红景天苷对类风湿关节炎患者血清脯氨酸羟化酶2及蛋白磷酸酯酶2A和丝裂原活化蛋白激酶表达水平的影响

目的分析红景天苷对类风湿关节炎(RA)患者血清脯氨酸羟化酶2(PHD2)及蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达水平的影响。方法选取青海省中医院2022年12月至2023年7月收治的RA患者96例。采用随机数字表法分为对照组和观察组,各48例。对照组采用常规西医治疗,观察组在常规西医治疗的同时予以红景天苷治疗,2组均治疗3个月。比较治疗前后2组中医证候评分、临床症状与体征、实验室检查指标[包括红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(anti-CCP)]、临床疗效,健康状况评定量表(HAQ)与28个关节疾病活动度评估(DAS28)评分,血清PHD2、PP2A、MAPK水平与基因表达,不良反应。结果治疗后2组主症、次症评分均低于治疗前且观察组均低于对照组(均P<0.05)。治疗后观察组临床症状与体征均轻于对照组,ESR、CRP、RF和anti-CCP水平均低于对照组(均P<0.05)。观察组总有效率高于对照组[95.8%(46/48)比80.4%(37/46)](P=0.020)。治疗后观察组HAQ与DAS28评分均低于对照组[(5.0±1.0)分比(7.2±1.2)分、(3.1±0.5)分比(4.1±0.7)分](t=9.528、7.444,均P<0.001)。治疗后观察组PHD2、MAPK水平及基因表达均低于对照组,PP2A水平及基因表达均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。2组不良反应发生率差异无统计学意义(P=0.528)。结论红景天苷治疗RA可增强临床效果、减轻患者症状、改善实验室指标且安全。推测与降低PHD2和MAPK表达、增加PP2A表达有关。

血清蛋白磷酸酯酶2A水平与宫颈癌的相关性研究

目的宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,本研究拟在血清学和组织学水平共同探讨宫颈癌患者蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)水平的变化。方法分别选择同期宫颈无病变健康体检者(健康对照组)30例,高危型人乳头瘤病毒(hsHPV)感染患者17例和宫颈癌患者23例,采用酶联免疫吸附试验检测血清PP2A蛋白表达水平;另选取健康对照者24例,hsHPV感染患者18例和宫颈癌患者14例,采用酶活试剂盒检测组织PP2A活性。结果与健康对照组相比,hsHPV感染组血清PP2A水平下降,差异有统计学意义(P<0.05),同时组织PP2A酶活性下调,PP2A活性仅为健康对照组的66%,差异有统计学意义(P<0.05);宫颈癌组血清PP2A水平下降明显,差异有统计学意义(P<0.05),同时组织酶活性显著下调,PP2A酶活性仅为健康对照组的45%,差异有统计学意义(P<0.05)。与hsHPV感染组相比,宫颈癌组患者血清PP2A水平下调差异有统计学意义(P<0.05),组织酶活性水平下调差异也有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌患者血清PP2A蛋白表达水平显著下调,同时组织学水平PP2A酶活性亦下降。该研究结果为宫颈癌发病机制提供了新的资料,为宫颈癌的早期诊断提供了新的靶标分子。

阻断酪氨酸蛋白激酶Src表达对蛋白磷酸酯酶2A活性和tau蛋白磷酸化的影响

目的:研究细胞内酪氨酸蛋白激酶Src对蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)酪氨酸307位点(Y307)磷酸化和活性以及tau蛋白磷酸化的影响,为阿尔茨海默病脑内PP2A活性下调和tau蛋白异常磷酸化机制提供实验依据。方法:体外培养小鼠成神经瘤N2a细胞,转染特异性阻断Src表达的SiRNA,检测转染不同时间点PP2A Y307的磷酸化水平、PP2A的活性以及tau蛋白在不同位点的磷酸化水平。结果:转染Src SiRNA 12 h时Src蛋白水平显著降低,PP2A Y307的磷酸化水平下降,但总的PP2A蛋白水平也降低,伴随PP2A活性下调,tau蛋白在Ser198/199/202位点发生过度磷酸化。结论:细胞内PP2A活性的调节受多种因素的影响,单纯阻断上游Src的表达可降低PP2A的活性,并导致tau蛋白的过度磷酸化。

蛋白磷酸酯酶2A通过MAPK信号通路抑制宫颈癌细胞侵袭

目的:探讨蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)在宫颈癌细胞侵袭中的作用及其可能机制。方法:常规培养Hela细胞,通过药物或基因调节PP2A水平,药物实验中将Hela细胞分为3组,即正常对照组(DMSO处理,n=6)、DES组(10nM PP2A激动剂DES处理,n=6)和OA组(10nM PP2A抑制剂OA处理,n=6);质粒转染组中将Hela细胞分为对照组(DsRed组,n=6)、wtPP2A组(n=6)和siPP2A组(n=6),按分组要求转染相应质粒。采用小室穿孔实验观察其对Hela细胞侵袭的影响;蛋白免疫印迹实验(Western Blot)观察其对MAPK信号通路的作用。结果:研究发现上调PP2A可显著抑制Hela细胞侵袭,而下调PP2A则显著促进Hela细胞侵袭;激活PP2A可去磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶家族(p-JNK, p-p38和p-ERK MAPK)及金属蛋白酶9(MMP-9)。结论:PP2A可能通过去磷酸化MAPK信号通路下调MMP-9起调节宫颈癌细胞侵袭的作用。

脑力苏胶囊对拟VD大鼠行为学及磷酸酯酶2A的影响

目的:研究脑力苏胶囊改善VD模型大鼠认知障碍的作用机制。方法:采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD大鼠模型,通过Morris水迷宫观察各组大鼠的学习记忆改善情况并采用免疫组化方法检测海马区磷酸酯酶2A的表达情况。结果:喜得镇组及脑力苏高、中、低剂量组大鼠学习记忆能力与模型对照组比较,均有明显改善(P<0.01),PP-2A表达增加(P<0.01)。结论:脑力苏能明显改善VD大鼠的学习记忆能力,对缺血引起的VD具有益智作用,其作用机制可能与增强缺血后PP-2A的表达有关;脑力苏虽能改善大鼠的学习记忆能力,但不能使其恢复至正常。

上调蛋白磷酸酯酶2A水平可显著抑制宫颈癌细胞迁移

目的:探讨蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)在宫颈癌迁移中的作用。方法:培养Hela宫颈癌细胞,通过药物或质粒转染干预PP2A水平。药物实验中将Hela细胞分为3组,即正常对照组(DMSO处理,n=6),DES组(10nM PP2A激动剂DES处理,n=6)和OA组(10nM PP2A抑制剂OA处理,n=6);质粒转染实验中将Hela细胞分为DsRed-vector组(n=6),DsRed-PP2Ac组(n=6)和DsRed-siPP2Ac组(n=6),按分组要求转染相应质粒。采用划痕实验观察各组不同时间点(药物0h、24h、48h;转染0h、48h)Hela细胞迁移情况并比较组间差异。结果:药物或基因上调PP2A可显著抑制宫颈癌细胞的迁移,而药物或基因下调PP2A水平则明显促进宫颈癌细胞的迁移。结论:PP2A在宫颈癌的发展中起重要的作用,该研究可为宫颈癌的发展提供新的分子机制,亦可为宫颈癌临床药物的开发提供新的靶点。

血清蛋白磷酸酯酶2A水平测定在宫颈癌诊断中的应用

目的分析宫颈癌患者血清蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)的水平及活性变化,为临床早期诊断提供参考依据。方法选取该院就诊的32例宫颈癌患者和高危人乳头瘤病毒(hs HPV)感染者30例,同期选取体检健康女性30名作为对照组,采用酶联免疫吸附法测定入组对象PP2A水平,并通过酶活性测定试剂盒对PP2A活性进行测定。结果 hs HPV组和宫颈癌组血清PP2A水平及活性显著低于对照组(P<0.05),且宫颈癌组PP2A水平及活性显著低于hs HPV组(P<0.05)。结论宫颈癌患者血清PP2A表达水平和酶活性均下降,PP2A可作为临床早期诊断宫颈癌的实验室检查潜在标志物。

蛋白磷酸酯酶2A调节微管相关蛋白1b的磷酸化

微管相关蛋白MAP1b的生物学活性受其磷酸化修饰的调节 ,后者则受相应的蛋白激酶和蛋白磷酸酯酶(PP)调控 .为研究蛋白磷酸酯酶在脑内对MAP1b磷酸化的调控作用 ,采用有代谢活性的大鼠脑片作为模型 ,分别应用冈田酸 (okadaicacid)和cyclosporinA选择性地抑制PP2A和PP2B活性 ,来研究其对脑内蛋白磷酸酯酶MAP1b磷酸化的调控 .采用特异性的MAP1bⅠ型磷酸化依赖性抗体 5 2 2和免疫印迹技术检测MAP1bⅠ型磷酸化 .结果表明 ,当PP2A被okadaicacid选择性抑制后 ,MAP1bⅠ型磷酸化明显增加 .而PP2B被选择性地抑制后 ,MAP1b磷酸化的变化不大 .免疫组化染色显示 ,MAP1b广泛分布于鼠大脑神经元和突起中 ,与对照组相比 ,在PP2A抑制的脑片中抗体 5 2 2的免疫活性在神经元中明显升高 .上述结果表明 ,PP2A是脑中调控MAP1bⅠ型磷酸化的主要蛋白磷酸酯酶 .

水稻磷酸酯酶2A基因蛋白的原核表达载体构建、表达和纯化

利用PCR技术,从水稻品种日本晴幼穗cDNA中扩增磷酸酯酶2A的基因ORF片段,并将其克隆入原核表达载体pGEX-6p-1中构建重组质粒pGEX-6p-1-PP-2A,经限制性内切酶酶切鉴定以及测序结果表明成功构建了原核表达载体pGEX-6p-1-PP2A,转化E.coliJM109并通过终浓度为0.4mmol/L的IPTG诱导,表达出39kD的GST-PP2A融合蛋白,并用蛋白亲和层析柱GSTrap FF对表达产物进行纯化,为下一步的研究打下了实验基础。

血清蛋白磷酸酯酶2A水平与卵巢癌患病的相关性研究

目的在血清学水平探讨卵巢癌患者蛋白磷酸酯酶2A(protein phosphatase,PP2A)蛋白表达水平及其与卵巢癌肿瘤标志物糖链抗原125(sugar chain antigen 125,CA125)和人附睾蛋白4(human epididymal protein 4,HE4)水平的相关性。方法分别选取正常对照组30例,卵巢囊肿15例,卵巢癌患者20例进行研究。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清PP2A蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,卵巢囊肿组血清PP2A水平下降,差异有统计学意义(P<0.05),同时PP2A酶活性下调,PP2A活性仅为正常对照组的80%,差异有统计学意义(P<0.05);卵巢癌组血清PP2A水平下降明显,差异有统计学意义(P<0.01),同时酶活性显著下调,PP2A酶活性仅为正常组的65%,差异有统计学意义(P<0.01)。与卵巢囊肿组相比,卵巢癌组血清PP2A水平下调,差异有统计学意义(P<0.05),酶活性水平下调,差异有统计学意义(P<0.05)。进一步做血清PP2A水平与肿瘤标志物相关性分析,结果显示无论是卵巢囊肿组还是卵巢癌组PP2A与CA125及HE4均无相关性,仅卵巢癌组中CA125和HE4呈正相关(P<0.01)。结论卵巢癌患者血清中PP2A蛋白表达水平显著下降,血清中PP2A水平与CA125及HE4均无相关性,提示血清中PP2A水平可能为卵巢癌独立的危险因素,检测患者血清PP2A水平可早期预测卵巢癌。

下调蛋白磷酸酯酶2A活性可抑制海马神经元轴突生长

目的探讨下调蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)活性对胎鼠海马神经元轴突生成的影响。方法选取体外培养原代海马神经元为研究模型;采用PP2A抑制剂OA下调PP2A活性,最后采用荧光双标检测PP2A对神经元轴突的影响。结果对照组海马神经元培养至72h时神经元轴突已经形成,而OA处理后的神经元轴突生长明显受到抑制;OA处理后的神经元轴突长度分别为对照组(DMSO)的47%,单个神经元的平均轴突数目也从正常1.1/neuron下降到0.6/neuron。结论下调PP2A活性能抑制原代海马神经元轴突生成,提示PP2A在海马神经元轴突生成中起重要作用。

黄腐酸及人参皂苷Rg1对蛋白磷酸酯酶2A影响的初步研究

要:利用分子模拟平台Discovery Studio 4.5研究分析黄腐酸和三七中人参皂苷Rg1分别对蛋白磷酸酯酶2A(Protein phosphatase2A,PP2A)的影响。结果表明,人参皂苷Rg1通过促进PP2A的活性以减少tau蛋白的过度磷酸化,从而防治阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)。采用CDOCKER对接技术对黄腐酸和人参皂苷Rg1分别与PP2A结合研究表明,黄腐酸也可能与PP2A发生作用,减少tau蛋白的过度磷酸化。与人参皂苷Rg1和PP2A形成的复合物对接结果表明,黄腐酸可能促进人参皂苷Rg1与PP2A的结合,从而增强PP2A的药理活性。

异丙酚、人参皂苷Rg-1、蛋白磷酸酯酶-2A和氯化锂对大鼠电休克后学习记忆及海马内谷氨酸含量的影响

目的观察异丙酚、人参皂苷Rg-1、蛋白磷酸酯酶-2A(PP-2A)和氯化锂对电休克(ECT)后嗅球切除抑郁模型大鼠学习记忆和海马内谷氨酸(Glu)浓度的影响。方法按随机单位组设2个干预因素,即ECT干预(2水平:无处置、施行1疗程ECT)和药物干预(5水平:海马CA1区分别微量注射生理盐水、异丙酚、人参皂苷Rg-1、PP-2A、氯化锂,20 g/L)的所有组合(2×5析因设计)。全部ECT处置结束24 h内开始Morris水迷宫检测,高效液相色谱法检测Glu在海马内的浓度。结果单独使用异丙酚或ECT均可造成学习记忆障碍,而二者联合使用则会缓解ECT后的学习记忆障碍;人参皂苷Rg-1、PP-2A和氯化锂对学习记忆无明显影响,但与ECT合用则可改善ECT后的学习记忆;ECT干预与药物干预存在交互作用。ECT可明显增加海马中Glu浓度;异丙酚和人参皂苷Rg-1在ECT前后均可减少Glu浓度;且ECT干预与药物干预存在交互作用。PP-2A和氯化锂在ECT前后对Glu浓度无明显影响。结论 ECT可使海马Glu浓度升高,导致学习记忆障碍;异丙酚与人参皂苷Rg-1、PP-2A和氯化锂均可改善ECT后的学习记忆;前两者与降低海马中Glu浓度有关,后两者与此无关。

人肝再生磷酸酯酶2(PRL-2)的原核表达及其鸡卵黄抗体的制备

目的 :原核表达人肝再生磷酸酯酶 2 (PRL 2 )与谷胱甘肽S转移酶 (GST)和 6个串联组氨酸 (6×His)的融合蛋白 ,并制备GST PRL 2特异性鸡卵黄抗体。方法 :将人PRL 2cDNA的全长蛋白编码序列 ,克隆入两种原核表达载体pGEX 4T 2和pET2 1a中 ,在大肠杆菌BL2 1中诱导表达融合蛋白。用Glu tathioneSepharose 4B和Ni NTAagarose亲和柱分别纯化目的蛋白。以纯化的GST PRL 2融合蛋白免疫产蛋母鸡制备多克隆抗体 ,应用 6×His PRL 2对抗体进行亲和层析纯化 ,纯化产物用Westernblot进行分析。结果 :得到高表达量的融合蛋白 ,经亲和层析柱纯化后获得较高纯度的GST PRL 2和 6×HisPRL 2融合蛋白。以GST PRL 2融合蛋白免疫鸡得到抗PRL 2的多克隆抗体 ,Westernblot证实 ,经 6×HisPRL 2亲和层析纯化的抗体 ,能够识别 6×His PRL 2和GST PRL 2融合蛋白 ,但不同GST蛋白起反应 ,表明具有较高的特异性。结论 :利用原核表达的人PRL 2融合蛋白制备的抗PRL 2多克隆抗体具有较好的特异性 ,为研究PRL

轻度认知障碍患者淋巴细胞蛋白磷酸酯酶-2A的变化

【目的】探讨轻度认知功能障碍(mild cognitive impairment,MCI)患者淋巴细胞蛋白磷酸酯酶-2A(protein phosphotase-2 A,PP-2 A)的变化。【方法】用32P放射性标记法检测了PP-2 A的活性,并用免疫印迹法检测不同病程MCI患者及正常对照组血淋巴细胞PP-2 A的表达。【结果】1年MCI患者淋巴细胞PP-2 A的活性(0.91±0.06)与对照组(1.02±0.08)比较有降低(P<0.05),2年MCI(0.83±0.07)和3年MCI(0.85±0.07)患者淋巴细胞PP-2 A的活性与对照组比较有明显降低(P<0.01,P<0.01),与1年MCI的比较虽有降低的趋势,但无统计学意义(P>0.05)。1年MCI组淋巴细胞PP-2 A的表达(0.95±0.06)与对照组(1.01±0.07)比较无明显降低(P>0.05),而2年MCI组(0.85±0.07)及3年MCI组(0.86±0.06)的PP-2 A表达与对照组相比明显降低(P<0.01,P<0.01),1年MCI组与2年MCI组的PP-2 A的表达无明显差别(P>0.05),与3年MCI组也无差别(P>0.05)。【结论】MCI患者淋巴细胞PP-2 A的活性及表达降低,对MCI的诊断可能有参考价值。

轻度认知障碍患者血浆蛋白磷酸酯酶-2A的活性变化

目的:探讨轻度认知功能障碍(Mild Cognitive Impairmem,MCI)患者血浆蛋白磷酸酯酶-2A(protein phosphotaae-2A,PP-2A)的活性变化。方法:用放射性配体结合实验检测不同病程MCI患者及正常老年人对照组血浆PP-2A的活性变化。结果:1年MCI组(0.94±0.09)PP-2A的活性与对照组(1.01±0.08)比较无明显降低(P>0.05),而2年MCI组(0.89±0.07)及3年MCI组(0.86±0.10)血浆PP-2A活性与对照组相比明显降低(P<0.05,P<0.01),与1年MCI组的PP-2A的活性比较无明显差别(P>0.05)。结论:病程延长的MCI患者血浆PP-2A的活性降低,对MCI的诊断可能有潜在的价值。

血清M型磷酸酯酶A2受体联合肾组织IgG 4的检测对成人特发性膜性肾病的诊断价值及临床意义

目的探讨血清M型磷酸酯酶A2受体(PLA2R)联合肾组织免疫球蛋白4(IgG 4)的检测对成人特发性膜性肾病(IMN)的诊断价值及临床意义。方法回顾性收集2017年4月~2019年4月新余市人民医院收治的70例膜性肾病患者的临床资料,依据发病原因分为IMN组(30例)与继发性膜性肾病(SMN)组(40例)。所有患者均接受血清PLA2R、肾组织IgG 4检测,分析血清PLA2R联合肾组织IgG 4检测对IMN的诊断价值。结果IMN组血清PLA2R水平高于SMN组,差异有统计学意义(P<0.05)。将血清PLA2R水平作为检验变量,IMN疾病发生情况作为因变量(1=IMN,0=SMN),绘制ROC曲线,以血清PLA2R为25.641 RU/mL作为IMN发生的诊断阈值,即血清PLA2R>25.641 RU/mL则判定为IMN,此时诊断AUC为0.919(P<0.05)。血清PLA2R、肾组织IgG 4联合检测对IMN的诊断准确率为93.33%,高于血清PLA2R、肾组织IgG 4单独检测(均为80.00%),差异有统计学意义(P<0.05);血清PLA2R、肾组织IgG 4水平单独检查IMN与肾活检具有理想的一致性(Kappa=0.622,0.706);联合检查IMN与肾活检具有极好的一致性(Kappa=0.912)。结论血清PLA2R联合肾组织IgG 4的检测对IMN疾病具有较高的诊断价值,临床可根据血清PLA2R联合肾组织IgG 4水平检测结果,及时制定针对性的预防措施。

人参皂苷Rg1通过调节GSK-3β/PP2A活性减轻皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化

目的探讨人参皂苷Rg1是否通过调节GSK-3β/PP2A活性而减轻凝聚态Aβ25～35诱导的胎鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化。方法选用孕期(18±2)d的SD大鼠,分离纯化胎鼠皮层神经元。实验分为阴性对照组、模型组、LiCl处理组、Rg1预处理组。阴性对照组不加任何处理因素;模型组用20μmol/LAβ25～35作用于皮层神经元12h;LiCl处理组用10mmol/LLiCl和20μmol/LAβ25～35共同作用于皮层神经元12h;Rg1预处理组分别用5、10、20、40、80μmol/LRg1预处理皮层神经元24h,再加入20μmol/LAβ25～35作用12h。通过免疫印迹法和免疫细胞化学染色法检测皮层神经元Tau蛋白磷酸化水平、总Tau蛋白水平和糖原合成酶3β(GSK-3β)表达水平,通过非放射性免疫法检测皮层神经元蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)活性。结果模型组Tau蛋白在Ser396、Ser199/202和Thr231位点的磷酸化水平、总Tau蛋白水平和GSK-3β的蛋白表达水平均增加,但PP2A的活性不受影响;LiCl处理组和Rg1预处理组,Tau蛋白在Ser396、Ser199/202和Thr231位点的磷酸化水平、总Tau蛋白水平和GSK-3β的蛋白表达水平均降低(P<0.05)。在Rg1预处理组中,以20μmol/LRg1预处理后Tau蛋白磷酸化水平、总Tau蛋白水平和GSK-3β的表达水平下降最为明显,而且PP2A的活性明显增强(P<0.01)。结论人参皂苷Rg1可通过上调PP2A活性和下调GSK-3β活性从而减轻凝聚态Aβ25～35所诱导的皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化。

马钱苷通过抑制蛋白磷酸酶2A催化亚基C磷酸化降低tau蛋白过度磷酸化

目的探讨马钱苷对tau蛋白过度磷酸化的影响及其作用机制。方法马钱苷(500、1 000μmol/L)与人神经母细胞瘤细胞株(SK-N-SH细胞)预孵育24 h,之后加入PI3K抑制剂Wortmannin(WT)及PKA抑制剂GF-109203X(GFX)与SK-N-SH细胞孵育3 h,采用Western blotting方法观察马钱苷对tau蛋白在Thr205、Thr217、PHF-1位点的磷酸化,GSK-3β-Ser9、GSK-3β、PP2A催化亚基C(protein phosphatase 2A catalytic subunit C,PP2Ac)磷酸化/甲基化及PP2Ac的表达。结果 WT/GFX明显抑制pGSK-3β-ser9的表达,引起GSK-3β活性增高,从而导致tau蛋白Thr205、Thr217、PHF-1位点高度磷酸化。马钱苷能够明显抑制模型细胞tau蛋白在Thr205、Thr217、PHF-1位点的过度磷酸化,但是不能增高p-GSK-3β-ser9的表达,提示马钱苷抑制tau蛋白磷酸化的作用不是通过影响GSK-3β通路实现的。但是实验显示马钱苷能够抑制PP2A催化亚基C Tyr307位点的磷酸化,但对Leu309位点甲基化无影响。结论马钱苷能够抑制tau蛋白过度磷酸化,机制可能与其抑制PP2A催化亚基C Tyr307位点的磷酸化,提高PP2A活性有关,与GSK-3β通路无关。