白藜芦醇通过激活去乙酰化酶1/腺苷一磷酸激活的蛋白激酶信号通路影响牛脂肪细胞凋亡

本试验旨在研究植物提取物白藜芦醇(RES)对牛皮下脂肪细胞凋亡率以及去乙酰化酶1(SIRT1)/腺苷一磷酸激活的蛋白激酶(AMPK)信号通路关键因子的mRNA和蛋白质表达量的影响。选取18月龄鲁西黄牛的皮下前体脂肪细胞,在细胞分化的第0天,更换为RES浓度分别为0(对照)、100、200和400μmol/L的培养液处理48 h,每组设3个重复。应用Hoechst33342染色检测细胞凋亡的形态学变化,流式细胞分析仪检测细胞凋亡率,荧光定量PCR(q PCR)和免疫印迹试验(Western-blot)分别检测SIRT1/AMPK信号通路上的关键因子SIRT1、A MPKα、叉头转录因子1(Fox O1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA和蛋白质表达量,并利用油红O染色鉴定脂肪细胞。结果表明,与对照组相比:不同浓度RES处理后的牛皮下脂肪细胞凋亡率均极显著增高(P<0.01);不同浓度RES处理后的SIRT1、AMPKα、caspase-3、Bax的mRNA表达量均显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01),Bcl-2的mRNA表达量极显著降低(P<0.01);不同浓度RES处理后的SIRT1、AMPKα、caspase-3的蛋白质表达量均显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01);200和400μmol/L RES处理后,Fox O1的mRNA和蛋白质表达量显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01),Bax的蛋白质表达量极显著提高(P<0.01),Bcl-2的蛋白质表达量极显著降低(P<0.01)。100μmol/L RES处理后时,Fox O1的mRNA和蛋白质表达量以及Bcl-2、Bax的蛋白质表达量均与对照组差异不显著(P>0.05)。由此可见,RES通过激活SIRT1/AM PK信号通路,同时激活通路下游的Fox O1,促进了牛皮下脂肪细胞的凋亡,为通过营养调控技术降低牛皮下脂肪沉积提供了一定的理论基础。

单磷酸腺苷激活的蛋白激酶能量代谢通路对心肌肥厚形成的作用

多种分子机制可以导致心肌肥厚,其中能量代谢紊乱是重要的分子机制之一,介导这一机制的关键是单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)能量代谢通路。近年来发现与心肌能量代谢密切相关的过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)通路,介导炎症与纤维化的核转录因子(NF)-κB通路以及神经体液调节因子相关P13K/AKT/GSK3β信号通路都和单磷酸腺苷激活的蛋白激酶密不可分。

矢车菊素-3-葡萄糖苷通过AMPK抑制成熟脂肪细胞脂蛋白脂酶活性

通过矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-g)干预成熟脂肪细胞,研究Cy-3-g对细胞脂蛋白脂酶(LPL)活性的影响及其作用机制。结果表明:Cy-3-g通过激活一磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)抑制成熟脂肪细胞的LPL活性,提示Cy-3-g具有潜在的调节机体脂代谢作用,与含Cy-3-g的花色苷提取物的肥胖抑制作用密切相关。

PPARγ在AMPK激活调节心肌肥厚中的作用

目的：探讨过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）γ是否参与单磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMPK）激活对心肌肥厚调节。方法：采用[3H]亮氯酸掺入、RT-PCR和Western blot等实验方法，观察AMPK激活与抑制时对笨肾上腺素（PE）诱导的培养新生SD大鼠心肌细胞肥大的影响及PPARγ的mRNA与蛋白表述的变化。结果：AMPK激活或抑制可抑制或增加PE诱导心肌细胞蛋白合成，同时伴随有PPARγ mRNA及蛋白表达的增减。结论：PPARγ参与了AMPK激活对心肌肥厚的调节。

谷氨酰胺对肉鸭免疫应激的调节作用

为了研究谷氨酰胺(Gln)对肉鸭免疫应激的调节作用,将240只1日龄四点花肉鸭随机分为4组,每组5个重复,每个重复又模拟三种免疫应激。4组分别饲喂添加0、0.4%、0.6%和0.8%Gln的试验日粮,肉鸭10日龄注射禽流感疫苗,42日龄时测定每个处理的日增重、采食量和料肉比,并在适当的时间每个重复选取2只肉鸭采血测定禽流感疫苗抗体效价、血清中溶菌酶活性和免疫球蛋白G(Ig M)含量。结果表明:不同免疫应激显著影响肉鸭日增重和采食量(P<0.05)、溶菌酶活、Ig M和禽流感疫苗抗体效价。说明日粮添加Gln可改善机体的免疫功能,缓解免疫应激对肉鸭生长性能和免疫功能的影响。

蛋白磷酸酶-1对凋亡酶-3水解的PAK2活性的负调控机制

p21激活的蛋白激酶2(PAK2)可以通过与小G蛋白Cdc42和Rac结合而激活,也可以通过凋亡酶-3(caspase-3)的水解作用而激活.PAK2的这2种激活方式都需要其402位苏氨酸残基(Thr-402)发生自磷酸化.对于PAK2激活的研究已经有近10年的时间,但PAK2活性的负调控机制仍然不清楚.本文采用酶活性不可逆改变动力学的方法研究了蛋白磷酸酶1催化亚基(PP1α)对凋亡酶-3(caspase-3)水解的PAK2活性的调控机制.根据在PP1α存在下PAK2的底物反应动力学方程,我们确定了游离酶和酶-底物复合物的微观失活动力学常数.结果表明:(ⅰ)PP1α可以直接使PAK2活化环上的Thr-402去磷酸化,从而下调PAK2的激酶活力;(ⅱ)外源蛋白或多肽底物结合在PAK2活性位点上可以降低PAK2自激活和失活的速度.本文所建立的方法不仅可以用于研究酶活性调节的修饰反应动力学,还可以研究底物对修饰反应的影响,为研究蛋白激酶和磷酸酶的作用机理奠定了理论基础.

氯化锰致大鼠神经毒性机制的研究

为研究不同剂量的氯化锰对大鼠脑纹状体谷氨酰胺合成酶(GS)、磷酸激活的谷氨酰胺酶(PAG)和大脑皮质Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活力的影响,将32只SD大鼠,按体重随机分成4组。第1组为对照组,皮下注射生理盐水,第2～4组为不同剂量染锰组,分别皮下注射50、100和200μmol/kg的氯化锰溶液,每周注射5次,连续染毒4周。观察大鼠体重变化和一般表现。最后一次注射后24h处死大鼠,切取纹状体,测定GS和PAG的活力;切取大脑皮质,测定Ca2+-ATPase和Na+-K+-ATPase的活力。结果显示,随着染锰剂量的增加,脑纹状体GS活力降低,PAG活力升高,大脑皮质Ca2+-ATPase和Na+-K+-ATPase活力降低。与对照组比较,在50、100和200μmol/kg染锰组GS和Na+-K+-ATPase活力逐渐下降,差异有统计学意义;在100和200μmol/kg染锰组PAG的活力逐渐升高,Ca2+-ATPase活力逐渐下降,且差异有统计学意义。说明不同剂量氯化锰可引起大鼠脑纹状体GS活力降低,PAG活力升高;大脑皮质Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活力降低,由此可引起谷氨酸代谢失衡,产生神经毒性。

大鼠三叉神经本体觉中枢通路中VGluT1样阳性胞体和终末的生后发育、分布以及与PAG样阳性神经元的联系

本研究应用免疫组织化学和免疫荧光组织化学技术,在光镜和激光共聚焦显微镜下观察了大鼠脑干内三叉神经本体觉中枢通路中I型囊泡膜谷氨酸转运体(VGluT1)样阳性神经元胞体和纤维终末的生后发育、表达和分布以及与磷酸激活的谷氨酰胺酶(PAG)样阳性神经元之间的联系。结果显示:(1)新生(P0)大鼠所有的三叉神经中脑核(Vme)神经元的胞体内均可观察到VGluT1的表达,3d(P3)时,VGluT1的表达最强,之后至P11,VGluT1的表达随着发育逐渐下降。P11后,在Vme神经元的胞体内未检测到VGluT1样免疫阳性产物,但在阴性胞体周围可观察到VGluT1样免疫阳性终末分布;(2)生后0d,三叉神经脊束核吻侧亚核背内侧部及其邻接的外侧网状结构(Vodm-LRF)、三叉神经感觉主核背内侧部(Vpdm)和三叉上核尾外侧部(Vsup-CL)内已可观察到VGluT1样阳性纤维终末分布。生后7d,VGluT1样阳性纤维终末开始在三叉神经运动核腹侧区(AVM)、上橄榄核背侧区(ADO)出现;(3)激光共聚焦显微镜下,于生后12d在Vme、Vodm和Vpdm内和生后21d在Vsup-CL内分别观察到一些VGluT1样阳性终末与PAG样阳性神经元的胞体或树突形成密切接触。以上结果提示:VGluT1可能与生后发育过程中大鼠脑干内三叉神经本体感觉中枢通路的兴奋性联系的建立密切相关。

二甲双胍抑制心功能恶化的机制研究

目的探讨二甲双胍对心力衰竭(心衰)大鼠心功能的影响并对其可能的作用机制进行分析。方法利用阿霉素多次间断腹腔给药方法建立心力衰竭模型,分为二甲双胍治疗组15只、5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷酸(5-amino-imidazole-4-carboxamide ribose nucleotides,AICAR)治疗组15只、生理盐水对照组15只,并设正常组10只,4周后分别观察左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、血流动力学指标、血浆B-型脑钠肽值(B-type natriuretic peptide,BNP),并留取心肌组织进行免疫组织化学分析。结果与心衰盐水对照组比较,二甲双胍灌胃组、AICAR注射组4周后LVEF、左室收缩末压(left ventricular systolicpressure,LVSP)和左室内压最大变化速率(left ventricular maximum velocity of ascending and descending inintraventricular pressure,±dp/dtmax)均显著提高,同时左室舒张末压(left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP)显著降低(P<0.05)。与正常对照组比较,所有的阿霉素腹腔注射大鼠血BNP含量明显升高(P<0.05)。心衰大鼠二甲双胍灌胃及AICAR注射4周后,与生理盐水对照组比较血BNP浓度明显降低(P<0.05)。心室肌细胞免疫组织化学结果示活化的腺苷激活的磷酸化酶-2(phosphorylation of AMP-activated protein kinase,P-AMPKα2)及内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)在二甲双胍及AICAR治疗组明显高表达(P<0.05),而二甲双胍和AICAR组之间差异无统计学意义。结论二甲双胍可明显抑制心衰大鼠心功能的恶化,这种作用可能和激活腺苷激活的磷酸化酶(AMPK)及后续的eNOS有关。

冠状动脉粥样硬化与AMPK、SIRT1基因表达的关系初步研究

目的:通过检测冠状动脉粥样硬化患者外周血单个核细胞(PBMC)中单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)以及沉默信息调节因子2相关酶I(SIRT1)的基因表达情况,初步探讨AMPK和SIRT1基因表达与冠状动脉粥样硬化形成以及调控血浆中一氧化氮(NO)水平、血脂、血糖代谢的可能机制。方法:利用普通PCR、琼脂糖凝胶电泳、实时荧光定量PCR及SPSS分析软件检测冠心病者和正常对照组外周血单个核细胞(PBMC)中AMPK和SIRT1的基因表达区别,以及它们与血脂(TC、TG、LDL-c、HDL-c)、空腹血糖(FBG)、一氧化氮(NO)含量的相关性。结果:冠心病组PBMC中AMPK和SIRT1基因表达以及血浆中NO含量均明显低于对照组,差异具有统计学意义(P均<0.05)。AMPK和SIRT1表达均与TC、TG、LDL-c、FBG呈负相关,与NO含量及HDL-c呈正相关(P均<0.05)。结论:冠心病患者PBMC中AMPK和SIRT1基因表达下降可能与冠心病的发病存在相关性,对调控血脂、血糖及NO生成释放中可能起到一定作用。

参附强心合剂对心衰大鼠心肌能量代谢AMPK-PGC-1α通路的影响

目的探讨参附强心合剂对心衰大鼠心肌能量代谢单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)-过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)通路的调控及其作用机制。方法采用腹主动脉缩窄法制作大鼠心衰模型,经4周造模成功后将造模组大鼠随机分为:模型组,参附强心合剂高、中、低剂量组,曲美他嗪组,予药物溶液灌胃4周后,取腹主动脉血及左心室组织,用ELISA法测血清中血清B型脑尿钠肽(BNP)、乳酸脱氢酶(LDH)、游离脂肪酸(FFA)含量,Western blot法对心室组织中AMPK、p-AMPK、PGC-1α进行半定量分析。结果 (1)各中药组血清BNP、LDH、FFA较模型组显著降低(P<0.05)。其中,中药高剂量组BNP、FFA水平与曲美他嗪组无显著差异[(265.74±19.89)ng/mL比(240.62±21.40)ng/mL,(482.64±23.89)ng/mL比(463.09±25.95)ng/mL(P>0.05)];中药高、中剂量组LDH水平与曲美他嗪组相当(295.25±29.34)ng/mL、(317.83±25.99)ng/mL比(283.09±31.41)ng/mL(P>0.05);(2)各组大鼠心肌组织中AMPK蛋白表达水平未见显著差异(P>0.05);中药高剂量组p-AMPK蛋白表达与曲美他嗪组均明显增加(P<0.01),两者之间未见明显差异[(1.128±0.085)ng/mL比(1.180±0.208)ng/mL(P>0.05)];各用药组PGC-1α蛋白表达均明显增加(P<0.05),但中药各剂量组PGC-1α蛋白表达与曲美他嗪组之间无显著差异(P>0.05)。结论参附强心合剂可以降低心衰大鼠的血清BNP、FFA、LDH水平从而减轻心衰。参附强心合剂可能通过激活AMPK-PGC-1α信号通路,提高p-AMPK、PGC-1α的表达以调节脂肪酸氧化代谢及葡萄糖转运,从而改善心衰大鼠心肌能量代谢,从而起到治疗心衰的作用。

AMPK/PGC-1α通路与运动诱导的骨骼肌线粒体生物合成

骨骼肌运动适应的重要表现之一是线粒体的含量增加和构成改变,即"线粒体生物合成"。过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子是调节线粒体生物合成的关键性信号分子,在缺血、缺氧、低温、收缩及运动等刺激下,其表达增加激活包括核呼吸因子1和2及线粒体转录因子A在内的一组转录因子,启动线粒体DNA复制和转录而诱导线粒体生物合成。5′-一磷酸腺苷激活的蛋白激酶能通过一氧化氮、肌细胞增强因子-2、P38MAPK等靶点刺激PGC-1αmRNA和蛋白表达增加,并直接或间接作用于核呼吸因子、线粒体转录因子A等转录因子,从而在运动诱导的骨骼肌线粒体生物合成中发挥重要作用。

运动诱导骨骼肌线粒体生成中沉默信息调节因子1的作用

背景:沉默信息调节因子 1 是新近受到体育科学领域关注的能量代谢调节因子,在运动骨骼肌线粒体生成中与其他信号分子一起发挥作用。目的:综述沉默信息调节因子 1 在运动诱导骨骼肌线粒体生物合成中的作用及机制。方法:应用计算机检索 PubMed 和 Highwire 数据库 2000 年 1 月至 2013 年 1 月有关运动、沉默信息调节因子 1、骨骼肌线粒体生物合成的文献,检索词为 SIRT1,AMPK,PGC-1α,mitochondrial biogenesis,skeletalmuscle, exercise,限定文章语言为 English。对资料进行初审,选取沉默信息调节因子 1 与运动诱导骨骼肌线粒体生物合成有关的文献,排除重复研究。结果与结论:共收集相关文献 165 篇,排除重复研究,纳入 62 篇。沉默信息调节因子 1 作为一种 NAD+依赖的去乙酰化酶,在运动中被激活,通过上调过氧化物酶体增殖物激活受体辅激活因子表达而诱导骨骼肌线粒体生物合成,其分子机制涉及一磷酸腺苷激活的蛋白激酶、低氧诱导因子 2α等信号分子。但近年来的一些研究对沉默信息调节因子 1 在骨骼肌线粒体生物合成中的作用提出了质疑,认为其并非为运动诱导的骨骼肌线粒体生物合成所必需。沉默信息调节因子 1 在运动诱导的骨骼肌线粒体生物合成中发挥重要调控作用,但采用蛋白和活性等不同检测方法,在实验结果上可能会造成较大差异。

早期应用AICAR对缺氧缺血性脑病新生大鼠的保护作用

目的在新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)发病的不同时期应用单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)激活剂5-氨基咪唑-甲酰胺核苷酸转甲酰酶(AICAR),观察其保护作用,探讨其作用机制。方法新生大鼠160只,分为假手术组、模型对照组、AICAR30 min组、AICAR24 h组和AICAR72 h组,各32只。采用Cresyl violet染色法比较手术后不同时间点(30 min,24 h,72 h)给予AICAR(500 mg·kg-1)对脑组织保护作用的差异;采用Foot-faults法评估大鼠远期预后;蛋白质印迹法检测脑组织中P-AMPK及三磷酸腺苷(ATP)的表达变化。结果假手术组与模型对照组大脑存活面积比例分别为(100.0±0.1)%和(45.3±6.3)%(P<0.05);手术后30 min、24 h给予AICAR治疗均有不同程度的保护作用,且手术后30 min治疗效果优于24 h(P<0.05),手术后72 h给予AICAR没有发现明显的保护作用(P>0.05)。早期给予AICAR治疗后可增加P-AMPK活性至假手术组约3倍,ATP含量可升至接近假手术组水平(P<0.05)。结论 HIE发病早期补充AICAR可调控AMPK信号通路,增加ATP含量,保护受损的神经元。

宫颈癌组织中RACK1、IQGAP1表达及与患者临床病理特征和β-连环蛋白相关性

目的:分析宫颈癌组织中激活的白激酶C受体1(RACK1)、IQ序列三磷酸鸟苷酶激活蛋白(IQGAPl)表达及与临床病理特征和β-连环蛋白(β-catenin)的相关性。方法:收集2018年1月-2020年12月本院行宫颈癌手术治疗的患者106例临床资料,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫组化技术检测RACK1、IQGAP1、β-catenin mRNA和蛋白表达,分析宫颈癌组织中RACK1、IQGAP1表达及与临床病理特征和β-catenin的相关性。结果:宫颈癌组织中RACK1 mRNA的相对表达量(0.27±0.11)低于癌旁组织(0.75±0.19),IQGAP1 mRNA(0.65±0.18)、β-catenin mRNA(0.61±0.21)高于癌旁组织(0.22±0.13、0.32±0.17),RACK1蛋白阳性率(18.9%)低于癌旁组织(63.2%),IQGAP1(76.4%)、β-catenin(68.9%)蛋白阳性率高于癌旁组织(28.3%、31.1%)(均P<0.05)。RACK1在高分化、TNM分期为I期、无淋巴结转移的宫颈癌组织中阳性率高于中低分化、TNM分期为II-III期、有淋巴结转移患者的组织,IQGAP1在中低分化、TNM分期为II-III期的宫颈癌组织中阳性率高于高分化、TNM分期为I期组织(均P<0.05)。宫颈癌中RACK1表达与β-catenin呈负相关(r=-0.405,P<0.05),IQGAP1表达与β-catenin呈显著正相关(r=0.346,P<0.05)。结论:宫颈癌组织RACK1低表达,IQGAP1高表达;RACK1蛋白表达异常可能与患者宫颈癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移及β-catenin表达有关,IQGAP1蛋白表达异常可能与分化程度、TNM分期及β-catenin表达有关。

AMPK、PPARs在2型糖尿病中的作用机制及药物研究

2型糖尿病(T2DM)在全球范围内广泛流行,其主要特征为胰岛素抵抗和胰腺β细胞分泌的胰岛素减少,糖脂代谢发生紊乱,其发病原因是多因素的。单磷酸腺苷(adenosine monophosphate,AMP)激活的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)和过氧化物酶增殖物激活受体(peroxisome proliferater-activated receptors,PPARs)作为体内代谢过程的关键调节因子,对糖脂代谢平衡有着巨大贡献。本文着重综述两者在2型糖尿病发生发展中的作用机制,以及相应的药物对2型糖尿病的治疗效果和作用机制,以期为2型糖尿病药物的研发提供参考。

芪参益气汤对心力衰竭大鼠心肌细胞自由基代谢及Ca-ATPase的影响

目的:探讨芪参益气汤对阿霉素致心力衰竭大鼠心肌细胞自由基代谢及钙离子激活的三磷酸腺苷酶(Ca-ATPase)定位的影响。方法:选取SPF级健康雄性SD大鼠78只,随机分为对照组13只及造模组65只。造模组采用阿霉素腹腔注射建立心力衰竭模型,对照组予以等量生理盐水腹腔注射。将造模成功的大鼠随机分为模型组、芪参益气汤低、中、高浓度组及卡托普利组,每组12只,分别给予相应药物干预。检测比较各组大鼠血流动力学指标、血清心肌酶水平、心肌细胞自由基代谢相关指标、心肌细胞Ca-ATPase活性和定位。结果:芪参益气汤低、中、高浓度组及卡托普利组大鼠心输出量、左室内压最大上升速率、左室内压最大下降速率、心肌细胞超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平、心肌Ca-ATPase活性均高于模型组,且芪参益气汤低浓度组<芪参益气汤中浓度组<芪参益气汤高浓度组和卡托普利组,差异均有统计学意义(P<0.05)。芪参益气汤低、中、高浓度组及卡托普利组大鼠血清乳酸脱氢酶、谷草转氨酶、肌酸激酶水平、心肌细胞丙二醛水平均低于模型组,且芪参益气汤低浓度组>芪参益气汤中浓度组>芪参益气汤高浓度组和卡托普利组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:芪参益气汤能剂量依赖性地改善心力衰竭大鼠心脏收缩和舒张功能,减轻心肌损伤,其作用可能与降低氧自由基水平,提高Ca-ATPase活性,促进钙离子转运有关。

基于AMPK/SIRT1/PGC-1α通路探讨泽泻汤改善高脂饮食诱导小鼠认知障碍的作用机制

目的:探讨泽泻汤对高脂饮食小鼠认知功能及AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路的调控作用。方法:普通饮食C57BL/6J小鼠作为对照组,高脂模型小鼠随机分为模型组、泽泻汤组和辛伐他汀组,每组8只。对照组及模型组给予蒸馏水灌胃,给药组分别给予泽泻汤和辛伐他汀灌胃。干预后,通过葡萄糖耐量试验、胰岛素耐受试验以及血脂4项(TG、TC、LDL-c、HDL-c)评估各组小鼠血糖及血脂的变化情况;Morris水迷宫及新物体识别实验评估各组小鼠学习记忆能力;Nissl染色观察海马神经元情况;免疫荧光及RT-qPCR分别检测IBA1蛋白及促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS、COX2 mRNA相对表达水平;硫磺素S观察脑内淀粉样蛋白沉淀情况;Western Blot检测海马组织细胞凋亡、Aβ转运以及AMPK/SIRT1/PGC-1α通路相关蛋白表达水平。结果:与模型组比较,泽泻汤能改善高脂模型小鼠的葡萄糖耐受性和胰岛素敏感性(P<0.01,P<0.05),泽泻汤组小鼠体质量和血清中TG及LDL-c水平显著降低(P<0.01,P<0.05),血清中HDL-c水平显著升高(P<0.01),泽泻汤可以改善高脂饮食小鼠在Morris水迷宫的逃避潜伏期(P<0.05),减轻海马神经元凋亡;下调Aβ转运蛋白RAGE的表达(P<0.01),减少淀粉样蛋白的沉积;降低IBA1蛋白的表达,显著降低促炎因子COX2、iNOS、TNF-α、IL-1βmRNA相对表达水平(P<0.05,P<0.01);上调AMPK/SIRT1/PGC-1α通路相关蛋白表达(P<0.01)。结论:泽泻汤可能通过调控AMPK/SIRT1/PGC-1α通路,促进Aβ转运,缓解神经炎症,进而减轻高脂饮食小鼠诱导的海马神经元凋亡,改善其学习记忆能力。

艾司洛尔对缺氧复氧诱导的心肌细胞AMPK/GSK-3β通路及凋亡的影响

目的探讨艾司洛尔对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响,并初步研究其作用机制。方法体外培养大鼠心肌细胞(H9c2),并建立缺氧/复氧(I/R)损伤模型,随机分为对照组、H/R组和艾司洛尔低、中、高剂量(0.2、5.0、25.0μmol/L)组;噻唑蓝(MTT)法检测各组H9c2细胞存活率变化情况;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(AnnexinV-FITC/PI)法检测各组H9c2细胞凋亡情况;蛋白印迹分析法检测各组H9c2细胞Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬氨酸酶-3(Caspase-3)、Bcl-2蛋白及腺苷单磷酸激活的蛋白激酶(AMPK)、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)磷酸化水平;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测各组H9c2细胞AMPK、GSK-3βmRNA表达情况。结果与对照组相比,H/R组H9c2细胞存活率、Bcl-2蛋白表达水平、AMPK、GSK-3β蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与H/R组相比,艾司洛尔低、中、高剂量组H9c2细胞存活率、Bcl-2蛋白表达水平、AMPK、GSK-3β蛋白磷酸化水平依次升高(P<0.05),细胞凋亡率、H9c2细胞Bax、Caspase-3蛋白表达水平依次降低(P<0.05),均呈剂量依赖性。结论艾司洛尔能够抑制I/R诱导下心肌细胞的凋亡,可能与激活AMPK/GSK-3β磷酸化水平相关。