链球菌产磷酸甘油氧化酶的基本特性

介绍了经筛选的链球菌（StreptococcusSP．）产磷酸甘油氧化酶的分离纯化及部分性质的研究．发酵培养液经离心收集菌体，用超声波破碎，40％～75％硫酸铵沉淀法进行粗分级，再通过Q-Sepharose FF、Phenyl—Sepharose CL-4B、Chelating Sepharose FF和Sephacryl S-200HR层析纯化，纯化的磷酸甘油氧化酶在还原、非还原SDS-PAGE中显示单一条蛋白着色带并测得该酶的表观分子质量为67．6kDa，用HPLC测得其天然状态酶的表观分子质量为121kDa，据此推测该酶由两个分子质量相同的亚基组成．酶学动力学研究结果表明，该酶的最适温度为35℃，最适pH为8．0，最适条件下测得Km为3．22×10^-2mol／L．一些金属离子和某些有机物对酶活性的影响也进行了讨论．

产磷酸甘油氧化酶菌株的鉴定及其酶学性质研究

对筛选到的1株产磷酸甘油氧化酶的菌株进行了生理生化测定和16SrDNA序列分析,初步鉴定该菌株为粪肠球菌(Entero-coccus faecalis)。菌株经发酵培养,超声波破碎后,依次经过双水相萃取、阴离子交换层析和金属离子亲和层析,得到的磷酸甘油氧化酶活力达到54.3U/mg。还原和非还原SDS-PAGE显示该酶为单一条带并测得其表观分子质量为6.7×104Da,HPLC显示其天然酶的相对分子质量为1.2×105Da,据此推测该酶由2个分子质量相同的亚基组成。酶促反应动力学研究结果表明,该酶的最适pH值和酸碱稳定范围分别为8.0和5.0～7.5,最适温度为35℃,以磷酸甘油二钠为底物时,其Km值为3.2×10-2mol/L。将酶在-20℃保存12个月后仍具有60%的酶活力;4℃保存1个月,酶活力仍保持21%。

磷酸甘油氧化酶的菌种选育及发酵条件

利用含甘油的斜面培养基连续传代、诱导筛选的方法,从大量链球菌中选育到一株产磷酸甘油氧化酶(L-α-Glycerophosphate Oxidase EC 1.1.3.21)活性较高的粪链球菌(Streptococcus faecalis) GPO 605。培养及产酶最佳条件表明,最适培养基组成(％):酪蛋白胨1,酵母提取物1.5,甘油0.2,葡萄糖0.1,K_2HPO_40.5,无机盐0.25ml,pH7.5。最适培养条件:250ml三角瓶中装100ml培养基,30℃,200r/min旋转摇床振荡培养8h。在最适培养及产酶条件下,每毫升发酵液的酶活力提高10倍以上。

聚乙二醇/(NH_4)_2SO_4双水相体系分离纯化α-磷酸甘油氧化酶

铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus)在诱导剂甘油存在的条件下,经发酵培养可合成和分泌α-磷酸甘油氧化酶。该菌的无细胞抽提液可通过聚乙二醇(PEG)/(NH4)2SO4双水相萃取法有效进行α-磷酸甘油氧化酶的分离和纯化。研究结果表明,PEG分子大小、PEG浓度、pH、(NH4)2SO4浓度和无机盐及粗酶液的加入量是影响该萃取系统的主要因素,最终确定的最适双水相系统为16.5%(m/m)PEG2000、13.2%(m/m)(NH4)2SO4、pH7.5和30%(m/m)的粗酶加入量。无机盐NaCl的加入对萃取α-磷酸甘油氧化酶会产生负面影响,导致低的纯化倍数和活性回收率。此双水相萃取体系用于放大提取α-磷酸甘油氧化酶,其酶活性回收率可达89%、分配率为1.2、纯化倍数为7.0。

酿酒酵母孢子表面展示系统的构建及应用

旨在建立1种酿酒酵母孢子表面展示系统,并将其应用于稀有糖合成。表面展示系统是运用微生物自身功能把外源蛋白或多肽展示在细胞表面,文中用磷酸甘油氧化酶(GPO)来验证酿酒酵母孢子表面展示系统的可行性。将编码肺炎链球菌来源的GPO的基因glpo与信号肽序列(ss)融合后连接到载体p RS424-TEFpr上,将重组质粒p RS424-TEFpr-ss-glpo转化至酿酒酵母野生型及缺陷型菌株中并进行产孢,通过荧光观察、western blot分析以及酶活测定,表明酿酒酵母缺陷型孢子可以实现蛋白的表面展示。通过对GPO孢子表征,表明GPO孢子在pH为7.0、温度为30℃时活性最高,该孢子作为催化剂可以重复使用,当使用第3次时,活性可达最大活性的40%。最后将GPO孢子应用于"一锅四酶法"进行稀有糖L-果糖的合成,转化率为12%。

库尔勒地区65岁以上老年人血脂血糖血尿酸检测结果分析

随着社会的发展与进步,人们的生活水平及膳食结构发生了很大变化,高血脂,高血糖,高血尿酸在人群中明显增多,而此三项结果的增高又是动脉粥样硬化的三个主要危险因素,尤其对老年人,最终可导致冠心病,脑卒中,肾功能损伤等疾病,严重威胁着老年人身体健康,影响着老年人的生活质量。本文就对本地区65岁以上老年人在2014年1月～6月健康体检数据进行分析,观察65岁以上老年人的血脂血糖血尿酸相关情况,以科学数据进行分析来预防高血脂，高血糖，高血尿酸在老年人群中发生。

半自然驯化条件下黑线姬鼠冬夏两季产热的比较

为探讨小型哺乳动物适应于季节性环境的产热机制,本文测定了户外半自然条件下驯化的黑线姬鼠(Apodemus agrarius)冬、夏两季的体重以及肝和褐色脂肪组织(Brown adiposetissue,BAT)的细胞色素c氧化酶及BATα-磷酸甘油氧化酶活力等指标。结果显示黑线姬鼠冬季体重显著降低,BAT绝对重量、BAT和肝的线粒体蛋白含量及BAT和肝酶的活力冬季均显著高于夏季。冬季BAT细胞色素c氧化酶活力是夏季的9.5倍,肝脏细胞色素c氧化酶活力是夏季的5倍;冬季BAT的α-磷酸甘油氧化酶活力高达夏季的19倍。以上结果表明,在寒冷的冬季为保证存活,黑线姬鼠降低体重以减少绝对能量需求,并极大地增加BAT重量及肝和BAT细胞水平上的产热能力。