不同浓度的血管紧张素II对心肌细胞钙调磷酸酶Aβ基因表达水平的影响

目的检测不同血管紧张素II(Ang II)的浓度对大鼠心肌细胞内钙调磷酸酶(CaN)Aβ基因表达水平的影响。方法设计并合成大鼠CaN Aβ和β-肌动蛋白(β-actin)基因的特异性引物和TaqMan探针,将PCR扩增的CaN Aβ和β-actin基因片段分别克隆入pMD18-T载体,用于标准曲线的绘制和样品检测。用ROX标记的TaqMan探针对CaN Aβ基因的表达进行定量;用FAM标记的TaqMan探针对β-actin看家基因的表达进行定量。通过看家基因β-actin表达水平的定量结果对CaN Aβ表达水平的定量结果进行校正。改变培养的大鼠心肌细胞中Ang II的浓度并定量检测其CaN Aβ基因的表达水平。结果应用重组质粒绘制的定量曲线循环阈值与模板的浓度具有良好的线性关系;与定量对照曲线比较计算出正常大鼠心肌细胞内CaN Aβ是β-actin含量的90%。随着Ang II浓度的增高,大鼠心肌细胞内CaN mRNA的表达水平亦增加。结论成功地建立了利用TaqMan探针检测CaN Aβ和β-actin基因的多重荧光定量PCR方法并绘制标准曲线,从定量角度进一步证实Ang II能刺激CaN基因表达的水平。

细胞周期素E和第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因在大肠癌中的表达与预后的关系

肿瘤的浸润和转移是一个多因素、多步骤的极为复杂的过程，它是肿瘤细胞、宿主细胞及细胞外基质之间的一系列复杂的多步骤相互作用的结果，涉及众多的基因产物及分子事件。研究肿瘤细胞恶性潜能的生物学标志以预测肿瘤转移趋势，已成为目前肿瘤防治研究的一个重点。大肠癌是最常见的消化系统恶性肿瘤之一，对人类危害严重。目前已认识到大肠癌的发生发展与多个癌基因的激活和肿瘤抑制基因的失活有关。

血管紧张素Ⅱ2型受体基因重组腺病毒简便快速的构建方法

目的:利用细菌内同源重组法构建含血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)基因的重组腺病毒。方法:应用PCR技术从质粒PUHD AT2R中克隆出AT2R基因片段,定向克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrackCMV中,PmeⅠ酶切线性化后转化Adeasier1细胞,抽提经鉴定含有目的基因的重组腺病毒质粒,PacⅠ酶切后用脂质体转染293细胞,包装成重组腺病毒Ad AT2R。用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有GFP报告基因,对病毒滴度进行监测。结果:PCR检测表明重组腺病毒已含有目的基因AT2R,滴度为1.5×1012pfu/ml。结论:细菌内同源重组法构建腺病毒比传统的细胞内同源重组法具有成功率高、方法简便、快捷和实验周期短的优点。AT2R基因重组腺病毒的成功构建为进一步实验研究奠定了基础。

血管紧张素Ⅱ对心脏成纤维细胞PTEN基因表达及增殖的影响

目的以AngⅡ刺激乳鼠心脏成纤维细胞(CFC),观察CFC的增殖情况以及第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)及转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达。方法以AngⅡ(1×10-7mmol/L)刺激分离培养的CFC,以MTT法检测成纤维细胞的增殖情况,以RT-PCR的方法检测PTEN及TGF-β1基因表达。结果MTT测定的结果:32 h后AngⅡ刺激组的吸光值(A)显著高于该时间点对照组(P<0.05),与正常对照组相比,AngⅡ作用组PTEN基因表达显著下降(P<0.05),TGF-β1基因显著上调(P<0.05)。结论在AngⅡ的刺激下,CFC的TGF-β1表达上调,抑制PTEN基因表达,并引起细胞增殖。

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2对AngⅡ刺激的心肌成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨含有Src同源结构域2的蛋白酪氨酸磷酸酶2(Src homology 2 domain-containing pro-tein tyrosine phosphatase 2,SHP-2)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)刺激的心肌成纤维细胞(cardiac fi-broblasts,CFs)增殖的作用。方法:差速贴壁法体外培养心肌成纤维细胞,以波形蛋白(vimentin)鉴定CFs纯度;MTT法检测AngⅡ作用下心肌成纤维细胞增殖率,采用重组腺病毒过表达SHP-2和SHP-2抑制剂NSC-87877分别对AngⅡ作用下的细胞增殖的影响。结果:AngⅡ对CFs增殖的促进作用有剂量依赖性,其促进细胞增殖的最高浓度为10-7mol/L;在AngⅡ的刺激下,SHP-2可以促进心肌成纤维细胞增殖,并且突变体组比野生型组增殖更明显(P<0.01)。SHP-2抑制剂NSC-87877达到50μmol/L时可以明显抑制AngⅡ刺激下的CFs增殖。结论:AngⅡ的促CFs增殖作用是通过SHP-2调控的。

用权重基因共表达网络分析识别心脏重构关键节点基因

目的采用权重基因共表达网络分析方法(WGCNA)挖掘心肌梗死后心脏重构的关键节点基因,并研究其与ACE1和ACE2的关系。方法从NCBI的GEO下载2个心肌梗死后心脏重构的全基因组表达数据GSE7487和GSE738;数据初处理后,用WGCNA构建基因共表达网络,识别与心脏重构相关的模块与关键节点基因,分析关键节点基因与ACE1和ACE2的关联性;并在心肌梗死后心脏重构大鼠模型中验证它们的关系。结果分析发现在GSE7487,17个模块中有6个模块与心脏重构相关,模块基因富集于16条KEGG信号通路。在GSE738,5个模块与心脏重构相关,模块基因富集于15条KEGG信号通路,其中有10条信号通路与第一组数据结果相同,这些信号通路涉及心肌肥厚病理、氧化磷酸化、代谢等。进一步利用模块内连通性和基因重要性找到了一些心脏重构的关键调控基因,如钙依赖磷酸酶调节子(RCAN1)。RCAN1表达与ACE1表达高度相关,但与ACE2不相关。在动物模型中验证结果与上述结果一致。结论权重基因共表达网络分析方法是一个高效的系统生物学方法,应用本方法发现了心脏重构的关键节点基因,其中RCAN1可能影响ACE1-ACE2在肾素血管紧张素系统中的平衡。

肿瘤抑制基因PTEN负性调控鼠心肌肥大

目的观察肿瘤抑制基因PTEN(phosphatase and tensin homolog tumor suppressor)过度表达对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)刺激所致Ca2+/钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)信号通路的影响,探讨PTEN负性调控心肌肥大的作用机制。方法利用携带野生型PTEN基因的腺病毒(adenovirus-mediated transfer of PTEN,Ad-PTEN)感染获得过度表达PTEN的原代培养心肌细胞,以AngⅡ作为促心肌肥大刺激剂处理心肌细胞,利用Furo-2/AM比率荧光成像系统检测细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i),逆转录酶-多聚酶链反应(reactive transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测受感染细胞内心钠素(atrial natriuretic factor,ANF)、β肌球蛋白重链(β-myocin heavy chain,β-MHC)与钙调神经磷酸酶(calcineurin Aβ,CaNAβ)的mRNA表达,免疫印迹(western blot)检测CaN Aβ的蛋白表达,同时测定CaN活性。结果Ad-PTEN感染后,心肌细胞内过度表达PTEN的mRNA和蛋白。AngⅡ刺激后[Ca2+]i、CaNAβ mRNA与蛋白表达以及CaN活性分别为(229±18)nmol/L、(1.34±0.09)μmol·mg-1·h-1、(1.74±0.10)μmol·mg-1·h-1和(3.26±0.23)μmol·mg-1·h-1,较无AngⅡ刺激组显著增高(P<0.05),PTEN过度表达组[Ca2+]i,CaNAβ mRNA与蛋白表达以及CaN活性分别为(178±19)nmol/L、(0.81±0.07)μmol·mg-1·h-1、(1.18±0.02)μmol·mg-1·h-1、(1.89±0.39)μmol·mg-1·h-1,较无PTEN过度表达组显著降低(P<0.05)。结论PTEN过度表达可抑制Ca2+/CaN信号通路,负性调控血管紧张素Ⅱ刺激所致心肌细胞肥大。

微卫星不稳定性和PTEN突变对可切除胃癌辅助化疗疗效和预后预测的临床观察

目的检测胃癌组织中微卫星不稳定性(MSI)与磷酸酶和紧张素同源物(PTEN)基因突变情况,及其与胃癌患者辅助化疗疗效和预后的关系。方法收集解放军联勤保障部队第九八〇医院2021年1月至2022年6月间接受R_(0)D_(2)胃切除术Ⅱ/Ⅲ期患者115例,采用免疫组化法检测PTEN蛋白和程序性死亡受体配体1(PD-L1)蛋白表达,采用二代测序(NGS)分析PTEN拷贝数变化。采用多重聚合酶链式反应(PCR)检测MSI状态。Kaplan-Meier法绘制生存曲线,生存差异行Log-rank检验。Cox比例风险回归模型分析影响胃癌患者预后的因素。结果共23例PTEN突变,55例PTEN蛋白阴性表达。PTEN突变与PTEN蛋白表达、PD-L1表达、EBV感染及MSI状态有关,差异具有统计学意义(P<0.05)。根据MSI状态和PTEN突变,将患者分为MSS/PTEN wild亚组(n=83)、MSI/PTEN wild亚组(n=9)、MSI/PTEN mutant亚组(n=12)和MSS/PTEN mutant亚组(n=11),四组中位OS分别为16.50个月、18.20个月、7.36个月和4.50个月,差异有统计学意义(P<0.001)。多因素Cox风险比例回归模型分析显示,PD-L1表达和MSI/PTEN状态是影响胃癌患者OS的独立因素(P<0.05)。在MSS/PTEN mutant亚组中,PD-L1阴性患者OS较PD-L1阳性患者预后差(P=0.035)。在MSI/PTEN wild亚组或MSS/PTEN wild亚组,PD-L1表达和预后无关(P>0.05)。PD-L1表达是MSS/PTEN mutant亚组OS的独立因素(HR=0.612,95%CI:0.389~0.962,P=0.033)。结论分子分型与PD-L1表达相结合可作为一种潜在的策略更好地预测胃癌患者的预后。

血清miR-93-5p、PTEN表达水平评估川崎病患儿冠状动脉损伤的价值

目的分析血清微小RNA(miR)-93-5p、第10号染色体上缺失的磷酸酶和紧张素同源物(PTEN)表达水平在评价川崎病(KD)患儿冠状动脉损伤(CAL)中的应用价值。方法回顾性分析2021年10月至2023年12月郑州大学附属儿童医院心血管内科收治的164例KD患儿的临床诊治资料,依据冠状动脉超声检查结果分为KD+CAL组56例和KD组108例。比较两组患儿的一般资料、血清miR-93-5p和PTEN水平,采用Pearson相关分析法分析血清miR-93-5p与PTEN水平的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-93-5p、PTEN水平对KD患儿CAL的诊断价值,采用多因素Logistic回归法分析KD患儿发生CAL的影响因素。结果KD+CAL组患儿血小板计数、发热持续时间、静脉注射用免疫球蛋白使用时间、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)及血清miR-93-5p水平分别为(430.33±86.42)×10^(9)/L、(9.84±1.96)d、(9.67±1.92)d、(0.68±0.13)μg/L、(82.46±16.24)mg/L、1.51±0.36,明显高于KD组的(351.61±70.18)×10^(9)/L、(8.11±1.07)d、(6.53±1.18)d、(0.32±0.06)μg/L、(65.67±13.25)mg/L、1.02±0.28,血清PTEN水平为(2.32±0.41)ng/mL,明显低于KD组的(3.03±0.61)ng/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关分析法分析结果显示,KD+CAL组患儿血清miR-93-5p与PTEN呈负相关(r=-0.522,P<0.05);经ROC曲线分析结果显示,血清miR-93-5p、PTEN水平联合诊断KD患儿CAL的曲线下面积(AUC)为0.917(95%CI:0.863~0.954),明显高于miR-93-5p单独诊断的AUC 0.837(95%CI:0.771~0.890)、PTEN单独诊断的AUC 0.847(95%CI:0.783~0.899),差异均有统计学意义(P<0.05);经Logistic回归法分析结果显示,血小板计数、发热持续时间、静脉注射用免疫球蛋白使用时间及血清miR-93-5p、PTEN水平均是KD患儿发生CAL的影响因素(P<0.05)。结论KD合并CAL患儿血清miR-93-5p水平上调,血清PTEN水平下调,检测其水平变化可用于疾病的早期诊断。

雌二醇及雌激素受体抑制剂对卵巢癌SKOV3细胞凋亡及其PTEN、GSK3β、cyclinD1蛋白表达的影响

目的:探讨雌二醇(E2)与雌激素受体抑制剂ICI182,780作用后,对卵巢癌SKOV3细胞凋亡及磷脂酰肌醇/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路上蛋白表达的影响,明确E2及其受体抑制剂对SKOV3细胞作用的机制。方法:采用流式细胞技术检测普通培养液(对照组)、浓度为10-7mol/L的E2(E2组)和相同浓度E2与ICI182,780(E2+ICI182,780组)作用SKOV3细胞后不同时间段(24、48小时)SKOV3细胞凋亡率的变化,Western-Blot法检测E2与ICI182,780作用SKOV3细胞后不同时间段(0、1、2、6、12、24小时)PI3K/AKT信号通路相关分子的蛋白表达。结果:①E2组作用SKOV3细胞24、48小时后SKOV3细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.05);E2+ICI182,780组作用SKOV3细胞24、48小时后SKOV3细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。②E2上调SKOV3细胞人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、p-PTEN、磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK3β)、细胞周期素D1(cyclinD1)蛋白表达;ICI182,780在不同程度上拮抗以上的作用,但是二者对GSK3β蛋白表达均无影响。结论:E2激活SKOV3细胞内的PI3K/AKT信号传导通路,促使通路上蛋白磷酸化,最终抑制细胞凋亡;雌激素受体抑制剂ICI182,780可抑制E2对PI3K/AKT信号传导通路的激活作用,从而促进细胞凋亡。

miR-652-3p靶向同源异型核基因1对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的探讨miR-652-3p靶向同源异型核基因1(PRRX1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法大鼠心肌细胞H9c2细胞采用正常培养基培养为对照组细胞,用含1μmol/L AngⅡ的培养基培养为AngⅡ组细胞;分别转染miR-652-3p阳性对照序列(NC)和转染miR-652-3p mimics后用含1μmol/L AngⅡ的培养基培养为AngⅡ+NC组和AngⅡ+miR-652-3p组细胞;将miR-652-3p mimics分别与PRRX1阳性对照质粒和PRRX1过表达质粒转染至H9c2细胞中用含1μmol/L AngⅡ的培养基培养,分别为AngⅡ+miR-652-3p+Vctor组和AngⅡ+miR-652-3p+PRRX1组细胞。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测H9c2细胞中miR-652-3p表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,用Western blot检测细胞中PRRX1、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证H9c2细胞中miR-652-3p与PRRX1调控关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果与对照组比较,AngⅡ组H9c2细胞中miR-652-3p水平(1.00±0.08比0.21±0.05)、Bcl-2蛋白水平(0.83±0.08比0.40±0.04)均较低,而PRRX1蛋白水平(0.06±0.01比0.41±0.04)、凋亡率(5.02﹪±1.41﹪比25.33﹪±3.75﹪)、Bax蛋白水平(0.46±0.05比0.96±0.10)均较高,差异具有统计学意义(P均<0.05)。与AngⅡ+NC组比较,AngⅡ+miR-652-3p组H9c2细胞中miR-652-3p的表达水平(0.24±0.06比0.98±0.07)、Bcl-2蛋白水平(0.38±0.04比0.72±0.07)均较高,而PRRX1蛋白水平(0.39±0.04比0.13±0.01)、凋亡率(27.02﹪±4.11﹪比12.19﹪±1.63﹪)、Bax蛋白水平(0.95±0.09比0.53±0.05)均较低,差异具有统计学意义(P均<0.05)。与AngⅡ+miR-652-3p+Vctor组比较,AngⅡ+miR-652-3p+PRRX1组H9c2细胞凋亡率(12.88﹪±1.84﹪比25.45﹪±3.58﹪)、PRRX1蛋白水平(0.13±0.01比0.35±0.04)和Bax蛋白水平(0.54±0.05比0.82±0.08)均较高,差异具有统计学意义(P均<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平(0.72±0.07比0.46±0.05)降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论AngⅡ能够下调心肌细胞中miR-652-3p的表达,上调miR-652-3p可通过靶向抑制PRRX1的表达减少AngⅡ诱导的H9c2细胞凋亡。

高脂血症性急性胰腺炎患者血清miR-372、PTEN水平变化及其意义

目的探讨高脂血症性急性胰腺炎(HLAP)患者血清微小RNA-372(miR-372)、第10号染色体上缺失的磷酸酶和紧张素同源物(PTEN)水平变化及其意义。方法选取150例HLAP患者为HLAP组,根据病情严重程度将HLAP患者分为轻症组(n=41)、中度重症组(n=43)、重症组(n=66),根据预后分为死亡组(n=34)和存活组(n=116);同期另选取62名体检者为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-372,酶联免疫吸附法检测PTEN。Pear-son相关法分析HLAP患者血清miR-372与PTEN水平的相关性,多因素Logistic回归分析HLAP患者预后不良的影响因素,受试者工作特征曲线分析血清miR-372、PTEN水平对HLAP患者预后的预测价值。结果HLAP组血清miR-372水平高于对照组,PTEN水平低于对照组(P均<0.05)。轻症组、中度重症组、重症组血清miR-372水平依次升高,PTEN水平依次降低(P均<0.05)。HLAP患者血清miR-372与PTEN水平呈负相关(r=-0.729,P<0.05)。重症HLAP、住ICU时间长和C反应蛋白、miR-372水平升高为HLAP患者预后不良的独立危险因素,PTEN升高为独立保护因素[OR(95%CI)分别为4.208(1.424~12.432)、1.724(1.243~2.390)、1.030(1.010~1.050)、1.672(1.271~2.200)、0.936(0.904~0.969)]。血清miR-372、PTEN水平联合预测HLAP患者预后的曲线下面积大于二者单独预测(P均<0.05)。结论HLAP患者血清miR-372水平升高、PTEN水平降低,二者与病情严重程度和预后有关,可作为HLAP患者预后不良的预测指标。

子宫内膜样腺癌及其癌前病变组织中PTEN和CyclinD1的表达及意义

采用免疫组化SP法检测正常子宫内膜(A组)、内膜增生(B组)、不典型增生(C组)和子宫内膜样腺癌(D组)组织中第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)和CyclinD1蛋白的表达。结果A、B、C、D组PTEN阳性表达30、27、17、28例,CyclinD1阳性表达0、3、14、40例。C、D组PTEN阳性表达率均显著低于A、B组,CyclinD1阳性表达率显著高于A、B组。PTEN、CyclinD1在C、D组中的表达均呈显著负相关。D组中PTEN阳性表达率与组织学分级有关,但与肿瘤的浸润转移、临床分期和复发无关,CyclinD1阳性表达率与以上指标均有关。认为PTEN表达缺失和CyclinD1的过度表达参与了子宫内膜样腺癌的发生、发展过程;二者可用于子宫内膜样腺癌早期诊断;CyclinD1表达情况可用于判断子宫内膜样腺癌的生物学行为。

PTEN、survivin在食管鳞癌中的表达及相关性研究

应用免疫组化EnVision法检测第10染色体同源丢失性磷酸酶—张力蛋白基因(PTEN)和survivin在136例食管鳞癌、30例食管癌旁组织标本中的表达情况。认为PTEN的阳性表达与淋巴结有无转移、肿瘤分化程度和临床分期有关(P<0.01),与肿瘤大小无关。survivin的阳性表达与肿瘤的分化程度有关(P<0.05),与淋巴结有无转移、肿瘤大小、临床分期无关。PTEN和survivin可能作为两个独立的因子参与食管鳞癌的发生、发展。

结直肠癌组织中cyclin E、survivin、PTEN的表达及意义

采用免疫组化SP法检测95例结直肠癌组织及40例正常结直肠组织中细胞周期素(cyclin)E、生存素(survivin)及第10染色体同源丢失性磷酸酸—张力蛋白基因(PTEN)蛋白,采用RT-PCR技术检测46例结直肠癌组织中的cyclin E mRNA、survivin mRNA及PTEN mRNA。95例结直肠癌组织中cyclin E、survivin及PTEN的阳性表达率分别为45.3%、48.4%及36.8%,40例正常结直肠组织分别为0、0及95.0%。cyclin E表达与结直肠癌组织学分级、TNM分期有关(P均<0.01),survivin表达与结直肠癌组织学分级有关(P<0.05),PTEN与结直肠癌浸润深度、组织学分级、TNM分期有关(P均<0.05)。cyclin E或survivin的阳性表达率与PTEN呈负相关(r分别为-0.3438、-0.3470,P<均0.01)。cyclin E mRNA、survivin mRNA及PTEN mRNA在46例结直肠癌中的表达与组织学分级及TNM分期有关(P均<0.05)。认为检测癌组织cyclin E、survivin及PTEN可评估结直肠癌的生物学行为,cyclin E和survivin表达上调与PTEN表达下调可能在结直肠癌的发生和进展中发挥协同作用。

MEK信号通路参与PTEN对心肌细胞肥大的负性调控

目的探讨第10号染色体上同源丢失的磷酸酶张力蛋白(PTEN)基因的过度表达对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌肥大的负性调控机制。方法通过携带野生型PTEN基因的腺病毒(Ad-PTEN)感染,构建过度表达PTEN的原代培养的心肌细胞模型。以AngⅡ为促心肌肥大的刺激剂,采用RT-PCR检测受感染细胞内心房钠尿肽(ANP)、β肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA的表达,用Western blot检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(pERK1/2)蛋白的表达。结果Ad-PTEN感染后,心肌细胞内过度表达的PTEN mRNA和其蛋白,可明显抑制AngⅡ刺激所致心肌细胞肥大标志基因的表达。AngⅡ刺激可使ERK1/2与pERK1/2蛋白的表达明显增高;但PTEN的过度表达能明显抑制AngⅡ引起的ERK1/2与pERK1/2蛋白的表达。结论PTEN能够负性调控AngⅡ刺激引起的心肌细胞肥大,MEK1/ERK1/2信号通路可能参与了PTEN的负性调控过程。

survivin ASODN对人胰腺癌PANC细胞移植瘤生长的影响及机制探讨

目的观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胰腺癌PANC细胞裸鼠移植瘤生长及瘤组织中survivin、PTEN、CEACAM-1表达的影响,并探讨其作用机制。方法构建28只人胰腺癌PANC细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、正义寡核苷酸(SODN)组、ASODN组、脂质体组,各7只,分别于瘤周及瘤体注射50μL的PBS、SODN、ASODN、脂质体+无血清DMEM。注射结束后2 d,切取瘤体,测算肿瘤生长抑制率和生长指数,免疫组化法检测瘤组织中的survivin、PTEN、CEACAM-1蛋白,TUNEL染色镜下观察细胞凋亡情况,半定量RT-PCR检测瘤组织中的survivin mRNA、PTEN mRNA、CEACAM-1 mRNA。结果与其他三组相比,ASODN组肿瘤生长抑制率高、生长指数低、细胞凋亡指数高(P均<0.05),其瘤组织中survivin和CEACAM-1表达下降、PTEN表达上升(P均<0.05)。结论 survivin ASODN可有效抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长并诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能与抑制survivin和CEACAM-1的表达、促进PTEN的表达有关。

子痫前期患者血清PTEN水平变化及其与氧化应激和妊娠结局的关系

目的观察子痫前期(PE)患者血清第10号染色体缺失性磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)的表达变化,并探讨其与氧化应激和妊娠结局的关系。方法 116例PE患者分为重度PE组(52例)和轻度PE组(64例),同期在我院体检的健康妊娠女性50例为对照组。抽取三组空腹静脉血5 mL,采用ELISA法检测血清PTEN、8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α),采用硫代巴比妥酸比色法检测血清丙二醛(MDA),采用黄嘌呤氧化酶法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)。PE患者均随访至分娩,观察不良妊娠结局发生情况。Pearson相关性分析法分析血清PTEN与PE患者血清MDA、SOD的相关性,非条件Logistic多元回归分析不良妊娠结局的独立危险因素。结果 与轻度PE组比较,重度PE组血清PTEN、SOD水平降低,8-iso-PGF2α、MDA水平升高( P 均<0.05);与对照组比较,重、轻度PE组血清PTEN、SOD水平降低,8-iso-PGF2α、MDA水平升高( P 均<0.05)。118例PE患者中不良妊娠36例,与正常妊娠者比较,不良妊娠PE患者血清PTEN、SOD水平降低,8-iso-PGF2α、MDA水平升高( P 均< 0.05 )。血清PTEN与PE患者舒张压、收缩压及血清8-iso-PGF2α、MDA水平均呈负相关,与血清SOD水平呈正相关( P 均<0.05)。血清PTEN、SOD水平过低是PE患者不良妊娠结局的独立危险因素( P 均<0.05)。结论 PE患者血清PTEN低表达。血清PTEN表达与PE患者氧化应激程度和不良妊娠结局有关。血清PTEN水平可能参与了PE的发生、发展。

蛇床子素对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用及其机制

目的:探讨蛇床子素(Osthole,OST)对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖、迁移、侵袭的抑制作用及其机制。方法:培养人骨肉瘤细胞U2-OS,采用不同浓度的OST处理细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞克隆形成的能力,细胞划痕实验观察细胞迁移能力,Transwell小室法检测细胞侵袭作用,Western-Blot法检测PTEN、pAKT、AKT蛋白的表达。结果:MTT法结果表明OST能够抑制人骨肉瘤细胞U2-OS的增殖并呈剂量依赖性;克隆形成实验结果表明OST能够抑制U2-OS细胞的克隆形成能力;细胞划痕实验和细胞侵袭实验结果显示OST处理后细胞的迁移和侵袭能力明显降低;Western-Blot结果显示OST处理后PTEN蛋白的表达明显增加,pAKT蛋白的表达明显下降,并呈现一定的剂量依赖性。结论:OST可抑制人骨肉瘤细胞U2-OS增殖、迁移、侵袭,其可能的作用机制与调控PTEN-AKT信号通路有关。