GSK3抑制剂氯化锂对FMR1基因敲除小鼠的自主活动的干预作用

目的:探讨GSK3抑制剂氯化锂对FMR1基因敲除小鼠的自主活动的干预作用及机制。方法:通过对90只30日龄FMR1基因敲除小鼠连续腹腔注射不同剂量氯化锂5d,行自主活动行为学实验,观察能否改善KO鼠的过度活动的表型;同时利用免疫印迹技术检测KO及WT鼠的海马和皮层的GSK3β和P-GSK3β的变化。结果:在自主活动行为学实验中,KO鼠的活动次数比WT鼠的活动次数增多而站立次数比WT鼠减少,差异具有统计学意义(P<0.05);使用氯化锂后,KO鼠的活动次数明显减少及站立次数明显增多,差异均有统计学意义(P<0.05);免疫印迹实验结果:KO鼠P-GSK3β表达比WT鼠少,用氯化锂后,KO鼠P-GSK3β的表达增多。KO鼠和WT鼠使用氯化锂后,总的GSK3β无明显改变(P>0.05)。结论:GSK3β的抑制剂氯化锂能改善KO鼠的活动过度的表型,可能与氯化锂导致的P-GSK3β的表达增加有关,对FMR1基因敲除小鼠有治疗作用。

长链非编码RNA-UFC1通过GSK-3β/β-catenin信号轴促进肝癌细胞的侵袭和转移

目的探讨长链非编码RNA-UFC1在肝癌侵袭和转移中的作用及机制。方法应用lincRNA-UFC1慢病毒载体转染人肝癌细胞株Huh7构建lincRNA-UFC1过表达组和对照组;应用lincRNA-UFC1干扰载体转染人肝癌细胞株BEL-7402构建lincRNA-UFC1干扰组和干扰对照组(scramble),通过实时定量PCR实验分析两种肝癌细胞中lincRNA-UFC1的表达水平。Transwell及划痕实验检测lincRNA-UFC1过表达组及干扰组相比对照组侵袭迁移能力的变化。Western blot检测lincRNAUFC1过表达组及干扰组相比对照组中GSK-3β/β-catenin蛋白的表达变化。利用GSK-3β/β-catenin信号通路抑制剂XAV939阻断后,观察Transwell及划痕实验中lincRNA-UFC1过表达对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响。结果在肝细胞癌中,过表达lincRNA-UFC1相较于对照组,肝癌细胞的侵袭转移能力明显增加(P<0.001),而沉默lincRNA-UFC1的表达相较于scramble组,肝癌细胞侵袭转移能力明显减弱(P<0.001)。Western blot结果显示,过表达lincRNA-UFC1与对照组相比较,侵袭转移相关蛋白β-catenin和p-GSK-3β表达明显上调(P<0.001),而lincRNA-UFC1沉默表达后,结果相反。利用GSK-3β/β-catenin信号通路抑制剂XAV939处理肝癌细胞可以逆转lincRNA-UFC1促进肝癌细胞侵袭转移的功能(P<0.001)。结论在肝细胞癌中lincRNA-UFC1通过上调磷酸化GSK-3β及β-catenin促进肝癌细胞侵袭转移。

GSK3抑制剂氯化锂对脆性X综合征模型小鼠避暗行为的干预作用

目的探讨糖原合成酶激酶3(glycogen synthase kinase3,GSK3)抑制剂氯化锂对脆性X综合症小鼠模型的避暗行为的干预作用及机制。方法通过对30日龄脆性X综合症小鼠连续腹腔注射不同剂量氯化锂5 d,用药第4天和第5天进行避暗实验;同时用免疫印迹技术检测Fmr1 knockout(KO)及wild type(WT)小鼠的海马和皮层总GSK 3β和磷酸化GSK 3β(P-GSK3β)的变化。结果在避暗实验中,KO鼠与WT鼠,两者潜伏期及错误次数分别为(56±32)s,(83±24)s;(7±3)次,(3±2)次;免疫印迹实验结果:KO鼠皮层及海马P-GSK3β表达平均灰度值分别为69,63;WT鼠皮层和海马均为100。注射氯化锂后,KO鼠和WT鼠总GSK3β无明显改变,而KO鼠60 mg/kg,120 mg/kg,200 mg/kg组皮层P-GSK3β表达平均灰度值分别为:147,151,234;海马P-GSK3β分别为108,111,146,较空白组增多;P<0.05。WT鼠用氯化锂后,潜伏期和错误次数以及P-GSK3β表达变化无统计学意义。结论氯化锂能改善KO鼠的学习记忆能力,可能与氯化锂导致的P-GSK3β的表达增加有关,对脆性X综合征基因敲除小鼠有治疗作用。

天王补心丸对慢性不可预知应激抑郁模型小鼠行为学,HPA轴,海马GSK3β磷酸化及BDNF表达的影响

目的:研究天王补心丸对慢性应激抑郁模型小鼠行为学、下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴),海马糖原合酶激酶3β(GSK3β)磷酸化及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,初步探讨其抗抑郁作用机制。方法:将60只雄性ICR小鼠按照糖水偏嗜度随机分为正常组、慢性应激模型组、盐酸氟西汀组(10 mg·kg-1)以及天王补心丸高、中、低剂量组(3.6,1.8,0.9 g·kg-1)。采用慢性不可预知应激实验(CUS)建立抑郁症小鼠模型,各给药组灌胃给药28 d后通过糖水偏好实验、开场行为实验、新奇抑制摄食实验检测其行为学变化。之后分别取小鼠血、肾上腺及海马组织,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠血清中促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CORT)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织中GSK3β磷酸化及BDNF表达的变化,并计算肾上腺指数。结果:与正常组比较,模型组小鼠的蔗糖水偏嗜度显著降低(P<0.01),开场活动次数明显减少(P<0.05),新奇抑制摄食潜伏期延长(P<0.01),血清ACTH,CORT含量民明显升高(P<0.05,P<0.01),海马组织中GSK3β磷酸化及BDNF表达显著降低(P<0.01),肾上腺指数显著升高(P<0.01);与模型组比较,天王补心丸可以逆转抑郁症模型小鼠行为学变化(P<0.05,P<0.01),显著降低抑郁症模型小鼠血浆ACTH和CORT的含量(P<0.01)和肾上腺指数(P<0.01),同时增加小鼠海马GSK3β磷酸化及BDNF表达水平(P<0.05,P<0.01),其作用效果与盐酸氟西汀相当。结论:天王补心丸对慢性不可预知应激抑郁模型小鼠具有显著的抗抑郁作用,其作用机制与抑制HPA轴活性、上调海马GSK3β磷酸化及BDNF的蛋白表达有关。

多巴胺再摄取抑制剂对小鼠和人精子运动的影响研究

目的探究多巴胺再摄取抑制后对小鼠和人精子运动的影响及其作用机制。方法精子经多巴胺再摄取抑制剂GBR 12909和GBR 12935处理后,应用计算机辅助精液分析系统(Computer-Assisted Semen Analysis,CASA)评估精子活力;伊红-苯胺黑染色检测精子存活率;通过荧光探针分别检测细胞内pH(Intracellular pH,pHi)、细胞内钙离子(Intracellular Calcium,[Ca^(2+)]_i)水平变化;蛋白质免疫印迹检测蛋白磷酸化水平变化;考马斯亮蓝G250染色检测顶体反应变化。结果GBR 12909和GBR 12935可在不影响精子存活率的情况下显著抑制小鼠和人精子运动,使精子细胞[Ca^(2+)]i降低,pHi升高,糖原合酶激酶3α(Glycogen Synthase Kinase 3 Alpha,GSK3α)磷酸化及蛋白激酶A(Protein Kinase A,PKA)底物磷酸化水平下降。其中GBR 12909可促进精子获能相关的蛋白酪氨酸磷酸化,GBR 12935未观察到该现象;二者均不影响小鼠精子获能后经A23187诱导的顶体反应发生率。结论多巴胺再摄取抑制剂GBR 12909和GBR 12935可降低精子[Ca^(2+)]_i,提高pH_i,并可能通过下调GSK3α磷酸化及PKA底物磷酸化水平降低精子运动能力。