西瓜噬酸菌磷酸盐特异性转运系统pstS基因功能分析

以西瓜噬酸菌(Acidovorax citrulli)Aac5菌株为研究对象,构建了pstS基因的缺失突变菌株和互补菌株,进行了致病能力及生物学表型的测定,并通过荧光定量PCR分析了pstS缺失对西瓜噬酸菌致病相关基因和磷酸盐特异性转运系统相关基因表达量的影响。此外,测定了西瓜噬酸菌的PstS蛋白在大肠杆菌中表达时对Pi的结合能力。结果表明,pstS的缺失,降低了西瓜噬酸菌的致病能力、运动能力、体外生长能力和生物膜形成能力,但不影响西瓜噬酸菌诱导烟草产生过敏性坏死反应的能力。pstS缺失后Ⅲ型分泌系统基因hrpG、鞭毛基因fliC、毒力相关基因virB、趋化性相关基因cheA、群体感应基因luxR的相对表达量显著上调,Ⅲ型分泌系统基因hrpX的相对表达量下调。磷酸盐特异性转运系统相关基因Aave_2627、Aave_2628、Aave_2629、Aave_2631和Aave_2632表达量均上调。经PstS对Pi的结合能力试验,证明在大肠杆菌中异源表达的PstS蛋白具有Pi结合能力。研究表明,pstS在西瓜噬酸菌致病能力和Pi转运吸收过程中的Pi结合环节起到重要作用。

采用Cre-loxP技术构建肝脏特异性Trappc11基因敲除小鼠模型

目的采用Cre-loxP系统构建肝脏组织特异性Trappc11基因敲除小鼠(Trappc11^(flox/flox)-Alb-Cre^(+/-))模型以探究脂肪肝的发病机制。方法用带有loxP位点的Trappc11纯合子小鼠(Trappc11^(flox/flox))和带有Alb-Cre的转基因小鼠(Alb-Cre^(+/-))进行杂交,对其子代进行基因型鉴定。筛选出Trappc11^(flox/+)-Alb-Cre^(+/-)小鼠,将其与Trappc11^(flox/flox)小鼠进一步杂交可获得Trappc11肝脏特异性敲除鼠。将3~4周龄的Trappc11^(flox/flox)-Alb-Cre^(+/-)、Trappc11^(flox/+)-Alb-^(Cre+/-)和Trappc11^(flox/flox)-Alb-^(Cre-/-)小鼠各3只,提取各组织脏器中的DNA,检测Trappc11的敲除效率和特异性。然后,在mRNA和蛋白质水平进一步验证。于第4周开始监测摄食量和体重等指标。结果我们成功繁育出肝脏特异性Trappc11基因敲除鼠,敲除心、脾、肺、肾、胰腺、肌肉、脂肪和脑组织中该基因表达未受影响,mRNA水平敲除效率达85%以上且TRAPPC11蛋白水平下降。该敲除鼠目前生长状态良好,饮食饮水正常,可用于后期繁殖与机制研究。结论已经构建成功的Trappc11^(flox/flox)-Alb-Cre^(+/-)鼠将为探索Trappc11在肝脏中的生理病理作用提供在体模型。

IpaB-IpgC相互作用决定了Ⅲ型分泌系统转运蛋白的结合功能域

毒力因子经Ⅲ型分泌系统转运入宿主细胞是肠道致病菌致病必需的。毒力因子分泌前，分子伴侣与毒力因子在胞质中特异性结合。侵袭质粒基因C（IpgC）是一个伴侣分子，能结合志贺菌的侵袭质粒抗原B（IpaB）和C（IpgC）。该研究报道了IpgC的晶体结构以及与IpaB相结合的晶体结构。

Protocells药物递送系统的模块化设计与应用

随着多种新型纳米载体的出现,药物递送已实现复杂的功能性递送形式。通常认为,理想的功能性纳米载体应具有以下特征:高水平的药物携带能力、抵抗免疫或排泄系统消除的体内长循环能力、与靶细胞或靶器官的高度特异性结合能力、控制药物释放或细胞内转运途径的能力以及低免疫原性和毒性等。

基因工程技术在重金属废水处理中的应用

综述了近年来国内外在利用基因工程技术治理重金属废水方面的研究进展,重点阐述了金属结合蛋白或金属结合肽以及特异性金属转运系统在基因工程菌富集重金属离子过程中的作用,并对基因工程技术在重金属废水治理领域的工业应用进行了展望。

生物物理学

运动对正常大鼠心肌JNK激活及MKP-1表达的影响；脉冲电磁场诱导人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的研究；小脑电刺激对大鼠脑缺血早期神经元线粒体的影响；急性脑缺血再灌注大鼠脑内IL-1β蛋白表达及针刺对其抑制作用的研究；早期干预对宫内缺氧、缺血大鼠脑功能及神经生长相关蛋白表达的影响；快速减压对小鼠血清细胞因子水平的影响；电磁脉冲对猴、犬及兔眼组织的辐射损伤；恒磁场对血管紧张素Ⅱ作用下人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的影响；低温生理盐水静脉灌注对局灶性脑缺血兔颅内压的影响；低强度He-Ne激光对软骨细胞增殖的影响；微波辐射对大鼠睾丸P450scc mRNA表达水平的影响；经颅磁刺激对颞叶癫痫大鼠海马代谢功能的影响；运动对胰岛素抵抗大鼠脂肪细胞葡萄糖转运蛋白-4的影响；盐酸多奈哌齐对低灌注大鼠中枢胆碱能系统的影响；脊髓受压时间与损伤程度的相关性研究；紫外线对系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞Fas抗原表达的影响；电针治疗对急性脑梗死患者血清神经元特异性烯醇化酶及神经功能缺损的影响。

溶磷菌Pseudomonas sp. wj1的Pst系统鉴定及pstS基因功能分析

为明确溶磷菌wj1的无机磷酸盐(Pi)的转运机制,对溶磷菌wj1磷酸盐特异性转运系统(Pst)进行生物信息学分析并与土壤中常见细菌的Pst系统进行比较,通过亚克隆构建溶磷菌wj1pstS蛋白的原核表达系统,利用钼酸铵分光光度法测定诱导表达的pstS蛋白对磷酸盐的结合率。结果表明:溶磷菌wj1的Pst系统是由pstS、pstC、pstA、pstB和phoU 5个基因组成,且依次分布于染色体上,这种结构与土壤中常见细菌的大多数菌属相似。溶磷菌wj1的pstS蛋白位于细胞质外,是一种具有信号肽的可溶性蛋白,其空间结构是由2个球状结构域组成。与绿脓假单胞菌的pstS蛋白结构相比,溶磷菌wj1pstS蛋白的活性中心位于两个球状结构域的裂缝中,其中有9个氨基酸参与Pi特异性结合,1个氨基酸通过疏水作用维持蛋白与Pi的结合。溶磷菌wj1pstS蛋白在大肠杆菌中过量表达后,使得重组大肠杆菌的无机磷酸盐吸收率显著提高,表明溶磷菌wj1pstS蛋白具有结合Pi的能力,但菌浓度不变时Pi浓度的增加会抑制溶磷菌wj1pstS蛋白对Pi的结合。