肝癌患者血清磷酸酪氨酸蛋白含量

目的研究测定血清PTPr对肝癌诊断的意义。方法用ELISA法测定健康成人和患者血清PTPr,然后分组统计分析。结果 77例健康成人血清PTPr全部低于30μg·L^(-1),其中74例未能测出(即<8);72例非癌症患者中44例未测出,仅5例超过30;肝癌组66例中56例超过30(283.4±535.7),显著高于前两组。测定PTPr对肝癌诊断敏感度达78.8％,特异度达93％,准确度达86.2％,诊断效率达73.3％。文中将PTPr与AFP测定的结果进行了对比,并研究了两项联合检测的意义。结论测定血清PTPr对肝癌诊断具有显著临床价值;其意义可与AFP相当,且与AFP联合应用更有意义。

脑缺血/再灌对海马磷酸酪氨酸蛋白含量的影响及其机制的研究

目的和方法 :采用蒙古沙土鼠双侧颈总动脉结扎 (BCAO)前脑缺血模型 ,研究N 甲基D 门冬氨酸 (NMDA)受体 (NR)非竞争性拮抗剂氯胺酮 (ketamine,KT)、L 型电压门控钙离于通道 (L typevoltagegatedcalciumchannel,L型VGCC)拮抗剂硝苯吡啶 (NifedipineND)及非NR拮抗剂 6 ,7 二硝基喹恶啉上卫四 (6 ,7 dinitroquinoxaline 2 ,3dioneDNQX)对沙土鼠脑缺血及缺血 /再灌海马可溶性 (S3)、突触体 (P2 )和颗粒性 (P3)部分中磷酸酪氨酸蛋白 (p tyr pr)含量变化的影响。 结果 :①缺血 15min ,三部分 (P2 ,P3,S3) p tyr pr含量均下降 ,而S3 部分 p tyr pr含量下降更明显 ;随着脑缺血再灌时间的延长 ,三部分P tyr Pr含量均逐渐升高。S3 部分恢复快 ,P2 与P3 部分相比 ,升高的速度较慢 ,但升高的幅度较大 ,且再灌后期变化不大 ;②脑缺血前腹腔注射KT或ND ,均可部分地拮抗缺血再灌引起的p tyr pr含量的升高 ,而DNQX对此无影响。 结论 :缺血 /再灌引起的p tyr pr变化与NR通道及L型VGCC有关 。

磷酸酪氨酸蛋白专一抗体的制备和纯化

以偶联磷酸化酪氨酸的牛血清白蛋白（ＢＳＡ）作为免疫原免疫兔获得抗血清．自抗血清中分离获得抗体．自酪胺合成磷酸酪胺，并偶联到溴化氰活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ上．抗体经磷酸酪胺－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和柱纯化，所得抗体专一性强，Ｄｏｔｂｌｏｔ显示：抗体仅对酪氨酸磷酸化的蛋白质包括酪氨酸磷酸化的血清白蛋白，溶菌酶，卵清蛋白起抗原抗体反应，而不识别非酪氨酸磷酸化的溶菌酶，卵清蛋白，也不识别作为免疫原的骨架成分ＢＳＡ，也不识别丝氨酸磷酸化的卵清蛋白和苏氨酸磷酸化的卵清蛋白．

消化系统癌症患者血清磷酸酪氨酸蛋白含量

目的研究消化系统各种癌症血清PTPr含量及差异。方法 ELISA测定各种癌症患者血清PTPr。结果 非癌患者72例中阳性(>30ng/ml)仅5例(6.9％);胃癌、肠癌、胆囊癌患者PTPr含量和阳性率与非癌组无显性差异;16例胰癌中6例(37.5％)阳性,PTPr含量和阳性率均显高于其他各组。结论 不同癌症患者血清PTPr含理并非都增加。提示不同癌症的发生发展过程中基因活化的分子机理可能不相同。

钒酸钠对缺氧大鼠海马脑片突触体膜磷酸酪氨酸蛋白及神经元损伤的影响

目的 研究酪氨酸蛋白磷酸酶 (PTP)抑制剂钒酸钠对缺氧海马突触体膜 (synapticplasmamembranes,SPM)磷酸酪氨酸蛋白 (p -tyr-pr)含量及神经元损伤的影响。方法 采用大鼠海马脑片体外缺氧模型 ,建立了p-tyr-pr测定的ELISA法 ,观察了PTP抑制剂钒酸钠对缺氧大鼠海马脑片突触体膜中p -tyr-pr含量及脑片孵育上清液中乳酸脱氢酶 (LDH)漏出量的影响。结果 缺氧引起SPM中p -tyr -pr含量下降 ;缺氧前 15min加入钒酸钠 ,则p -tyr-pr显著增加 ,同时LDH漏出量明显升高 ,且其漏出量增加与钒酸钠浓度呈剂量依赖关系。结论 蛋白酪氨酸磷酸化的增加可能起加重缺血性脑损伤的作用。

尿磷酸酪氨酸蛋白检测在肾脏病的临床意义

应用人工合成了磷酸酪氨酸牛血清白蛋抗原，免疫家兔产生抗体。测定了肾脏病患者尿中磷酸酪氨酸蛋白，发现急，慢性肾炎，慢性肾功能衰竭，肾病综合征Ⅱ型呈阳性反应，而正常人，肾病综合型Ｉ型呈阴性反应。

肾脏病患者尿中磷酸酪氨酸蛋白的检测

应用人工合成的磷酸酪氨酸牛血清白蛋白抗原，免疫家兔产生抗体，测定了肾脏病患者尿中磷酸酪氨酸蛋白。发现急、慢性肾炎，慢性肾功能衰竭，肾病综合征Ⅱ型呈阳性反应；而正常人、肾病综合征Ⅰ型呈阴性反应。

磷酸酪氨酸衔接蛋白1与恶性肿瘤关系的研究进展

磷酸酪氨酸衔接蛋白1(adaptor protein,phosp-hotyrosine interacting with PH domain and leucine Zipper 1,APPL1)基因表达产物与多条细胞信号通路有关,涉及多种细胞的代谢、凋亡等生理活动。APPL1在胰腺中高表达,与脂联素结合,通过胰岛素信号通路调节血糖水平,与胰岛素抵抗及2型糖尿病、代谢综合征有关[1-2]。APPL1还有抗心肌凋亡作用[3],并且与心肌梗死后心力衰竭的发生有关联[4]。葛晓萍等[5]发现乙型肝炎后肝硬化患者血液APPL1水平明显高于正常人,并且随Child分级升高而升高,提示APPL1水平反映肝脏储备功能,可以作为评估肝纤维化的一项指标。Chen等[6]发现蛋白激酶B介导下的APPL1对肾缺血再灌注小鼠的肾慢性纤维化有保护作用。除了上述疾病,近年逐渐发现APPL1与多种恶性肿瘤的发生、转移、复发密切相关,本文拟对APPL1与多种恶性肿瘤相关性的研究进行综述,为后续对其研究提供参考。

含Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2变构抑制剂缓解放射性肺炎的作用效应与机制研究

目的探索含Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2(Src homology 2 domain-containing protein tyrosine phosphatase 2,SHP2)变构抑制剂对放射性肺炎的缓解作用及其可能的机制。方法以50 Gy的剂量进行双肺辐照建立辐射诱导放射性肺炎小鼠模型,分别提取SHP2变构位点抑制剂SHP099辐照组(辐照并予以SHP099灌胃)、辐照组(辐照未灌胃)、SHP099未辐照组(未辐照并予以SHP099灌胃)和对照组(未辐照且未灌胃)小鼠的肺组织制作HE切片。通过实时荧光定量聚合酶链反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测4组小鼠肺组织内炎性反应因子诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的mRNA水平。RT-qPCR检测小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7和骨髓原代巨噬细胞(bone marrow derived macrophage,BMDM)中iNOS、TNF-α和IL-6的表达情况。收集BMDM培养上清采用酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测TNF-α和IL-6的分泌情况。通过流式细胞术分析辐照后不同培养时间后RAW264.7和BMDM细胞产生活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平。采用RT-qPCR检测10 Gy辐照后24 h RAW264.7细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶(NADPH oxidase,NOX)各亚基和同系物表达水平变化。采用蛋白质印迹法检测RAW264.7细胞中NOX4表达水平。结果通过SHP099灌胃辐射小鼠模型发现,SHP099预处理的辐照小鼠肺部损伤减弱,肺组织内炎性反应因子iNOS、TNF-α和IL-6的mRNA表达均下调(均P<0.05)。10 mmol/L SHP099预处理24 h后,RAW264.7和BMDM细胞因10 Gy辐照引起的上升的炎性反应因子iNOS、TNF-α和IL-6 mRNA表达均下降(均P<0.05)。收集BMDM细胞的培养上清显示,SHP099预处理也可减少辐照后TNF-α和IL-6蛋白的分泌(均P<0.05)。SHP099预处理也可降低10 Gy辐照后30 min引起的RAW264.7和BMDM细胞升高的ROS水平(均P<0.05)。采用RT-qPCR检测RAW264.7细胞10 Gy辐照后24 h NOX各个亚基和同系物的表达变化情况显示,p22^(phox)、p40^(phox)、Rac1、NOX2、NOX3、NOX4和NOX5表达均上调(均P<0.05),其中NOX4上调最多;而SHP099预处理可减少辐照后RAW264.7细胞的NOX4蛋白表达(P<0.01)。结论SHP2变构抑制剂可以缓解辐照诱导的小鼠肺部炎性反应。SHP2变构抑制剂可能是通过抑制巨噬细胞中NOX4的表达降低ROS产生,从而减少炎性反应因子分泌。

蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂的研究进展

蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)作为一类调节细胞活动的重要蛋白,与目前一些常见疾病,如癌症、代谢性疾病、心血管疾病、精神性疾病等密切相关。研究表明,抑制这类蛋白可以有效控制上述相关疾病的发生与发展。文章按不同亚型分类对主要蛋白抑制剂的研究进展进行介绍,以期为蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂的开发提供参考,进一步指导相关药物开发。

华泽兰根化学成分及其抑制α-葡萄糖苷酶和蛋白酪氨酸磷酸酶1B的活性研究

为研究华泽兰Eupatorium chinense根部的化学成分及其抗糖尿病活性,采用正相硅胶柱色谱、薄层色谱、凝胶柱色谱及半制备高效液相色谱等色谱方法,从华泽兰根部分离得到15个单体化合物,并通过现代波谱技术鉴定其结构分别为:8 S-9-hydroxythymol(1)、8,10-dehydro-9-hydroxythymol(2)、1-[4-hydroxy-3-methoxy-5-(3-methylbut-3-en-1-ynyl)phenyl]wethanone(3)、speciosin L(4)、(R)-8-hydroxy-9-isobutyryloxythymol(5)、1,4-[13C]-1,2,3,4-tetrahydro-5-naphthyl-amin(6)、eupatriol(7)、3β,6-hydroxytremetone(8)、泽兰酮(9)、(2 R,3 S)-5-acetyl-6-hydroxyl-2-isopropenyl-3-ethoxy-dihydrofuran(10)、(2 R,3 S)-5-乙酰基-6-羟基-2-异丙烯基-3-乙氧基-苯并二氢呋喃(11)、6-羟基-2 H-苯并呋喃-3-酮(12)、3,5-dimethyl-2,3-dihydrobenzofuran(13)、2,4-bis-(5-acetyl-6-hydroxy-benzofuran-2-yl)-4-methyl-pent-1-ene(14)、1,1′-[[(2 E)-4-methylpent-2-ene-2,4-diyl]bis(6-hydroxy-1-benzofuran-2,5-diyl)]diethanone(15)。其中化合物3为首次从泽兰属植物中分离获得,化合物14为首次从华泽兰中分离获得。采用对硝基苯基-β-吡喃半乳糖苷法与对硝基苯磷酸盐法分别测定所有化合物对诱导糖尿病发生的α-葡萄糖苷酶和蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)的抑制活性进行评价,化合物3、4、5和12具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其IC 50值分别为3.7、10.1、21.3、22.5μg/mL,其中化合物3的抑制活性优于良性药阿卡波糖(4.6μg/mL);化合物1、3、4和12具有良好的PTP1B抑制活性,其IC 50值分别为15.2、8.6、2.2和21.2μg/mL,其中化合物3的抑制活性优于良性药齐墩果酸(12.5μg/mL),化合物4的抑制活性优于阳性药正钒酸钠(7.5μg/mL)和齐墩果酸(12.5μg/mL)。研究表明,炔类化合物3和4均具有较明显的α-葡萄糖苷酶和PTP1B抑制活性。利用分子对接技术计算化合物3和4分别与α-葡萄糖苷酶和PTP1B的相互作用,结果表明化合物3和4与α-葡萄糖苷酶和PTP1B均具有较强的结合力。本论文首次采用双靶点对华泽兰根部的化学成分进行了抗糖尿病活性及构效研究,发现化合物3和4可作为抗糖尿病的先导化合物。

以蛋白酪氨酸磷酸酶1B为作用靶点的胰岛素增敏剂的研究进展

糖尿病是全球重要公共卫生问题之一,也是导致高致残率、高致死率的主要病种之一。胰岛素抵抗是2型糖尿病的主要发病机制。蛋白酪氨酸磷酸酶1B(protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B)可使胰岛素受体和胰岛素受体底物去磷酸化,是胰岛素信号通路的关键负调控因子,亦是2型糖尿病治疗的有效作用靶点。近年来,开发PTP1B抑制剂以治疗胰岛素抵抗已成为糖尿病研究领域中的热点之一。本文介绍以PTP1B为作用靶点的胰岛素增敏剂的研究进展。

蛋白酪氨酸磷酸酶受体J在非小细胞肺癌中的研究进展

非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌的常见类型,随着现代医学技术的发展,癌症的诊断和治疗已进入“精准医学”的发展阶段,然而肺癌患者5年生存率依然很低。蛋白酪氨酸磷酸化参与肿瘤发生发展过程,蛋白酪氨酸磷酸酶受体J(PTPRJ)作为酪氨酸磷酸酶家族中的一员,通过对蛋白的去磷酸化作用抑制NSCLC发病的多种机制,包括抑制肿瘤细胞的增殖、迁移、调控肿瘤发生的上游信号通路等,是新的肿瘤抑制因子。同时,在临床上,PTPRJ具有独立预测NSCLC患者死亡风险的能力,与患者肿瘤分期和临床特征相关,是NSCLC预后评估和治疗的新工具。

食源性蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制剂的功能意义和结构-活性关系

蛋白酪氨酸磷酸酶1B(protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B)在胰岛素和瘦素信号通路中发挥着关键的负调节作用,是治疗2型糖尿病和肥胖症的潜在靶点。天然产物因其结构的多样性,能够针对不同的靶点和途径对糖尿病或其并发症发挥独特的预防和治疗效果。近年来,多种食源性天然产物已被报道具有PTP1B抑制活性。本文主要就PTP1B的作用机制和食源性天然PTP1B抑制剂的研究进展进行了综述,以期为进一步开展PTP1B抑制剂的研究工作以及开发新型PTP1B抑制剂或降糖功能食品提供参考。

酶联免疫试验检测磷酸化酪氨酸蛋白

国外研究结果表明，细胞酪氨酸蛋白激酶(PTK)活性增强与蛋白质上酪氨酸磷酸化及脱磷酸是细胞活化增殖，转化及恶变的信号传递枢钮［1-6］。磷酸酪氨酸蛋白(o-phosph o-L-tyrosine pro-tein,PTPr)是PTK催化反应产物。检测PTPr对研究PTK功能十分重要，对肿瘤发生，生长及防治研究可能有意义。我们探索建立了PTPrRLISA检测方法，报告如下。

两种真菌多糖对HL-60细胞酪氨酸蛋白磷酸化作用的影响

目的 :研究猪苓多糖和茯苓多糖对人早幼粒白血病细胞 (HL 6 0 )酪氨酸蛋白磷酸化作用的影响。方法 :用一定浓度的药物处理体外培养的HL 6 0细胞。用放射免疫法测定经过培养 12 ,2 4,48,72和 12 0h对照组和药物处理组细胞浆和膜部分的酪氨酸蛋白激酶 (TPK)和磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶 (PTPP)的活力 ,比较酶活力变化情况。结果 :两种多糖对胞浆和膜部分TPK活力均有不同程度的抑制作用。而对两部分PTPP的活力均有不同程度的激活作用。结论 :两种真菌多糖均可使HL 6 0细胞酪氨酸蛋白磷酸化水平下降 ,提示两种多糖抗肿瘤作用的机制可能与酪氨酸蛋白磷酸化作用有关。

一种鰑鱼诺卡氏菌酪氨酸蛋白磷酸酶基因的克隆及功能初步研究

這鱼诺卡氏菌是鱼类诺卡氏菌病的主要病原,可导致鱼类慢性系统性肉芽肿疾病。這鱼诺卡氏菌全基因组序列分析发现了一个酪氨酸蛋白磷酸酶(protein tyrosine phosphtase,PTP)基因,生物信息学分析显示该基因很可能编码一个靶向定位于宿主细胞线粒体的分泌蛋白。本实验对這鱼诺卡氏菌PTP进行了基因克隆、分泌蛋白鉴定、亚细胞定位、过表达和线粒体膜电位检测,结果显示,在這鱼诺卡氏菌胞外产物中质谱鉴定到了PTP肽段,证实其为分泌蛋白。亚细胞定位研究观察到PTP-GFP融合蛋白均匀地分布在FHM细胞中,与线粒体分布不重合,说明這鱼诺卡氏菌PTP蛋白并未靶向定位于线粒体。亚细胞定位和过表达研究都显示PTP蛋白在FHM细胞中表达后,细胞核出现固缩浓染、凋亡小体等明显的细胞凋亡特征。通过线粒体膜电位检测表明,在pcDNA-PTP转染后48 h,线粒体跨膜电位被明显破坏,说明這鱼诺卡氏菌PTP很可能是一种可诱导细胞凋亡的细菌蛋白。通过对這鱼诺卡氏菌PTP开展基因克隆和功能初步研究,为进一步揭示该基因的功能和深入了解這鱼诺卡氏菌的分子致病机理奠定了基础。

盾叶木中具蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制活性的三萜类成分

目的研究盾叶木Macaranga adenantha枝的化学成分并进行蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制活性和人肿瘤细胞毒活性筛选。方法用硅胶和凝胶色谱分离化合物,用波谱学等方法鉴定结构;分别以体外酶学方法和MTT法测定化合物PTP1B抑制活性和细胞毒活性。结果从盾叶木乙醇提取物中分离得到8个化合物,分别鉴定为:齐墩果酸(Ⅰ)、3β-乙酰基齐墩果酸(Ⅱ)、3β-乙酰基齐墩果酸甲酯(Ⅲ)、3β,28-二羟基-12-烯-齐墩果烷(Ⅳ)、2α,3β-二羟基齐墩果酸(Ⅴ)、3β-乙酰氧基-11-烯-齐墩果烷-28,13-内酯(Ⅵ)、3β-乙酰氧基-11α,12α-环氧-齐墩果烷-28,13-内酯(Ⅶ)、3β-O-乙酰基木油醇酸(Ⅷ)。化合物Ⅰ, Ⅳ, Ⅴ抑制PTP1B酶的IC50分别为(7.2±0.3)、(12.4±5.5)、(6.2±0.9)、(7.6±1.7)μg/mL,所有化合物抑制几种肿瘤细胞的IC50均大于10μg/mL。结论8个化合物均为首次从该属植物中得到。化合物、、、为PTP1B酶抑制剂,所有化合物均无细胞毒活性。