磷酸化Akt蛋白表达在非小细胞肺癌中的临床意义

目的 探讨磷酸化Akt(p Akt)蛋白表达与非小细胞肺癌(NSCLC)患者临床病理参数及预后的关系。方法 应用免疫组织化学SP法检测2 0例正常肺组织和10 2例NSCLC患者癌组织中p Akt蛋白的表达,NSCLC患者随访时间为3～6 0个月。结果 NSCLC癌组织中p Akt蛋白表达的阳性率为4 1 2 % (42 / 10 2 ) ,而正常肺组织为阴性。p Akt蛋白阳性与肿瘤组织分化程度、临床分期以及有无淋巴结和远处转移相关。p Akt蛋白阳性表达者5年生存率和中位生存时间显著低于阴性者(分别为14 2 9%和33 33% ;14个月和32个月,Logrank检验χ2 =14 2 4 ,P =0 0 0 0 2 )。结论p Akt蛋白表达与NSCLC发展有关。

组织芯片检测磷酸化AKT蛋白在不同胃组织中的表达

目的探讨磷酸化AKT蛋白在不同胃组织中的表达意义。方法采用免疫组织化学染色,检测胃组织芯片(包括对照组正常胃黏膜、癌旁、非典型增生、原发癌及淋巴结转移癌组织)中磷酸化AKT蛋白表达。结果与正常胃黏膜、癌旁和非典型增生组织相比,AKT蛋白磷酸化在原发癌、淋巴结转移癌中表达升高(P<0.01);与正常胃黏膜组织比较,磷酸化AKT蛋白在非典型增生组织中表达上调(P=0.26)。结论磷酸化AKT蛋白表达与胃癌的发生发展有关。

健脾化瘀解毒方调控AKT/p38蛋白磷酸化改善胃癌前病变小鼠脾虚证研究

目的 探讨健脾化瘀解毒方在体内改善胃癌前病变小鼠脾虚证的作用机制。方法 构建脾虚证胃癌前病变小鼠模型,使用健脾化瘀解毒方干预后,观察小鼠体质量增长及摄食情况、脾脏组织结构变化、脾/胸腺指数、并检测AKT/p38信号通路相关蛋白表达情况。结果 与空白组比较,模型组小鼠体质量增长缓慢,摄食明显减少,脾脏指数减小,胃黏膜AKT/p38信号通路被激活;与模型组比较,健脾化瘀解毒方干预组小鼠脾虚症状得到改善,脾脏组织结构重塑,且AKT/p38信号通路受到一定程度抑制。结论 MNNG可诱导胃癌前病变小鼠出现脾虚症状,健脾化瘀解毒方可能在一定程度抑制AKT/p38信号通路进而改善胃癌前病变小鼠脾虚症状,与其以健脾法为基础的治法相符合,进而发挥抑制甚至逆转胃癌前病变的作用。

胰岛素和表皮生长因子刺激引起的蛋白激酶B磷酸化与PTEN突变的关系

目的研究第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)突变对人鼻咽癌细胞系CNE-1中蛋白激酶B(Akt)的磷酸化的影响。方法 CNE-1细胞用含100 m L/L胎牛血清RPMI1640培养基培养,并分别转染野生型PTEN(wt PTEN)质粒、突变型PTEN C124S质粒和突变型PTEN G129E质粒。各组细胞加刺激前用无血清RPMI1640培养基饥饿过夜,用0.15 IU/m L胰岛素或0.3μg/m L重组人表皮生长因子(rh EGF)刺激,Western blot法检测Akt的磷酸化水平。结果胰岛素和rh EGF刺激均可导致CNE-1细胞Akt信号激活;wt PTEN可抑制胰岛素或rh EGF刺激引起的Akt信号激活;PTEN C124S突变体可激活胰岛素刺激引起的Akt信号,但不可激活rh EGF刺激引起的Akt信号;PTEN G129E突变体抑制胰岛素刺激引起的Akt信号激活。结论 wt PTEN可抑制胰岛素或rh EGF刺激引起的Akt信号激活,但PTEN C124S和G129E突变体不能一致性激活Akt信号表达。这表明PTEN基因突变可能与Akt信号表达无关。

结肠癌组织中Notch1、NF-κB、uPA及p-Akt的表达变化及意义

目的观察Notch1、核转录因子κB(NF-κB)、尿激酶型纤溶酶原激活物(u PA)及p-Akt在结肠癌组织中的表达,并探讨其意义。方法收集结肠癌手术标本86例,其中高分化腺癌33例,中分化腺癌39例,低分化腺癌14例;结肠腺瘤手术标本25例;手术切端正常结肠黏膜组织30例作为对照。应用免疫组化法分别检测Notch1、NF-κB、u PA和p-Akt在腺癌组织、腺瘤组织和正常结肠黏膜组织中的表达,分析Notch1、NF-κB、u PA和p-Akt表达与结肠癌患者临床病理特征的关系,各指标间的相关性分析采用Pearson相关分析法。结果从正常结肠黏膜组织到结肠腺瘤和结肠癌组织,Notch1、NF-κB、u PA和p-Akt表达阳性率呈逐渐增加趋势,且差异有统计学意义(P均<0.05);Notch1、NF-κB、u PA和p-Akt表达与结肠癌患者的组织分化程度、淋巴结转移、浸润深度及Dukes分期相关(P均<0.05);Notch1和p-Akt、Notch1和NF-κB、NF-κB和u PA及p-Akt和NF-κB阳性表达均呈正相关关系(r分别为0.225、0.434、0.751、0.683,P均<0.05)。结论 Notch1、NF-κB、u PA和p-Akt在结肠癌组织中的表达升高,这些指标与结肠癌的发生发展有关。

PARG基因沉默对大肠癌CT26细胞移植瘤生长与转移的影响

目的探讨聚腺苷二磷酸核糖水解酶[poly-(ADP-ribose)glycohydrolase,PARG]基因沉默经AKT途径对大肠癌细胞肝转移的影响及其可能机制。方法用未转染的CT26细胞、慢病毒空载体转染的CT26细胞和PARG-shRNA慢病毒载体转染的CT26细胞接种至BALB/c小鼠脾包膜下,建立相应的肝转移模型,比较各组脾脏移植瘤及肝脏转移瘤结节的差异。进一步用Western blot法检测各组脾脏移植瘤PARG、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1[poly-(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,即AKT)、P-AKT473、核转录因子-κB p65(nuclear factor-kappaB p65,NF-κB p65)、血管内皮细胞生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF,即FGF-2)的表达。结果与对照组相比,PARG沉默组脾脏移植瘤体积较小(P<0.05),肝转移瘤结节数量减少(P<0.05);脾脏移植瘤的PARG、PARP-1、NF-κB p65、VEGF、FGF-2蛋白表达显著减弱(P均<0.05),P-AKT473的表达明显增强(P<0.05)。结论 CT26细胞系的PARG表达抑制后,可以抑制大肠癌CT26细胞移植瘤的生长与转移,这可能与PARG抑制使AKT磷酸化增强,从而降低了VEGF、FGF-2等血管生成相关因子的表达有关。

Signal transduction mechanism of TRB3 in rats with non-alcoholic fatty liver disease

AIM： To evaluate the possible role of Tribble 3 （TRB3） in a rat model of non-alcoholic fatty liver disease （NAFLD） and its signal transduction mechanism.METHODS： Thirty Sprague-Dawley rats were randomized into three groups： normal control group, non-alcoholic fatty liver group A （fed on a high-fat diet for 8 wk） and group B （fed on a high-fat diet for 16 wk）. To determine the degree of hepatic steatosis in rats of each group, livers were stained with hematoxylin and eosin, and evaluated; real-time fluorescent quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction was performed to measure the expression levels of TRI33 mRNA, and Western blotting analysis was done to determine the expression levels of protein kinase B （Akt） and phosphorylated protein kinase B （p-Akt-Thr308, p-Akt-Ser473）.RESULTS： Hepatic steatosis was evident in both NAFLD groups： mild to moderate hepatic steatosis occurred in group A, mainly as mild steatosis.Moderate to severe hepatic steatosis occurred in group B, mainly as severe steatosis. The expression level of TRB3 mRNA in group B was significantly higher than in the control group （122.28 ± 95.37 vs 3.06 ± 2.33,P = 0.002） and group A （122.28 ± 95.37 vs 5.77 ± 4.20,P = 0.001）. There was no significant difference in the expression levels of Akt （1.03 ± 0.53 vs 1.12 ± 0.77,P = 0.729） and p-Akt-Thr308 （0.82 ± 0.45 vs 0.92 ± 0.38, P = 0.592） between group A and the control group. The expression level of Akt and p-Akt-Thr308 in group B was significantly lower than in group A （Akt 0.41 ± 0.16 vs 1.12 ± 0.77, P = 0.008; p-Akt-Thr308 0.47 ± 0.19 vs 0.82 ± 0.45, P = 0.036） and the control group （Akt 0.41 ± 0.16 vs 1.03 ± 0.53, P = 0.018;p-Akt-Thr308 0.47 ± 0.19 vs 0.92 ± 0.38, P = 0.010）.The expression level of p-Akt-Ser473 in group A was significantly higher than in group B （1.48 ± 0.50 vs 0.81± 0.39, P = 0.041） as well as the control group （1.48 ± 0.50 vs 0.45 ± 0.26, P = 0.003）.CONCLUSION： TRB3 blocks insulin signaling by inhibiting Akt activation, which contributes to insulin resistance. It may be an important factor in the occurrence and development of NAFLD.

表没食子儿茶素没食子酸酯抑制脂多糖诱导人视网膜内皮细胞中调节活化正常T细胞表达与分泌趋化因子的表达

本研究旨在探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人视网膜内皮细胞(human retinal endothelial cells,HRECs)炎症反应通路中调节活化正常T细胞表达与分泌趋化因子(regulated upon activation normal T cell expressed and secreted,RANTES)表达的影响及可能机制。将HRECs作为研究对象,分别用实时细胞计数法和非同位素细胞增殖法检测LPS(50～250 ng/mL)和EGCG(0～200μmol/L)对HRECs的毒性作用,确定合适的实验药物浓度。再将细胞随机分为正常对照组、LPS组和LPS+不同浓度EGCG(100、50、25、12.5、6.25μmol/L)共7组,用不同浓度EGCG预处理2 h,再加入LPS刺激24 h后,酶联免疫吸附法测定各组培养上清液中RANTES的表达水平,Western免疫印迹法检测蛋白激酶Akt及其磷酸化水平。结果显示,LPS可显著刺激诱导HRECs产生RANTES,EGCG抑制LPS诱导的RANTES表达,作用呈剂量依赖性。免疫印迹结果也显示,LPS对HRECs炎症过程中的Akt通路起重要作用,EGCG可显著抑制LPS诱导HRECs中Akt信号分子的蛋白磷酸化水平。以上结果提示,EGCG能有效抑制LPS诱导HRECs中RANTES的表达,其机制可能与抑制Akt信号通路有关。