酪蛋白磷酸肽-钙螯合物的分级、表征及持钙特性

利用酪蛋白磷酸肽螯合钙离子的特性,以钙离子浓度为尺度,分级制取不同钙螯合能力的CPPs,同时提高其纯度。以酪蛋白的胰蛋白酶酶解产物为原料,通过逐级增加Ca^(2+)添加量,在终浓度为55%(v/v)的乙醇溶液中分级沉淀出三个酪蛋白磷酸肽-钙螯合物级分(CPP1-Ca、CPP2-Ca和CPP3-Ca),并利用PBS脱钙得到三个级分相应的酪蛋白磷酸肽(CPP1、CPP2和CPP3)。以传统钙乙醇沉淀法得到的肽钙螯合物(CPP-Ca)为对照,分析并对比三个酪蛋白磷酸肽-钙螯合物级分的理化性质以及持钙特性。结果表明,三个酪蛋白磷酸肽-钙螯合物级分中,CPP3-Ca含有最高的纯度和钙螯合量,分别为89.42%和69.59 mg/g,明显高于未分级CPP-Ca的83.77%和55.05 mg/g。氨基酸组成及N/P(摩尔比)分析发现CPP3-Ca含有更高磷酸丝氨酸基团,进而能够结合更多的Ca^(2+)。不同酪蛋白磷酸肽级分持钙能力分析结果显示CPP3能够更好地延迟和阻止磷酸钙沉淀的形成,具有更高的持钙能力。同时CPP3-Ca在模拟肠道环境中具有更高的钙溶解度,表明分级后的酪蛋白磷酸肽-钙螯合物的体外生物利用度提高。

婴幼儿辅助食品中配料和膳食补充成分对酪蛋白磷酸肽持钙能力的影响

比较研究婴幼儿辅助食品中肉类、果蔬和谷物等配料以及维生素和蛋白质等膳食补充成分,对三种酪蛋白磷酸肽产品持钙能力强弱的影响。研究结果表明,大米和小麦对婴幼儿辅助食品中酪蛋白磷酸肽的持钙能力有一定的不良影响,但大米和小麦添加量在50%~85%的范围未显著改变酪蛋白磷酸肽的持钙能力。添加3%以上的肉类和果蔬类配料的添加量显著降低了酪蛋白磷酸肽的持钙能力。20 mg/kg的烟酰胺降低了酪蛋白磷酸肽的持钙能力,而其它维生素、乳清蛋白和大豆蛋白则未对其产生显著影响。进一步分析发现,肉类配料中脂肪和蛋白质以及果蔬类配料中的酚类化合物可能是影响酪蛋白磷酸肽持钙能力的关键因素。本文对于明确婴幼儿辅助食品中影响酪蛋白磷酸肽持钙能力的因素,使其更好地发挥功效具有一定的指导意义。

卵黄高磷蛋白磷酸肽在Caco-2细胞单层模型中的促钙转运作用

结合高温低压处理、胰蛋白酶和嗜热菌蛋白酶复合酶解制备具有高钙结合能力的卵黄高磷蛋白磷酸肽(Phosvitin phosphopeptides,PPP)。通过优化确定制备PPP-Ca的最佳条件为pH 9.5,多肽与钙质量比7∶1,此条件下钙螯合率达到97%,PPP-Ca在模拟胃肠道消化中显示了极高的稳定性。使用Caco-2细胞单层模型验证PPP-Ca在体外的钙转运作用,通过细胞形态、电阻值和荧光素钠透过率等验证Caco-2细胞模型,毒性实验(MTT)结果显示PPP-Ca对Caco-2细胞呈现低毒性作用。研究PPP-Ca和PPP对Caco-2细胞转运钙离子质量浓度和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性的影响,采用RT-PCR测定Calbindin D9K mRNA的相对表达量。结果表明,PPP和PPP-Ca能够显著提高AKP活性,钙转运量从(3.06±0.08)μg增到(5.66±0.62)μg,Calbindin D9K mRNA的表达量增加2倍,进而增强人体肠道中钙的转运吸收。研究结果为开发新的钙补充剂和卵黄高磷蛋白提供了科学证据。

钙结合卵黄高磷蛋白磷酸肽的制备及其肽钙螯合物的结构表征

以鸡蛋蛋黄为原料制备卵黄高磷蛋白磷酸肽(phosvitin phosphopeptide,PPP),并与钙离子螯合制备肽钙补充剂。通过高温高压处理卵黄高磷蛋白,先用胰蛋白酶酶解,以水解度和肽钙结合率为指标,进一步优化碱性蛋白酶的酶解条件以制备PPP。PPP与钙螯合获得螯合物PPP-Ca,通过紫外光谱、红外光谱分析、圆二色谱分析、扫描电镜和Zeta电位分析表征PPP-Ca的结构特性。结果表明最佳酶解条件为加酶量5%、酶解90 min、pH 9.0、温度40℃,在此最优条件下水解度为(25.45±0.17)%,肽钙结合率为(93.41±1.10)%。结构表征发现PPP-Ca主要通过羧基、氨基和磷酸基团相互作用结合,PPP和钙离子结合后其结构变得紧密有序,且有聚集现象。

超声促进葡聚糖-酪蛋白磷酸肽接枝及其递送钙的应用

为了进一步完善蛋白质与多糖共聚物作为钙递送体系的应用,本研究利用超声法促进葡聚糖与酪蛋白磷酸肽(casein phosphopeptide,CPP)间的接枝,并构建葡聚糖-酪蛋白磷酸肽-钙离子(葡聚糖-CPP-Ca^(2+))递送体系,以傅里叶红外光谱(FTIR)、扫描电子显微镜(SEM)等方法表征其结构,探讨其在模拟胃肠道消化中的缓释性能.结果表明:超声处理增加了CPP与葡聚糖结合点位,与水浴处理组相比,在接枝率为50.00%时共聚物反应时间缩短2.5 h,且在反应4 h后,250W超声处理组的接枝率比水浴处理组提高19.67%,葡聚糖-CPP-Ca^(2+)在胃液和小肠液消化阶段过程中钙离子的释放率分别为64.48%和89.62%,表明缓释效果良好.本研究结果为促进葡聚糖-CPP接枝反应与递送钙的应用提供了基础.

酪蛋白磷酸肽-无定形磷酸钙联合原花青素对牙本质小管封闭作用的研究

目的探讨酪蛋白磷酸肽-无定形磷酸钙(casein phosphopeptide-amorphous calcium phosphate,CPP-ACP)联合原花青素(proanthocyanidin,PA)对牙本质小管的封闭效果。方法选择2022年3—6月哈尔滨医科大学附属第一医院因阻生或正畸治疗而拔除的磨牙20颗,每颗牙可截取两个牙本质切片,共得到40个牙本质切片,将其作为试件并采用随机数字表法分为A、B、C、D组,每组10个试件。A组应用CPP-ACP处理牙本质表面,B组应用PA处理,C组应用CPP-ACP联合PA处理,D组不做处理。使用扫描电子显微镜观察试件的牙本质小管封闭情况,计算牙本质小管的封闭率和矿化物在牙本质小管内的最大沉积深度,并测量试件表面的显微硬度;再进行耐久性实验(酸性溶液处理和刷牙处理),然后用扫描电子显微镜观察牙本质小管的封闭率。比较各组牙本质小管未封闭面积及封闭率、显微硬度、耐久性实验前后的封闭率。结果牙本质小管的未封闭面积C组B组>A组>D组,差异均有显著性(P<0.001);矿化物在牙本质小管内的最大沉积深度达到16.04μm(C组)。B组的表面显微硬度值最高(P<0.05);经酸性溶液处理及刷牙处理后,C组仍表现出最高的牙本质小管封闭率(P<0.05),且耐久性实验前后封闭率比较差异无显著性(P>0.05)。结论CPP-ACP联合PA可有效封闭牙本质小管,并表现出更高的封闭率和再矿化深度,且形成的再矿化层具有较好的耐酸性和耐磨性。

饲粮中添加酪蛋白磷酸肽对产蛋后期蛋鸡生产性能和钙代谢的影响

为探讨饲粮中添加酪蛋白磷酸肽(casein phosphopeptide,CPP)对产蛋后期蛋鸡钙代谢的影响,试验采用单因素设计,选择800只58周龄海兰褐商品蛋鸡,随机分为5组,对照组(T1组)饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加0.5(T2组)、1.0(T3组)、1.5(T4组)、2.0(T5组)g/kg CPP。结果表明:与对照组相比,T2、T3、T4组和T5组鸡蛋合格率显著提高(P<0.05);T3组胫骨钙含量和胫骨强度提高,T2、T3组血清中碱性磷酸酶活性显著降低(P<0.05);在十二指肠中,T2组碳酸酐酶活性提高(P<0.05),T4组钙结合蛋白和钙泵的基因相对表达量显著上调(P<0.05),T3、T5组钠钙交换体的基因相对表达量显著上调(P<0.05);T2、T3组蛋壳腺中钙结合蛋白的含量提高(P<0.05),T2、T3、T4、T5组的碱性磷酸酶基因相对表达量上调(P<0.05),碳酸酐酶基因相对表达量显著下调(P<0.05)。综上,饲粮中添加CPP能够提高鸡蛋合格率、提高蛋鸡肠道和蛋壳腺中相关酶活性,进而促进血清钙含量与胫骨强度的提高;饲粮中添加0.5~1.0 g/kg CPP的T2、T3组效果最佳。

酪蛋白磷酸肽-无定形磷酸钙联合应用在口腔治疗中的研究进展

酪蛋白磷酸肽-无定形磷酸钙(Casein phosphopeptides-amorphous calcium phosphate,CPPACP)是一种以乳制品为基础的生物活性剂,对钙离子以及磷离子有很强的固定作用。CPP-ACP可以防治龋齿,减轻牙釉质的脱矿现象,去除牙釉质的白垩色病变,并可抑制正畸托槽和其他矫治器周围的牙菌斑堆积,因此受到越来越多口腔科医生的关注。本文汇总了近5年关于CPP-ACP在临床上的多种联合应用的中英文文献,从CPP-ACP联合氟化物、渗透树脂、过氧化氢类漂白剂、玻璃离子水门汀等6个方面进行综述。

酪蛋白磷酸肽的功能性研究进展

酪蛋白磷酸肽是以牛奶酪蛋白为原料,经过酶水解并分离纯化后得到的含有磷酸丝氨酸簇的生物活性肽。它能促进机体肠黏膜对钙、铁和锌等矿物盐的吸收利用,被誉为“矿物质载体”。此外,酪蛋白磷酸肽在预防龋齿、影响骨骼形成以及提高机体免疫力等方面也有重要作用。本文针对酪蛋白磷酸肽的功能性进行了总结,并对其在婴幼儿配方奶粉中的应用进行简单介绍。

酪蛋白磷酸肽(CPPs)的纯化研究

研究了用大孔强碱性阴离子交换树脂提纯酪蛋白磷酸肽（ CPPs）的方法。结果表明，树脂 GM201对 CPPs的分离提纯效果较好，最佳洗脱纯化工艺条件为：盐酸浓度 0.2mol/L， NaCl浓度 0.3mol/L，温度 45℃。在上述最佳工艺条件下， CPPs回收率可达 77.7％～ 80％，纯度提高到 N:P=4.7:4.9。

酪蛋白磷酸肽(CPPs)的分子量及持钙功能的分析

实验对不同来源的酪蛋白磷酸肽（CPPs）的氮与磷的摩尔比值（N：P）、分子大小及结合钙的最大量进行了分析和测定，初步探讨了CPPs的N：P、分子大小和结合钙的能力之间的关系。N：P较小则CPPs制品的纯度较高或磷酸基密度较大，也即CPPs制品中分子量较小部分占的比例较大，结合钙的能力也较强。N：P能较客观和综合地反映CPPs的肽链长度和磷酸基密度，因而可以作为CPPs制品的特性指标。

酪蛋白磷酸肽（CPP）对大鼠钙吸收利用的影响

酪蛋白磷酸肽（ＣＰＰ）是从牛奶中提取出的一种多肽制品，在中性和弱碱性的环境下可提高钙的溶解度和钙溶液的稳定性。将ＣＰＰ按０．５％和０．２％浓度分别加入大鼠基础饲料和低钙饲料中，并设一组含５％脱脂奶粉为阳性对照。每组１０只断乳大鼠，进行四周生长试验和三天代谢试验。结果表明，基础饲料添加０．５％ＣＰＰ组的大鼠钙吸收率和钙储留率比对照组升高６％左右，差别有显著性意义。低钙饲料添加０．２％ＣＰＰ亦使钙吸收率和储留率增加５％～６％，差别有非常显著的意义（Ｐ＜０．０１）。奶粉的钙吸收率和利用率在各组中最高。ＣＰＰ作为促进钙吸收利用的食品添加剂有进一步研究应用的前景。

酪蛋白磷酸肽的质量评价方法研究

对来自8种不同公司的酪蛋白磷酸肽(CPP)产品的含量、体外结合钙离子的能力(即持钙能力)用不同的测定方法进行了测定和比较,采用氮磷比(N/P)、钡乙醇沉淀法测定样品含量,用pH滴定法和钙离子选择电极法测定了8种样品的体外持钙能力。研究结果表明:当酪蛋白磷酸肽含量较低时选用N/P和钡乙醇沉淀法测定结果偏差较大,应选用高效液相色谱法(HPLC);pH滴定法和钙离子选择电极法两种方法都能在一定程度上反映样品体外持钙能力的大小,但用pH滴定法测定的结果更符合产品含量的测定结果。本文为CPP开发过程中的质量评价提供了一定的依据。

酪蛋白磷酸肽功能性质的体外研究

以酪蛋白为原料，通过有控制的酶解以及离子交换和凝胶过滤技术制得N／P（摩尔比）不同的酪蛋白磷酸肽（CPPS），并对其体外阻止磷酸钙沉淀的效果进行了分析、测定和比较。在添加量相同时，总的趋势是N／P较小的样品阻止磷酸钙沉淀形成的效果好于N／P值较大的样品。CPPs的作用效果不仅与N／P值有关，还和它们分子中氨基酸的组成和排序或磷酸基的分布有关。

LC-MS法测定钙片中酪蛋白磷酸肽含量

用液相色谱-质谱联用法,以选择离子模式(SIM)检测钙片中酪蛋白磷酸肽(CPP)含量。结果表明,该法前处理简便,专属性好,灵敏度高,检出限为1μg/ml,在1～100μg/ml范围内线性回归方程为y=3074.6x+684.6,R2=0.999,回收率为96%～104%,可用于测定钙片中CPP的含量,也可用于其它钙强化剂中添加CPP的检测。

卵黄高磷蛋白磷酸肽-钙对受试小鼠钙表观吸收率的影响

本实验借助营养成分常规检测方法和原子吸收检测法对三种卵黄高磷蛋白磷酸肽-钙样品进行样品纯度检测和含钙量的分析。对样品采用羧甲基纤维素进行预处理后,选用葡萄糖酸钙市场上常见的补钙制剂与之比较,通过小鼠动物实验来研究这种补钙制剂对处于生长期的小鼠钙吸收率的影响。结果表明,在三种卵黄高磷蛋白磷酸肽-钙样品中,PPP3纯度最高且含钙量最高;在小鼠的体重增长过程中三种样品均没有显著差异,说明卵黄高磷蛋白磷酸肽-钙对小鼠的体重没有影响;在钙的表观吸收率方面,其中PPP3-钙高剂量组的钙的表观吸收率最高,这组数据表现为对空白组和对照组均有显著差异(p<0.05),往下依次为PPP3-钙中剂量组、PPP2-钙中剂量组、PPP1-钙中剂量组和PPP3-钙补剂低剂量组,均表现为与空白组差异显著(p<0.05)。

生理活性物质酪蛋白磷酸肽的功能及应用

生理活性物质酪蛋白磷酸肽的功能及应用冯凤琴，许时婴，王璋（无锡轻工大学食品科学与工程系，无锡，２１４０３６）自然界赋予很多食物以保健和治疗功能。由于我们在分子水平上对食物成分进行分析和测试的能力不断提高，因此，对食物成分的分子结构与功能的关系以及它们...

酶解反应与膜分离耦合连续制备酪蛋白磷酸肽

采用酶解反应与膜分离耦合新工艺连续水解全酪蛋白制备酪蛋白磷酸肽(CPPs)。考察了超滤膜对胰蛋白酶及底物溶液的截留效果;研究了初始底物质量浓度、初始酶质量浓度、反应体积、膜渗透通量等参数对反应器性能和反应转化率的影响规律;利用高效凝胶排阻色谱系统(HPSEC)对酶解产物进行检测分析;建立了酶膜反应器连续水解动力学模型,并对间歇与连续酶解过程进行比较分析,证明反应-分离耦合技术可使酶解效率及蛋白酶利用率大幅提高,并使产物得到调控与富集,为CPPs的酶法制备提供了一种更为有效的方法。

酪蛋白酶解制备酪蛋白磷酸肽研究 Ⅰ.过程分析与优化

以 pH－ stat技术跟踪间歇搅拌反应釜中酪蛋白—碱性蛋白酶抑制备酪蛋白磷酸肽 (CPPS)过程特性，利用水解度 (DH)表征其反应历程。分析了温度 (T)、 pH值、底物浓度 ([S])、酶浓度 ([E])及时间 (t)等参数对 DH的影响，并通过多元线性回归求得其关联式，确定出最适酶解条件为： T=40℃， pH=10， [E]=0.2％， [S]=2.5g/L， t=30min。

酪蛋白磷酸肽的体外功能试验

对不同级别的酪蛋白磷酸肽 (CaseinPhosphopeptide,以下简称CPP)促进钙吸收的体外功能性质进行了研究 ,测定了CPP的结合钙量、CPP阻止磷酸钙沉淀形成的效果及持钙能力 .结果表明 :CPP对钙的结合量随温度的升高而减少 ,随 pH值的升高而增加 ;CPP对阻止磷酸钙沉淀的作用随温度升高和溶液钙磷比增加而下降 ;随氮磷摩尔比降低 ,CPP阻止磷酸钙沉淀形成的最低有效浓度下降 ;对于不同的钙磷比 ,CPP的氮磷摩尔比越小 ,保持在溶液中的钙量越多 。