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大肠杆菌BL21(DE3)磷酸转乙酰基酶缺陷变株的发酵研究
被引量:
3
1
作者
张惟材
邓兵兵
+2 位作者
彭清忠
黄培堂
朱厚础
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第1期59-63,共5页
研究了E .coliBL2 1(DE3)及其磷酸转乙酰基酶 (PTA)缺陷变株FR5 5发酵过程中菌体生长和有机酸产生情况 ,并以肿瘤坏死因子 (TNF)为外源蛋白表达的模型考察了pta基因缺陷对外源蛋白表达的影响。在摇瓶培养条件下 ,pta变株TNF的表达水平...
研究了E .coliBL2 1(DE3)及其磷酸转乙酰基酶 (PTA)缺陷变株FR5 5发酵过程中菌体生长和有机酸产生情况 ,并以肿瘤坏死因子 (TNF)为外源蛋白表达的模型考察了pta基因缺陷对外源蛋白表达的影响。在摇瓶培养条件下 ,pta变株TNF的表达水平比亲株提高了 2 3 %。在 5L发酵罐中进行了补料分批培养试验 ,在不限制比生长速率的条件下 pta变株能够以较长时间和较高比生长速率保持对数生长 ,最终达到 32 5 g(DCW ) /L的菌密度 ,TNF的总表达量达 2 8g/L ;而在相同条件下 ,以BL2 1(DE3)为受体菌的对照组最高菌密度为 19 5g(DCW ) /L ,TNF总表达量只有 0 84g/L。表明 pta变株对于提高工程菌外源蛋白的表达和实现高密度培养具有一定应用价值。分析了补料分批培养过程中发酵液有机酸组成和含量的动态变化情况 ,发现pta变株乙酸累积水平明显降低(为亲株乙酸累积水平的 42 % )的同时 ,其他几种有机酸 (丙酮酸、乳酸、琥珀酸 )的累积有显著增加的趋势 ,使发酵液中总有机酸浓度增加了 12 3% 。
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关键词
磷酸转乙酰基酶
缺陷变株
高密度培养
有机酸
发酵
下载PDF
职称材料
E.coliBL21(DE3)磷酸转乙酰基酶缺陷变株的筛选及特性
被引量:
1
2
作者
张惟材
邓兵兵
+2 位作者
朱厚础
彭清忠
黄培堂
《军事医学科学院院刊》
CSCD
北大核心
2000年第4期247-250,共4页
目的 :利用大肠杆菌磷酸转乙酰基酶 (PTA)缺陷变株减少工程菌乙酸的产生 ,以利于工程菌高密度培养及外源蛋白表达。方法 :从E .coliBL2 1(DE3)出发筛选PTA变株 ,并对变株的特性进行研究。结果 :筛选得到 5株磷酸转乙酰基酶缺陷变株 ,变...
目的 :利用大肠杆菌磷酸转乙酰基酶 (PTA)缺陷变株减少工程菌乙酸的产生 ,以利于工程菌高密度培养及外源蛋白表达。方法 :从E .coliBL2 1(DE3)出发筛选PTA变株 ,并对变株的特性进行研究。结果 :筛选得到 5株磷酸转乙酰基酶缺陷变株 ,变株的乙酸累积水平为亲株的 1/ 5左右 ,最大比生长速率为亲株的 2 / 3左右。各种有机酸 (乙酸、乳酸、丙酮酸和琥珀酸 )对BL2 1(DE3)及其变株生长影响的考察结果显示 ,有机酸对PTA变株的生长抑制曲线发生了一定变化 ,其中以乙酸影响的变化最为显著。低浓度乙酸对PTA变株的生长不但不具抑制作用反而具有刺激作用 ,而高浓度乙酸对变株生长的抑制作用也明显减弱。
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关键词
大肠杆菌
磷酸转乙酰基酶
缺陷变株
筛选
PTA
原文传递
酪丁酸梭菌代谢工程菌的构建及其发酵特性
被引量:
4
3
作者
杨贵清
刘刚
杨长得
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期170-176,共7页
酪丁酸梭菌Clostridium tyrobutyricum可以利用葡萄糖、木糖、纤维二糖、阿拉伯糖等多种底物进行产酸发酵,主要发酵产物为丁酸和乙酸,是一种适合于木质纤维素同步糖化发酵生产丁酸的菌种。将酪丁酸梭菌乙酸发酵关键基因取代为丁酸发酵...
酪丁酸梭菌Clostridium tyrobutyricum可以利用葡萄糖、木糖、纤维二糖、阿拉伯糖等多种底物进行产酸发酵,主要发酵产物为丁酸和乙酸,是一种适合于木质纤维素同步糖化发酵生产丁酸的菌种。将酪丁酸梭菌乙酸发酵关键基因取代为丁酸发酵关键基因来构建突变株,可使突变株丁酸发酵量增多,乙酸发酵量减少。分别获得来源于丙酮丁醇梭菌的丁酸代谢关键酶基因——乙酰乙酰辅酶A转移酶基因(thl)、来源于酪丁酸梭菌本身的乙酸代谢关键酶基因片段——磷酸转乙酰基酶基因片段(pta)和来源于质粒pIMP1的红霉素抗性基因(em)。将它们与质粒pUC19相连构建为非复制性质粒pUC19-EPT。通过电转化将其导入酪丁酸梭菌中。利用红霉素抗性平板筛选获得转化子,通过PCR验证发现,获得的突变株染色体上pta被thl替换。在以葡萄糖为底物的发酵中,突变株丁酸得率为0.47,较野生型增大了34%,乙酸得率为0.05,较野生型下降了29%。
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关键词
酪丁酸梭菌
丁酸
乙酰乙酰辅
酶
A
转
移
酶
磷酸转乙酰基酶
代谢工程
原文传递
题名
大肠杆菌BL21(DE3)磷酸转乙酰基酶缺陷变株的发酵研究
被引量:
3
1
作者
张惟材
邓兵兵
彭清忠
黄培堂
朱厚础
机构
军事医学科学院生物工程研究所
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第1期59-63,共5页
基金
军事医学科学院创新课题启动基金资助课题!(9910 0 35 )&&
文摘
研究了E .coliBL2 1(DE3)及其磷酸转乙酰基酶 (PTA)缺陷变株FR5 5发酵过程中菌体生长和有机酸产生情况 ,并以肿瘤坏死因子 (TNF)为外源蛋白表达的模型考察了pta基因缺陷对外源蛋白表达的影响。在摇瓶培养条件下 ,pta变株TNF的表达水平比亲株提高了 2 3 %。在 5L发酵罐中进行了补料分批培养试验 ,在不限制比生长速率的条件下 pta变株能够以较长时间和较高比生长速率保持对数生长 ,最终达到 32 5 g(DCW ) /L的菌密度 ,TNF的总表达量达 2 8g/L ;而在相同条件下 ,以BL2 1(DE3)为受体菌的对照组最高菌密度为 19 5g(DCW ) /L ,TNF总表达量只有 0 84g/L。表明 pta变株对于提高工程菌外源蛋白的表达和实现高密度培养具有一定应用价值。分析了补料分批培养过程中发酵液有机酸组成和含量的动态变化情况 ,发现pta变株乙酸累积水平明显降低(为亲株乙酸累积水平的 42 % )的同时 ,其他几种有机酸 (丙酮酸、乳酸、琥珀酸 )的累积有显著增加的趋势 ,使发酵液中总有机酸浓度增加了 12 3% 。
关键词
磷酸转乙酰基酶
缺陷变株
高密度培养
有机酸
发酵
Keywords
recombinant \%E.coli\%, acetate, phosphotransacetylase
分类号
TQ920.1 [轻工技术与工程—发酵工程]
下载PDF
职称材料
题名
E.coliBL21(DE3)磷酸转乙酰基酶缺陷变株的筛选及特性
被引量:
1
2
作者
张惟材
邓兵兵
朱厚础
彭清忠
黄培堂
机构
军事医学科学院生物工程研究所
出处
《军事医学科学院院刊》
CSCD
北大核心
2000年第4期247-250,共4页
基金
军事医学科学院创新课题启动基金
文摘
目的 :利用大肠杆菌磷酸转乙酰基酶 (PTA)缺陷变株减少工程菌乙酸的产生 ,以利于工程菌高密度培养及外源蛋白表达。方法 :从E .coliBL2 1(DE3)出发筛选PTA变株 ,并对变株的特性进行研究。结果 :筛选得到 5株磷酸转乙酰基酶缺陷变株 ,变株的乙酸累积水平为亲株的 1/ 5左右 ,最大比生长速率为亲株的 2 / 3左右。各种有机酸 (乙酸、乳酸、丙酮酸和琥珀酸 )对BL2 1(DE3)及其变株生长影响的考察结果显示 ,有机酸对PTA变株的生长抑制曲线发生了一定变化 ,其中以乙酸影响的变化最为显著。低浓度乙酸对PTA变株的生长不但不具抑制作用反而具有刺激作用 ,而高浓度乙酸对变株生长的抑制作用也明显减弱。
关键词
大肠杆菌
磷酸转乙酰基酶
缺陷变株
筛选
PTA
Keywords
Escherichia coli
acetate
phosphotransacetylase
分类号
Q933 [生物学—微生物学]
原文传递
题名
酪丁酸梭菌代谢工程菌的构建及其发酵特性
被引量:
4
3
作者
杨贵清
刘刚
杨长得
机构
深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室
深圳市罗湖疾病预防控制中心
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期170-176,共7页
文摘
酪丁酸梭菌Clostridium tyrobutyricum可以利用葡萄糖、木糖、纤维二糖、阿拉伯糖等多种底物进行产酸发酵,主要发酵产物为丁酸和乙酸,是一种适合于木质纤维素同步糖化发酵生产丁酸的菌种。将酪丁酸梭菌乙酸发酵关键基因取代为丁酸发酵关键基因来构建突变株,可使突变株丁酸发酵量增多,乙酸发酵量减少。分别获得来源于丙酮丁醇梭菌的丁酸代谢关键酶基因——乙酰乙酰辅酶A转移酶基因(thl)、来源于酪丁酸梭菌本身的乙酸代谢关键酶基因片段——磷酸转乙酰基酶基因片段(pta)和来源于质粒pIMP1的红霉素抗性基因(em)。将它们与质粒pUC19相连构建为非复制性质粒pUC19-EPT。通过电转化将其导入酪丁酸梭菌中。利用红霉素抗性平板筛选获得转化子,通过PCR验证发现,获得的突变株染色体上pta被thl替换。在以葡萄糖为底物的发酵中,突变株丁酸得率为0.47,较野生型增大了34%,乙酸得率为0.05,较野生型下降了29%。
关键词
酪丁酸梭菌
丁酸
乙酰乙酰辅
酶
A
转
移
酶
磷酸转乙酰基酶
代谢工程
Keywords
Clostridium tyrobutyricum
butyric acid
acetyl coenzyme A acetyltransferase
phosphotransacetylase
metabolic engineering
分类号
TQ921.4 [轻工技术与工程—发酵工程]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大肠杆菌BL21(DE3)磷酸转乙酰基酶缺陷变株的发酵研究
张惟材
邓兵兵
彭清忠
黄培堂
朱厚础
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001
3
下载PDF
职称材料
2
E.coliBL21(DE3)磷酸转乙酰基酶缺陷变株的筛选及特性
张惟材
邓兵兵
朱厚础
彭清忠
黄培堂
《军事医学科学院院刊》
CSCD
北大核心
2000
1
原文传递
3
酪丁酸梭菌代谢工程菌的构建及其发酵特性
杨贵清
刘刚
杨长得
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
4
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