牛支原体核糖磷酸焦磷酸激酶的黏附功能分析

目的分析牛支原体(Mycoplasma bovis)核糖磷酸焦磷酸激酶(ribose-phosphate pyrophosphokinase, prsA)对宿主细胞的黏附功能。方法参照牛支原体HB0801株prsA基因序列设计特异性引物,PCR扩增获得牛支原体武威分离株prsA基因,构建原核表达载体pET-prsA,转化入大肠埃希菌Rosetta(DE3)感受态细胞后加入IPTG诱导表达His-prsA。表达产物纯化后免疫新西兰兔,制备抗血清,应用Western blot和间接ELISA分析prsA蛋白在牛支原体细胞中的分布;通过抗体依赖补体杀菌试验分析多抗血清介导的补体杀支原体活性;利用黏附及黏附抑制试验分析prsA蛋白的宿主细胞黏附功能。结果 SDS-PAGE显示,pET-prsA转染DE3细胞表达的重组蛋白His-prsA分子质量单位约36 ku,且主要以可溶性形式表达;间接ELISA检测重组His-prsA免疫兔血清抗体效价为1∶24 000;Western blot和ELISA结果表明,prsA蛋白存在于牛支原体细胞膜和细胞浆,且细胞浆中较多;抗体依赖的补体杀菌试验结果表明,prsA抗血清具有杀牛支原体活性;黏附及黏附抑制试验证实prsA蛋白与牛支原体黏附宿主细胞有关。结论牛支原体prsA蛋白具有良好的免疫原性和宿主细胞黏附功能,为深入研究牛支原体的致病机制奠定了基础。