钙调磷酸酶抑制剂FK506对Tg2576小鼠记忆时间的影响

[目的]探讨钙调磷酸酶（Calcineurin，CaN）抑制剂FK506对Tg2576小鼠记忆时间的影响。[方法]应用新事物再认实验（Norel Object Recognition，NOR）观察在2min，4h及24h时Tg2576小鼠记忆力损害程度及CaN抑制剂FK506对Tg2576小鼠记忆损害的改善作用。[结果]Tg2576小鼠的短时记忆并未受到影响，Tg2576小鼠主要表现出中、长时程记忆损害；且CaN抑制剂FK506能有效改善Tg2576小鼠中时程记忆及长时程记忆损害。[结论]CaN活性异常可影响Tg2576小鼠中时程记忆及长时程记忆功能；推测在阿尔茨海默症病（AD）患者应用CaN抑制剂能有效改善其记忆功能障碍，可成为AD治疗的途径之一。

异硫氰酸苯乙酯对结肠癌细胞PTEN及MMP-9表达的影响

目的观察异硫氰酸苯乙酯(PEITC)对结肠癌细胞磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)以及基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响。方法体外培养结肠癌细胞系SW480,分别用10、30、50μmol/L PEITC作用24 h,采用实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)和荧光素酶报告基因分别检测PTEN和MMP-9 mRNA的表达;采用蛋白质印迹法(western blotting)检测MMP-9和PTEN蛋白表达。结果 PEITC可抑制MMP-9蛋白表达,同时能降低MMP-9的转录活性。此外,不同浓度PEITC处理后,可明显诱导细胞内PTEN的表达,其中50μmol/L PEITC处理后,PTEN mRNA含量可增高5.1倍。结论 PEITC能影响结肠癌细胞PTEN和MMP-9的表达。

两种ErbB2/Neu阳性-PTEN缺失乳腺癌基因工程小鼠模型的建立及其生物学特征比较

目的：建立两种ErbB2／Neu阳性-PTEN缺失的乳腺癌基因工程小鼠模型并比较其生物学特征。方法：利用先前建立的由鼠乳腺肿瘤病毒（MMTV）启动子同时驱动活化型ErbB2／Neu基因和重组酶Cre表达的FVB／N—MMTV—NIC小鼠与Flox-PTEN小鼠交配；或将由内源性启动子驱动活化型ErbB2／Neu基因表达的FVB／N-ErbB2^KI、FVB／N—MMTV—Cre及Flox—PTEN三种基因工程小鼠交配；PCR分别扩增Neu、Cre和PTEN基因，对其子代小鼠进行基因型鉴定；免疫组织化学法检测乳腺组织ErbB2／Neu和PTEN蛋白表达。对两种模型的成瘤时间、肿瘤数目、肺转移等生物学特征进行比较，观察肿瘤组织病理学形态，免疫组织化学法检测肿瘤细胞Ki-67表达，TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡水平。结果：经基因型鉴定和组织蛋白表达分析，获得了两种ErbB2／Neu阳性-PTEN纯合型缺失的乳腺癌基因工程小鼠模型；一是由MMTV外源性启动子同时驱动活化型ErbB2／Neu和Cre表达，抑癌基因PTEN条件性敲除的NIC／PTEN^-/-模型；二是由MMTV-Cre使内源性启动子驱动ErbB2／Neu基因表达，PTEN条件性敲除的ErhB2^KI／PTEN^-/-模型。NIC／PTEN^-/-模型的平均成瘤时间低于ErbB2^KI／PTEN^-/-模型（30d与368d，P〈0．01）；肿瘤数目、肺转移率均高于ErbB2^KI／PTEN^-/-模型（分别为10个与1～2个，75．0％与37．5％，均P〈0．01）；两种模型肿瘤呈现不同的组织病理形态，肿瘤细胞凋亡水平相当（P〉0．05）；NIC／PTEN^-/-模型Ki-67阳性细胞百分率高于ErhB2^KI／PTEN^-/-模型（86．9％±2．8％与37．4％±7．2％，P〈0．01）。结论：两种不同表型的ErbB2／Neu阳性-PTEN缺失的乳腺癌基因工程小鼠为探索ErbB2／HER2阳性乳腺癌的发生、发展规律及更有效的防治方案提供了理想的动物模型。

PTEN蛋白在肺癌中的表达及意义

目的:探讨肺癌中PTEN蛋白表达与临床病理特征的关系。方法:应用免疫组织化学PV-9000通用型二步法检测65例肺癌组织、10例癌旁肺组织、8例肺良性病变组织中PTEN蛋白的表达情况。结果:PTEN蛋白在肺癌中的阳性表达率为49.23%(32/65),在癌旁肺组织阳性表达率为90%(9/10),在肺良性病变组织阳性表达率为100%(8/8),肺癌PTEN蛋白阳性表达率显著低于癌旁肺组织及肺良性病变组织(P<0.05)。PTEN蛋白表达与非小细胞肺癌的组织分化程度及有无淋巴结转移有关。结论:PTEN蛋白的表达缺失在肺癌发生中可能起重要作用,并可能影响肿瘤的分化和预后。

PI3K/AKT信号通路与PTEN在非小细胞肺癌表达中的相关性

目的研究表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、磷酸化AKT蛋白(phophorylatedAKT,p-AKT)及PTEN基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome,PTEN)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及意义。方法 采用免疫组织化学Maxvision法检测EGFR、p-AKT及原位杂交法检测PTEN在66例NSCLC和10例正常肺组织中的表达,并分析两者的相关性及其与临床病理特征的关系。结果 EGFR、p-AKT和PTEN在NSCLC中的阳性率分别为69.7%、75.8%、33.3%,在NSCLC中,EGFR的高表达与分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P<0.05);p-AKT的高表达与分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P<0.05)。PTEN在NSCLC中的阳性表达率明显下调,其失表达与分化程度、淋巴结转移、TNM分期和病理类型密切相关(P<0.05)。EGFR与p-AKT表达呈正相关(P<0.05),EGFR与PTEN表达呈负相关(P<0.05),p-AKT与PTEN表达呈负相关(P<0.05)。结论 EGFR和p-AKT在NSCLC的高表达和PTEN基因失表达,可能促进了NSCLC的发生、发展及侵袭转移。可为NSCLC基因靶向治疗提供理论依据。

腺病毒介导的PTEN cDNA对子宫内膜癌细胞凋亡的影响

目的研究外源性PTEN cDNA的表达对子宫内膜癌细胞凋亡的影响。方法用细菌内同源重组法构建含野生型抑癌基因PTEN cDNA的复制缺陷型腺病毒Ad-PTEN,蛋白印迹法鉴定转染Ad-PTEN后,子宫内膜癌细胞系RL95-2细胞中PTEN蛋白的表达。将RL95-2细胞随机分成3组: (1)空白对照组:仅用培养基而不加腺病毒;(2)Ad-CMV组:转染复制缺陷型空载体腺病毒Ad-CMV; (3)Ad-PTEN组:转染复制缺陷型腺病毒Ad-PTEN,前两组均为对照组。采用细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)外翻检测、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)测定及染色体DNA片段化检测这3种方法,从不同角度检测PTEN蛋白的表达对RL95-2细胞凋亡的影响。结果经Ad-PTEN介导的PTEN cDNA能够在RL95-2细胞中持续有效地表达。Ad-PTEN组转染后24、48、72、96 h,RL95-2细胞中细胞膜PS外翻细胞分别占(6．09±1．01)％、(9．98±2．17)％、(11．74±2．65)％、(27．69±8．67)％,各个时间点分别与两个对照组比较,差异均有统计学意义(P<0．05);RL95-2细胞中活化caspase-3细胞分别占(2．6±0．5)％、(18．0±4．4)％、(21．8±5．1)％、(33．7±9．9)％,各个时间点分别与两个对照组比较,差异均有统计学意义(P<0．05)。Ad-PTEN转染后48 h,RL95-2细胞中出现特异性的染色体DNA梯状条带。结论腺病毒介导的PTEN cDNA能够有效地在RL95-2细胞中表达,并诱导其凋亡,为子宫内膜癌的基因治疗提供了理论基础。