磷酸甘油酸变位酶-1在不同分型前列腺炎患者睾丸组织中的表达及临床意义

目的:观察磷酸甘油酸变位酶-1(PGAM1)在不同分型前列腺炎患者睾丸组织中的表达差异,并分析PGAM1表达检测的临床意义。方法:收集Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者和健康体检人群的睾丸组织标本,采用免疫组化检测PGAM1表达水平,分析不同分型前列腺炎患者PGAM1表达差异,并分析PGAM1表达与生精功能指标卵泡刺激素、黄体生成素、睾酮水平的关系。结果:Ⅰ型前列腺炎患者睾丸组织标本PGAM1表达与健康体检人群比较无显著差异性(P>0.05),Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者睾丸组织标本PGAM1表达与健康体检人群比较有显著差异性(P<0.05);Ⅰ型前列腺炎患者中PGAM1低表达者的卵泡刺激素、黄体生成素、T激素水平与健康体检人群比较无显著差异性(P>0.05),但Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者中PGAM1低表达者的卵泡刺激素、黄体生成素、睾酮水平与健康体检人群比较有显著差异性(P<0.05)。结论:除Ⅰ型前列腺炎患者外,Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者PGAM1呈异常的低表达,而PGAM1呈异常的低表达对患者睾丸组织生精功能产生影响,因此PGAM1检测在前列腺炎患者病情及生精功能障碍诊断中具有一定的临床价值。

磷酸甘油酸变位酶1在结直肠癌组织中的表达及其对患者预后和癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨结直肠癌(CRC)组织中磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)的表达及其与患者预后的关系,研究PGAM1对CRC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:选择2003年3月至2008年11月间在天津医科大学肿瘤医院手术切除的30例CRC患者的肿瘤组织标本及临床资料,采用免疫组织化学染色法检测CRC组织中PGAM1蛋白的表达,分析PGAM1表达与患者临床病理特征的关系,Kaplan-Meier生存分析法比较PGAM1高表达与低表达患者的OS、PFS来评价PGAM1表达与患者预后的关系。利用RNA干扰技术分别将si-PGAM1及si-NC质粒转染至HCT-116和SW480细胞,WB法检测转染细胞中PGAM1蛋白的表达水平,CCK-8、Transwell实验分别检测敲低PGAM1对CRC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:30例CRC组织中PGAM1阳性染色定位于CRC细胞的细胞质,其中33.3%(10/30例)呈高表达。虽然PGAM1高表达与CRC患者年龄、性别、组织学类型、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移及临床TNM分期无关(均P>0.05),但是PGAM1高表达与低表达患者相比其OS、PFS显著缩短。在CRC细胞中敲低PGAM1后,细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低(均P<0.05)。结论:CRC组织中PGAM1呈高表达,PGAM1高表达的患者预后较差;敲低PGAM1后细胞的增殖、迁移及侵袭能力均显著降低,提示PGAM1可能是CRC患者预后的生物标志物。

重组弓形虫磷酸甘油酸变位酶2联合IL-2、IFN-γ佐剂鼻内免疫小鼠诱导的小肠黏膜免疫应答

为探讨IL-2和IFN-γ的佐剂效应，本研究观察了重组弓形虫磷酸甘油酸变位酶2（rTgPGAM2）联合IL-2或IFN-γ滴鼻免疫小鼠诱导小肠黏膜IgA抗体分泌细胞（IgA—ASCs）和小肠冲洗液sIgA的免疫应答。将48只6周龄雌性BALB／c小鼠随机均分为6组，免疫组分别用500IUIL-2、1000UIFN-γ、30μgrTgPGAM2、30μgrTgPGAM2＋500IUIL-2或30μgrTgPGAM24-1000UIFN-1滴鼻免疫小鼠，抗原和佐剂溶于20μLPBS中，对照组用20μLPBS滴鼻。免疫3次，一免和二免间隔2周，二免后1周三免。三免后第14天，颈椎脱臼处死小鼠，免疫组化检测小鼠十二指肠、空肠和回肠黏膜中IgA-ASCs，计算阳性率，ELISA测定小肠冲洗液sIgA水平。结果表明，免疫组十二指肠、空肠和回肠黏膜中IgA—ASCs阳性率高于PBS组，其中rTgPGAM2、rTgPGAM2联合IL-2或IFN-γ佐剂组差异显著（P〈0．05或P〈0．01）。rTgPGAM2联合IL-2或IFN-γ佐剂组小肠冲洗液sIgA水平显著高于PBS组（P〈0．01）。rTgPGAM2、TgPGAM2＋IL-2和TgPGAM2＋IFN-γ滴鼻免疫小鼠均可有效诱导肠黏膜免疫应答，IL-2和IFN-γ可显著增强抗原的免疫效应，IL-2的佐剂效应优于IFN-γ。

磷酸甘油酸变位酶5调控细胞焦亡在肝脏缺血-再灌注损伤中的作用

目的研究磷酸甘油酸变位酶5(PGAM5)调控细胞焦亡在肝脏缺血-再灌注损伤(IRI)中的作用及分子机制。方法建立C57小鼠肝脏IRI模型,随机分别予再灌注6 h(6 h组)与12 h(12 h组),并设立假手术组(Sham组),每组10只。分析IRI对小鼠肝组织及血清学指标的影响;分析小鼠肝脏IRI过程中PGAM5、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1的表达情况。建立肝细胞IRI模型(IRI组),采用Caspase-1抑制剂Z-YVAD-FMK预处理后再建立肝细胞IRI模型(抑制剂组),将未处理的AML12细胞作为对照组,分析抑制Caspase-1活性对细胞焦亡的影响。采用脂质体3000将PGAM5小干扰核糖核酸(siRNA)(siRNA组)和siRNA阴性对照(siRNA-NC)(siRNA-NC组)转染至AML12细胞,再建立肝细胞IRI模型,将未处理的AML12细胞作为对照组,分析PGAM5调控细胞焦亡对肝细胞IRI的影响。结果 6 h组和12 h组小鼠肝组织中部分肝细胞水肿,肝窦区变窄,中央静脉充血,偶见点灶状坏死等,且12 h组较6 h组病变加重。与Sham组小鼠比较,6 h组和12 h组小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平升高,且12 h组高于6 h组;6 h组和12 h组肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β水平升高,12 h组低于6 h组;6 h组和12 h组小鼠肝组织IL-1β信使核糖核酸(mRNA)相对表达量升高,12 h组低于6 h组;6 h组和12 h组肝组织细胞凋亡率升高,12 h组低于6 h组(P<0.01~0.05)。与Sham组小鼠比较,6 h组和12 h组小鼠肝组织PGAM5 mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均升高,且12 h组高于6 h组(P<0.01~0.05);6 h组和12 h组肝组织PGAM5、Caspase-1蛋白表达增多。IRI组细胞NOD样受体蛋白3(NLRP3)、裂解Caspase(cleaved Caspase)-1及Gasdermin D(GSDMD)蛋白相对表达量较对照组升高,GSDMD荧光强度较对照组增强;抑制剂组NLRP3、cleaved Caspase-1及GSDMD蛋白相对表达量较IRI组下降,GSDMD荧光强度较IRI组减弱(P<0.01~0.05)。与对照组比较,siRNA-NC组细胞存活率下降,PGAM5、NLRP3、cleaved Caspase-1、GSDMD蛋白相对表达量升高(P<0.01~0.05);与siRNA-NC组比较,siRNA组细胞存活率升高,PGAM5、NLRP3、cleaved Caspase-1、GSDMD蛋白相对表达量下降(P<0.01~0.05)。结论 PGAM5可加重小鼠肝脏IRI,其机制可能为通过PGAM5/Caspase-1/GSDMD信号通路调控细胞焦亡,加速肝细胞损伤。

磷酸甘油酸变位酶1在脑胶质瘤中的表达及意义

目的:研究磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)在脑胶质瘤细胞中的表达情况,探讨PGAM1在胶质瘤恶性生长中的作用。方法:应用逆转录聚合酶链反应检测PGAM1在大鼠C6胶质瘤细胞和星形胶质细胞中的表达。应用免疫组织化学法检测人脑胶质瘤组织和瘤周脑组织中PGAM1蛋白的表达。结果:(1)PGAM1在C6胶质瘤细胞中表达显著高于星形胶质细胞(P<0.05)。(2)对照组15例瘤周脑组织中PGAM1阴性12例,阳性表达3例(20.00%)。观察组43例脑胶质瘤标本中PGAM1阳性表达29例,PGAM1阴性14例(67.44%)。PGAM1两组表达率比较差异有统计学意义(χ2=8.29,P<0.05)。结论:PGAM1可能与人脑胶质瘤的恶性生长有关。

非小细胞肺癌组织中磷酸甘油酸变位酶1表达及其与患者预后的关系

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)的表达及其与患者预后的关系。方法选择NSCLC患者206例,采用Real-time PCR技术检测其肿瘤组织中PGAM1 mRNA表达,其中28例患者配对检测其癌旁正常组织中PGAM1 mRNA表达。以ROC曲线中约登指数最高值(1.96)作为PGAM1 mRNA表达水平的分割点,>1.96为PGAM1 mRNA高表达,≤1.96为PGAM1 mRNA低表达。分析NSCLC组织中不同PGAM1 mRNA表达与患者临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier生存分析法计算不同PGAM1 mRNA表达者的总生存期(OS)、无病生存期(DFS),并采用Cox比例风险回归模型分析患者OS、DFS的影响因素。结果 28例NSCLC患者癌组织中PGAM1 mRNA表达明显高于其癌旁正常组织(P<0.05)。PGAM1 mRNA表达与NSCLC患者吸烟状况、组织学类型、病理学T分级有关(P均<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,PGAM1 mRNA高表达者OS、DFS中位时间均低于PGAM1mRNA低表达者(P均<0.01)。Cox比例风险回归模型分析显示,PGAM1 mRNA高表达是OS、DFS的独立影响因素(HR分别为1.730、1.698,P均<0.05)。结论 PGAM1 mRNA在NSCLC组织中表达升高,其高表达提示患者预后不良。

人磷酸甘油酸变位酶1在大肠杆菌中的表达及纯化

目的表达与纯化人磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1),为后续研究奠定基础。方法用SnapGene设计5′侧翼添加Nde I和Xho I位点的上、下游引物,PCR扩增cDNA,扩增产物与质粒pET-28a经Nde I和Xho I酶切后进行琼脂糖凝胶电泳分离、胶回收纯化。用DNA ligase连接cDNA和pET-28a,热激法将连接产物转化大肠杆菌DH5α,转化产物涂布于含卡那霉素(Kanamycin)的LB平板(LBK板),筛选抗性菌落。于含卡那霉素的LB培养基(LBK培养基)培养抗性菌落,抽提质粒,进行酶切和测序鉴定。将重组质粒同法转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选抗性菌落。将一个抗性菌落接种于LBK培养基,37℃250r/min培养至OD约0.8。用0.1mmol/L IPTG,16℃诱导PGAM1表达20h。收集细胞,超声破碎,离心取上清,用Ni-NTA试剂盒纯化PGAM1。超滤浓缩纯化的PGAM1,并用不含咪唑的缓冲液进行交换,降低PGAM1溶液中的咪唑浓度。BCA法测定PGAM1浓度,保存PGAM。结果重组质粒pET-28a-PGAM1构建成功,基因工程菌pET-28a-PGAM1-BL21(DE3)经IPTG诱导,PGAM1获得可溶性表达,产量达120mg/L。结论高纯度、高产的PGAM1为后续研究奠定了坚实基础。

磷酸甘油酸变位酶1在肿瘤发生及发展中的作用

磷酸甘油酸变位酶1(phosphoglycerate mutase 1,PGAM1)作为糖酵解通路的重要酶之一,在多种肿瘤组织中高表达,并且与肿瘤患者预后呈负相关。PGAM1催化糖酵解通路中3-磷酸甘油酸(3-phosphoglycerate,3-PG)转化生成2-磷酸甘油酸(2-phosphoglycerate,2-PG),促进葡萄糖代谢和能量生成。PGAM1通过调节3-PG与2-PG的转化平衡来影响其他代谢通路,参与细胞内生物大分子合成和维持氧化还原稳态,促进肿瘤细胞增殖及转移。PGAM1作为潜在的抗肿瘤靶标,其抑制剂的研发也成为抗肿瘤药物研究热点之一。该文对PGAM1结构、调控、在肿瘤发生及发展中的作用以及PGAM1抑制剂的最新研究进展作一综述。

三角褐指藻磷酸甘油酸变位酶基因可能侧翼序列的筛选、克隆以及序列测定

采用RT PCR的方法从酵母中成功地得到了磷酸甘油酸变位酶的cDNA基因 ,分别用32 P和地高辛 ddUTP标记以用作探针。以32 P标记的探针筛选三角褐指藻基因组文库 ,获得了 4kb的阳性DNA片段 ;进一步分析发现 ,该 4kb片段的真正阳性区域是位于片段端部的30 6bp的序列 ,因此认为该序列为三角褐指藻磷酸甘油酸变位酶基因的侧翼部分。克隆该30 6bp的DNA片段 ,并且测定其序列。结果表明 ,该 30 6bp的DNA片段包含两个同向重复序列 ,每个重复序列的大小为 1 1 6bp ,在每个重复序列中均含有GGTTCAATGT区域 ,这与一般常见的真核基因 5′端的CAATbox有相似之处。

刚地弓形虫磷酸甘油酸变位酶2基因片段克隆、表达及抗原性分析

目的克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)磷酸甘油酸变位酶2(TgPGAM2)基因片段,并分析其抗原性。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,逆转录合成cDNA。PCR扩增TgPGAM2基因。扩增产物经双酶切后连接入pET30a(+)载体,重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli)DH5α,阳性菌落经PCR和双酶切鉴定,并测序。将测序正确的重组质粒pET30a(+)-TgPGAM2转化至E.coli BL21并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。以兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白的抗原性。结果PCR扩增产物约为750 bp。菌落PCR、双酶切和测序结果显示,重组质粒pET30a(+)-TgPGAM2构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约30 000的可溶性重组蛋白。Western blotting分析证实其能被兔抗弓形虫血清识别。结论刚地弓形虫RH株TgPGAM2基因片段可在原核表达系统中表达,且该可溶性重组蛋白具有抗原性。

激活红细胞2,3-二磷酸甘油酸变位酶活性的中药组分筛选

目的:从中药组分中筛选2,3-二磷酸甘油酸(BPG)变位酶(BPGM)的激活剂,以提高红细胞的缺氧耐受性。方法:以红细胞胞浆蛋白BPGM为受体,常用中药成分数据库为配体,经过里宾斯基五规则类药性筛选后,采取刚性对接(LibDock)和半柔性对接(CDOCKER)进行虚拟筛选;提取红细胞胞浆蛋白,验证筛选出来的化合物对红细胞胞浆中BPGM亲和力的影响;最后,体外孵育红细胞,建立红细胞缺氧模型,并验证化合物对红细胞缺氧模型中BPGM活性的影响。结果:通过刚性对接和半柔性对接优选出与BPGM结合能前十的化合物。用这十种化合物孵育胞浆蛋白,与空白对照组比较,迷迭香酸甲酯各剂量组、二氢姜黄素大剂量组、八氢姜黄素中剂量组和阿魏酸松柏酯大剂量组可以进一步激活BPGM,从而显著增加常氧红细胞中的2,3-BPG含量(均P<0.05);四氢姜黄素小剂量组、橙黄胡椒酰胺大剂量和小剂量组、六氢姜黄素各剂量组和N-p-香豆酰-羟色胺中剂量组常氧红细胞2,3-BPG含量有增加的趋势(均P>0.05)。缺氧红细胞在加入中剂量迷迭香酸甲酯、中剂量八氢姜黄素、大剂量六氢姜黄素和中剂量N-p-香豆酰-羟色胺后,2,3-BPG含量显著增加(均P<0.05)。结论:迷迭香酸甲酯、八氢姜黄素、六氢姜黄素和N-p-香豆酰-羟色胺可以激活BPGM从而提高缺氧红细胞中2,3-BPG含量。

磷酸甘油酸变位酶活性测定方法建立

目的建立一种适用于生化自动分析仪动力学测定磷酸甘油酸变位酶(phosphoglyceromutase,PGAM)的方法并评价此方法的可靠性。为进一步探讨人体血清PGAM活性在急性心肌梗死和脑出血等疾病中的早期作用建立良好的方法基础。方法PGAM活性测定采用3-磷酸甘油酸为底物,经烯醇化酶等一系列偶联,以340nm波长在自动分析仪上测定,根据NADH吸光度变化可求出PGAM总活性。结果通过一系列参数的测定建立了良好的能适应生化自动分析仪的PGAM活性测定方法。结论全自动酶偶联法操作简单、测定快速、稳定性好,灵敏度和精确度高,抗干扰性强,可在全自动生化分析仪上应用。

磷酸甘油酸变位酶测定方法及临床意义

血清中磷酸甘油酸变住酶（Phosphoglycericacidmutase；PGAM，EC2．7．5．3）目前可测定总活力及同工酶，两者同时测定可增强其临床意义；总活力测定采用3-磷酸甘油酸基质，经烯醇化酶等一系列偶联，以340nm波长在自动分析仪上测定，同工酶测定采用化学抑制法或电泳法和ELISA法等，可求出总活力和B型同工酶比率（B／T）。PGAM测定在心脏疾病中与CK、AST、LDH是高度相关；肝脏疾病中与AST相关明显；恶性肿瘤中与LDH相关显著。PGAM在心梗发作后6～12h其总活力上升并达高峰，B／T下降；脑卒中在发病2h后总活力上升即可达峰值，随后下降，而B／T在正常范围内，这有助于心、脑疾病的鉴别诊断。

日本血吸虫磷酸甘油酸变位酶SjPGAM基因的克隆、表达及功能分析

磷酸甘油酸变位酶(Phosphoglyceratemutas)是糖酵解过程中的一种重要酶,主要催化3-磷酸甘油酸转化为2-磷酸甘油酸。利用PCR技术从日本血吸虫19d童虫中首次扩增到一个PGAM家族基因,序列分析表明该基因的完整编码框含753bp,编码250个氨基酸,理论分子量28.26kD,理论等电点7.01。同源性分析结果表明,该基因的氨基酸序列具有典型PGAM家族特征,推测为血吸虫的PGAM基因,命名为SjPGAM(GenBank Accession No.EU374631)。实时定量PCR分析显示该基因在14d和19d童虫中的表达量明显高于其他发育阶段,42d雄虫中的表达量高于雌虫。构建了该基因的原核重组表达质粒pET-28a(+)-PGAM,在大肠杆菌系统中成功获得了表达,重组蛋白以包涵体形式存在,Western blotting显示表达产物能被日本血吸虫成虫粗抗原免疫血清所识别。SjPGAM基因及其表达产物的获得,为探索PGAM基因家族在血吸虫能量代谢过程中碳水化合物转运、新陈代谢调节和生长发育提供了重要基础。

磷酸甘油酸变位酶5与坏死样凋亡

多年来人们认为细胞死亡方式主要包括坏死和凋亡。坏死是不受特定调控的被动死亡方式，表现为细胞器肿胀，细胞膜破裂，内容物渗出，有炎症反应[1]，而凋亡则是由细胞内胱天蛋白酶（caspase）调控的一种主动死亡方式，因caspase激活导致细胞内底物裂解，破坏胞膜囊泡形成凋亡小体，死亡过程中无内容物渗出，不引起炎症反应[2]。

成团泛菌依赖型磷酸甘油酸变位酶基因的克隆、序列分析及产氢中的差异表达

为研究高效产氢菌株成团泛菌(Pantoea agglomerans)BH-18中依赖型磷酸甘油酸变位酶(cofactor-dependent phosphoglycerate mutase,dPGM)与产氢之间的关系,本研究根据GenBank上已登录的肠杆菌中编码dPGM的基因序列设计一对引物,从细菌基因组DNA中克隆得到编码dPGM基因的完整开放阅读框,其长度为753 bp,编码250 aa。采用BLAST对其与NCBI GenBank中的核苷酸序列进行比较分析,结果表明该基因保守性相对较高,与肠杆菌科众多菌株中的dPGM基因相似性达100%。采用Bioedit和Mega4软件构建NJ系统进化树,结果表明成团泛菌BH-18的dPGM氨基酸序列与Enterobacter asburiae的dPGM聚为一类,而与成团泛菌属中其他菌株的该蛋白关系较远,dPGM的氨基酸序列在属内不保守。最后,根据已获得的基因序列设计引物,采用RT-PCR的方法分析了成团泛菌BH-18产氢过程中dPGM基因的转录情况,结果表明dPGM基因的转录与产氢呈正相关,依赖型磷酸甘油酸变位酶是产氢过程中的关键酶。

β2-微球蛋白、糖化血红蛋白、脂蛋白相关磷脂酶A2和磷酸葡萄糖变位酶联合检测在冠心病诊断中的价值

目的:探讨β2-微球蛋白(β2M)、糖化血红蛋白(HbA1c)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、磷酸葡萄糖变位酶(PGM)联合检测诊断冠心病(CHD)的价值。方法:选择135例CHD患者为CHD组,另选择本院同期健康体检者70例作为对照组,收集血液样本,放射免疫法检测β2M,免疫比浊法检测HbA1c,酶联免疫吸附法检测Lp-PLA2、PGM,采用Logistics回归分析CHD发生的相关因素,采用ROC分析诊断试验的灵敏度和特异度。结果:CHD组血清β2M、HbA1c、Lp-PLA2、PGM水平均显著高于对照组(P<0.05);Logistics回归分析显示,高水平β2M、HbA1c、Lp-PLA2、PGM是发生CHD的危险因素;β2M(临界值2.65μg·mL^-1)、HbA1c(临界值5.00%)、Lp-PLA2(临界值197.20 ng·mL^-1)、PGM(临界值34.52 U·L^-1)联合检测诊断CHD的AUC为0.949,准确度为95.12%,灵敏度为95.56%,特异度为94.29%,均明显高于单项检测。结论:CHD患者β2M、HbA1c、Lp-PLA2、PGM水平显著升高,联合检测诊断CHD的准确度和灵敏度更高。

利用大肠杆菌工程菌生产2,3-二磷酸甘油酸的研究

通过基因工程的方法,将表达人源BPGM(bisphosphoglycerate mutase二磷酸甘油酸变位酶,E.C.2.7.5.4.)的质粒转化入大肠杆菌内,并进行培养条件的优化摸索,通过向培养基内加入葡萄糖使大肠杆菌大量发酵生产2,3-BPG(2,3-bisphosphoglycerate,2,3-二磷酸甘油酸).结果表明,当培养基中葡萄糖质量浓度为10 g/L,诱导时间为4 h,大肠杆菌工程菌表达的2,3-BPG含量最高.如果诱导后加入终质量分数为0.5%的Tween 80可以有效促进2,3-BPG分泌到培养基中.诱导后4 h添加新培养基,补加葡萄糖可以使2,3-BPG的产量提高1倍,达到7.5 mmol/L.

CircOGDH通过调控miR-195-5p/PGAM5轴对氧糖剥夺/复糖复氧诱导的小胶质细胞损伤的影响

目的:探讨环状RNA OGDH(CircOGDH)通过调控miR-195-5p/磷酸甘油酸变位酶5(PGAM5)轴对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导的小胶质(MG)细胞损伤的影响。方法:将体外培养的HMC3细胞分为:NC组(正常培养)、OGD/R、si-NC组、si-CircOGDH组、mimic NC组、miR-195-5p mimic组、si-CircOGDH+inhibitor NC组、si-CircOGDH+miR-195-5p inhibitor组。除NC组外,剩余组在转染对应物质前构建OGD/R模型。qRT-PCR法测定CircOGDH、miR-195-5p、PGAM5 mRNA表达水平;测定各组细胞增殖、凋亡、活性氧(ROS)及炎性因子水平;Western blot检测Cleaved caspase-3、Bax表达;双荧光素酶基因实验检测CircOGDH与miR-195-5p、PGAM5与miR-195-5p之间的靶向关系。结果:与NC组对比,OGD/R组miR-195-5p表达、OD450值均降低,CircOGDH、PGAM5 mRNA表达、凋亡率、ROS及炎性因子水平、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达均升高(P<0.05);对比OGD/R组和si-NC组,si-CircOGDH组miR-195-5p表达、OD450值均升高,CircOGDH、PGAM5 mRNA表达、凋亡率、ROS及炎性因子水平、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达均降低(P<0.05);miR-195-5p mimic组分别与OGD/R组、mimic NC组对比,CircOGDH无显著差异(P>0.05),miR-195-5p表达、OD450值均升高,PGAM5 mRNA表达、凋亡率、ROS及炎性因子水平、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达均降低(P<0.05);与si-CircOGDH+inhibitor NC组对比,si-CircOGDH+miR-195-5p inhibitor组CircOGDH差异不显著(P>0.05),miR-195-5p表达、OD450值均降低,PGAM5 mRNA表达、凋亡率、ROS及炎性因子水平、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达均升高(P<0.05)。双荧光素酶基因实验显示miR-195-5p和CircOGDH、PGAM5均存在靶向关系。结论:沉默CircOGDH可促进OGD/R诱导的HMC3细胞增殖,抑制其炎症反应和凋亡,可能与调控miR-195-5p/PGAM5轴有关。

微生物磷酸葡萄糖变位酶的研究进展

从磷酸葡萄糖变位酶对碳代谢和细菌细胞形态的影响、细菌致病性、在细菌高效产氢中的作用、细菌脂多糖生物合成中的作用和维持酵母细胞内Ca2+平衡的作用等方面,介绍了微生物磷酸葡萄糖变位酶的研究进展。