焦磷酸测序技术在4种食源性致病菌快速检测中的应用

为建立一种利用焦磷酸测序技术检测和鉴定沙门氏菌(Salmonellla)、单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和志贺氏菌(Shigella)的方法,通过对4种菌毒力靶基因特异性序列的同源性分析,设计出适合焦磷酸测序特异性扩增和测序的引物,摸索出最佳的焦磷酸测序反应体系和反应程序,并建立了4种食源性致病菌焦磷酸测序快速检测方法。此方法以传统国标法的前增菌为前提,而省去了后期生化验证的繁琐过程,大大缩短了检测时间,并且其准确性与传统生化验证完全一致,灵敏度可达10 CFU/mL。结果表明,作者建立的焦磷酸测序检测方法具有高效、快速、精准及操作简便等特点,为食源性致病菌的快速鉴定开辟了广阔的前景。

焦磷酸测序技术在确认北京严重急性呼吸综合征(SARS)病毒株并检测基因突变中的应用

结合严重急性呼吸综合征(SARS)病毒株序列信息分析和高通量测序技术,建立一种快速、简单地确定SARS病毒株并筛查SARS病毒突变位点和突变频率的方法。从感染人SARS病毒的Vero-6细胞中提取病毒RNA,反转录为cDNA后,PCR扩增目的基因片段,采用焦磷酸测序技术(PyrosequencingTechnology,PSQ)进行第2601、79199、4791、9838多个碱基突变位点测序和突变频率分析。通过测序分析多个可能出现突变的位点,确定了该病毒为北京流行株,同时发现第7919位碱基发生了A/G突变。PSQ技术对于高通量筛选研究病毒基因的突变和确定病毒株型别有着简单、快速、灵敏的特点。利用生物信息学分析核酸多态性,结合实验验证,可以确定SARS病毒流行株的特征,有利于对突发事件及早确定传染来源。

运用454焦磷酸测序技术对病原菌16S-rDNA的分析

目的探讨运用测序技术鉴定临床感染标本中病原菌的应用价值。方法运用聚合酶链反应(PCR)扩增及454焦磷酸测序技术,对标本中病原菌16S-rDNA V3区进行多样性分析;并与细菌培养结果相比较。结果测序能检测出临床不宜培养的菌属,如支原体属、嗜血杆菌属、莫拉菌属等;9种菌属为2种方法共同检测所得,7种菌属的P值均<0.05。结论 2种方法的检测敏感性差异有统计学意义;与细菌培养相结合是临床实践中的一种新的偿试。

焦磷酸测序技术检测UGT1A3和UGT2B7在中国汉族人群中的基因多态性

目的建立焦磷酸测序技术(pyrosequencing)研究二相代谢酶UGT1A3和UGT2B7基因多态性在中国汉族人群中的分布。方法应用带生物素标记扩增引物并经PCR扩增和Beads分离,制备UGT1A3和UGT2B7焦磷酸测序单倍摸板。在PYroMarkID焦磷酸测序上进行焦磷酸测序,检测233血样的DNA标本的17个SNP位点,以确定血样DNA标本的的基因型。结果 233例血样的DNA标本中,UGT1A3等位基因有9种表型,分别为UGT1A3*1*1、UGT1A3*1*2、UGT1A3*1*3、UGT1A3*1*4、UGT1A3*1*5、UGT1A3*2*3、UGT1A3*2*4、UGT1A3*3*3和UGT1A3*3*5。UGT2B7-1和UGT2B7-2各有3种基因型,分别为G/G型、G/T型、T/T和C/C型、C/T型、T/T型。结论我国汉族人群中UGT1A3和UGT2B7基因突变较高。

用VITEK 2 Compact系统鉴定准确率低的临床少见病原菌评价焦磷酸测序技术鉴定能力

目的用焦磷酸测序技术鉴定经VITEK 2 Compact系统鉴定准确率低或无法鉴定的46株细菌,对两种方法在少见菌的鉴定能力进行评价。方法选择经VITEK 2 Compact系统鉴定准确率低或无法鉴定的46株细菌(包含革兰阳性球菌、革兰阳性杆菌、革兰阴性球菌及革兰阴性杆菌),提取DNA模板,做焦磷酸测序技术分析;同步进行Sanger法测序并以其结果作为准确鉴定的"金标准"。结果焦磷酸测序技术在4 h内完成46株细菌的鉴定。焦磷酸测序技术鉴定正确率为71.74%(33/46),VITEK 2 Compact系统鉴定正确率为43.48%(20/46)。46株菌中,两种方法鉴定均鉴定正确的菌株19株;焦磷酸测序技术鉴定正确、VITEK 2 Compact系统鉴定准确率低、未鉴定或鉴定错误的菌株14株;VITEK2 Compact系统鉴定正确、焦磷酸测序技术鉴定错误的菌株1株;两种方法均鉴定错误的菌株12株。结论对于微生物实验室利用传统方法无法准确鉴定的细菌,利用焦磷酸测序技术鉴定具有准确、快速及简便的特点,可适用于临床少见病原菌的鉴定。

PCR-焦磷酸测序技术在HPV型别检测中的应用

宫颈癌是严重危胁妇女生命健康的最常见恶性肿瘤之一,全球每年新发病例约52.98万,死亡病例25.51万,80%发生在发展中国家[1]。早期宫颈癌如能及时发现并治疗,治愈率可达90%以上。高危型人乳头瘤病毒(high risk human papillomavirus,HR-HPV)持续感染是宫颈癌的主要致病因素,不同HPV亚型引起宫颈癌的危险性不同,其中HPV16和HPV18是致癌能力最强的基因型,70%的浸润性宫颈癌与其相关[2]。因此,HPV感染筛查及型别检测是预防和控制子宫颈癌的重要手段。对30~65岁已婚妇女而言。

焦磷酸测序技术的原理及应用

焦磷酸测序技术是由4种酶催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应,适于对已知的短序列的测序分析,其可重复性和精确性能与SangerDNA测序法相媲美,而速度却大大的提高。焦磷酸测序技术不需要凝胶电泳,也不需要对DNA样品进行任何特殊形式的标记和染色,具备同时对大量样品进行测序分析的能力。在单核苷酸多态性、病原微生物快速鉴定、病因学和法医鉴定研究等方面有着越来越广泛的应用。

磷酸化蛋白质组学技术及其在肿瘤研究中的应用

磷酸化蛋白质组是指机体细胞在特定时间和空间上表达的所有磷酸化蛋白质;磷酸化蛋白质组学是在整体水平上研究磷酸化蛋白质在细胞中的组成成分、表达水平、修饰状态及相互作用规律的学科。近年来,磷酸化蛋白质学技术已广泛应用于肿瘤研究,为阐明肿瘤的发生机制,提高肿瘤的诊治水平提供了重要信息。

磷酸盐处理技术在汽包锅炉炉水调节中的应用与发展

磷酸盐处理工艺一直是汽包锅炉炉水水质的主导调节方式 ,在高参数、大容量机组为代表的现代电力工业中 ,磷酸盐处理仍是汽包锅炉首先的炉水处理方式 .文章回顾、评述了磷酸盐处理技术的发展历程 ,讨论了其技术特点、控制参数。

焦磷酸测序技术及其应用进展

焦磷酸测序技术是一种新的依靠生物发光进行DNA序列分析的技术。在DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和双磷酸酶的协同作用下,将引物上每一个dNTP聚合与一次荧光信号释放偶联起来,通过检测荧光的释放和强度,达到实时测定DNA序列的目的。此技术不需要荧光标记的引物或核酸探针,也无需进行电泳,具有分析结果快速、准确、灵敏度高和自动化的特点。在遗传多态性分析、重要微生物的鉴定与分型研究、克隆检测和等位基因频率分析等方面具有广泛的应用。

焦磷酸测序技术对阿司匹林个体化用药相关SNP位点分型

阿司匹林的抗血小板作用在临床存在显著的个体差异,而rs5918、rs12041331和rs730012 3个单核苷酸多态性位点与阿司匹林的药效和不良反应有着密切的联系。本文基于PCR结合焦磷酸测序技术,建立了阿司匹林相关SNP位点的基因分型方法。自主设计扩增引物和测序引物;优化PCR扩增条件,使3个位点能够在相同的条件下扩增并通过梯度稀释基因组DNA检测方法的灵敏度;最后,分别基于本文建立的新方法和Sanger测序技术对20例临床样本进行3个位点的基因分型,验证该方法的准确性。结果显示,本文成功建立了阿司匹林个体化用药相关SNP位点的基因分型方法,检测下限低至0.4 ng基因组DNA,用两种方法对20例临床样本进行3个位点的基因分型,结果完全一致,说明该方法有较高的准确性。

基于焦磷酸测序分析技术的金银花掺伪鉴别方法研究

金银花是大宗药材,市场掺伪时有发生,但目前的检测方法不能满足快速准确的检测需求,因此亟需建立快精准的检测方法。为了确立高精准度和大通量的金银花掺伪鉴别检测方法,结合SNP标记及焦磷酸测序分型分析技术,对金银花及其常见伪品差异性SNP位点进行PCR扩增及焦磷酸测序分析。结果发现,运用焦磷酸测序技术对金银花和山银花的差异性SNP位点进行定量分析,能够对金银花真伪及掺伪量进行鉴定。该方法兼有PCR技术的灵敏性和焦磷酸测序技术的准确性,具有重复性好、自动化程度较高、易操作的特点,能在3小时之内完成金银花成分掺伪量的检测工作,并得出量化结果。

应用焦磷酸测序技术快速检测食品中沙门氏菌

设计出适合特异性扩增引物和测序引物,采取焦磷酸测序技术对沙门氏菌invA毒力靶基因特异性序列分析,同时对焦磷酸测序反应条件进行优化,建立1种利用焦磷酸测序技术检测和鉴定沙门氏菌的方法。结果显示,此方法以传统国标法的前增菌为前提,可省去后期生化验证的繁琐过程,将检测时间由常规检测的4～7d缩短至20h,并且其准确性与传统生化验证完全一致。所建立的针对沙门氏菌的焦磷酸测序检测方法具有高效性、精准及操作简便等特点,适用于食品中沙门氏菌的快速检测。

磷酸锰薄膜技术对旋转式空调压缩机曲轴影响研究

空调已经成为人们生活中不可缺少的电器,空调除了需要具备节能、低噪,使用舒适等特点外,作为一种耐用消费品,其在寿命周期内的高可靠性备受关注。这很大程度上依赖于空调器的心脏——压缩机来实现,空调的性能、可靠性以及长达10年以上的运行寿命,必须由压缩机来保证。因此,如何提高作为主机——压缩机的高效率、低噪音、高可靠性的压缩机是所有压缩机生产不懈努力的方向。本文采用磷酸锰薄膜技术对旋转式空调压缩机曲轴进行处理,研究该处理技术对曲轴耐磨性的影响。

湿法磷酸净化技术及发展

本次研究通过针对我国近些年湿法磷酸净化技术的常用方法及优缺点进行综述,并且以萃取技术的研究进展着重探讨,认为我国新研发运用的溶剂萃取技术,利用率较高且具备自主知识产权,具有极为广阔的应用前景。

多源数据融合的技术生命周期测度

科学有效地测度技术生命周期、及时把握全球竞争态势、抓紧布局未来产业是经济社会高质量发展的关键,也是面对新型国际关系、掌握技术发展主动权的战略举措。鉴于既有技术生命周期测度方面的研究数据来源单一、设计指标不够全面,根据“基础研究—应用研究—技术推广—产业化—技术改进”这一技术发展主线,考虑除论文、专利信息外的科研项目信息、企业数量、融资情况等多源信息数据,构建包含基础研究、技术创新、科技布局、产业规模与技术改进5个维度的技术生命周期多指标测度体系,采用熵权法赋权并结合灰色关联分析法构建技术生命周期综合指数计算模型,以成熟的磷酸铁锂技术作为参考技术,绘制其生命周期演化曲线,并与常用于技术成长阶段判定的S曲线对比,考察该测度体系的可行性。结果表明,根据磷酸铁锂技术生命周期综合发展指数计算模型绘制出的磷酸铁锂技术生命周期演化曲线,可判定该技术在1997—1999年为潜伏期、1999—2007年为萌芽期、2007—2014年为成长期、2014—2022年为成熟期、2022年以后为衰退期;进一步对比分析表明,技术生命周期多指标测度体系不仅能够更加全方位动态展现技术综合发展水平、准确评估技术发展态势,更有利于在技术创新没有造成市场显著变化时实现预警决策,为企业赢得早期研发布局的时机。

电动汽车磷酸铁锂动力电池技术的发展

电动汽车属于新时期的科技产物,其属于电机驱动汽车,即依靠单独的蓄电池供电的纯电动汽车,具有很高的环保性和节能性。随着电动汽车产业的不断发展,各种新型的蓄电池供电技术也开始应运而生。本文主要针对磷酸铁铿动力电池技术在电动汽车发展中的重要作用,进行着重分析,并结合其存在的关键技术问题,提出一些可行性强的完善措施,以便为促进磷酸铁铿电池技术的长期发展提供有效参考。