雷公藤甲素通过丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/糖原合成酶激酶-3β通路对MGC803细胞增殖、侵袭与迁移的影响

目的 探讨雷公藤甲素通过丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/糖原合成酶激酶-3β(AKT/GSK-3β)通路对MGC803细胞增殖、侵袭与迁移的影响。方法 体外培养MGC803细胞,确定雷公藤甲素的干预剂量和干预时间。将细胞分为阴性对照组(A组,不进行处理),阳性对照组(B组,10μmol/L顺铂),雷公藤甲素高、中、低剂量组(C组、D组、E组)。干预48 h,采用Transwell法检测细胞侵袭能力,采用划痕试验法检测迁移能力,采用免疫印迹(Western blot)法检测检测相关蛋白的表达。结果 随着雷公藤甲素浓度的增加,MGC803细胞增殖率降低(P <0.05);48 h时半数抑制浓度(IC50)最小,选择干预时间为48 h,C组、D组、E组的干预剂量分别为80,40,20 nmol/L。与B组比较,C组、D组、E组侵袭细胞数、细胞迁移距离及波形蛋白(vimentin),snail,p-AKT/AKT,p-GSK-3β/GSK-3β表达水平均显著升高(P <0.05),上皮钙黏素(E-cadherin)、β-联蛋白(β-catenin)表达水平均显著降低(P <0.05),且呈剂量依赖关系。结论 雷公藤甲素可通过抑制AKT/GSK-3β信号通路而抑制MGC803细胞增殖、侵袭与迁移。

磷脂酰肌醇3-激酶蛋白激酶B信号通路在胃癌及癌旁组织中的表达及与其病理特征的关系

目的分析磷脂酰肌醇3-激酶蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在胃癌及癌旁组织中的表达及与其病理特征的关系。方法选取2018年2月至2019年4月商丘市第一人民医院收治的54例胃癌患者,检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达水平,对比p-PI3K、p-Akt在胃癌及癌旁组织中的表达情况和不同病理特征胃癌组织中的阳性表达率。结果p-PI3K胃癌组织阳性表达率[81.48%(44/54)]高于癌旁组织[22.22%(12/54)](P<0.05)。p-Akt胃癌组织阳性表达率[75.93%(41/54)]高于癌旁组织[20.37%(11/54)](P<0.05)。低分化、有淋巴结转移的胃癌组织p-PI3K阳性表达率高于中高分化、无淋巴结转移的胃癌组织(均P<0.05);低分化、有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期的胃癌组织p-PI3K阳性表达率高于中高分化、无淋巴结转移、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期的胃癌组织(均P<0.05)。结论p-PI3K、p-Akt胃癌组织阳性表达率高,p-PI3K、p-Akt表达情况与分化程度、疾病分期、淋巴结转移密切相关,PI3K/Akt信号通路可能为临床药物治疗提供新靶点。

基于ERK1/2-GSK3β-NFκB信号通路探究芪黄苁蓉通便散贴敷对肾衰竭大鼠肠道菌群及肾功能的影响

目的 研究基于细胞外信号调节激酶(ERK)1/2-糖原合成酶激酶(GSK)3β-核因子(NF)κB信号通路探究芪黄苁蓉通便散贴敷对肾衰竭大鼠肠道菌群及肾功能的影响。方法 40只SD大鼠随机抽取10只作为健康组进行对照,剩余建立慢性肾衰竭(CRF)模型,建模成功后分为模型组、治疗组(芪黄苁蓉通便散贴)、药物对照组(复元四红散)各10只。运用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肾功能、氧化应激相关指标水平,苏木素-伊红(HE)、Masson染色观察肾组织病理形态学,采集粪便检测肠道细菌种类及数量,Western印迹检测ERK1/2-GSK3β-NFκB通路相关蛋白。结果 与健康组相比,模型组尿素氮、血肌酐、尿酸、丙二醛、肠球菌、肠杆菌、ERK1/2、p-ERK1/2、GSK3β、p-GSK3β、NFκBp65、p-NFκBp65、单核细胞趋化蛋白-1、细胞间黏附分子-1升高,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、双歧杆菌、乳酸杆菌水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,治疗组与药物对照组均有所改善,且以治疗组效果显著(P<0.05)。健康组肾组织结构正常;模型组肾小球变形,肾小管扩张,大量炎性细胞浸润;与模型组相比,治疗组与药物对照组均有所改善。Masson染色显示,健康组结构正常;模型组出现肾组织肾小管发生变性、萎缩、破坏及再生等病理改变,间质中单核与淋巴细胞浸润及胶原纤维表达最多;治疗组与药物对照组肾小管、间质的病理改变得到有效改善,蓝色胶原纤维沉积也呈下降趋势。结论 芪黄苁蓉通便散贴可能是通过抑制ERK1-2-GSK3β-NF-κB通路的激活,改善CRF大鼠肠道菌群及肾功能。

淫羊藿苷对阿尔茨海默病细胞模型糖原合成酶激酶-3β表达的影响及机制

目的研究淫羊藿苷（ICA）对阿尔茨海默病（AD）细胞模型糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）表达的影响及机制。方法以Aβ25~35孵育PC12细胞制备的AD细胞模型为研究对象,分为对照组、β-淀粉样蛋白（Aβ）组、ICA组、PI3K/Akt信号通路的经典抑制剂（LY）组、ICA＋LY组,Western印迹法检测各组的蛋白激酶B（Akt）、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β的表达。结果与对照组相比,Aβ组的p-Akt水平、p-GSK-3β水平明显下降（P〈0.01）。与Aβ组相比,ICA组的p-Akt水平、p-GSK-3β水平明显增高（P〈0.01）。与ICA组相比,ICA＋LY组p-Akt水平、p-GSK-3β水平明显下降（P〈0.01）。结论 ICA可能通过PI3K/Akt信号通路,上调p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达,发挥其保护作用。

糖原合成酶激酶-3与2型糖尿病

糖原合成酶激酶-3（GSK-3）是20世纪70年代发现的一种调节糖原代谢的丝氨酸／苏氨酸类蛋白激酶。后来研究者们还发现它有多种其他的功能，包括通过writ信号和hedgehog信号调节细胞增殖和凋亡，以及在蛋白合成和细胞迁移等诸多方面都扮演了相当重要的角色。组成胰岛素信号通路的相关分子在过去20多年的广泛研究中逐步得到证实。胰岛素通过与其受体结合后使受体胞内段的酪氨酸激酶活化，导致几种酪氨酸残基产生自磷酸化作用。

党参炔苷调节AKT/GSK-3β/snail信号通路对胃癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的探究党参炔苷(LOB)调节蛋白激酶B(AKT)/糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)/Snail信号通路对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法将GC细胞株SGC7901随机分为对照组(Control组)、低浓度LOB组(LOB-L组,10μmol/L LOB)、中浓度LOB组(LOB-M组,20μmol/L LOB)、高浓度LOB组(LOB-H组,40μmol/L LOB)和高浓度LOB+AKT激活剂SC79组(LOB-H+SC79组,40μmol/L LOB+20μmol/L SC79)。CCK-8法检测5组细胞增殖能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞侵袭能力。流式细胞术检测细胞凋亡。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法测定5组细胞AKT、GSK-3β、snail1 mRNA的表达。Western Blot检测5组细胞AKT/GSK-3β/snail信号通路和凋亡、EMT过程相关蛋白表达。结果与Control组比较,LOB-M组、LOB-H组SGC7901细胞OD450值(48 h、72 h)、细胞划痕愈合率、细胞侵袭数目、AKT、GSK-3β、snail1 mRNA表达和AKT、GSK-3β磷酸化水平、snail1、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著下降(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。SC79减弱了LOB对GC细胞增殖和EMT的抑制作用,抑制了细胞凋亡。结论LOB可能通过下调AKT/GSK-3β/snail信号通路抑制GC细胞增殖和EMT过程,促进细胞凋亡。

黄芩苷调节galectin-3/Akt/GSK-3β/Snail信号通路改善慢性肾脏病大鼠的肾纤维化机制

目的 探讨黄芩苷调节半乳糖凝集素3(galectin-3)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶(GSK-3β)/Snail信号通路对慢性肾脏病大鼠肾纤维化的影响。方法 采用腺嘌呤诱导制备慢性肾脏病大鼠肾纤维化模型,随机将健康雄性SD大鼠分为对照组、模型组、阳性药物(氯沙坦,9 mg/kg)组、低剂量黄芩苷组(20 mg/kg)、中剂量黄芩苷组(40 mg/kg)、高剂量黄芩苷组(80 mg/kg),模型组和对照组给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃。30 d后,检测6组大鼠血清尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平;Masson染色检测肾脏组织胶原分布面积;苏木精-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理变化;免疫组化学法检测肾脏组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原A1(CoLIA1)表达;蛋白印迹(Western blot)法分析肾脏组织中galectin-3、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β、Snail表达情况。结果 与对照组比较,模型组大鼠肾脏损伤严重并伴有黑色腺嘌呤代谢物结晶沉积,胶原纤维增多,肾脏组织胶原分布面积、α-SMA、CoLIA1、Scr、BUN、galectin-3、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β、Snail水平升高(P<0.05);与模型组比较,阳性药物组、黄芩苷低、中和高剂量组大鼠肾间质、肾小球和肾小管病变明显减轻,腺嘌呤代谢物结晶和纤维化组织减少,肾脏组织胶原分布面积、α-SMA、CoLIA1、Scr、BUN、galectin-3、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β、Snail水平降低(P<0.05)。结论 黄芩苷可能通过抑制galectin-3/Akt/GSK3β/Snail信号通路,进而改善慢性肾脏病大鼠肾纤维化。

环磷酸鸟苷/蛋白激酶G信号通路的激活与再灌注损伤挽救激酶信号通路的关系

目的:观察脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)激活环磷酸鸟苷/蛋白激酶G(cyclic guanosine monophosphate/protein kinase G,cGMP/PKG)信号通路的心肌保护作用是否与细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinase1/2,ERK1/2)、磷酸酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)蛋白激酶的激活有关。方法:将84只新西兰兔随机分为7组(n=12):假手术组;对照组;BNP组;BNP+LY294002组(LY294002为PI3K抑制剂);LY294002组;BNP+PD98059组(PD98059为ERK1/2抑制剂);PD98059组。除了假手术组只开胸不结扎冠状动脉外,其余6组均于结扎左回旋支45 min后恢复左回旋支血流,进行再灌注180 min。全程观察血流动力学及心电变化;实验终末,各组随机抽取6只兔子心脏做左室梗死面积测定,采用伊文思蓝和氯化三苯基四氮唑双染色法测定心肌梗死面积;每组另外6只兔子心脏取梗死边缘区组织,Western blot方法测定PAkt/Akt、P-ERK1/2/ERK1/2的表达。结果:心率(heart rate,HR)和平均动脉压(mean arterial blood pressure,MABP)在基线水平上无明显差异(P>0.05)。与基线水平相比,HR和MABP在缺血以及再灌注时期有明显下降(P<0.05),而在再灌注时期维持较稳定的水平。各组之间HR、MABP差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,BNP组心律失常发生率明显减少(P<0.003 125)。与BNP组比较,BNP+LY294002组、LY294002组、BNP+PD98059组及PD98059组心律失常明显增加(P<0.003 125),BNP+LY294002组和LY294002组,BNP+PD98059组和PD98059组差异无统计学意义(P>0.003 125);假手术组无心肌梗死。与对照组比较,BNP组心肌梗死范围明显减少(P<0.05)。与BNP组比较,BNP+LY294002组、LY294002组、BNP+PD98059组及PD98059组梗死面积明显增加(P<0.05)。BNP+LY294002组和LY294002组,BNP+PD98059组和PD98059组差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,BNP组Akt、ERK1/2的磷酸化水平明显增加(P<0.05)。与BNP组相比,BNP+LY294002组Akt的磷酸化水平及BNP+PD98059组ERK1/2的磷酸化水平分别明显降低(P<0.05)。BNP+LY294002组和LY294002组Akt的磷酸化水平,BNP+PD98059组和PD98059组ERK1/2的磷酸化水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:BNP激活cGMP/PKG信号通路,对心肌缺血再灌注损伤产生保护作用,且该通路的激活与再灌注损伤挽救激酶通路的激活有关。

糖原合成酶激酶-3的研究进展及其生物学意义

糖原合成酶激酶-3(GSK-3)是一种丝/苏氨酸蛋白激酶,广泛存在于各种细胞中,参与调控细胞凋亡,作用于Wnt、Hh等多条细胞信号通路,对细胞增殖与分化、肿瘤的发生、侵袭转移等方面起着重要的调节作用。

基于PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨升阳益胃汤对肺癌大鼠免疫力的影响

目的探究升阳益胃汤对肺癌大鼠免疫力的影响及其可能作用机制。方法72只SPF级Wistar大鼠随机抽取12只为对照组,其余60只大鼠采用气管内灌注致癌碘化油溶液法建立肺癌模型,并分为模型组、顺铂组(5 mg/kg)、升阳益胃汤组(14 g/kg)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)激活剂740 Y-P组(10 mg/kg)、升阳益胃汤+740 Y-P组(升阳益胃汤14 g/kg+740 Y-P 10 mg/kg),每组12只。给予相应的药物干预后,流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)占比,计算CD4^(+)/CD8^(+)比值;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清炎性因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和免疫球蛋白(Ig)G、IgA、IgM水平;取肺、脾和胸腺并称质量,计算肺、脾、胸腺指数;HE染色观察肺组织病理学变化;实时荧光定量PCR检测肺组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA表达;Western blot检测肺组织PI3K/蛋白激酶B(Akt)/核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组CD3^(+)、CD4^(+)占比和CD4^(+)/CD8^(+)比值、脾和胸腺指数、IgG、IgA、IgM水平降低,CD8^(+)占比、肺指数、IL-6和TNF-α水平、肺组织ICAM-1 mRNA和MMP-9 mRNA水平、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值和核NF-κB p65蛋白水平升高(均P<0.05),肺组织左叶增生、鳞状上皮化生、大量肿瘤细胞片状或条索状排列紊乱,伴有较多炎性细胞浸润;与模型组相比,升阳益胃汤组CD3^(+)、CD4^(+)占比和CD4^(+)/CD8^(+)比值、脾和胸腺指数、IgG、IgA、IgM水平升高,CD8^(+)占比、肺指数、IL-6和TNF-α水平、肺组织ICAM-1 mRNA和MMP-9 mRNA水平、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值和核NF-κB p65蛋白水平降低(均P<0.05),肺组织病变减轻,肺组织肿胀不明显,肺泡囊及上皮细胞结构基本清晰;在使用740 Y-P的基础上,加用升阳益胃汤干预可明显抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路,增强肺癌大鼠免疫力。结论升阳益胃汤可能通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路,增强肺癌大鼠T淋巴细胞免疫力。

中药单体及复方通过调控PI3K/Akt信号通路防治心肌缺血再灌注损伤的研究进展

再灌注治疗是急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)的常用防治手段,但在改善供血的过程中可能诱发心率失常、心肌细胞凋亡等一系列损伤,即心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)。现代中医学家认为MIRI的基本病机是本虚标实,本虚以气虚、阳虚为主,标实多为痰浊、瘀血,通常以虚实夹杂者多见,治疗当以扶正祛邪兼顾。磷酸肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路在防治MIRI过程中对心肌细胞的存活和功能发挥具有重要作用。该通路参与介导细胞增殖、生长、存活等生理过程,又可调控心肌细胞凋亡、自噬、氧化应激和炎症反应等多种病理过程,此双向调节作用与中医学的“扶正祛邪”理论不谋而合。基于此,对中药防治MIRI与PI3K/Akt信号通路的关系进行综述,以期为MIRI的治疗和新药开发提供参考。

3-羟基-3-甲基-辅酶A合成酶1调控PI3K/AKT信号通路影响HL-60细胞的药物敏感性

目的·探讨3-羟基-3-甲基-辅酶A合成酶1(3-hydroxymethyl-3-methylglutaryl-CoAsynthase1,HMGCS1)对于急性髓细胞性白血病(acute myelocytic leukemia,AML)HL-60细胞株药物敏感性的作用机制。方法·培养HL-60细胞,分别通过感染阴性对照慢病毒和HMGCS1慢病毒构建阴性对照组和HMGCS1过表达组细胞株,设置未作处理的HL-60细胞为空白对照组。采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测3组细胞中HMGCS1mRNA含量,并验证HMGCS1过表达组细胞株是否构建成功。应用Westernblotting检测HMGCS1对磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)信号通路中AKT及磷酸化AKT表达水平的影响。采用CCK8法检测HMGCS1及PI3K/AKT信号通路抑制剂LY29400对HL-60细胞活力的影响。应用qPCR和Western blotting检测LY29400对HMGCS1表达水平的影响。结果·与阴性对照组相比,HMGCS1过表达组细胞中HMGCS1 mRNA水平显著增加(P=0.000)。与空白对照组及阴性对照组相比,HMGCS1过表达组细胞中的磷酸化AKT的表达水平明显升高,而AKT的水平则无明显差异。与空白对照组及阴性对照组相比,HMGCS1可降低阿霉素对细胞活力的影响(P=0.003,P=0.006),而LY294002则可抑制由HMGCS1产生的作用(P=0.000)。在阴性对照组及过表达组细胞中,予以LY294002干预可降低HMGCS1 mRNA(均P=0.000)和蛋白的表达水平。结论·HMGCS1可以降低HL-60细胞对化学治疗药物阿霉素的敏感性,而PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002则可恢复其敏感性。

基于AKT/GSK-3β信号通路探讨熟地黄提取物对糖尿病肾病大鼠肾小球脏层上皮细胞表型转化的影响

目的基于蛋白激酶B(AKT)/糖原合成酶激酶(GSK)-3β信号通路,探讨熟地黄提取物对糖尿病肾病大鼠肾小球脏层上皮细胞表型转化的影响。方法建立糖尿病肾病大鼠模型,分为对照组、模型组、阳性对照组和熟地黄提取物组,分别进行8 w给药治疗,统计治疗后各组尿蛋白、尿肌酐、血糖、血清肌酐等指标,并统计肾脏E-钙黏蛋白(cadherin)、肾病蛋白(Nephrin)、肌间线蛋白(Desmin)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)mRNA及蛋白和p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达情况。结果各组尿蛋白和尿肌酐差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比较,模型组、阳性对照组和熟地黄提取物组尿蛋白和尿肌酐均显著升高,且模型组和阳性对照组尿蛋白及尿肌酐明显高于熟地黄提取物组(均P<0.05)。各组血糖和血清肌酐差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比较,模型组、阳性对照组和熟地黄提取物组血糖和血清肌酐均显著升高,且模型组和阳性对照组血糖及血清肌酐明显高于熟地黄提取物组(均P<0.05)。各组E-cadherin、Nephrin、Desmin、α-SMA mRNA及蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比较,模型组、阳性对照组和熟地黄提取物组E-cadherin、Nephrin mRNA及蛋白表达均显著降低而Desmin、α-SMA mRNA及蛋白均显著升高(P<0.05),且模型组E-cadherin、Nephrin mRNA及蛋白表达明显低于阳性对照组和熟地黄提取物组,Desmin、α-SMA mRNA及蛋白表达明显高于阳性对照组和熟地黄提取物组(P<0.05)。各组p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比较,模型组、阳性对照组和熟地黄提取物组p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达均显著升高,且模型组p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达明显高于阳性对照组和熟地黄提取物组(P<0.05)。结论熟地黄提取物可能是通过影响AKT/GSK-3β信号通路抑制糖尿病肾病大鼠肾小球脏层上皮细胞表型转化。

苦荞麦总黄酮对2型糖尿病大鼠胰岛素信号转导通路中GSK-3β、AKt相关基因与蛋白表达的影响

目的:观察苦荞麦总黄酮对2型糖尿病大鼠胰岛素信号转导通路中GSK-3β与AKt基因与蛋白表达情况的影响。方法:雄性wistar大鼠链脲佐菌素诱导建立T2DM模型,将T2DM模型大鼠随机分为5组:模型组、苦荞麦总黄酮低剂量组(50 mg/kg)、苦荞麦总黄酮中剂量组(100 mg/kg)、苦荞麦总黄酮高剂量组(200 mg/kg)、西药组(二甲双胍100 mg/kg),另外设置对照组。灌胃给药后,采用ELISA法测胰岛素水平、血糖水平,计算胰岛素敏感指数;采用RT-PCR法检测大鼠肝组织中GSK-3β、Akt的mRNA表达情况;采用Western-blot法测定大鼠肝组织中GSK-3β、AKT的蛋白表达情况。结果:与模型组相比,苦荞麦总黄酮可降低大鼠肝组织中GSK-3βmRNA和蛋白表达(P<0.05)、增加Akt mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:苦荞麦总黄酮能降低模型大鼠肝组织中GSK-3βmRNA和蛋白表达、增加Akt mRNA和蛋白表达进而起到积极的影响作用。

PI3K/AKT/GSK-3β信号通路与心肌缺血/再灌注损伤的相关性研究

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路在肿瘤细胞中被发现。随着分子医学的发展,研究发现,该通路通过调控下游的多种效应分子对器官的缺血/再灌注损伤起保护作用,其中糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)是主要效应分子,两者联合被称为PI3K/AKT/GSK-3β信号通路。该通路在心肌细胞缺血/缺氧培养、心肌暖缺血/再灌注损伤及离体心脏心肌缺血/再灌注损伤中的保护作用已经得到证实,但在心脏移植中对于心肌缺血冷保护及移植后的再灌注损伤的作用报道较少,需要进一步探讨。

血清外泌体miR-21靶向PTEN激活PI3K/AKT信号通路诱导肺癌细胞的生长和转移的机制分析

目的探讨肺癌患者血清外泌体miR-21对肺癌细胞生长和转移的影响及机制。方法收集18例健康志愿者和20例肺癌患者的血清,提取并鉴定血清外泌体(记为Normal exo和LCA exo),qRT-PCR检测Normal exo和LCA exo中miR-21的表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-21与PTEN的靶向关系,肺癌细胞A549中转染miR-NC(miR-NC组)、miR-21 mimic(miR-21组)、miR-21 mimic+PTEN质粒(miR-21+PTEN组)后,CCK8法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测PTEN蛋白表达。将10μg/mL时Normal exo和LCA exo及等体积的PBS(Normal exo组、LCA exo组、PBS组)与A549细胞共孵育,检测细胞中miR-21表达,PTEN蛋白表达,细胞增殖、迁移和侵袭能力。A549细胞与10μg/mL时LCA exo共孵育后转染PTEN质粒(LCA exo+PTEN组),然后检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。Western blot检测PBS组、Normal exo组、LCA exo组和LCA exo+PTEN组A549细胞中磷酸酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)磷酸化水平。结果Normal exo和LCA exo符合外泌体的结构及生物学特征。LCA exo组中miR-21表达显著高于Normal exo组(P<0.001)。PTEN为miR-21的靶基因,与miR-NC组比较,miR-21组A549细胞PTEN表达下调(P<0.001),细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加(P<0.05)。与miR-21组比较,miR-21+PTEN组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低(P<0.05)。相比于PBS组,LCA exo组细胞PTEN表达显著下调(P<0.001),细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加(P<0.05),PI3K和AKT磷酸化水平显著增加(P<0.001);与LCA exo组比较,LCA exo+PTEN组A549细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低(P<0.05),PI3K和AKT磷酸化水平显著降低(P<0.001)。结论肺癌患者血清外泌体传递miR-21靶向PTEN促进肺癌细胞的生长和转移。

白芍总苷对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭、迁移及PI3K/Akt/GSK3β信号通路的影响

目的研究白芍总苷(TGP)对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,并初步探究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)信号通路在此过程中的作用。方法体外培养喉癌Hep-2细胞,设对照组、25μg/mL TGP组、50μg/mL TGP组、100μg/mL TGP组,采用不同浓度TGP(0、25、50、100μg/mL)作用后,分别采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)、Transwell法、划痕实验检测喉癌Hep-2细胞增殖活力、侵袭能力、迁移能力,蛋白免疫印迹法检测喉癌Hep-2细胞中PI3K/Akt/GSK3β信号通路相关蛋白表达水平。结果与对照组相比,25、50、100μg/mL TGP组喉癌Hep-2细胞增殖活力、侵袭能力、划痕闭合率和磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化GSK3β(p-GSK3β)蛋白表达水平显著降低(P<0.05),均呈现浓度依赖性(P<0.05)。结论TGP能够抑制喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭、迁移,其机制可能与抑制PI3K/Akt/GSK3β信号通路表达有关。

YWHAB基因通过PI3K/AKT通路调控肝细胞癌增殖和侵袭并重塑免疫抑制微环境

目的:探究PANoptosis关键基因YWHAB在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达水平和作用机制及其与肿瘤免疫微环境的关系。方法:来自南通大学附属医院肝胆胰脾外科的组织芯片和癌症基因组图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析YWHAB在HCC中的表达及与预后的关系。体外构建HCC的PLC/PRF/5和Huh7的YWHAB敲低以及过表达模型,评估其肿瘤细胞的增殖和侵袭能力,并用Western Blot验证其通路。通过ssGSEA/TIDE/ESTIMATE 3种免疫浸润算法分析YWHAB对免疫环境的影响,并用体外CD8+T细胞杀伤实验进行验证。结果:YWHAB在HCC组织中阳性表达率为70.46%,在癌旁组织阳性表达率为20.46%,差异有统计学意义(P<0.05),YWHAB高表达与肿瘤包膜完整性、血管浸润、淋巴结转移、肿瘤分化程度和晚期TNM分期均明显相关(均P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明,YWHAB高表达患者总体生存(overall survival,OS)率明显降低(P=0.003)。体外实验证明,YWHAB能通过PI3K/AKT信号通路调控肿瘤细胞的增殖和侵袭。免疫微环境方面,YWHAB表达与辅助型T细胞2(R=0.402,P<0.05)、巨噬细胞(R=0.321,P<0.05)等抑制性免疫细胞浸润数量呈正相关,与免疫耗竭性检查标志物CD274、HAVCR2、PDCD1、TIGIT、LAG3和CTLA4等表达呈正相关。YWHAB低表达组显示出更好的免疫治疗敏感评分,当敲低YWHAB基因后,T细胞对肿瘤细胞的杀伤效果显著增强(P<0.05)。结论:YWHAB作为HCC的癌基因和不良预后标志物,可能通过调控PI3K/AKT通路途径而促进HCC的增殖和侵袭,且与免疫抑制微环境相关。

PI_3K-AKT信号通路在急性胰腺炎发病与进展中的作用

急性胰腺炎(AP)被认为是与全身炎性反应综合征密切相关的全身性疾病,目前发病机制尚不清楚,但炎性反应及胰腺细胞的凋亡坏死是AP的基本病理过程。磷酸肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-PKB/Akt)信号通路的研究已明确其在细胞生长、增殖、凋亡、炎症等细胞功能中发挥重要作用。PI3K-AKT信号通路是否参与AP的发病与进展及其机制仍无一致意见。现就PI3K-Akt信号通路在AP中的作用进行综述。

微小RNA与磷酸肌醇-3激酶／蛋白激酶B信号通路在心脏发育中的作用

微小RNA具有调控细胞增殖、分化和生物体生长发育等功能。磷酸肌醇．3激酶／蛋白激酶B信号通路在细胞增殖、分化和器官组织发育也起重要作用。了解微小RNA与磷酸肌醇-3激酶／蛋白激酶B信号通路分别在心脏发育中的作用及两者之间关系将有助于进一步地阐述心脏发育畸形及其相关疾病的发病机制。