长链非编码RNA葡萄糖磷酸变位酶样蛋白5反义1通过靶向调控微小RNA-484对乳腺癌细胞的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)葡萄糖磷酸变位酶样蛋白5反义1(PGM5-AS1)靶向微小RNA(miR)-484对乳腺癌细胞增殖、细胞周期分布和凋亡的影响及其临床意义。方法53例乳腺癌患者来源于2016年1月至2018年10月南开大学附属第四中心医院确诊患者。收集患者肿瘤组织和癌旁组织(距离癌灶>5 cm处正常组织)。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测乳腺癌组织、癌旁组织、人乳腺上皮细胞株MCF-10A、乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-231、SKBR-3)中PGM5-AS1和miR-484的表达水平。将MCF-7细胞分为正常对照(NC)、pcDNA、pcDNA-PGM5-AS1、抗miR-con、抗miR-484、pcDNA-PGM5-AS1+miR-con、pcDNA-PGM5-AS1+miR-484组。采用噻唑蓝(MTT)实验、流式细胞术检测细胞的增殖活力、细胞凋亡率以及细胞周期分布。两组比较采用t检验;多组比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果与癌旁组织比较,乳腺癌组织PGM5-AS1表达(0.61±0.26比1.07±0.14)降低,miR-484表达(3.15±0.84比1.04±0.17)升高(t=11.341、17.924,P<0.05),差异有统计学意义。与MCF-10A细胞比较,乳腺癌细胞PGM5-AS1表达(0.28±0.03比1.04±0.07、0.37±0.05比1.04±0.07、0.35±0.04比1.04±0.07)降低,miR-484表达(4.75±0.34比1.07±0.12、3.89±0.48比1.07±0.12、3.58±0.42比1.07±0.12)升高(F=459.394、167.657,P<0.05),差异有统计学意义。与pcDNA组比较,pcDNA-PGM5-AS1组MCF-7细胞存活率[(68.28±4.78)%比(98.63±6.57)%]降低,凋亡率[(13.44±1.28)%比(4.63±0.59)%]、G0~G1期细胞比例[(72.42±3.64)%比(56.80±2.47)%]升高(F=89.925、363.156、81.190,P<0.05),差异有统计学意义。与抗miR-con组比较,抗miR-484组MCF-7细胞存活率[(64.64±7.26)%比(102.49±6.84)%]降低,凋亡率[(19.54±2.88)%比(4.17±0.57)%]、G0~G1期细胞比例[(68.38±2.60)%比(55.16±2.78)%]升高(F=97.967、253.890、59.086,P<0.05),差异有统计学意义。PGM5-AS1靶向负调控miR-484表达。结论PGM5-AS1通过靶向miR-484可抑制乳腺癌细胞增殖,引起细胞凋亡和G0~G1期阻滞。

PGM5-AS1抑制miR-4728-5p对宫颈癌细胞侵袭、转移的影响

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)葡萄糖磷酸变位酶样蛋白5反义(PGM5-AS)1对微小RNA(miRNA)-4728-5p的靶向调控及对宫颈癌细胞侵袭、转移的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测宫颈癌组织中PGM5-AS1表达。在宫颈癌SiHa细胞中转染pcDNA3.1-PGM5-AS1或anti-miR-4728-5p。采用噻唑蓝(MTT)法检测SiHa细胞的增殖,平板克隆形成实验分析细胞的克隆形成,Transwell小室法评估细胞的侵袭迁移,Western印迹测定细胞中细胞增殖抗原Ki67、E钙黏蛋白(E-cadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达。生物信息学预测与双荧光素酶报告实验验证PGM5-AS1对miR-4728-5p的靶向调控。qRT-PCR检测miR-4728-5p的表达。结果 宫颈癌组织中PGM5-AS1的表达量明显减少(P<0.05)。转染pcDNA3.1-PGM5-AS1显著降低SiHa细胞的细胞存活率、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数、Ki67和N-cadherin蛋白水平,并明显提高E-cadherin蛋白水平(P<0.05)。PGM5-AS1靶向抑制miR-4728-5p的表达。转染anti-miR-4728-5p明显减少SiHa细胞的细胞存活率、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数、Ki67和N-cadherin蛋白表达量,而显著增加高E-cadherin蛋白表达量(P<0.05)。结论 PGM5-AS1通过靶向miR-4728-5p,抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭、转移。

应用PCR-SSCP技术检测PGM_1基因型

目的应用PCR-SSCP技术分型PGM1基因型。方法提取156份武汉地区汉族无关个体的血样DNA,分别扩增PGM1基因外显子4和外显子8的多态性靶DNA,用SSCP分析PCR产物,判断基因型。结果两种PCR产物均检出了两个等位基因、三种基因型,DP值分别为0.5620、0.4405。综合外显子4和8的PCR-SSCP结果,分出8种PGM1基因型,DP值为0.7318。应用本法对保存10年的陈旧血痕和精斑PGM1分型成功。结论用PCR-SSCP分型PGM1基因型在法医物证检验中具有实用价值。

应用PCR-RFLP调查武汉汉族人群PGM1基因型

目的PCR RFLP技术调查武汉地区汉族人群PGM 1基因型。方法应用PCR RFLP技术检测PGM 1基因型 ,调查 3 0 0例汉族无关个体。扩增PGM 1基因外显子 4和 8中的靶片段 ,并分别经过Bg1Ⅱ和NlaⅢ限制酶消化。酶切片段经聚丙烯酰胺凝胶电泳分型。结果PGM 1 RFLP技术可分出 9种基因型 ,在汉族人群 ,PGM 1 RFLP系统的个体识别能力为 0 745 0。与传统的PAGE酶型检测比较 ,本法不能区分 1+ 2 -和 1-2 +型 ,不能检测出PGM 1稀有基因 ,但克服了IEF无法分析微量、陈旧材料的缺点 ,对保存 2 5年陈旧血痕及 0 1ng模板DNA均能成功分型。 结论PGM 1

阴道分泌物中PGM1、EsD分型研究

本文利用混合淀粉凝胶同步电泳技术,对532例阴道分泌物PGM1、EsD的分型进行了研究,检出PGM1、EsD的3种常见表型。PGM1在阴道分泌物中的检出率为46.8%（249例）,其中PGM1 1 54%（138例）,PGM1 2-1 34.5%（86例）,PGM1 2 9.6%（24例）。EsD的检出率为45.5%（242例）,其中EsD 1 43%（104例）,E8D 2-1 47.5%（115例）,EsD 2 9.5%（23例）。