2型糖尿病病人外周血同源性磷酸酶-张力蛋白诱导的激酶1、Parkin蛋白、视神经蛋白表达与肾损伤程度的关系研究

目的探究2型糖尿病(T2DM)病人外周血同源性磷酸酶-张力蛋白诱导的激酶1(PINK1)、Parkin蛋白、视神经蛋白(OPTN)表达及与肾损伤程度关系。方法选取2019年5月至2021年5月河南科技大学第一附属医院156例T2DM病人,根据糖尿病肾病(DN)诊断分期标准,分为非DN组92例、早期DN组(EDN组)38例、临床期DN组(CDN组)26例,另以同期60例健康体检者为健康组。比较四组病人外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量(荧光定量PCR法);采用Pearson相关分析法探究PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量与糖脂代谢空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及肾功能指标血尿素氮、血肌酐、预估肾小球滤过率(eGFR)、尿微量白蛋白/尿肌酐(UACR)、24 h尿蛋白排泄率(UAER)相关性,采用多因素logistic回归分析探究DN发生影响因素,绘制ROC曲线分析PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量对DN诊断价值。结果CDN组、EDN组、非DN组、健康组外周血PINK1 mRNA表达量分别为0.31±0.17、0.44±0.20、0.69±0.35、0.73±0.34,Parkin蛋白mRNA分别为0.51±0.12、0.62±0.18、0.79±0.28、0.98±0.35,OPTNmRNA分别为0.05±0.01、0.10±0.03、0.14±0.05、0.18±0.07,四组病人外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量差异有统计学意义(P<0.05),均表现为CDN组<EDN组<非DN组<健康组。T2DM病人外周血PINK1、Parkin蛋白表达量均与空腹血糖、HbA1c、血尿素氮、血肌酐、UACR、UAER呈负相关(P<0.05),与eGFR呈正相关(P<0.05);OPTN与血尿素氮、血肌酐、UACR、UAER呈负相关(P<0.05),与eGFR呈正相关(P<0.05)。糖尿病病程、HbA1c、UACR、UAER是DN的独立危险因素(P<0.05),PINK1、Parkin蛋白、OPTN为其保护因素(P<0.05)。外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量诊断DN的ROC曲线下面积分别为0.709、0.754、0.839。结论T2DM病人外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量均下调,且随着病人肾损伤程度增加而降低,检测外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量对DN有一定诊断价值。

磷酸酶及张力蛋白同源物诱导的蛋白激酶1／Parkin介导的线粒体自噬的研究进展

磷酸酶及张力蛋白同源物诱导的蛋白激酶（PINK1）／Parkin介导的线粒体自噬在多种疾病的发生发展中起到了重要作用。对PINK1／Parkin介导的线粒体自噬进行研究，包括PINK1和Parkin的生物学特性及PINK1／Parkin介导的线粒体自噬的生物学作用，希望将来人类通过对线粒体自噬的调控来治疗临床疾病有所提示。

麦冬皂苷D调控磷酸酶及张力蛋白同源物诱导激酶1/帕金蛋白通路对脓毒症心肌损伤的保护作用

目的 探讨麦冬皂苷D(OPD)对脓毒症大鼠心肌损伤及磷酸酶及张力蛋白同源物诱导激酶1/帕金蛋白(PINK1/parkin)通路的影响。方法 用盲肠结扎穿孔法构建脓毒症大鼠模型,并将造模成功的大鼠随机分为模型组、实验组、对照组和联合组,每组8只。在模型制备成功后12 h,实验组给予腹腔注射40 mg·kg^(-1)OPD,对照组给予腹腔注射20 mg·kg^(-1)3-MA,联合组给予腹腔注射40 mg·kg^(-1)OPD和20 mg·kg^(-1)3-MA;假手术组和模型组均给予腹腔注射等量0.9%NaCl。5组大鼠每12 h重复给药1次,连续给药6 d。用酶联免疫吸附试验法检测血清肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)水平,用蛋白质印迹法检测大鼠心肌组织中PINK1和parkin蛋白的表达水平。结果 实验组、对照组、联合组、模型组和假手术组的血清cTnⅠ水平分别为(0.98±0.20)、(3.44±0.69)、(1.64±0.38)、(2.39±0.45)和(0.37±0.07)mg·L^(-1),PINK1蛋白相对表达水平分别为1.73±0.35、0.55±0.11、0.91±0.20、0.83±0.15和0.28±0.05,parkin1蛋白相对表达水平分别为1.78±0.36、0.63±0.12、0.96±0.22、0.94±0.17和0.30±0.06。实验组、对照组和假手术组的上述指标与模型组相比,实验组和对照组的上述指标与联合组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 OPD缓解脓毒症引起的大鼠心肌损伤可能是通过激活PINK1/parkin通路促进线粒体自噬实现的。

PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在异烟肼诱导的肝细胞损伤中的作用

目的:结核病患者长期大剂量联合使用抗结核药物会引起肝损伤等不良反应,但引起损伤的机制尚不明确。尽管同源性磷酸酶及张力蛋白诱导激酶1(phosphatase and tensin homolog induced kinase 1,PINK1)/Parkin信号轴可能通过调控线粒体自噬和肝细胞内氧化应激水平而参与肝损伤过程,但目前尚不清楚药物致肝损伤与该信号轴调控的线粒体自噬机制间的相关性。本研究旨在探究PINK1/Parkin信号轴是否可通过调控线粒体自噬改善抗结核药物用药过程中出现的肝细胞损伤,从而为临床结核病患者使用抗结核药物治疗过程导致的肝损伤提供潜在的药物治疗靶点。方法:使用异烟肼(isoniazide,INH)处理小鼠肝实质细胞AML-12以模拟肝损伤状态,分别采用real-time PCR和蛋白质印迹法检测正常AML-12细胞(对照组)、INH刺激的肝损伤模型(模型组)及INH和PINK1激动剂红景天甙共同刺激下的AML-12细胞(干预组)中PINK1、Parkin以及自噬相关分子的表达水平。利用ELISA试剂盒检测肝细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,采用HE染色及透射电镜技术观察细胞的肝细胞形态结构。结果:与对照组比较,模型组中PINK1、Parkin和微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)的mRNA表达水平(P<0.01)以及蛋白质水平(P<0.05)均显著下降,同时泛素化蛋白水平显著下调(P<0.05),ROS水平升高(P<0.05),细胞损伤明显。与模型组相比,干预组中使用红景天甙后PINK1、Parkin和自噬相关分子LC3的mRNA及蛋白质水平均显著升高(均P<0.05),泛素化蛋白水平亦显著升高(P<0.05),同时线粒体介导的ROS水平下降(P<0.05),肝细胞损伤状态明显减轻。结论:本研究利用体外细胞实验证明了PINK1/Parkin信号轴介导的线粒体自噬机制可能与异烟肼所致肝细胞的损伤相关,并能调控损伤状态,提示Parkin是一个潜在的药物致肝损伤预测及诊疗的分子靶点。

艾帕素13(apelin-13)通过阻断PINK1/parkin信号通路促进线粒体自噬改善大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的研究脂肪细胞因子艾帕素13(AP13)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中线粒体自噬水平的影响及机制。方法通过结扎大鼠冠状动脉分支建立MIRI模型,大鼠分为假手术组、AP13处理的假手术组、MIRI组、AP13处理的MIRI组。MIRI模型建立24 h后,采用ELISA检测血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平,2,3,4-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测大鼠心肌梗死面积,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测MIRI心肌区的心肌细胞凋亡水平,透射电镜观察受损心肌区心肌细胞线粒体损伤情况及自噬体的形成。取各组大鼠心肌梗死区组织,Western blot法检测细胞中微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)/LC3Ⅰ比值,泛素结合蛋白P62蛋白及线粒体自噬通路中磷酸酶与张力蛋白同源物诱导激酶1(PINK1)、泛素连接酶parkin和裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白表达。采用携带GFP-LC3的腺病毒感染分离的各组大鼠心梗区心肌细胞,并采用免疫荧光细胞化学染色观察线粒体外膜转位酶20(TOM20)和LC3的共定位。结果与假手术组或AP13处理的假手术组相比,MIRI组或AP13处理的MIRI组大鼠血清CK、LDH、cTnI和心肌梗死面积和细胞凋亡率均显著增加,前两组无明显差异。而与MIRI组相比,AP13处理的MIRI大鼠的上述变化均明显降低。与假手术组或AP13处理的假手术组相比,MIRI组或AP13处理的MIRI组大鼠心肌细胞中线粒体结构的完整性明显破坏,且包裹线粒体的自噬体大量出现,而与MIRI组相比,AP13处理的MIRI组大鼠的心肌细胞线粒体损伤明显减轻,自噬体的数量显著增加。MIRI组或AP13处理的MIRI组梗死心肌组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、PINK1、parkin及c-caspase-3蛋白表达均显著增加,P62表达水平明显降低,而与MIRI组相比,AP13处理的MIRI组中上述蛋白水平的变化趋势明显降低;MIRI造模后LC3与TOM20共定位于心肌细胞线粒体中,且在AP13处理的MIRI组中LC3的表达强度较MIRI组显著增加。结论AP13可能通过阻断PINK1/parkin信号通路,促进线粒体自噬水平减少MIRI造成的心肌梗死面积,降低细胞凋亡率。

蛋白激酶PINK1与炎症及免疫反应

磷酸酶及张力蛋白同源物诱导的蛋白激酶1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)是一种与线粒体自噬、帕金森病的发生发展密切相关的蛋白激酶。PINK1蛋白由581个氨基酸残基组成,具有高度保守的结构域,表达广泛。除了帕金森病,PINK1还参与多种疾病的发生、发展和调控,如肿瘤、糖尿病、心肺功能异常等。近年的研究表明,PINK1的表达影响T细胞的增殖和分化,抑制线粒体抗原递呈,参与调节机体固有免疫反应和炎症反应。另外,炎症小体NLRP3对肺内皮细胞的调节作用也与PINK1表达有关。PINK1也能通过NLRP3调节炎症介质的释放,参与脓毒症诱导的免疫代谢活动。本文就近年来PINK1与炎症、免疫反应的相关研究进行综述。

Pink1/Parkin介导的线粒体自噬在心肌缺血再灌注损伤中的作用研究进展

心肌缺血再灌注损伤(MIRI)显著降低了缺血心肌再灌注的效益,是目前缺血心肌治疗过程中亟待解决的关键问题。线粒体自噬参与了MIRI的发病机制,由第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因诱导激酶1(Pink1)/Parkin介导的线粒体自噬是最常见的线粒体自噬途径。由于激活程度不同,Pink1/Parkin介导的线粒体自噬在MIRI中具有双重作用。Pink1/Parkin介导的线粒体自噬存在于心肌细胞、血小板和微血管内皮细胞中。因此,了解Pink1/Parkin介导线粒体自噬的调控机制,探索心肌细胞、血小板和微血管内皮细胞中的Pink1/Parkin介导的线粒体自噬在MIRI中的作用,有助于指导未来MIRI的治疗。

PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬在重症肺炎中的作用研究

目的探究PINK1(同源性磷酸酶张力蛋白诱导激酶1)/Parkin(帕金森蛋白)信号通路介导的线粒体自噬在大鼠重症肺炎中的作用。方法将20只大鼠随机分为对照组及模型组(重症肺炎模型),每组10只,以探讨重症肺炎对大鼠肺功能、病理的影响。之后再将30只大鼠随机分为对照组、模型组及mdivi-1(线粒体自噬抑制剂)组,每组10只,进一步探讨重症肺炎对大鼠线粒体自噬指标的影响。结果与对照组相比,模型组大鼠静息通气量[(3.44±0.22)vs.(1.58±0.18)mL/min]及气道阻力比值(77.48±3.84 vs.47.76±5.54)降低(P<0.05);模型组大鼠肺组织损伤,可见大量炎性细胞浸润;模型组大鼠肺组织中Parkin、PINK1及微管相关蛋白1轻链3Ⅱ的蛋白和mRNA表达水平增加(P<0.05)。与模型组相比,mdivi-1组大鼠静息通气量及气道阻力比值增加(P<0.05);mdivi-1组大鼠肺组织损伤及炎性浸润改善;mdivi-1组大鼠肺组织中Parkin、PINK1及微管相关蛋白1轻链3Ⅱ的蛋白和mRNA表达水平减少(P<0.05)。结论mdivi-1可改善重症肺炎大鼠肺功能结构的异常,其机制可能与PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬相关。

PINK1介导的线粒体自噬对大鼠骨髓内皮祖细胞衰老及其功能的影响

目的采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术敲减大鼠骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)中磷酸酶和张力蛋白同源物诱导激酶1(PTEN-induced putative kinase 1,PINK1),探讨PINK1介导的线粒体自噬对EPCs衰老及其功能的影响。方法分离培养大鼠骨髓EPCs并鉴定,EPCs计数后随机分为空白组、阴性对照组(NC siRNA)和PINK1转染组(PINK1 siRNA)。qRT-PCR与Western blot检测各组PINK1 mRNA与蛋白的表达情况;以最佳敲减时间为据点选择不同时间点模拟衰老进程,SA-β-半乳糖苷酶染色法及p16蛋白表达评估细胞衰老情况;CCK-8、Transwell小室、体外血管生成试剂盒检测细胞增殖、迁移、成血管功能;流式细胞术检测细胞ROS水平,Western blot检测PINK1、Parkin、LC3、p62的表达,透射电镜观察线粒体及自噬小体情况。结果转染PINK1 siRNA 48 h后,PINK1被有效敲减。转染48 h和96 h后,与空白组相比,PINK1 siRNA组衰老细胞蓝染阳性率和p16蛋白表达水平均明显上升;细胞增殖、迁移和成血管功能明显降低,ROS水平明显升高;PINK1、Parkin、LC3蛋白表达明显下调,而p62蛋白明显上调;透射电镜下PINK1 siRNA组线粒体肿胀变形,自噬小体减少。结论PINK1基因的下调会加剧EPCs的衰老,PINK1介导的线粒体自噬可能参与并调节了EPCs的衰老和功能。

川芎嗪改善缺血再灌注诱导的大鼠急性肾损伤

目的探讨川芎嗪对缺血再灌注(I/R)诱导的大鼠急性肾损伤的保护作用及其与线粒体自噬的相关性。方法48只Wistar大鼠分为正常对照组、模型组、模型+TMP(10,15和20 mg·kg^-1)组和正常+TMP(15 mg·kg^-1)组。通过夹闭双侧肾动脉45 min再灌注30 min制备大鼠急性肾损伤模型;模型+TMP(10,15和20 mg·kg^-1)组大鼠于夹闭双侧肾动脉45 min再灌注30 min后一次性ip给予不同剂量的TMP;正常+TMP(15 mg·kg^-1)组于开腹刺激75 min后一次性ip给予TMP 15 mg·kg^-1。给予TMP 24 h后,肌氨酸氧化酶法检测血清中肌酐(Cr)含量;尿素酶-谷氨酸脱氢酶法检测血清中尿素氮(BUN)含量;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;WST-1法检测肾组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性;TBA法检测肾组织匀浆中丙二醛(MDA)含量。HE染色检测肾组织病理变化,免疫组织化学法检测大鼠肾组织中磷酸酶及张力蛋白同源物诱导的激酶1(PINK1)和E3泛素连接酶(Parkin)蛋白的表达水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠血清中Cr,BUN及TNF-α含量明显升高(P<0.01);肾组织匀浆中SOD活性明显降低(P<0.01),MDA含量明显升高(P<0.01);肾组织中PINK1和Parkin蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与正常对照组相比,正常+TMP组大鼠血清中Cr,BUN及TNF-α含量未见明显变化;肾组织匀浆中SOD活性和MDA含量无明显变化;肾组织中PINK1和Parkin蛋白表达水平未见明显变化。与模型组相比,模型+TMP组大鼠血清中Cr,BUN和TNF-α含量明显降低(P<0.01,P<0.05);肾组织匀浆中SOD活性明显升高(P<0.01),MDA含量明显降低(P<0.01);肾组织中PINK1和Parkin蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。HE染色结果显示,TMP可明显改善I/R引起的大鼠肾小管细胞肿胀、排列紊乱和蛋白管型等,细胞形态明显好转。结论TMP对I/R诱导的大鼠急性肾损伤具有保护作用,其机制可能与改善氧化应激损伤、促进线粒体自噬有关。

枳实-白术调节PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬改善慢传输型便秘大鼠结肠动力障碍

目的:基于线粒体自噬及磷酸酶及张力蛋白同源物诱导的蛋白激酶1(PINK1)/帕金蛋白(Parkin)通路观察枳实、白术及其配伍对慢传输型便秘大鼠结肠动力障碍的改善作用,为临床精准用药提供理论参考。方法:将56只雄性SD大鼠按体质量随机分成正常组、模型组、自然恢复组、枳实组、白术组、枳实-白术组和莫沙必利组,每组各8只。除正常组外,采用洛哌丁胺连续14 d灌胃(3 mg·kg^(-1)·d^(-1))构建慢传输型便秘大鼠模型。造模成功后,除模型组继续洛哌丁胺诱导外,正常组和自然恢复组采用0.9%生理盐水灌胃,枳实组(1.35 g·kg^(-1)·d^(-1))、白术组(2.7 g·kg^(-1)·d^(-1))、枳实-白术组(4.05 g·kg^(-1)·d^(-1))和莫沙必利组(1.56 mg·kg^(-1)·d^(-1))大鼠分别给予相应的药物灌胃,连续7 d。观察药物对大鼠粪便数量、粪便含水率及小肠推进率的影响;苏木素-伊红(HE)染色法和阿尔新兰-过碘酸雪夫染色(AB-PAS)观察结肠病理变化;紫外分光光度计测定结肠组织呼吸链复合体活性;透射电子显微镜观察结肠组织超微结构;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测PINK1、Parkin和p62 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、线粒体自噬相关蛋白PINK1和Parkin的表达水平。结果:与正常组比较,模型组和自然恢复组大鼠粪便数量、含水率及小肠推进率均明显下降(P<0.05,P<0.01),结肠组织线粒体呼吸链复合体Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ活性明显降低(P<0.05,P<0.01),PINK1、Parkin mRNA表达,PINK1、Parkin和LC3蛋白表达显著上调(P<0.01),p62 mRNA表达明显下降(P<0.05);与模型组和自然恢复组比较,枳实-白术组大鼠粪便数量、含水率、小肠推进率及线粒体呼吸链复合体Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ活性均明显提高(P<0.05,P<0.01);透射电镜结果显示,枳实-白术组可减轻结肠组织线粒体肿胀程度,并能明显降低PINK1、Parkin mRNA表达,降低PINK1、Parkin和LC3蛋白表达(P<0.05,P<0.01),明显升高p62 mRNA表达(P<0.05)。结论:枳实、白术配伍后可显著改善洛哌丁胺诱导的大鼠慢传输型便秘,其机制可能与阻断PINK1/Parkin信号通路抑制结肠组织中Cajal间质细胞线粒体过度自噬有关。

BUB1表达对结直肠癌细胞增殖、凋亡及PLK1/PTEN信号通路的影响

目的探讨苯并咪唑出芽抑制解除同源物蛋白1(BUB1)表达对结直肠癌细胞增殖、凋亡及Polo样激酶1(PLK1)/10号染色体上缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)信号通路的影响,以期为结直肠癌的临床治疗提供理论依据。方法以2018年8月至2020年8月在该院收集的125对结直肠癌患者癌组织及邻近癌旁组织,以及人结直肠癌细胞系SW1116、SW480、HCT116、HT-29与人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460为研究对象;利用Lipofectamine^(TM)2000转染试剂盒对SW480细胞进行转染,并分组为空白组(细胞未转染)、si-NC组(细胞转染si-NC)、si-BUB1-1组(细胞转染si-BUB1)、si-BUB1-2组(细胞转染si-BUB1-2)。Western blot检测各组细胞中BUB1、促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2及PLK1/PTEN信号通路相关蛋白表达;CCK-8法检测各组细胞在0、24、48、72 h的增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果BUB1在结直肠癌组织的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05);与人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460比较,人结直肠癌细胞SW1116、SW480、HCT116、HT-29中BUB1表达水平均显著升高(P<0.05),且BUB1表达水平在SW480细胞中最高,因此,选择SW480细胞进行后续研究;与空白组和si-NC组比较,si-BUB1-1组、si-BUB1-2组SW480细胞中细胞凋亡率、Bax及PTEN蛋白表达水平显著升高,细胞增殖能力及BUB1、Bcl-2、PLK1表达水平显著降低(P<0.05),空白组与si-NC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论抑制BUB1表达可抑制癌细胞增殖,促进细胞凋亡,该机制可能与PLK1/PTEN信号通路中PLK1表达水平下调,PTEN蛋白表达水平上调有关。

miR-339-5p过表达对带状疱疹后遗神经痛大鼠疼痛缓解的机制

目的探究miR-339-5p过表达对带状疱疹后遗神经痛大鼠的疼痛缓解机制。方法选取48只健康SPF级SD大鼠,分别将48只大鼠分为空白组、模型组、过表达组、沉默组各12只,模型组、过表达组、沉默组构建带状疱疹后遗神经痛模型,做miR-339-5p慢病毒滴定,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-339-5p基因表达量,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠5-羟色胺(HT)、神经生长因子(NGF)、白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)-α,采用电子测痛仪进行测定机械痛阈,采用Western印迹检测大鼠同源性磷酸张力蛋白诱导激酶1/帕金森蛋白(PINK1/Parkin)信号通路基因表达量。结果与模型组相比,过表达组miR-339-5p基因表达量、不同时间点痛阈值、IL-2、TNF-α、5-HT、NGF、PINK1/Parkin信号通路表达量明显升高(P<0.05)。与模型组相比,沉默组miR-339-5p基因表达量、PINK1/Parkin信号通路表达量明显降低,不同时间点痛阈值、IL-2、TNF-α、5-HT、NGF明显升高(P<0.05)。与过表达组相比,沉默组miR-339-5p基因表达量、PINK1/Parkin信号通路表达量明显降低,不同时间点痛阈值、IL-2、TNF-α、5-HT、NGF明显升高(P<0.05)。结论miR-339-5p过表达基因通过作用于PINK1/Parkin信号通路,调控PINK1、Parkin表达量,显著减轻了带状疱疹后遗神经痛大鼠的疼痛程度。

PINK1敲除对氟化钠处理小鼠肺脏线粒体损伤、氧化应激和炎症反应的影响

以6周龄雄性野生型(WT)C57BL/6J小鼠和磷酸酶与张力蛋白同源物诱导激酶1(PINK1)基因敲除(PINK1^(-/-))小鼠为对象,将小鼠随机分为WT对照组,WT模型组和PINK1^(-/-)模型组。WT模型组和PINK1^(-/-)模型组小鼠饮用含100mg/L氟化钠(NaF)的蒸馏水,WT对照组小鼠饮用蒸馏水,处理时间为12周。通过免疫印迹(Western blot)研究线粒体自噬相关蛋白表达水平;用透射电镜观察肺脏线粒体超微结构损伤;ATP通过检测试剂盒和RT-qPCR分别测定ATP水平和mtDNA拷贝数;DHE染色检测肺脏活性氧(ROS)水平;比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力以及丙二醛(MDA)的含量;TUNEL染色检测肺脏细胞凋亡;酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素6(IL-6)的水平。结果显示,与WT模型组比较,PINK1^(-/-)模型组小鼠肺脏中帕金森病蛋白2(Parkin)和微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)的蛋白表达水平显著降低(P<0.05),p62/SQSTM1和线粒体外膜转运孔蛋白20(TOM20)蛋白表达水平显著增加(P<0.05);与WT模型组比较,PINK1^(-/-)模型组小鼠肺脏受损线粒体百分比增加(P<0.05),ATP水平和mtDNA拷贝数减少(P<0.05)。PINK1^(-/-)模型组小鼠肺脏ROS水平、MDA含量和TUNEL阳性细胞数升高,SOD和CAT活力降低,较WT模型组有显著性差异(P<0.05)。此外,与WT模型组比较,PINK1^(-/-)模型组小鼠肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6的水平显著增加(P<0.05)。结果表明,PINK1介导的线粒体自噬可减弱NaF引起的小鼠肺脏损伤。

基于PINK1 RNAi果蝇模型探讨黄芩素对遗传性帕金森病的作用机制

本研究旨在探讨黄芩素对基因突变导致的遗传性帕金森果蝇模型的作用,初步阐释黄芩素延缓遗传性帕金森病的作用机制。采用磷酸酶及张力蛋白同源物诱导的蛋白激酶1(PTEN-induced putative kinase 1,PINK1)-RNAi帕金森果蝇为模型组,野生型果蝇w1118为对照组,给予模型组不同剂量的黄芩素与阳性药美多芭,观察其对PINK1-RNAi帕金森果蝇寿命、运动能力、异翅率、多巴胺含量及多巴胺能神经元的影响,并观察其对腺嘌呤核苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)、线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)及活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量等线粒体功能障碍的影响。结果表明,黄芩素的有效给药剂量为低浓度0.8 mg·mL^(-1)、中浓度1.6 mg·mL^(-1)、高浓度3.2 mg·mL^(-1),阳性药美多芭最佳给药剂量为0.1μg·mL^(-1)。黄芩素和美多芭均能够显著提高PINK1-RNAi雄果蝇的寿命、运动能力和降低翅膀异常率(P<0.05),且低剂量黄芩素效果最佳;黄芩素可改善多巴胺能神经元的丢失,且低、高剂量效果最佳,但美多芭无显著影响;黄芩素和美多芭均对多巴胺含量无显著影响(P>0.05)。黄芩素和美多芭均能够提高PINK1-RNAi雄果蝇的ATP含量(P<0.05),且低剂量黄芩素效果最佳;中剂量黄芩素能够显著提高PINK1-RNAi雄果蝇的mtDNA含量(P<0.05),但美多芭无显著影响;黄芩素和美多芭均对ROS含量无显著影响(P>0.05)。

PTEN和S6K1在Ⅰ型子宫内膜癌中的表达及意义

目的探讨子宫内膜癌组织中10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PETN)和核糖体蛋白S6激酶-1(S6K1)的表达情况及其临床意义。方法选择2013年1月至2015年6月徐州医科大学附属医院及徐州市中心医院妇科行手术治疗的患者在病理科存档的组织蜡块,标本中子宫内膜癌组织65例,子宫内膜不典型增生组织30例,良性增生的子宫内膜组织30例,用免疫组化法分别检测PTEN、S6K1在不同内膜组织中的表达情况,分析两者的表达与子宫内膜癌患者各临床病理特征的相关性;对所有子宫内膜癌患者进行术后随访,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox比例风险回归模型分析子宫内膜癌患者预后的影响因素。结果(1)PTEN在子宫内膜癌组织中的阳性表达率低于正常子宫内膜组织及不典型增生子宫内膜组织(P<0.05);S6K1在子宫内膜癌组织中的阳性表达率较不典型增生子宫内膜组织、正常子宫内膜组织均增高(P<0.05)。(2)不同年龄及FIGO分期、是否淋巴结转移子宫内膜癌组织中的PTEN表达差异无统计学意义(P>0.05)。浸润深度为≥1/2肌层的PTEN阳性表达率(27.3%)显著低于无或<1/2组(59.4%),低-中分化的PTEN阳性表达率(23.3%)显著低于高分化组(60.0%)。不同年龄、不同肌层浸润深度子宫内膜癌组织S6K1阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅱ~Ⅳ期、低-中分化及有淋巴结转移的S6K1阳性表达率(分别为72.4%、76.7%、81.3%)显著高于Ⅰ期、高分化及无淋巴结转移者(47.2%、42.9%、51.0%)。(3)Kaplan-Meier生存分析显示,PTEN阴性表达患者的平均生存时间短于阳性表达患者(P<0.05);S6K1阳性表达患者的平均生存时间短于阴性表达患者(P<0.05)。(4)Cox回归分析显示FIGO分期、病理分化程度、肌层浸润深度、淋巴结转移及PTEN、S6K1的表达是子宫内膜癌患者预后影响因素(P<0.05,P<0.01),其中FIGO分期、淋巴结转移及PTEN、S6K1的表达是影响子宫内膜癌预后的独立影响因素(P<0.05,P<0.01)。结论在子宫内膜癌组织中,PTEN的阴性表达和S6K1的阳性表达与子宫内膜癌的发生、发展及预后相关。

西罗莫司对慢性轻度不可预知应激大鼠线粒体自噬的影响

目的探究西罗莫司对慢性轻度不可预知应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)大鼠行为学和海马区线粒体自噬的影响。方法SD大鼠经过蔗糖偏好率基线测试后,随机分为空白组8只和造模组30只。造模组给予3周的CUMS造模处置,造模成功的大鼠随机分为模型组8只、对照组9只和实验组9只。空白组和模型组均灌胃给予10 mL·kg^(-1)·d^(-1)0.9%NaCl;对照组灌胃给予10 mL·kg^(-1)·d^(-1)氟西汀;实验组给予腹腔注射10 mL·kg^(-1)·d^(-1)西罗莫司。4组大鼠均干预3周,给药同时继续造模。用蔗糖偏好实验检测蔗糖偏好率变化,用蛋白质印迹法检测磷酸酶及张力蛋白同源物诱导激酶1(PTEN Induced putative kinase 1,PINK-1)和Parkin的表达情况。结果实验组、对照组、模型组和空白组大鼠的蔗糖偏好率分别为0.65±0.06,0.71±0.08,0.41±0.09和0.77±0.08,PINK-1蛋白相对表达水平分别为0.55±0.01,0.62±0.01,0.45±0.01和0.68±0.03,Parkin蛋白相对表达水平分别为0.83±0.01,0.88±0.02,0.57±0.02和0.69±0.02。实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论西罗莫司可改善CUMS大鼠蔗糖偏好率,其机制可能与调控PINK-1/Parkin通路介导的线粒体自噬有关。