天津地区595例老年人外周血磷酸腺苷酸活化蛋白激酶浓度变化及其与代谢综合征的关系

目的通过对老年人外周血磷酸腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）的测定,探讨外周血AMPK浓度与老年代谢综合征患者的关系。方法按照代谢综合征的诊断标准将595例入选者分为代谢综合征组（试验组）和非代谢综合征组（对照组）,又按年龄分为60~69岁、70~79岁、≥80岁3个年龄段。2组均空腹8h抽取静脉血检测AMPK浓度,对试验组患者给予降压、降糖、调脂治疗及生活指导,1年后再次进行AMPK的测定,了解干预治疗前后AMPK浓度的变化。结果试验组体质量指数、空腹血糖、收缩压、舒张压和TG高于对照组,HDL-C和AMPK浓度低于对照组（P〈0.01）;试验组与对照组3个年龄段之间AMPK浓度比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。试验组干预治疗1年后FPG[（6.3±1.1）mmol/Lvs（6.8±1.2）mmol/L]、收缩压[（136.3±12.3）mm Hg vs（145.3±13.6）mm Hg]、舒张压[（80.3±8.6）mm Hg vs（89.9±9.1）mm Hg]和TG[（2.2±0.4）mmol/L vs（2.5±0.3）mmol/L]较治疗前下降,HDL-C[（1.0±0.3）mmol/L vs（0.8±0.1）mmol/L]和AMPK浓度[（4.7±0.2）nmol/L vs（4.1±0.2）nmol/L]较治疗前增加,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论患有代谢综合征的老年患者外周血AMPK浓度下降,经干预治疗后血压、血糖、血脂有改善,AMPK浓度增加,AMPK与代谢综合征相关。

单磷酸腺苷酸依赖的蛋白激酶α2过表达对异丙肾上腺素刺激后心肌细胞骨架表达的影响

目的观察腺病毒介导单磷酸腺苷酸依赖的蛋白激酶(adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)α2过表达对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)刺激后心肌细胞骨架蛋白肌间线蛋白(desmin)和α-辅肌动蛋白(α-actinin)的影响。方法 ISO处理心肌细胞,Western blot检测α-辅肌动蛋白和肌间线蛋白表达量变化。重组腺病毒AD-Prkaa2感染ISO处理的心肌细胞,Wetern blot检测p-AMPKα、α-辅肌动蛋白、肌间线蛋白表达量变化。结果 ISO刺激后心肌细胞α-辅肌动蛋白表达减少(P=0.001),肌间线蛋白表达增多(P=0.015),差异有统计学意义。AMPKα2过表达的心肌细胞内p-AMPKα增多(P<0.05),肌间线蛋白减少(P=0.008),α-actinin增多(P=0.001),差异有统计学意义。结论 AMPK激活改善ISO刺激引起的心肌细胞骨架重构,有利于心肌细胞搏动功能的维持。

骨骼肌腺苷酸活化蛋白激酶在高脂饮食诱导小鼠肥胖易感性差异中的作用

目的:通过观察高脂饮食诱导的肥胖倾向(DIO)及肥胖抵抗倾向(DIO-R)两种小鼠的血糖、血脂变化,探讨腺苷酸活化蛋白激酶活性水平在高脂饮食诱导小鼠肥胖易感性差异中的作用。方法:雄性ICR小鼠随机分为普通饮食对照组和高脂饮食组。喂养5周后,将高脂饮食组体重增加最大的10只判定为肥胖倾向小鼠,体重增加最小的10只判定为肥胖抵抗倾向小鼠。小鼠摘眼球取血后,检测血糖、血脂浓度。采用免疫印迹(Western Blot)法测定小鼠骨骼肌组织磷酸化的腺苷酸活化蛋白激酶α2(AMPKα2)、过氧化物酶增殖物激活受体γ共化合物1α(PGC-1α)、雌激素受体相关受体α(ERRα)和肉毒碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)蛋白表达。结果:(1)高脂饮食喂养5周后,DIO小鼠体重显著高于对照组和DIO-R小鼠(P<0.05)。(2)与普通饮食对照组小鼠相比,DIO小鼠和DIO-R小鼠血糖、血脂均有显著性差异(P<0.01),而DIO小鼠与DIO-R小鼠之间血脂四项无显著性差异。(3)高脂饮食喂养5周后,DIO小鼠骨骼肌pAMPKα2蛋白表达水平较普通饮食对照组显著减少(P<0.05)。结论:(1)对同一批小鼠采用同样高脂饮食喂养5周后,DIO和DIO-R小鼠体重增长显著不同,而血糖和血脂变化无明显差异。(2)在高脂饮食刺激下,小鼠骨骼肌AMPKα2活性差异可能导致骨骼肌内脂肪酸氧化水平不同,诱导出现DIO和DIO-R。

棕榈酸急性、慢性刺激对小鼠骨骼肌细胞腺苷酸活化蛋白激酶活性的影响

目的:探讨棕榈酸急性、慢性刺激对小鼠骨骼肌细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)活性的影响。方法:以体外培养并诱导分化成熟的C2C12小鼠骨骼肌细胞为研究对象,观察棕榈酸急性(5-30 mins)或慢性(16 h)刺激对AMPK蛋白活性的影响。小鼠骨骼肌细胞AMPK蛋白磷酸化水平的测定采用免疫印迹法。结果:(1)棕榈酸急性刺激下,C2C12细胞AMPK蛋白活性水平成时间-浓度依赖性增加。其中当300μM棕榈酸刺激15分钟时,与对照组相比,AMPK蛋白活性水平显著增加(P<0.05);(2)与对照组相比,16 h棕榈酸慢性刺激可诱导C2C12细胞AMPK蛋白活性水平显著增加(P<0.05)。结论:棕榈酸急性、慢性刺激均能诱导骨骼肌细胞AMPK活性增加,可以为一次性或持续性高脂膳食引起的血浆游离饱和脂肪酸过多造成的骨骼肌胰岛素抵抗的在体研究,提供简便实用的骨骼肌细胞模型。

益心泰颗粒对慢性心衰(心气虚兼血瘀水停证)大鼠AMPK、PGC-1α的影响

目的观察益心泰颗粒对慢性心力衰竭(CHF)(心气虚兼血瘀水停证)大鼠AMPK、PGC-1α的影响。方法采用丙硫氧嘧啶灌胃及阿霉素腹腔注射复制CHF(心气虚兼血瘀水停证)模型大鼠,将造模成功大鼠分为模型组与益心泰低、中、高剂量组和曲美他嗪组;另设正常对照组。灌胃4周后观察心肌组织病理结构,检测LVEF、血清NT-proBNP及心肌组织FFA、ATP/AMP、LAC、pAMPK、AMPK、PGC-1α水平。结果与模型组比较,益心泰颗粒低、中、高剂量组及曲美他嗪组LVEF、心肌组织ATP/AMP值、心肌组织p-AMPK、AMPK、PGC-1α相对灰度值均明显升高(P<0.05或P<0.01),血清NT-proBNP及心肌组织FFA、LAC明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论益心泰颗粒能促进慢性心力衰竭(心气虚兼血瘀水停证)大鼠AMPK、PGC-1α表达,改善心肌能量代谢。

不同n-3/n-6多不饱和脂肪酸构成比膳食对大鼠一磷酸腺苷活化蛋白激酶表达的影响

目的研究不同n-3/n-6配比脂肪酸对大鼠磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)蛋白及活性表达的影响。方法58只SD大鼠适应性喂养7d后,尾静脉取血。根据血清总胆固醇水平随机分为:空白(基础饲料);高脂(高脂饲料);高脂1:1(高脂饲料+n-3/n-6=1:1配方油);高脂1:5(高脂饲料+n3/n6=1:5配方油);低脂1:1(脱脂基础饲料+n-3/n-6=1:1配方油);低脂1:5(脱脂基础饲料+n3/n6=1:5配方油)6组,喂养45d,观察大鼠摄食与体重增长。于实验前1d,15d,30d,45d分别各取血测血清总胆固醇水平,于D45处死动物。Western blotting分别分析肝和下丘脑组织中AMPK-α总蛋白及其活性表达。结果添加PUFA的4个比例组血清TC、体重与高脂组相比,显著降低,且低脂2个比例组和高脂1:1组均与高脂1:5组相比有显著差异。添加PUFA的4个比例组均与高脂组相比,大鼠下丘脑AMPK-α总蛋白表达水平明显降低,肝AMPK-α蛋白表达水平均比高脂组明显升高。结论PUFA改善血脂可能是通过增加肝AMPK表达,抑制下丘脑AMPK表达,增加肝脂肪酸氧化和抑制食欲,影响血脂代谢。

芦丁激活腺苷酸活化蛋白激酶α蛋白表达减轻全氟辛酸染毒小鼠肝脏损伤

目的研究芦丁(rutin)对全氟辛酸(perfluorooctanoic acid, PFOA)染毒小鼠肝脏损伤的保护效应及机制。方法将24只雄性ICR小鼠随机分成3组,每组8只:对照组(双蒸水),PFOA组[PFOA 20 mg/(kg·d)],芦丁干预组[PFOA 20 mg/(kg·d)+rutin 20 mg/(kg·d)],正常饮食,经口灌胃,每日观察、称重、记录。14天后采血、处死后迅速剥离肝脏并称重。部分肝脏组织固定于4%多聚甲醛后苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色及糖原过碘酸希夫(periodic acid-schiff, PAS)染色;检测血清样品中谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase, GPT)活性,以及肝脏组织匀浆中甘油三酯(triglyceride, TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、丙二醛(malondialhyde, MDA)等含量和相关酶的活性等;Western blot检测腺苷酸活化蛋白激酶α(AMP-activated protein kinase, AMPKα)及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α(phospho-AMP-activated protein kinaseα, p-AMPKα)的蛋白表达水平。结果 PFOA导致小鼠体重明显降低、肝脏重量与肝脏相对体重系数均显著性升高(P<0.05);肝细胞索解离,肝细胞肿胀、溶解,有明显损伤,PAS染色阳性细胞明显减少;PFOA组GPT活性为(204.63±11.26)U/L,与对照组(28.80±4.51)U/L相比显著升高(P<0.05);小鼠肝脏组织中TG、TC和MDA的含量分别为(4.89±0.51)mmol/g prot、(8.06±0.84)mmol/g prot和(315.38±60.79)nmol/mg prot,与对照组相比均明显增多(P<0.05);T-SOD活性为(4175.56±334.96)U/mg prot,与对照组比显著降低(P<0.05);芦丁干预后,与PFOA暴露组比较,小鼠体重没有显著性变化(P>0.05),但是肝重和肝脏相对体重系数显著降低(P<0.05),小鼠肝细胞肿胀情况好转,肝细胞索结构尚清,PAS染色阳性细胞明显增多,芦丁干预组GPT活性为(168.75±18.32)U/L,与PFOA组比显著下降(P<0.05);小鼠肝脏组织中TC和MDA含量分别为(4.25±0.77)mmol/g prot和(211.27±44.44)nmol/mg prot,与PFOA组比显著减少(P<0.05);T-SOD活性为(7368.88±673.09)U/mg prot,与PFOA组比显著升高(P<0.05)。三组肝脏组织中AMPKα蛋白表达无明显差异,与PFOA组相比,PFOA+rutin组的p-AMPKα蛋白表达显著上调。结论 PFOA暴露可导致小鼠肝脏损伤,引起脂质堆积。而芦丁对该损伤有一定的保护效应,这可能与芦丁激活AMPKα蛋白表达从而有效纠正TG水平以及增强抗氧化酶类的活性有关。

余甘子水提物对糖尿病模型大鼠脂质代谢紊乱和胰岛素抵抗的改善作用及机制研究

目的 探讨余甘子水提物改善糖尿病模型大鼠脂质紊乱和胰岛素抵抗(IR)的作用及可能机制。方法 雄性SD大鼠进行IR造模,并随机分为模型组、阳性对照组和余甘子水提物高、中、低剂量组,另设空白组,每组各10只。余甘子水提物高、中、低剂量组大鼠分别给予800、400、200 mg/kg余甘子水提物稀释液,阳性对照组大鼠给予2.7 mg/kg吡格列酮溶液,空白组和模型组大鼠给予等体积生理盐水,每日灌胃1次,连续4周。观察大鼠一般状态并测定其体质量及血清脂代谢指标[三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)]水平;应用酶联免疫吸附法测定并计算其血清空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(IRI)及胰岛素敏感指数(ISI);通过苏木素-伊红染色观察其肝组织病理形态;通过碘酸-雪夫(PAS)染色法观察其肝组织糖原表达情况,并计算染色面积;采用Western blot法检测其肝组织中氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)、核因子κB(NF-κB)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠多饮、多食、多尿现象明显,其血清中TC、TG、LDL-C、FINS水平和IRI显著升高(P<0.05),ISI显著降低(P<0.05);肝小叶结构明显紊乱,肝细胞多发变形、肿大,且有许多脂质沉积和脂肪空泡;糖原PAS染色面积显著减小(P<0.05);PPARγ、p-AMPK蛋白表达水平显著降低(P<0.05),NF-κB蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,余甘子水提物高、中剂量组大鼠精神状态、肝组织病理形态及糖原表达情况均明显好转,以上指标水平均显著逆转(P<0.05)。结论 余甘子水提物可能通过激活PPARγ/AMPK/NF-κB信号通路,改善IR模型大鼠的糖脂代谢紊乱、肝功能和IR。

特异性阻断成纤维细胞生长因子受体信号抑制肝星状细胞激活改善小鼠肝纤维化

目的:研究成纤维细胞生长因子受体(FGFR)信号阻断对四氯化碳(CCl_(4))诱导小鼠肝纤维化的作用及其机制。方法:腹腔注射CCl_(4)诱导小鼠肝纤维化模型,给予FGFR抑制剂AZD4547处理,比较给药前后小鼠肝脏质量、血清谷丙转氨酶(ALT)、血清谷草转氨酶(AST)变化;组织学染色分析肝脏胶原沉积、纤维化水平、肝脏炎症及肝星状细胞(HSCs)活化程度等变化;同时采用荧光定量PCR(qPCR)检测肝组织纤维化相关基因α-SMA、Col1a1的mRNA表达水平。选取人HSCs细胞株LX-2给予肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导炎症模型,免疫荧光染色比较AZD4547处理前后Vimentin表达情况,透射电镜观察不同处理组细胞超微结构变化,JC-1染色检测线粒体膜电位,分析细胞中脂联素(ADN)mRNA和蛋白表达,蛋白质印迹(Western blot)法检测JNK和AMPK的磷酸化水平。结果:FGFR抑制剂处理不影响模型小鼠肝功能,但是可显著改善CCl_(4)诱导的肝纤维化和组织炎症反应(P<0.05),减少HSCs活化(P<0.05),损伤部位的ADN可参与补偿性保护作用(P<0.05)。同时FGFR抑制剂明显逆转TNFα诱导的HSCs形态及超微结构变化,缓解LX-2线粒体功能障碍,负反馈刺激细胞中ADN表达增加(P<0.05)及AMPK活化(P<0.05)。结论:FGFR信号阻断能够减轻肝纤维化,其机制可能与抑制HSCs炎症反应及活化有关。

二甲双胍增强结直肠癌细胞放射敏感性

目的:探讨二甲双胍对结直肠癌细胞(SW480、HCT116)的放射敏感性的影响。方法:采用CCK-8法检测二甲双胍、X射线及二甲双胍联合X射线及AMPK抑制剂干预对SW480、HCT116细胞增殖的影响。应用流式细胞仪检测二甲双胍、X射线、二者联合等干预后SW480、HCT116细胞的凋亡情况。应用Western blotting检测二甲双胍、X射线、二者联合处理SW480、HCT116细胞后相关蛋白的表达情况。结果:CCK-8结果显示:二甲双胍对SW480、HCT116细胞的增殖有抑制作用,并呈现浓度、时间依赖;X射线对SW480、HCT116细胞也有增殖抑制作用,8Gy时对SW480、HCT116细胞的增殖抑制作用最显著(P<0.05);在二甲双胍(1 mmol/L)与X射线(8Gy)共同处理SW480、HCT116细胞,联合组对细胞的增殖抑制作用均显著高于单用组(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示:二甲双胍(1mmol/L)与X射线(8Gy)联合诱导细胞凋亡率显著高于二者单用时(P<0.05)。Western blotting结果显示:与单用二甲双胍组(1 mmol/L)、单用X射线组(8Gy)比较,联合组的p-AMPK表达显著增加,而p-m TOR的表达显著下降。结论:二甲双胍能够增加结直肠癌细胞的放射敏感性。

山茱萸提取物对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗与脂肪分解的影响

目的观察山茱萸环烯醚萜苷类提取物对3T3-L1成熟脂肪细胞葡萄糖消耗及异丙肾上腺素(ISO)诱导脂肪分解的影响,探讨其分子机制。方法葡萄糖氧化酶法测定0.04、0.2、1g/L浓度山茱萸提取物干预24h后对脂肪细胞葡萄糖消耗量的影响;比色法测定干预2d后ISO 30min诱导脂肪细胞脂肪分解的甘油释放量;Real-time PCR法检测干预2d后脂肪细胞AMPK、GLUT4和HSL mRNA表达水平,Western blot检测药物对AMPK、ACC蛋白磷酸化的影响。结果 1g/L山茱萸提取物干预成熟脂肪细胞24h后可增加葡萄糖消耗,干预2d后可明显抑制不同浓度ISO诱导的脂肪分解,0.2、0.04g/L提取物可抑制低浓度ISO诱导的脂肪分解;各浓度提取物干预2d可不同程度上调AMPK、GLUT4mRNA水平,下调HSL mRNA表达,1g/L浓度时AMPK、ACC磷酸化水平升高。结论山茱萸提取物可能通过上调AMPK基因表达的相关途径增加3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗并抑制ISO诱导的脂肪分解。

染料木黄酮抑制3T3-L1细胞成脂分化机制

目的：研究染料木黄酮是否通过雌激素受体介导影响3T3-L1前脂肪细胞成脂分化,并探讨其可能的机制。方法：以不同浓度染料木黄酮处理3T3-L1细胞,四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法测定细胞存活率;在3T3-L1前脂肪细胞成脂分化过程中分别加入不同浓度染料木黄酮、染料木黄酮和ICI182780（一种雌激素受体抑制剂）混合物及不同浓度雌二醇,油红染色观察分化结果,测定细胞甘油三酯（triglyceride,TG）含量;染料木黄酮、染料木黄酮和ICI182780混合物及不同浓度雌二醇处理诱导成熟后的脂肪细胞,测定培养液甘油含量;分别用染料木黄酮（30μmol/L）、染料木黄酮（30μmol/L）和ICI182780混合物干预细胞成脂分化,Western blotting法检测细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）、p-ERK、腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK）、p-AMPK、激素敏感性脂肪酶（hormone sensitive lipase,HSL）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase,FAS）蛋白表达量。结果：3T3-L1细胞存活率随染料木黄酮浓度的升高而降低,50-200μmol/L染料木黄酮能抑制细胞生长（P〈0.01）;染料木黄酮能负向调节成脂分化后细胞胞浆内TG含量,在0-50μmol/L浓度范围内呈剂量依赖关系,高剂量雌二醇（100 nmol/L）能下调TG含量;染料木黄酮能促进成熟脂肪细胞脂解,提高细胞培养液甘油浓度;染料木黄酮（30μmol/L）能上调p-AMPK、HSL蛋白表达,下调FAS蛋白表达（P〈0.01）,对ERK、p-ERK、AMPK表达量无明显影响（P〉0.05）。ICI182780（1μmol/L）能部分阻断染料木黄酮（30μmol/L）对p-AMPK的调节作用（P〈0.05）。结论：染料木黄酮能抑制3T3-L1细胞成脂分化,其机制可能是染料木黄酮一方面下调FAS蛋白表达,抑制脂肪合成,另一方面激活AMPK-HSL途径促进脂肪分解;染料木黄酮还可能通过非雌激素受体途径抑制3T3-L1细胞成脂分化。

基于AMPK信号通路探讨花旗泽仁对2型糖尿病糖、脂代谢作用的实验研究

目的:基于AMPK信号通路探讨花旗泽仁对2型糖尿病糖、脂代谢的作用机制。方法:db/m小鼠10只,为空白组;db/db小鼠40只,随机分为4组,每组10只,为模型组、阳性药组(0.2 g/kg)、花旗泽仁高剂量组(32 g/kg)、花旗泽仁低剂量组(16 g/kg)。给药6周后,检测各组小鼠空腹血糖(FPG)及血清中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),Western blot法检测各组小鼠肝脏中单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、促进葡萄糖转运体4(GLUT4)、瘦素(Leptin)、过氧化物酶体增殖活化受体-1a(PGC-1a)蛋白质相对表达量。结果:花旗泽仁可显著降低FPG及血清中TC、TG和HDL-C的含量,上调小鼠肝脏中AMPK、GLUT4、Leptin、PGC-1a蛋白质相对表达量。结论:花旗泽仁可显著改善db/db小鼠糖、脂代谢紊乱,其作用可能与调节肝脏中AMPK相关信号通路有关。

cAMP-PKA信号转导在SO2衍生物舒张血管中作用

目的研究环腺苷酸单磷酸-蛋白激酶A(cAMP-PKA)信号转导系统在SO2衍生物舒张血管中的作用。方法当SO2衍生物诱发该血管环舒张时,采用放射免疫法检测血管环组织环腺苷酸单磷酸(cAMP)、环鸟苷酸单磷酸(cGMP)、前列环素(PGI2)和血栓素(TXA2)的稳定代谢产物6-酮-前列腺素F1a(6-keto-PGF1a,6-keto)和血栓素B2(TXB2)的含量,并用32P掺入底物法测定组织中的蛋白激酶A(PKA)活性。结果SO2衍生物可引起血管组织中cAMP、6-kceto(即PGI2)含量及PKA活性增加,其增加程度与内皮无关;SO2衍生物不能引起血管环cGMP和TXB2含量的变化,但可引起cAMP/cGMP和6-keto/TXB2比值显著升高。结论SO2衍生物可使PGI2-cAMP-PKA信号通路活化,这可能是SO2导致血管舒张的机制之一。

米力农注射液对肾缺血再灌注损伤大鼠PDE3/cAMP/PKA信号通路及肾功能的影响

目的:探究米力农注射液对肾缺血再灌注损伤(IRI)大鼠磷酸二酯酶3(PDE3)/环腺苷酸(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)信号通路及肾功能的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、地塞米松(5 mg/kg)组、米力农低(125μg/kg)、中(250μg/kg)、高(500μg/kg)剂量组,每组12只,除假手术组外,其余各组建立IRI大鼠模型,分组处理后,检测大鼠肾功能指标血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)水平;以苏木精-伊红染色(HE)检测大鼠肾组织病理形态;以试剂盒检测大鼠肾组织SOD、MDA及cAMP水平;以酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清TNF-α,IL-6;以蛋白免疫印迹法检测肾组织PDE3、PKA蛋白表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠肾组织球囊黏连,肾小管结构水肿膨胀,肾上皮细胞变性、坏死,形成空泡,显示严重的病理损伤,Scr、BUN、血清TNF-α、IL-6水平、肾组织MDA水平及PDE3蛋白表达升高(P<0.05),肾组织cAMP、SOD水平及PKA蛋白表达明显降低(P<0.05)。与模型组相比,米力农低、中、高剂量组及地塞米松组大鼠肾组织病理损伤减轻,Scr、BUN、血清TNF-α、IL-6水平、肾组织MDA水平及PDE3蛋白表达降低(P<0.05),cAMP、SOD水平及PKA蛋白表达升高,且米力农各组呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:米力农注射液可下调PKA表达激活cAMP/PKA信号,从而抑制炎症反应,降低氧化应激,加快肾组织缺血再灌注损伤的修复。

白藜芦醇调节SIRT1/AMPK通路抑制大鼠多囊卵巢综合征颗粒细胞内自噬的机制研究

目的:探讨植物提取物白藜芦醇对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠模型颗粒细胞内自噬的影响,并探讨其对SIRT1/AMPK通路的调控作用。方法:体外培养PCOS的SD大鼠卵巢颗粒细胞,用不同浓度白藜芦醇(5、10、20、40μmol/L)处理不同时间(24、48、72 h),MTT法观察卵巢颗粒细胞增殖率的变化;电镜观察细胞内自噬水平的变化;Western blot检测细胞内沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regulator T1,SIRT1)、单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、磷酸化的AMPK(pAMPK)、Beclin1和p62的表达变化,并检测SIRT1特异性抑制剂EX527作用后,细胞内上述蛋白的表达情况。结果:MTT结果显示,白藜芦醇能明显促进颗粒细胞增殖(P<0.05),呈浓度-时间依赖性(P<0.05);电镜结果表明白藜芦醇能降低细胞内的自噬体数量(P<0.05)。Western blot结果显示白藜芦醇可以增强卵巢颗粒细胞内SIRT1和pAMPK的蛋白表达水平(P<0.05),抑制细胞内Beclin1的表达(P<0.05),增加p62的表达;联合SIRT1特异性抑制剂EX527作用后,颗粒细胞内的SIRT1和pAMPK蛋白表达水平明显降低,Beclin1表达明显增加(P<0.05),p62却明显降低(P<0.05)。结论:白藜芦醇能抑制PCOS卵巢颗粒细胞内自噬水平并促进其增殖,这与白藜芦醇激活SITR1/AMPK通路密切相关。

麻黄细辛附子汤对变应性鼻炎小鼠线粒体氧化应激损伤AMPK-PGC-1α通路的影响

目的探讨麻黄细辛附子汤对变应性鼻炎小鼠线粒体氧化应激损伤的影响。方法C57BL/6J小鼠21只,随机抽取5只作为空白组,其余16只进行变应性鼻炎模型制备:用卵蛋白腹腔注射14天,隔日一次进行基础致敏,之后连续7天进行滴鼻激发。变应性鼻炎模型成功7天后,用麻黄细辛附子汤治疗14天后取材。肺组织进行苏木精和伊红染色,显微镜下观察病理学变化;透射电镜观察肺组织线粒体超微结构;比色法检测脾组织超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量;比色法检测脾组织三磷酸腺苷含量、呼吸链复合物Ⅰ、Ⅸ活性;蛋白免疫印迹法检测腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)α2、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phosphorylated AMPK,p-AMPK)Thrl72位点、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(peroxlsome proliferator-activated receptor-γcoactlvator-1α,PGC-1α)的表达。结果(1)与空白组比较,模型组超氧化物歧化酶活性下降(P<0.01)、丙二醛的含量升高(P<0.01);麻黄细辛附子汤治疗组(以下简称“治疗组”)超氧化物歧化酶活性活性升高(P<0.05)、丙二醛的含量下降(P<0.05)。(2)与空白比较,模型组三磷酸腺苷含量减少(P<0.01),呼吸链复合物Ⅰ、Ⅸ活性均降低(P<0.01),治疗组三磷酸腺苷含量增加(P<0.05),呼吸链复合物Ⅰ活性升高(P>0.05),呼吸链复合物Ⅸ活性升高(P<0.05)。(3)与空白组比较,模型组AMPKα2、p-AMPK(Thrl72)、PGC-1α蛋白表达均降低(P<0.01),治疗组AMPKα2蛋白表达升高(P<0.05),p-AMPK(Thrl72)蛋白表达升高(P<0.01),PGC-1α蛋白表达升高(P>0.05)。结论麻黄细辛附子汤具有保护变应性鼻炎小鼠线粒体免受氧化应激损伤的作用,可能与上调AMPKα2、p-AMPK(Thrl72)蛋白表达,升高超氧化物歧化酶活性,降低丙二醛含量,升高呼吸链复合物Ⅸ活性,增加三磷酸腺苷含量有关。

姜黄素调节SREBP和FAS改善非酒精性脂肪性肝病的研究

目的探究姜黄素对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的作用和可能机制。方法18只SD大鼠随机分为对照组、模型组和姜黄素组,每组各6只。模型组和姜黄素组予以高脂高胆固醇食物10 ml/kg灌胃,对照组给予等量生理盐水灌胃。建模成功后,姜黄素组每日给予姜黄素100 mg/kg灌胃,对照组和模型组给予等量的羧甲基纤维素钠。治疗4周后,检测大鼠血清ALT、AST、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)水平,HE染色观察大鼠肝脏组织病理学变化,免疫组织化学法检测大鼠肝组织固醇调节元件结合蛋白(SREBP)和脂肪酸合成酶(FAS)蛋白的表达情况,蛋白免疫印迹法检测沉默调节蛋白6(Sirt6)和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)蛋白表达变化。结果模型组ALT、AST、TG、TC、SREBP和FAS蛋白表达均高于对照组(P均<0.05);姜黄素组ALT、AST、TG、TC、SREBP和FAS蛋白表达均低于模型组(P均<0.05)。模型组Sirt6、p-AMPK蛋白表达均低于对照组(P均<0.05);姜黄素组Sirt6、p-AMPK蛋白表达均高于模型组(P均<0.05)。结论姜黄素可以减轻大鼠NALFD的脂肪沉积和肝损伤,可能与Sirt6、p-AMPK的表达上调相关。

安石榴苷对阿霉素所致心脏毒性的改善作用及其可能机制

目的探讨安石榴苷对阿霉素所致心脏毒性的改善作用,并基于5′-单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)通路及细胞凋亡、氧化应激探讨其可能的作用机制。方法将48只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、阿霉素组、阿霉素+安石榴苷组、阿霉素+安石榴苷+Compound c组,每组12只。除对照组外,给予其他各组小鼠一次性腹腔注射阿霉素。同时,给予阿霉素+安石榴苷组小鼠腹腔注射安石榴苷,给予阿霉素+安石榴苷+Compound c组小鼠腹腔注射安石榴苷后再腹腔注射Compound c,给予对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。干预7 d后,观察各组小鼠心脏组织形态结构,检测各组小鼠心脏功能[左室压力上升最大速率(+dp/dt_(max))、左室压力下降最大速率(-dp/dt_(max))],血清肌钙蛋白T(cTnT)水平,以及心脏组织活性氧簇(ROS)水平和cleaved Caspase-3、细胞色素c(Cyt-c)、gp91^(phox)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、AMPK、Nrf2和血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达水平。结果与对照组比较,阿霉素组小鼠的+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)降低(P<0.05),心肌纤维结构紊乱,出现胞质空泡化,血清cTnT水平升高,心脏组织ROS水平及cleaved Caspase-3、Cyt-c、gp91^(phox)蛋白表达水平上调,SOD2、p-AMPK、Nrf2和HO-1蛋白表达水平下调(均P<0.05);与阿霉素组比较,阿霉素+安石榴苷组小鼠的+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)升高(P<0.05),心肌纤维结构改善,胞质空泡化减少,血清cTnT水平降低,心脏组织ROS水平及cleaved Caspase-3、Cyt-c、gp91^(phox)蛋白表达水平下调,SOD2、p-AMPK、Nrf2和HO-1蛋白表达水平上调(均P<0.05);与阿霉素+安石榴苷组比较,阿霉素+安石榴苷+Compound c组小鼠的+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)降低(P<0.05),心肌纤维结构紊乱,胞质空泡化加重,血清cTnT水平升高,心脏组织ROS水平及cleaved Caspase-3、Cyt-c、gp91^(phox)蛋白表达水平上调,SOD2、p-AMPK、Nrf2和HO-1蛋白表达水平下调(均P<0.05)。4组小鼠AMPK蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论安石榴苷可能通过AMPK/Nrf2通路抑制细胞凋亡和氧化应激损伤,从而减轻阿霉素引起的心脏毒性。

水蛭、三七及其配伍对慢性肾衰竭大鼠肾纤维化作用机制比较

目的:观察水蛭-三七单味药与药对改善慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾脏病理形态及对蛋白磷酸酶2A(PP2A)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响。方法:将55只雄性SD大鼠随机分为正常组11只、造模组44只。正常组常规饲养,造模组进行0.25 g·kg^(-1)·d^(-1)腺嘌呤连续灌胃28 d复制CRF模型。将造模成功后的大鼠随机分为模型组、水蛭组(3 g·kg^(-1)·d^(-1))、三七组(3 g·kg^(-1)·d^(-1))与水蛭-三七组(3 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组9只,正常组和模型组以等体积生理盐水灌胃,连续30 d。实验结束后,测定各组大鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)含量;苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色和电镜观察肾脏病理形态学改变;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾组织PP2A、AMPK、mTOR mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织PP2A、AMPK、磷酸化(p)-AMPK、mTOR、p-mTOR蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肾脏病理结构变化明显,血清SCr、BUN含量明显升高,肾组织PP2A mRNA表达增加,PP2A蛋白表达和p-mTOR/mTOR均明显升高,p-AMPK/AMPK明显降低(P<0.05);与模型组比较,药物干预治疗后各组大鼠肾脏病理形态学明显改善,血清中SCr、BUN含量均明显降低,肾组织PP2A mRNA表达下降,PP2A蛋白表达和p-mTOR/mTOR均明显降低,p-AMPK/AMPK明显升高(P<0.05),水蛭-三七组效果更为明显。正常组、模型组及治疗各组肾组织AMPK、mTOR mRNA表达差异未见统计学意义。结论:水蛭-三七对改善CRF大鼠肾纤维化的疗效明显优于单味药,其对CRF大鼠肾纤维化的改善可能与调节PP2A/AMPK/mTOR信号通路有关。