。结论舒芬太尼预处理可减轻大鼠肝脏缺血-再灌注损伤,且10μg/kg舒芬太尼保护作用最为显著,其机制可能是通过抑制JNK通路,降低p-JNK的表达,从而减轻大鼠肝脏缺血-再灌注损伤。

c-Jun氨基末端激酶信号通路抑制对白细胞介素-1诱导的大鼠椎间盘纤维环细胞基因表达的影响

目的研究c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路抑制对白细胞介素-1(IL-1)诱导的大鼠椎间盘纤维环细胞基因表达的影响,为阻止椎间盘退变提供新的治疗靶点。方法分离培养大鼠尾椎纤维环细胞,IL-1刺激纤维环细胞后,Western blot检测JNK信号通路的激活;传代的纤维环细胞培养48 h后,以IL-1(10 ng/ml)加或不加JNK通路抑制剂SP600125刺激24 h,Real-Time PCR检测JNK通路抑制对IL-1诱导的大鼠纤维环细胞基因表达的影响。结果 JNK通路抑制可显著抑制IL-1引起的诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-6(IL-6)、环氧合酶-2(Cox-2)和基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-13表达上调,同时,可显著逆转IL-1引起的Ⅰ型胶原和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因表达下调。结论 JNK通路抑制可作为阻断IL-1诱导的椎间盘退变的治疗靶点。

α-硫辛酸对糖尿病大鼠肾脏c-Jun氨基末端激酶通路的影响

目的探讨α-硫辛酸(ALA)对糖尿病(DM)大鼠肾脏c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路及足细胞的影响。方法链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,大鼠分为正常组(NC组)、糖尿病组(DM组)和ALA干预组(ALA组),8周后测各组大鼠血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、尿白蛋白排泄率(UAER)、血糖、肾皮质超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA);透射电镜观察足细胞超微结构;Western blotting法测肾脏P-JNK、JNK蛋白的表达;免疫组织化学法测足细胞Nephrin蛋白的表达。结果与NC组比较,DM组BUN、Scr、UAER和血糖均显著增加;肾皮质MDA含量显著增加,SOD活性显著降低;透射电镜示:DM组足突增宽,肾小球基底膜增厚,系膜基质增多;肾脏P-JNK、JNK蛋白的表达及P-JNK/JNK均显著增加;Nephrin的表达显著降低。与DM组比较,ALA组BUN、Scr、UAER和MDA含量均显著降低;SOD活性显著增加;足细胞超微结构明显改善;肾脏P-JNK、JNK蛋白的表达及P-JNK/JNK均显著降低;Nephrin的表达显著增加。结论 ALA可能通过抑制DM大鼠JNK信号通路的活性,上调足细胞Nephrin蛋白的表达而发挥对糖尿病肾病的肾保护作用。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠肺成纤维细胞c—Jun氨基末端激酶通路活化的调节作用

目的：探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号转导通路活化的调节作用.方法：培养新生大鼠肺成纤维细胞.激光扫描共聚焦显微镜观察phospho-JNK在细胞内定位与分布.免疫印迹法检测JNK/phospho-JNK蛋白的表达.结果：激光扫描共聚焦显微镜显示,与对照组比较,TGF-β1刺激后,胞质中phospho-JNK荧光强度变弱,而核浆比值明显增加.经AcSDKP干预作用后,胞质中phospho-JNK的荧光强度较TGF-β1刺激组增强,核浆比值明显减小.免疫印迹法显示,与对照组比较,TGF-β1刺激组phospho-JNK表达明显增加;而AcSDKP干预作用后,phospho-JNK蛋白表达较TGF-β1刺激组明显减少.结论： AcSDKP能阻断TGF-β1介导的肺成纤维细胞JNK通路的活化作用.

导痰汤通过c—Jun氨基末端激酶信号通路抑制人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子-1表达的研究

目的通过体外实验研究导痰汤是否能通过调节c—Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路来干预细胞间黏附分子-1（ICAM—1）的表达，以揭示导痰汤治疗动脉粥样硬化的机制。方法培养人脐静脉内皮细胞（HuVEc），并随机分为7组。空白对照组：正常培养HUVEC24h；导痰汤对照组：用20％导痰汤含药血清预处理HUVEC6h；肿瘤坏死因子-a（TNF-a）诱导组：用200kU／L TNF—a培养HuVEC12h；5％、10％、20％导痰汤干预组及JNK阻滞组：TNF—a诱导前分别给予5％、10％、20％导痰汤含药血清或25umol／L JNK特异性阻滞剂SP600125预处理。采用聚合酶链反应（PCR）和蛋白质免疫印迹法（western blotting）检测HUVEC中ICAM-1mRNA和JNK蛋白的表达。结果TNF—a诱导组ICAM-1 mRNA和JNK蛋白表达显著高于空白对照组和导痰汤对照组（均P〈0．01）；用导痰汤含药血清或SP600125预处理，ICAM-1mRNA和JNK蛋白表达显著下降（P〈0．05或P〈0．01）。JNK蛋白与ICAM-1mRNA水平呈显著正相关（r=0．680，P〈0．01）。结论导痰汤可以有效抑制TNF—a刺激所致的HUVEC中ICAM-1的过度表达，这可能与导痰汤可抑制JNK信号通路有关。

黄芪当归合剂通过抑制c-Jun氨基末端激酶活性影响肾小球系膜细胞表型变化

目的观察中药黄芪当归合剂(A&A)对白细胞介素-1β(IL-1β)和血管紧张素Ⅱ(AⅡ)诱导的肾小球系膜细胞分泌表型及其细胞内 JNK 信号通路的影响。方法在体外培养的大鼠肾小球系膜细胞中,以IL-lβ和 AⅡ为刺激物,采用蛋白印记和酶联免疫吸附法测定α-平滑肌动蛋白(a-SMA)表达、纤维粘连蛋白(FN)分泌量和 c-Jun 氨基末端激酶(JNK)活性,用共聚焦显微镜观察 IL-lβ刺激前后系膜细胞内α-SMA 的分布变化,并观察 A&A 血清滤液对上述指标的影响。结果外源性 IL-lβ和 AⅡ可刺激肾小球系膜细胞表达α-SMA 和 FN 增加,A&A 血清滤液可明显抑制 IL-lβ刺激系膜细胞导致的上述效应,但对 AⅡ引起的上述变化无明显作用。同时,A&A 血清滤液可显著抑制 IL-lβ刺激诱导的 JNK 活化;AⅡ对 JNK 活化无明显刺激作用,A&A 血清滤液对 AⅡ的作用亦无明显影响。结论 A&A 可抑制 IL-lβ诱导的系膜细胞表型转化,该作用可能与其下调 JNK 信号通路活化有关。

c-Jun氨基末端激酶在单增李斯特菌感染形成炎症复合体中的作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)在单增李斯特菌(LM)感染小鼠腹腔巨噬细胞过程中,对于炎症复合体活化与装配的作用,及其与毒力因子李斯特菌溶血素(LLO)的关系。方法将小鼠腹腔巨噬细胞随机分为SP处理组、未处理组及阴性对照组(NI),每组3个复孔。SP处理组用JNK抑制剂SP600125预处理小鼠腹腔巨噬细胞1 h,除NI外,其余各组巨噬细胞感染野生型LM(WT-LM)24 h,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测上清液中白细胞介素(IL)-18的表达;免疫荧光观察细胞内炎症复合体的关键蛋白组分ASC斑点(ASC-speck)的形成情况;Western blot检测WT-LM感染小鼠腹腔巨噬细胞不同时相点JNK的磷酸化水平。同时使用LM的△hly和△hly::hly突变株感染小鼠腹腔巨噬细胞,观察胞内ASC-speck的形成情况及不同时相点JNK蛋白的磷酸化水平。结果SP处理组IL-18的表达水平与未处理组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),免疫荧光法发现SP处理组ASC-speck阳性的细胞百分比明显低于未处理组,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot结果显示p-JNK在WT-LM感染10 min时即明显升高,40 min时达到峰值,持续至少120 min。LM的突变株感染实验中,免疫荧光结果显示△hly感染组ASC-speck阳性细胞的百分比较WT-LM感染组明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),而LLO重新表达的△hly::hly感染组,ASC-speck阳性细胞数得到明显恢复,与野生型LM组相比差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果看到p-JNK在△hly突变株感染后40 min有显著表达,而在80 min和120 min后出现骤然减弱甚至消失。结论JNK信号通路参与调控LM感染过程中炎症复合体的活化,并且在JNK参与活化过程中,与LLO密切相关。

c-Jun氨基末端激酶在转化生长因子-β_1诱导肾系膜细胞合成纤维连接蛋白中的作用

目的研究c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在转化生长因子-1β(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)诱导肾系膜细胞合成纤维连接蛋白(fibronectin)中所介导的作用。方法用蛋白免疫印迹法检测TGF-β1诱导的肾系膜细胞纤维连接蛋白合成以及JNK的磷酸化。用SP600125来抑制JNK的活性。结果加入TGF-β1后,系膜细胞JNK磷酸化水平逐渐增加,5 h时达高峰,TGF-1β显著增加系膜细胞纤维连接蛋白的表达。用SP600125预处理系膜细胞能增加TGF-β1引起的纤维连接蛋白表达,且具有剂量依赖性。结论JNK活化可能负性调控TGF-β1引起的纤维连接蛋白表达。

活性氧/c-Jun氨基末端激酶/核因子-κB信号分子通过调控凋亡参与牙周炎诱导肝损伤

目的牙周炎和非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发生发展与活性氧(ROS)的大量积累密切相关。ROS参与调控c-Jun氨基末端激酶(JNK)/核因子-κB(NF-κB)信号分子的激活,当该信号分子被ROS过度激活后可引发机体内环境紊乱。因此,本研究旨在探究ROS/JNK/NF-κB信号分子在牙周炎诱导肝损伤中的作用机制。方法将12只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为对照组和牙周炎组,在牙周炎组大鼠双侧上颌第一磨牙颈部进行钢丝结扎构建牙周炎模型,8周后检查大鼠牙周临床指标并处死,Micro-CT重建牙槽骨三维结构并分析牙槽骨吸收情况,组织病理学分析牙周及肝组织的病理改变,MitoSOXred试剂检测肝组织中ROS含量,生化试剂盒检测肝功指标和氧化应激生物标志物,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝组织中NF-κB、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、BCL2-AssociatedX的蛋白质(Bax)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)mRNA表达水平,蛋白免疫印迹(Westernblot)法检测肝组织中磷酸化c-Jun氨基末端激酶(P-JNK)、JNK、NF-κB、Bax、Bcl-2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达水平,末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色法检测肝细胞凋亡。结果Micro-CT结果显示,牙周炎组大鼠牙槽骨骨质吸收明显,且釉牙骨质界到牙槽嵴顶的距离明显大于对照组。组织病理学结果显示,牙周炎组大鼠牙周组织内可见大量炎症细胞浸润和牙槽骨明显吸收;肝组织结构破坏,可见大量气球样变和红色脂滴形成。MitoSOXred染色结果显示牙周炎组肝组织中ROS含量明显升高。生化检测结果显示,牙周炎组血清中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)含量升高;肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)含量降低,丙二醛(MDA)含量升高。qRT-PCR和Westernblot结果显示,牙周炎组肝组织中IL-6、TNF-α、Bax和NF-κB mRNA及P-JNK/JNK、NF-κB、Caspase-3和Bax蛋白表达水平较对照组显著上升,而Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平下降。TUNEL染色结果显示牙周炎组肝组织中凋亡细胞数量明显增多。结论ROS/JNK/NF-κB信号分子通过调控细胞凋亡参与牙周炎诱导肝损伤。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠心脏成纤维细胞c-Jun氨基末端激酶通路活化的影响

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对血小板源生长因子诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖及胶原合成以及c-Jun氨基末端激酶表达的影响。方法选用新生Wistar大鼠心脏成纤维细胞作为实验研究材料,MTT法检测心脏成纤维细胞代谢活性的改变,免疫细胞化学法检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达的改变,Western Blotting检测大鼠心脏成纤维细胞中磷酸化JNK(p-JNK)和JNK蛋白及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果 10μg/L血小板源生长因子刺激下,代表大鼠心脏成纤维细胞代谢活性的OD值增加,Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达增强,表明血小板源生长因子刺激了心脏成纤维细胞增殖,促进了胶原的合成。同时p-JNK蛋白表达增高,而JNK蛋白表达无明显改变。10-9mol/LAcSDKP能够抑制血小板源生长因子诱导的大鼠心脏成纤维细胞代谢活性,同时抑制了Ⅰ型、Ⅲ型胶原及p-JNK蛋白的表达,而JNK蛋白表达无明显改变。结论 AcSDKP能够通过阻断血小板源生长因子介导的JNK通路激活进而抑制大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原蛋白表达。

c-Jun氨基末端激酶选择性抑制剂对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎的影响

目的:探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)选择性抑制剂SP600125对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的急性期溃疡性结肠炎小鼠结肠组织内肿瘤坏死因(TNF)α的表达情况及血清白介素(IL)-6含量的影响.方法:40只♂C57BL/6小鼠随机分成5组,每组8只.正常对照组(A组)、DSS模型组(B组)、SP600125低剂量组(C组)、SP600125高剂量组(D组)、DMSO载体组(E组).A组小鼠饮用蒸馏水7d;B-E组小鼠饮用3%DSS水溶液7d.C组和D组小鼠分别以低、高剂量SP600125腹腔内注射,E组只给SP600125的载体DMSO,给药方式同前.造模及干预7d后处死小鼠,观察指标包括:疾病活动指数(disease active index,DAI)、组织学损伤的评估(histological index,HI);免疫组织化学法检测各组结肠黏膜p-JNK和TNF-α的变化,ELISA检测血清IL-6的水平.结果:造模第8天,B与E组之间的各项检测指标的差异均无统计学意义(均P>0.05);B组的DAI、HI都明显高于A组(8.00±1.41vs0.25±0.16;5.88±0.99vs0.50±0.93,均P<0.01),C组的DAI与B组相比无显著性差异(P>0.05),D组的DAI明显低于B组(4.38±1.51vs8.00±1.41,P<0.01),C、D组的HI都明显低于B组(3.88±1.46vs5.88±0.99;2.63±0.74vs5.88±0.99,均P<0.01);B组结肠黏膜的p-JNK、TNF-α及血清IL-6都明显高于A组(99.01±10.75vs116.41±10.46;103.39±11.09vs120.24±10.67;183.34±25.87vs75.91±20.27,均P<0.01),各项在C、D组中的水平都明显低于B组(105.94±10.93vs99.01±10.75;110.21±11.05vs103.39±11.09;140.37±32.07vs183.34±25.87;114.52±11.06vs99.01±10.75;117.87±11.00vs103.39±11.09;108.61±20.34vs183.34±25.87,均P<0.01).结论:SP600125通过下调p-JNK表达,降低小鼠结肠黏膜促炎因子TNF-α表达及血清IL-6的含量而发挥其干预作用.

益气聪明汤在光学离焦性近视大鼠巩膜组织MMP-2、p-JNK表达中的作用

目的探究中药方剂益气聪明汤在光学离焦性近视(LIM)大鼠巩膜组织基质金属蛋白酶2(MMP-2)、磷酸化氨基末端蛋白激酶(p-JNK)表达中的作用。方法选取SPF级健康无眼疾21 d龄SD大鼠60只,所有大鼠均选择右眼为实验眼。雌雄不拘,随机分为空白(BG)组、模型(MG)组、中药低剂量(LG)组、中药中剂量(MD)组、中药高剂量(HG)组以及西药(WG)组,每组各10只。将-5 D近视离焦透镜打磨至直径约1.7 cm的圆形,在两侧打一小孔,分别缝于MG、LG、MD、HG、WG组大鼠右眼上下眼睑皮肤处建立LIM模型。在造模4周后开始灌胃,WG组大鼠用0.1 g·L^(-1)阿托品滴眼液滴眼,BG组大鼠不做任何干预,LG、MD、HG组给予益气聪明汤灌胃,MG、BG组给予生理盐水灌胃。记录每组大鼠造模前、造模4周及8周后的眼轴长度。造模8周后处死大鼠,苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠巩膜组织形态学变化,Western blot检测各组大鼠巩膜组织中MMP-2、p-JNK蛋白表达,免疫组织化学检测各组大鼠巩膜组织中MMP-2阳性表达,透射电镜观察各组大鼠巩膜胶原纤维直径大小。结果造模4周和8周后,与BG组比较,MG组大鼠眼轴长度均明显增加(均为P<0.001);与MG组比较,WG、LG、MD、HG组大鼠眼轴长度均减小(均为P<0.05)。造模8周后,BG大鼠的巩膜层间胶原纤维排列规则,走行正常;与BG组比较,MG组大鼠巩膜胶原纤维疏松有明显空隙,排列紊乱;与MG组比较,MD、HG组大鼠巩膜胶原纤维排列较规则,纤维间空隙变小,LG、WG组大鼠巩膜各层间胶原纤维相对清晰紧实。造模8周后,与BG组比较,MG组大鼠巩膜中MMP-2、p-JNK蛋白相对表达水平均明显升高(均为P<0.001);与MG组比较,WG、LG、MD、HG组大鼠巩膜中MMP-2、p-JNK蛋白相对表达水平均降低(均为P<0.05)。造模8周后,与BG组比较,MG组大鼠巩膜中MMP-2蛋白阳性表达升高(P<0.001);与MG组比较,WG、LG、MD、HG组大鼠巩膜中MMP-2蛋白阳性表达均降低(均为P<0.05)。透射电镜下观察可见,BG组大鼠巩膜胶原纤维排列整齐致密,大小均匀;与BG组比较,MG组大鼠巩膜胶原纤维溶解;与MG组比较,WG组及LG组可见胶原纤维溶解减少,密度相对增加;与MG组比较,MD和HG组可见大鼠巩膜中胶原纤维直径较均匀,空隙减少,无纤维溶解。结论益气聪明汤可通过调节LIM大鼠巩膜中MMP-2、p-JNK的表达,减缓近视的发生发展。

电针对脑缺血大鼠前扣带皮质HMGB1和p-JNK蛋白表达的影响

目的:观察电针对脑缺血大鼠前扣带皮质高迁移率族蛋白1(high mobility group protein 1,HMGB1)和磷酸化的c-Jun氨基酸末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)的表达影响,探讨电针对脑缺血大鼠前扣带皮质的保护作用及机制。方法:将24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组和假电针组,6只/组。采用右侧大脑中动脉栓塞法制备脑缺血大鼠模型,电针组选取“百会”穴、左侧“足三里”穴进行电针刺激,1次/d,30 min/次,持续14 d;假电针组仅浅刺入两穴位皮下,接电针仪但不通电。采用Longa评分评估各组大鼠神经功能损伤情况;Nissl染色观察右侧前扣带皮质神经元的形态与分布情况;免疫组化检测右侧前扣带皮质HMGB1和p-JNK蛋白的表达情况。结果:与假手术组相比,模型组和假电针组大鼠神经功能缺损评分升高(P<0.01),右侧前扣带皮质区Nissl阳性神经元数量减少(P<0.01),HMGB1和p-JNK蛋白表达增加(P<0.01);与模型组相比,电针组大鼠在脑缺血第7天、14天时神经功能缺损评分降低(P<0.05),Nissl阳性神经元数量增加(P<0.01),HMGB1和p-JNK蛋白表达降低(P<0.01)。结论:电针可能通过抑制脑缺血后HMGB1和p-JNK的过表达,减轻前扣带皮质的损伤。