鼠李糖乳杆菌对老年小鼠术后海马区小胶质细胞激活及Tau蛋白磷酸化的影响

【目的】探讨术前益生菌鼠李糖乳杆菌(LGG)灌胃对麻醉手术老年小鼠海马区小胶质细胞及Tau磷酸化的影响。【方法】18月龄C57BL/6J小鼠30只随机分为3组,10只/组:对照组,麻醉手术组,麻醉手术+鼠李糖乳杆菌组。生理盐水/LGG 109CFU 150μL灌胃,每日1次,连续20 d后接受异氟醚麻醉+剖腹探查手术,术后12 h免疫荧光染色检测海马区小胶质细胞激活状态,ELISA检测IL-6的浓度变化,Western blot检测Tau蛋白磷酸化位点Tau-pS202/pT205和total Tau蛋白表达变化。【结果】对照组海马区小胶质细胞呈静息状态,炎症因子IL-6浓度为(82.08±12.07)pg/mL。与对照组相比,麻醉手术组海马区小胶质细胞活化增生,胞体变大,突起缩短变粗,炎症因子IL-6上升至(123.7±5.72)pg/mL(P=0.000),磷酸化Tau-pS202/pT205蛋白表达量也明显增加(P=0.002)。而与麻醉手术组相比,麻醉手术+LGG组海马区小胶质细胞增生肥大不明显,炎症因子IL-6分泌减少至(96.68±9.59)pg/mL(P=0.008),磷酸化Tau-pS202/pT205蛋白表达量明显下降(P=0.002)。而3组total Tau蛋白表达水平差异无统计学意义。【结论】术前服用益生菌鼠李糖乳杆菌减轻麻醉手术导致的老年小鼠海马区小胶质细胞活化、炎症因子分泌增加、以及Tau蛋白磷酸化水平增加。

中药复方金思维含药血清调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路对拟阿尔茨海默病细胞模型tau蛋白磷酸化的影响

目的探讨中药复方金思维含药血清对拟阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)细胞模型tau蛋白磷酸化的影响及作用机制。方法采用Aβ25-35诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)建立拟AD细胞模型,CCK-8法筛选金思维含药血清、PI3K/AKT/GSK-3β通路抑制剂LY294002最佳作用浓度。将SH-SY5Y细胞分为正常组、模型组、金思维低剂量组、金思维中剂量组、金思维高剂量组以及LY294002组。蛋白免疫印迹法检测金思维含药血清对SH-SY5Y细胞tau蛋白磷酸化以及PI3K/AKT/GSK-3β通路相关蛋白的影响。结果20μmol/L Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞24 h可建立最佳拟AD细胞模型。相对于正常组,模型组P-AKT显著降低(P<0.05),P-tau显著升高(P<0.01)。相对于模型组,金思维低剂量含药血清组PI3K的表达量显著升高(P<0.05),高剂量含药血清组GSK-3β的表达量显著降低(P<0.05),中剂量和高剂量含药血清组P-tau的表达量显著降低(P<0.01、P<0.001)。加入通路抑制剂LY294002后,P-PI3K、PI3K、P-AKT、AKT、GSK-3β、P-tau蛋白的表达量较模型组差异无统计学意义(P>0.05)。结论金思维含药血清可降低拟AD细胞模型tau蛋白磷酸化水平,其机制可能与PI3K/AKT/GSK-3β通路的激活有关。

临床血清磷酸化Tau蛋白检测结果回顾及试剂盒分析

目的:对南京鼓楼医院检验科所开展的血清磷酸化Tau蛋白(p-Tau)检测结果进行回顾,并分析可能存在的问题,提供对该检测方法更加全面的认识。方法:收集已有的检测数据,对其进行疾病诊断分类,并观察阿尔茨海默病、认知减退、痴呆及其它各类疾病下的p-Tau阳性率。利用细胞与脑组织类参照样品对该方法试剂盒的性能进行初步验证。结果:共包括546例患者数据。其中诊断为阿尔茨海默病的患者p-Tau阳性率为16.7%,诊断为痴呆和认知功能减退的患者阳性率为23.7%、12.1%。试剂盒对梯度稀释于血清中的参照品不能有效显示线性,不能有效检测出细胞与脑组织参照样品中的p-Tau,对手工加入临床血清标本中的参照品也不能提供预期的叠加值,显示较差的回收率。结论:该试剂盒对p-Tau检测的阳性率较低,其准确性仍需要改进并提高。

安神定志方对阿尔茨海默病细胞模型miR-103a-3p及Tau蛋白磷酸化的影响

目的观察安神定志方对阿尔茨海默病细胞模型miR-103a-3p及其介导的Tau蛋白磷酸化的影响,探讨其可能作用机制。方法采用β淀粉样蛋白_(25-35)诱导PC12细胞构建阿尔茨海默病体外模型,将细胞分为空白组、模型组、安神定志方组、过表达组和安神定志方+过表达组(联合组),采用安神定志方含药血清和miR-103a-3p模拟剂进行干预。流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量,RT-qPCR检测细胞miR-103a-3p mRNA表达,Western blot检测细胞脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)、p-TrkB、Tau、p-Tau蛋白表达。结果与空白组比较,模型组PC12细胞各时点细胞活力明显降低,凋亡率明显增加,LDH活性和MDA含量明显增加,SOD和GSH-Px活性明显降低,miR-103a-3p mRNA表达明显升高,p-Tau蛋白表达明显升高,BDNF、p-TrkB蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,安神定志方组和联合组PC12细胞各时点细胞活力明显升高,凋亡率明显降低,LDH活性和MDA含量明显降低,SOD和GSH-Px活性明显增加,miR-103a-3p mRNA表达明显降低,p-Tau蛋白表达明显降低,BDNF、p-TrkB蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论安神定志方能通过下调miR-103a-3p表达激活BDNF/TrkB信号通路,从而抑制Tau蛋白磷酸化,发挥对PC12细胞的保护作用。

血清Aβ1-42、P-Tau181和Hcy与帕金森病患者睡眠障碍的相关性

目的探讨血清Aβ1-42、P-Tau181和Hcy与帕金森病(PD)患者睡眠障碍的相关性。方法将80例PD患者根据匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)评估结果分为睡眠正常组(<7分)和睡眠障碍组(≥7分)。采用单因素和多因素logistic回归分析血清Aβ1-42、P-Tau181和Hcy水平与PD患者睡眠障碍的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析不同指标预测PD患者发生睡眠障碍的效能参数。结果单因素和多因素logistic回归分析发现血清Aβ1-42和Hcy分别是PD患者发生睡眠障碍的保护因素和独立危险因素(P<0.05)。血清Aβ1-42、Hcy水平预测PD伴睡眠障碍的AUC分别为0.757(95%CI:0.652~0.861)和0.796(95%CI:0.688~0.905)。结论PD患者血清Aβ1-42、Hcy水平与睡眠障碍密切相关,可作为临床诊断PD伴睡眠障碍的预测因子。

血清Trx2、P-tau与脑小血管病患者核磁总负荷评分和认知功能的相关性

目的 探讨脑小血管病患者血清硫氧还蛋白2(Trx2)、磷酸化tau蛋白(P-tau)与核磁总负荷评分和认知功能的相关性。方法 选取2019年7月—2020年7月沧州市中心医院脑小血管病患者94例,根据是否存在认知功能障碍分为认知障碍组(38例)和无认知障碍组(56例);根据核磁总负荷评分分为轻度负荷组(67例)和中重度负荷组(27例)。收集所有患者的一般资料和实验室检测结果,并检测血清Trx2、P-tau水平。采用多因素Logistic回归分析评估脑小血管病患者核磁总负荷和认知功能的影响因素。采用Pearson相关分析评估各项指标与核磁总负荷和认知功能的相关性。结果 认知障碍组和无认知障碍组性别、年龄、饮酒史、吸烟史和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、尿酸(UA)、核磁总负荷评分、Trx2、P-tau水平差异均有统计学意义(P<0.05),其他指标差异均无统计学意义(P>0.05)。轻度负荷组与中重度负荷组之间性别、年龄、高血压史和HDL-C、UA、Trx2、P-tau水平差异均有统计学意义(P<0.05),其他指标差异均无统计学意义(P>0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清Trx2[比值比(OR)值=2.751,95%可信区间(CI)为1.123~6.738]、血清P-tau(OR=2.651,95%CI为1.180~5.956)是脑小血管病患者认知功能障碍的独立危险因素(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,脑小血管病患者血清Trx2、P-tau与核磁总负荷评分和CMMSE评分均呈正相关(P<0.05)。结论 血清Trx2、P-tau与脑小血管病患者核磁总负荷和认知功能密切相关,检测血清Trx2、P-tau水平有助于评估脑小血管病的严重程度和患者认知功能。

血清p-tau181与帕金森病的相关性

目的探究帕金森病(PD)患者血清磷酸化tau181(p-tau181)浓度及其与疾病严重程度、认知损害、患者功能预后的相关性。方法纳入2021-07—2022-02于重庆医科大学附属第一医院神经内科住院或门诊就诊的PD患者40例和同期健康对照(HC)35例为研究对象。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清p-tau181水平。入院或就诊时评估帕金森病统一评分量表(UPDRS)和Hoehn-Yahr(H-Y)分期量表,以评估PD患者的疾病严重程度。认知功能由蒙特利尔认知评估(MoCA)量表测评。6个月后随访患者UPDRS评分及H-Y分期,进一步评估血清p-tau181与患者预后的相关性。结果与HC相比,PD患者血清p-tau181水平升高,但差异无统计学意义[1.01(0.28~2.63)ng/L比0.53(0.04~3.72)ng/L,P=0.55]。PD早期和晚期患者p-tau181水平差异无统计学意义(P=0.80),认知损害PD患者、认知正常PD患者与HC者p-tau181水平差异无统计学意义(P=0.63)。p-tau181与病程(r=-0.14,P=0.37)、UPDRS评分(r=0.02,P=0.89)、MoCA评分(r=0.16,P=0.32)均无相关性。预后良好组与预后不佳组血清p-tau181水平表达无统计学差异(P=0.74)。结论p-tau181在帕金森病患者血清表达增加,与疾病严重程度、认知损害、功能预后无明确相关性。

老年2型糖尿病患者血清外泌体中神经元特异性烯醇化酶和磷酸化tau的表达及其与继发轻度认知功能障碍的相关性

目的检测老年2型糖尿病(T2DM)患者血清外泌体神经元特异性烯醇化酶(NSE)和磷酸化tau(P-tau)的表达,并探讨其与患者发生轻度认知功能障碍(MCI)的相关性。方法选取2019年1月至2020年12月于联勤保障部队第921医院就诊的114例老年T2DM患者为研究对象(研究组),另选取同期健康体检者100名为对照组。采用ExoQuick-TC提取研究对象血清源性外泌体。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测研究对象血清源性外泌体中NSE和P-tau的表达。使用简易认知状态评价量表(MMSE)和蒙特利尔认知评估量表(MoCA)对研究对象进行认知评估。采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析。根据数据类型,分别采用t检验或χ^(2)检验进行组间比较。应用Spearman秩相关分析血清外泌体中NSE及P-tau表达水平与认知受损严重程度的相关性。应用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清源性外泌体中NSE和P-tau表达水平对MCI的预测价值。结果研究组老年T2DM患者出现认知受损的比例高于对照组;MMSE和MoCA分值明显低于对照组;发生MCI的比例高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。根据MoCA分值将研究组患者分为MCI组(n=71)和非MCI组(n=43),MCI组血清外泌体中NSE和P-tau表达分别为(13.27±1.61)μg/L和(17.14±2.45)pg/ml,明显高于非MCI组的(10.86±1.43)μg/L和(14.49±2.25)pg/ml(t=5.728,6.154;P<0.05)。相关性分析显示,老年T2DM患者血清外泌体中NSE和P-tau表达水平与MMSE(r=-0.547,-0.562;P<0.05)和MoCA分值(r=-0.583,-0.597;P<0.05)存在负相关。ROC曲线分析结果显示,血清外泌体中NSE表达预测老年T2DM患者发生MCI的曲线下面积(AUC)为0.729,血清外泌体中P-tau表达预测老年T2DM患者发生MCI的AUC为0.741,而两者联合预测老年T2DM患者发生MCI的AUC为0.827,高于NSE和P-tau单个指标的预测价值(t=3.836,3.478;P<0.05)。结论血清外泌体中高表达的NSE和P-tau与老年T2DM患者MCI的发生密切相关,二者联合的预测价值更高。

Aβ_(1-42)及P-tau-181在阿尔茨海默病患者血清中的表达及意义

目的探讨血清β-淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))及磷酸化tau蛋白181(P-tau-181)在阿尔茨海默病(AD)患者血清中的表达及意义。方法选取2022年11月至2023年7月医院收治的40例阿尔茨海默病患者为AD组,40例血管性痴呆(VD)患者为VD组,另选择医院同期接收的40名健康体检老年人为健康组,3组均给予Aβ_(1-42)及P-tau-181检测。比较3组的Aβ_(1-42)及P-tau-181浓度及不同检测方法的阳性检出率。结果3组Aβ_(1-42)、P-tau-181浓度比较,差异有统计学意义(P<0.05);AD组的Aβ_(1-42)及P-tau-181浓度均高于VD组、健康组、VD组的Aβ_(1-42)及P-tau-181浓度均高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05);AD组Aβ_(1-42)、P-tau-181联合检测的阳性检出率高于Aβ_(1-42)、P-tau-181单一检测,差异有统计学意义(P<0.05);VD组Aβ_(1-42)、P-tau-181联合检测的阳性检出率高于Aβ_(1-42)、P-tau-181单一检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Aβ_(1-42)及P-tau-181在阿尔茨海默病患者血清中的浓度较健康人群及血管性痴呆患者更高,且联合检测的阳性检出率较单一指标检测更高。

红景天苷对脂多糖所致痴呆小鼠Tau蛋白过度磷酸化的作用

目的采用腹腔注射脂多糖(LPS)制备小鼠痴呆模型,观察红景天苷(Sal)对该模型小鼠脑组织Tau蛋白过度磷酸化的影响。方法49只雄性C57BL/6J小鼠随机分成7组:空白组、Sal高剂量对照组、LPS组、LPS+Sal低、中、高剂量组、LPS+多奈哌齐(DP)组。药物干预组小鼠灌胃给予Sal 25、50、100 mg/kg或DP 1 mg/kg,空白组和LPS组小鼠给予同体积双蒸水灌胃,1次/d,连续30 d。从灌胃第15天起,LPS小鼠腹腔注射LPS 250μg/kg,空白组与Sal高剂量对照组小鼠腹腔注射等体积生理盐水,1次/d,连续7d。给药结束前1周,采用Morris水迷宫检测各组小鼠行为学功能;之后处死小鼠取脑,Elisa检测脑组织上清液中炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;Western blot法检测脑组织中IL-1β、IL-6、核因子-κB(NF-κB)的表达水平,以及Tau在S202、T231、S396、S404位点的磷酸化水平及总Tau蛋白的表达水平。结果Morris水迷宫结果显示,与空白组小鼠比较,LPS小鼠在第5、6天找到隐匿平台的时间(逃避潜伏期)明显延迟(P<0.01),而给予Sal和DP后明显缩短了逃避潜伏期(P<0.01);Elisa结果显示IL-1β(P<0.01),IL-6和TNF-α(P<0.05)在LPS组小鼠脑内的水平均较空白组显著增加,而给予Sal高剂量和DP后均不同程度的下降(P<0.05)。Western blot法检测LPS小鼠脑组织中IL-1β,IL-6和NF-κB的蛋白表达水平较空白组显著增加(P<0.01),而给予Sal高剂量和DP后均不同程度的下降(P<0.05;P<0.01)。Tau蛋白磷酸化的结果显示,LPS小鼠脑组织Tau蛋白在S202、T231、S396、S404位点的磷酸化水平均较空白组小鼠增加(P<0.01),给予Sal和DP后不同程度的降低了上述磷酸化位点的水平(P<0.01或P<0.05)。但总Tau蛋白的表达水平在各组没有明显变化。结论红景天苷明显改善腹腔注射LPS导致的痴呆小鼠的行为学功能,并降低脑内Tau蛋白过度磷酸化的水平。

雷帕霉素通过抑制mTOR活性降低铝引起的磷酸化tau蛋白沉积

目的研究雷帕霉素是否可以通过抑制mTOR活性降低铝暴露引起的p-tau蛋白的沉积。方法24只SD大鼠随机分为四组:对照组、低剂量麦芽酚铝组、中剂量麦芽酚铝组和高剂量麦芽酚铝组。Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力;Western blot检测海马组织中p-tau蛋白、p-mTOR和PSD95的变化情况;PC12细胞分为对照组、铝处理组、铝+溶剂对照组、铝+雷帕霉素100 nmol组、铝+雷帕霉素300 nmol组和铝+雷帕霉素500 nmol组,Western blot检测蛋白变化情况。12只大鼠分为铝处理组和铝+雷帕霉素组,Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力;Western blot检测海马组织中p-tau蛋白、p-mTOR和PSD95的变化情况。结果水迷宫实验中,铝处理组大鼠的逃避潜伏期均比对照组延长,中、高剂量麦芽酚铝组逃避潜伏期明显低于对照组((35.24±4.78)、(25.92±8.80)vs(20.32±6.04),P<0.001);铝处理组大鼠的目标象限停留时间和穿越平台次数均随着铝剂量的升高而减少(P<0.05)。与对照组比较,铝处理组大鼠的海马组织中,p-mTOR/mTOR和p-tau/tau的水平均明显增高(P<0.05);PSD95蛋白明显降低(P<0.05)。在PC12细胞中,与单独铝处理组相比,雷帕霉素干预组的p-mTOR/mTOR和p-tau/tau的表达均有所减少,尤其在雷帕霉素300 nmol和雷帕霉素500 nmol干预组中,p-tau可恢复至正常对照组水平,PSD95也明显回升(P<0.05)。与单独铝处理组大鼠比较,雷帕霉素干预组的大鼠学习记忆能力明显改善,同时海马组织中p-mTOR/mTOR和p-tau/tau的表达均减少,PSD95也明显回升。结论mTOR磷酸化激活参与了铝引起的p-tau蛋白过度沉积,雷帕霉素可以通过抑制mTOR的磷酸化活性降低磷酸化tau蛋白的沉积。

枸杞多糖对阿尔茨海默病合并2型糖尿病小鼠学习记忆能力及脑内Tau蛋白磷酸化水平的影响

目的探讨枸杞多糖(LBP)对阿尔茨海默病(AD)合并2型糖尿病(T2DM)小鼠学习记忆能力及脑内Tau蛋白磷酸化水平的影响。方法5月龄C57BL/6J小鼠16只随机分为对照组、T2DM组,同月龄APP/PS1小鼠32只随机分为AD组、AD+T2DM组、LBP组(100 mg·kg^(-1))、多奈哌齐组(0.75 mg·kg^(-1)),每组各8只。T2DM组、AD+T2DM组、LBP组、多奈哌齐组小鼠高糖高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素建立T2DM模型。治疗组以相应剂量药物干预,其余组给予等体积生理盐水。连续给药3个月后,Morris水迷宫实验评价各组小鼠学习记忆能力,HE染色观察各组小鼠脑组织细胞形态变化,Western Blot检测各组小鼠脑内不同位点磷酸化Tau蛋白及GSK3β蛋白的表达水平。结果LBP可缩短AD+T2DM模型小鼠逃避潜伏期、第一次穿越平台时间(P<0.05,P<0.05),增加穿越平台次数及目标象限停留时间(P<0.01,P<0.01),改善大脑皮层神经元形态损伤,降低皮层及海马Tau蛋白Ser404、Ser396及Ser199位点磷酸化水平(P<0.05,P<0.05,P<0.05;P>0.05,P<0.01,P<0.01)和GSK-3β及Tyr216位点磷酸化水平(P>0.05,P<0.01;P<0.01,P<0.01),提高GSK-3β蛋白Ser9位点磷酸化水平(P<0.01,P<0.05)。结论枸杞多糖可改善AD+T2DM模型小鼠的学习记忆能力,降低脑内Tau蛋白的磷酸化水平。

自噬参与神经细胞中过表达tau和异常磷酸化tau蛋白的降解

目的观察自噬对神经细胞内源性tau、过表达tau和异常磷酸化tau蛋白水平的影响,探讨不同形式tau蛋白降解的可能机制。方法体外培养小鼠神经瘤母细胞株N2a和敲除Atg5基因的小鼠胚胎成纤维细胞株MEF,分别转染GFP-tau质粒,并用蛋白磷酸酯酶抑制剂冈田酸(okadaic acid,OA)诱导tau蛋白过度磷酸化,自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin)和溶酶体抑制剂氯化铵(NH4Cl)处理细胞,Western blot法检测tau、磷酸化tau以及自噬相关蛋白LC3和p62的表达;放线菌酮(cycloheximide,CHX)示踪法观察tau和磷酸化tau的降解;GFP-tau和RFP-Lamp1质粒共转染N2a细胞,观察tau和溶酶体的定位;免疫荧光染色和DAB染色观察自噬抑制对表达tau细胞形态的影响。结果与溶媒对照组相比,NH4Cl和rapamycin处理组细胞内源性tau蛋白水平无明显变化;过表达tau的细胞中,NH4Cl能增加tau和OA诱导的磷酸化tau蛋白水平,而rapamycin处理组细胞中tau和磷酸化tau水平降低,尤其是高分子量的磷酸化tau寡聚体明显减少;CHX实验证明自噬抑制能减缓tau和磷酸化tau的降解;tau和溶酶体在细胞内存在共定位;过表达tau的N2a细胞经NH4Cl处理后,胞质中出现大量tau聚集体,细胞核变小、固缩甚至消失。结论自噬参与神经细胞中过表达tau和异常磷酸化tau蛋白的降解,抑制自噬能增加tau的细胞毒作用。

甲醛诱导的磷酸化减弱Tau蛋白与DNA相互作用

异常磷酸化Tau蛋白是神经纤维缠结的主要成分,也是老年痴呆的典型病理特征之一.本实验室前期报道了Tau蛋白具有保护DNA的作用,但磷酸化对Tau与DNA相互作用的影响需要进行探索,这对于揭示Tau蛋白异常磷酸化与神经细胞死亡之间的关系具有一定的参考价值.本文采用甲醛孵育N2a细胞,引起了细胞内Tau蛋白的过度磷酸化.实验结果进一步显示,甲醛孵育组的细胞核内磷酸化Tau蛋白与DNA非共定位存在,而对照组细胞核内Tau蛋白与DNA存在一定程度的共定位现象.电泳迁移率实验检测GSK-3β催化的磷酸化Tau蛋白与DNA的结合情况,可以观察到磷酸化减弱了Tau蛋白与DNA的相互结合.这些结果表明,异常磷酸化可以使Tau蛋白丧失对DNA的保护作用,这可能是Tau蛋白异常磷酸化引起DNA损伤甚至细胞死亡的原因之一.

饥饿对小鼠脑中tau蛋白磷酸化和O-GlcNAc糖基化的影响

为了探讨大脑中葡萄糖摄取和代谢障碍在阿尔茨海默病(Alzheimer$sdisease,AD)神经退行性病变中的作用,将昆明种小鼠进行饥饿和再喂食处理,并使用多种磷酸化tau蛋白特异性的抗体和蛋白O-GlcNAc糖基化特异性抗体进行检测,观察饥饿及恢复喂养后不同时间点大脑皮质中tau蛋白糖基化及多个位点磷酸化的变化.结果显示:饥饿处理引起小鼠大脑皮质中总蛋白和tau蛋白的O-GlcNAc糖基化水平降低,同时tau蛋白磷酸化水平升高,饥饿引起的tauO-GlcNAc糖基化和磷酸化改变均在恢复进食后逆转成正常水平.该研究结果提示:大脑中tau蛋白的磷酸化和O-GlcNAc糖基化之间存在相互调节,脑中葡萄糖代谢障碍可能通过下调tau蛋白O-GlcNAc糖基化水平使tau蛋白产生异常过度磷酸化,进而促发AD的病理进程.这一结果为在早期阶段通过逆转tau蛋白异常过度磷酸化治疗AD成为可能提供了实验基础.

人参皂苷Rb1通过JNK/p38 MAPK途径减轻Aβ_(25-35)诱导的胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化

探讨在Aβ25-35(beta-amyloid peptide(25-35),Aβ25-35)诱导的拟阿尔茨海默病样胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化中,人参皂苷Rb1对tau蛋白磷酸化及JNK/p38 MAPK的可能作用。应用蛋白免疫印迹和免疫细胞化学染色的方法,观察tau蛋白磷酸化和JNK(c-jun N-terminal kinase)/p38 MAPK的表达情况。凝聚态Aβ25-35(20μmol.L-1)作用于皮层神经元12 h,tau蛋白的磷酸化水平明显增高,同时JNK/p38 MAPK的总量及其活性形式——磷酸化JNK/p38 MAPK的蛋白表达水平也增加,人参皂苷Rb1可以减轻tau蛋白的磷酸化水平及JNK/p38MAPK的蛋白水平。人参皂苷Rb1可通过JNK/p38 MAPK途径减轻Aβ25-35诱导的tau蛋白过度磷酸化。

肥胖及2型糖尿病大鼠Alzheimer病样Tau蛋白过度磷酸化修饰及机制探讨

Tau蛋白异常过度磷酸化修饰在阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)发病机理中起非常重要的作用,而2型糖尿病是AD的风险因素之一.采用蛋白质印迹研究2型糖尿病及单纯肥胖大鼠脑中海马回tau蛋白磷酸化程度,发现在这两种大鼠模型中海马tau蛋白在多个位点上都呈现过度磷酸化状态.同时,胰岛素信号传导系统中的关键酶糖原合成激酶-3β(glycogensynthasekinase-3β,GSK-3β)活性在这两种大鼠模型的海马回中明显增高,经脑立体定位法向大鼠海马回注射GSK-3β抑制剂氯化锂(LiCl),可阻止2型糖尿病及肥胖大鼠模型中的GSK-3β激活,但仅阻止单纯肥胖大鼠海马回tau蛋白过度磷酸化.另外,海马神经细胞膜上胰岛素受体β亚基水平在两种实验模型中显著下降.研究结果表明,2型糖尿病及肥胖可能通过增高胰岛素抵抗,从而导致GSK-3β激活和tau蛋白的过度磷酸化来提高AD的发病风险.2型糖尿病脑中低下的葡萄糖代谢也可能在tau蛋白的过度磷酸化起一定作用.

人参皂苷Rb1抑制β淀粉样蛋白_(25-35)诱导的皮层神经元tau蛋白过度磷酸化

目的 探讨人参皂苷Rb1对凝聚态β AP25 35诱导的胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化的影响及其可能的作用机制。方法 通过蛋白免疫印迹法和免疫细胞化学染色法检测神经元tau蛋白磷酸化水平、总tau蛋白水平和糖原合成酶3β(GSK 3β)的蛋白表达水平。结果 凝聚态β AP25 35(20μmol·L-1)作用于皮层神经元12h,tau蛋白磷酸化水平和总tau蛋白水平均增高,同时GSK 3β蛋白表达也增多。用人参皂苷Rb1或GSK 3β特异性抑制剂氯 化锂预处理后,凝聚态β AP25 35诱导的tau蛋白的过度磷酸化受到明显抑制,同时GSK 3β的表达也降低。结论 人 参皂苷Rb1可通过抑制GSK 3β的表达来抑制凝聚态β AP25 35诱导的皮层神经元tau蛋白的过度磷酸化。

人参皂甙Rb1减轻冈田酸诱导的大鼠海马神经元Tau蛋白过度磷酸化

为研究人参皂甙Rb1(ginsenoside Rb1)对冈田酸(okadaic acid,OA)诱导的大鼠海马神经元Tau蛋白过度磷酸化的影响及其可能机制,实验随机分为正常组、溶媒对照组、OA模型组和Rb1预处理组。正常组不作任何处理;Rb1预处理组大鼠分别用5、10、20 mg/kg的Rb1预处理,每天一次,共14 d,于第13天向海马背侧注射1.5μl OA[0.483 μl,溶于10% 二甲基亚砜(dimethysulphoxide,DMSO)];OA模型组大鼠于第13天时海马背侧注射OA,溶媒对照组则注射等体积的生理盐水。各组均于第15天收取标本。通过Biescbowski’s染色、免疫组化和Western blot,分别观察大鼠海马神经元胞体和突起内神经原纤维的改变和磷酸化Tau蛋白的表达水平,同时检测蛋白磷酸酯酶2A(protein phosphatase-2A,PP2A)活性以探讨其作用机制。结果显示:(1)OA模型组与溶媒对照组及正常组比较,海马神经元胞体和突起着色较深,染色不均匀;神经元中Thr231和Sei396位点磷酸化的Tau蛋白和总Tau含量增多;PP2A活性则明显下降(P<0.01):(2)Rb1预处理组大鼠海马神经元胞体和突起染色均匀,神经原纤维走行规则;海马神经元中Thr231和Ser396位点磷酸化的Tau蛋白和总Tau 含量较OA模型组减少,而PP2A活性明显增高(P<0.01)。以上观察结果表明,人参皂甙Rb1可以减轻OA诱导的大鼠海马神经元Tau蛋白过度磷酸化,其机制可能与提高PP2A活性有关。

人参皂苷Rg1对Aβ_(25-35)诱导大鼠海马神经元tau蛋白异常磷酸化的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对Aβ2535所致大鼠海马神经tau蛋白异常磷酸化的抑制作用及其可能机制。方法应用脑立体定向技术向成年大鼠海马背侧注射凝聚态Aβ25355nmol制备AD样大鼠模型,术后分别给予腹腔内注射不同浓度的人参皂苷Rg1(625、125、25μmol·kg-1)处理,14d后处死,采用镀银染色方法观察海马组织神经元病理改变;免疫组织化学染色方法和免疫蛋白印迹技术显示大鼠脑内[pS396]tau、[pSpS199/202]tau、[pT231]tau的表达水平情况,以及总tau蛋白的水平(tau5);免疫蛋白印迹技术检测海马组织中GSK3β和磷酸化GSK3β的水平变化。结果凝聚态Aβ2535注射组神经元纤维走行紊乱,增粗、肿胀密集成宽带状,轴突深染;而人参皂苷Rg1对神经元具有明显的保护作用,脑内总tau的水平下降,[pS396]tau、[pSpS199/202]tau、[pT231]tau的表达明显低于Aβ2535注射组(P<001),以25μmol·kg-1保护作用最明显;GSK3β和磷酸化GSK3β的水平亦明显低于Aβ2535注射组,与正常和假注射组差异无显著性(P>005),以25μmol·kg-1作用最明显。结论人参皂苷Rg1对Aβ2535诱导的AD样大鼠海马神经元具有保护作用,其机制可能是通过阻断GSK3β的活性而降低磷酸化tau蛋白的表达而实现的。