磷酸盐饥饿时番茄幼苗根部质膜蛋白组分的变化(英文)

对处于磷酸盐饥饿条件下的番茄幼苗根部质膜以及去除质膜的其他膜部分的蛋白质含量及组分的变化进行了检测。结果显示 ,磷酸盐饥饿第 7d时 ,受胁迫苗根部质膜及去除质膜的其他膜蛋白质含量与各自的对照相当。而SDS -PAGE结果表明 ,磷酸盐饥饿第 7d时受胁迫苗根部质膜蛋白质中出现 4条对照中所没有的新的多肽 (分子量分别为 34kD ,36kD ,4 6kD和 4 9kD)。该结果经浓度梯度电泳得到进一步的证实。本文推测在受胁迫苗根部质膜中出现的这些新的多肽可能是磷酸盐饥饿诱导蛋白并作为磷酸盐饥饿救援系统的组分。但在去除质膜的其他膜蛋白质中未看到胁迫处理与对照之间多肽表达的明显的差别。

圆红冬孢酵母磷酸盐饥饿诱导表达载体的构建

【目的】建立一种适用于圆红冬孢酵母代谢工程的磷酸盐饥饿诱导表达系统。【方法】对圆红冬孢酵母pho89基因5'侧翼序列进行生物信息学分析,设计相应引物,PCR扩增pho89基因启动子(p PHO89)和hsp70基因终止子(t HSP),利用RF克隆方法置换出发载体上的p PGK组成型启动子和t NOS终止子,以潮霉素磷酸转移酶基因hyg为报告基因,得到响应磷酸盐饥饿诱导的单表达盒载体p ZPK-p PHO89-hyg-t HSP,利用ATMT方法转化圆红冬孢酵母,通过转化子潮霉素抗性表型鉴定p PHO89和t HSP的启动子和终止子活性。在此基础上,构建了适合外源基因表达的双表达盒诱导表达载体p ZPK-HYG-p PHO89-MCS-t HSP,并利用该载体构建了苹果酸酶重组表达菌株。【结果】成功构建了响应磷酸盐饥饿的圆红冬孢酵母诱导性表达载体,该载体在圆红冬孢酵母中可表现出启动子和终止子活性。【结论】该启动子受磷酸盐浓度的严谨调节,响应度高,操作简单,无需额外诱导剂,经济便捷,为后续圆红冬孢酵母代谢工程研究提供了基本材料。