通管丸含药血清对巨噬细胞炎症模型磷酸化IRAK4、磷酸化IKKs蛋白表达的影响

目的:探究通管丸治疗输卵管炎性阻塞性不孕的可能作用机制。方法:将10只大鼠随机分为实验组和对照组。实验组大鼠予通管丸混悬液灌胃,对照组大鼠予等量生理盐水灌胃,连续灌胃3 d后制备血清。将RAW264.7细胞随机分为9组:正常培养组、无药血清组(5%、10%、20%、40%)、含药血清组(5%、10%、20%、40%)。正常培养组添加胎牛血清,其余各组予以相应浓度的血清,CCK8法检测最佳含药血清浓度。将RAW264.7分为造模组和非造模组,造模组添加脂多糖,非造模组添加等量的PBS,ELISA法检测两组TNF-α、IL-1β的含量,确定巨噬细胞炎症模型是否造模成功。最后将RAW264.7分成空白对照组、PPAR-γ激动剂组、NF-κB阻断剂组、无药血清组和含药血清组。空白对照组予以正常RAW264.7细胞和胎牛血清;其余各组予以造模后的RAW264.7细胞和相应的药物。培养后采用Western blotting测定磷酸化IRAK4、IKKs蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,无药血清组、NF-κB阻断剂组、PPAR-γ激动剂组、含药血清组中磷酸化IRAK4、IKKs蛋白表达均增加(P<0.05);与无药血清组比较,NF-κB阻断剂组、PPAR-γ激动剂组、含药血清组中磷酸化IRAK4、IKKs蛋白表达均降低(P<0.05)。结论:通管丸可能通过抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路中"关键元件"磷酸化IRAK4、IKKs蛋白的表达,从而抑制该信号通路的活化,减少炎症因子及其炎症介质的表达,达到抑制输卵管炎症反应的目的。

罗格列酮对糖尿病大鼠肾脏中磷酸化IKK和IκBα表达及肾组织超微结构改变的影响

将24只雄性Wistar大鼠随机分为(C)(、DM)和(R),DM组和R组一次性腹腔注射链尿佐菌素(STZ)50mg/kg制备糖尿病大鼠模型。用免疫组化检测12周后肾组织中磷酸化IKK和磷酸化IκBα表达的改变,用电镜观察肾组织超微结构的改变。结果与C组相比,DM组及R组IKK及IκBα表达增加(P<0.05);而R组IKK及IκBα表达低于DM组(P<0.05);与DM组相比,R组基底膜变薄(P<0.05),足突融合程度减轻。结论 T2D可通过抑制IKK活化,进而抑制IκBα降解,降低NF-κB活化水平,从而延缓肾脏损伤。R酮能够改善糖尿病大鼠肾脏超微结构的改变,对DM肾病具有一定的保护作用。

罗格列酮对糖尿病大鼠心肌组织中磷酸化IKK,IκBα表达的影响

目的探讨罗格列酮对链尿佐菌素STZ糖尿病大鼠心肌组织中核因子(NF)-κB抑制蛋白激酶(IKK)和其下游作用物NF-κB抑制蛋白(IκBα)表达的影响。方法将48只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(A)、糖尿病组(B)和罗格列酮干预组(C),分别于实验8周和12周检测血糖、血清C肽水平,心重指数和心肌细胞面积,并用免疫组化方法检测8周和12周STZ大鼠心肌组织中磷酸化IKK和磷酸化IκBα表达的改变。结果与正常对照组相比,糖尿病组和罗格列酮干预组的心重指数、心肌细胞表面积及IKK和IκBα表达增加(P<0.01);而罗格列酮干预组的心重指数、心肌细胞表面积及IKK和IκBα表达低于糖尿病组(P<0.01)。讨论罗格列酮能抑制IKK活化,进而抑制IκBα降解,降低NF-κB活化水平,最终延缓心肌损伤,起到心肌保护作用。

磷酸化IKK和磷酸化IκBα在糖尿病大鼠心肌组织中的表达

雄性Wistar大鼠腹腔注射STZ以建立糖尿病模型成膜后4周、8周、12周测量大鼠心肌细胞面积并检测磷酸化IKK和磷酸化IκBα在糖尿病大鼠心肌组织中的表达水平等。结果:各时间点磷酸化IKK和磷酸化IκBα比正常对照组大鼠显著增加(P<0.01)。结论:磷酸化IKK和磷酸化IκBα伴随着心脏病理学改变而表达增加,可能在糖尿病心肌病中发挥重要作用。

葛根芩连汤对KKAy糖尿病小鼠TLR4/IKKβ/NF-κB信号通路的影响

目的:观察经方葛根芩连汤对KKAy小鼠部分炎性因子及脂多糖介导的炎症通路中关键靶点的影响,探讨其改善2型糖尿病的作用机制。方法:选取SPF级自发性2型糖尿病动物模型KKAy小鼠65只及对照C57BL/6J小鼠13只予屏障系统、高脂饲料喂养,随机血糖≥13.9 mmoL·L^(-1),为成模小鼠44只。随机分为5组,每组11只。正常组(生理盐水20 mL·kg^(-1))、阿卡波糖组(3.9 mg·kg^(-1))、葛根芩连汤高、低剂量组(1.82、0.45 g·kg^(-1))及模型组(生理盐水20 mL·kg^(-1)),连续灌胃给药8周,1次/d,系统评价血糖及体质量。末次给药12 h后,摘眼球取血,提取血清及肌肉、肝脏组织。采用半定量酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及葡萄糖转运子4(GluT4)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肌肉组织IκB磷酸化激酶β(IKKβ)蛋白、核转录因子-κB(NF-κB)及肝组织Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组体质量及血糖显著升高(P<0.01);与模型组比较,阿卡波糖组及葛根芩连汤组能够明显降低体质量及血糖水平(P<0.05,P<0.01)。ELISA结果显示,与正常组比较,模型组炎性因子TNF-α、IL-6含量显著升高(P<0.01),GluT4含量明显下降(P<0.05);与模型组比较,各给药组炎性因子TNF-α、IL-6含量均有不同程度下降(P<0.05,P<0.01),阿卡波糖组与葛根芩连汤高剂量组GluT4含量明显升高(P<0.05,P<0.01)。Western blot分析显示,与正常组比较,模型组IKKβ、NF-κB及TLR4蛋白表达均有升高(P<0.01);与模型组比较,阿卡波糖组与葛根芩连汤组IKKβ、NF-κB及TLR4蛋白表达均明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论:葛根芩连汤可能在调节肠道菌群的基础上,通过下调TLR4通路中关键炎性因子的水平,抑制其激活,提高GluT4的转位及活性水平,从而在一定程度上抑制炎性级联效应,改善2型糖尿病。