miRNA-21和磷酸酶-张力蛋白基因的表达在老年结直肠癌浸润转移中的作用及机制

目的探讨miRNA-21和磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)在老年结直肠癌浸润转移中的作用机制。方法行大肠癌根治术的老年患者70例,术中取癌组织标本和距癌组织20 cm以上的切缘大肠正常组织。采用实时荧光定量RT-PCR检测标本中miRNA-21和PTEN的mRNA表达水平;免疫组化和Western印迹分析PTEN蛋白表达水平。结果结直肠癌组织中miRNA-21表达水平明显高于正常切缘组织(P<0.05),其中伴淋巴结转移的结直肠癌患者miRNA-21表达水平明显高于不伴淋巴结转移者;随着结直肠癌浸润深度增加,miRNA-21表达水平明显提升(P<0.05)。结直肠癌组织中PTEN mRNA表达水平明显低于正常切缘组织(P<0.05);结直肠癌组织中PTEN蛋白中阳性细胞数比例明显低于正常切缘组织(P<0.05),PTEN蛋白表达水平明显低于正常切缘组织(P<0.05)。伴淋巴结转移的结直肠癌患者PTEN mRNA及蛋白表达水平明显低于不伴淋巴结转移者;随着结直肠癌浸润深度和Dukes分期增加,PTEN mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,结直肠癌组织中miRNA-21转录水平与PTEN mRNA和蛋白表达水平之间呈明显负相关。结论老年结直肠癌组织中miRNA-21过表达会下调PTEN的表达,导致结直肠癌的浸润转移。

2型糖尿病病人外周血同源性磷酸酶-张力蛋白诱导的激酶1、Parkin蛋白、视神经蛋白表达与肾损伤程度的关系研究

目的探究2型糖尿病(T2DM)病人外周血同源性磷酸酶-张力蛋白诱导的激酶1(PINK1)、Parkin蛋白、视神经蛋白(OPTN)表达及与肾损伤程度关系。方法选取2019年5月至2021年5月河南科技大学第一附属医院156例T2DM病人,根据糖尿病肾病(DN)诊断分期标准,分为非DN组92例、早期DN组(EDN组)38例、临床期DN组(CDN组)26例,另以同期60例健康体检者为健康组。比较四组病人外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量(荧光定量PCR法);采用Pearson相关分析法探究PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量与糖脂代谢空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及肾功能指标血尿素氮、血肌酐、预估肾小球滤过率(eGFR)、尿微量白蛋白/尿肌酐(UACR)、24 h尿蛋白排泄率(UAER)相关性,采用多因素logistic回归分析探究DN发生影响因素,绘制ROC曲线分析PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量对DN诊断价值。结果CDN组、EDN组、非DN组、健康组外周血PINK1 mRNA表达量分别为0.31±0.17、0.44±0.20、0.69±0.35、0.73±0.34,Parkin蛋白mRNA分别为0.51±0.12、0.62±0.18、0.79±0.28、0.98±0.35,OPTNmRNA分别为0.05±0.01、0.10±0.03、0.14±0.05、0.18±0.07,四组病人外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量差异有统计学意义(P<0.05),均表现为CDN组<EDN组<非DN组<健康组。T2DM病人外周血PINK1、Parkin蛋白表达量均与空腹血糖、HbA1c、血尿素氮、血肌酐、UACR、UAER呈负相关(P<0.05),与eGFR呈正相关(P<0.05);OPTN与血尿素氮、血肌酐、UACR、UAER呈负相关(P<0.05),与eGFR呈正相关(P<0.05)。糖尿病病程、HbA1c、UACR、UAER是DN的独立危险因素(P<0.05),PINK1、Parkin蛋白、OPTN为其保护因素(P<0.05)。外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量诊断DN的ROC曲线下面积分别为0.709、0.754、0.839。结论T2DM病人外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量均下调,且随着病人肾损伤程度增加而降低,检测外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量对DN有一定诊断价值。

微小RNA-21调控同源性磷酸酶-张力蛋白基因表达在子痫前期发病中的作用机制

目的探究微小RNA-21(miR-21)在子痫前期(PE)病人发病中的表达变化及可能作用机制。方法收集2016年8月至2019年10月郑州市妇幼保健院收治的45例PE病人及45例匹配正常孕妇胎盘组织,采用实时定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-21相对表达水平。体外培养人滋养层细胞系HTR-8/SVneo,转染miR-21模拟物(mimics组),抑制物(inhibitor组)及无意义序列(NC组),另设无任何处理HTR-8/SVneo细胞为空白对照组(BC组)。采用Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率,采用Tanswell小室检测细胞侵袭性。生物学分析并进行双荧光素酶报告基因验证miR-21与同源性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)的靶向关系,免疫印迹(WB)法检测胎盘组织及细胞中PTEN、磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)及蛋白激酶B(p-Akt)磷酸化蛋白表达情况。结果与正常组(0.45±0.06)比较,PE病人胎盘组织中miR-21表达水平(0.41±0.05)显著降低(t=79.157,P<0.05),PTEN mRNA及蛋白表达水平分别为(4.13±0.58)、(0.91±0.08)均显著增加(t=36.201、30.858,P<0.05)。PE病人胎盘组织中miR-21与PTEN蛋白表达水平呈负相关(r=-0.542,P<0.05)。与BC组、NC组比较,mimics组HTR-8/SVneo细胞侵袭细胞数、pPI3K、p-Akt蛋白表达水平显著增加,凋亡率、PTEN蛋白表达水平显著降低,inhibitor组呈相反趋势。双荧光素酶报告基因实验结果显示,与转染NC+Wt(1.00±0.00)比较,转染mimics+Wt后HTR-8/SVneo细胞相对荧光活性(0.39±0.04)显著降低(t=37.355,P<0.05)。结论 miR-21可通过靶向抑制PTEN表达促进细胞侵袭并抑制其凋亡,可能与促进PI3K/Akt通路激活有关。

抑癌基因同源磷酸酶-张力蛋白基因与慢性髓性白血病相关性研究进展

目前,有关同源磷酸酶-张力蛋白基因（PTEN）基因的研究已经涉及到了其治疗研究。各种体内外实验证实PTEN对肿瘤有抑制作用。而且在白血病的发生、发展、侵袭、耐药中都有发挥影响作用,因而如何提高PTEN的表达和避免其缺失将是靶向治疗的关注点。此外PTEN/PIP3/AKT/VEGF和PTEN/FAK/MMP通路介导着白血病的侵袭,并且这往往是白血病在临床上难治和高病死率的关键,所以可以通过对通路的进一步，

脑胶质瘤中磷脂酰肌醇3-激酶、蛋白激酶B及同源磷酸酶-张力蛋白表达水平

目的探讨PI3K、AKT、PTEN在脑胶质瘤中的表达。方法选择2017年1~12月在我院及华山医院手术治疗的脑胶质瘤患者66例的病理标本进行分析,另选择50例患者的正常脑组织病理标本为参照。应用免疫组化方法检测磷脂酰肌醇3-激酶、蛋白激酶B及同源磷酸酶-张力蛋白表达,比较脑胶质瘤组织中以及正常脑组织中三者的表达水平,分析脑胶质瘤组织中三者阳性表达的相关性。结果 PI3K及AKT在正常脑组织的阳性表达率显著低于低级别脑胶质瘤及高级别脑胶质瘤,差异有统计学意义(P<0.05);低级别脑胶质瘤显著低于高级别脑胶质瘤,差异有统计学意义(P<0.05)。正常脑组织PTEN蛋白阳性率100.0%,显著高于低级别脑胶质瘤与高级别脑胶质瘤,差异有统计学意义(P<0.05);低级别脑胶质瘤显著高于高级别脑胶质瘤,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PI3K、AKT在脑胶质瘤中呈高表达,PTEN呈低表达,且与恶性程度有关。

下调微小RNA-425-5p靶向第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白调控宫颈癌细胞侵袭和迁移的分子机制

目的研究下调微小RNA(miR)-425-5p靶向第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)调控宫颈癌Caski细胞侵袭和迁移的分子机制。方法本研究起止时间为2018年12月至2019年11月。以宫颈癌Caski细胞为探讨对象,转染miR-425-5p抑制剂(inhibitor),PTENsiRNA和miR-425-5p inhibitor共转染到宫颈癌Caski细胞;MTT法测定细胞增殖,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移;在线靶基因预测软件发现PTEN与miR-425-5p可能互为靶向关系,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系;蛋白质印迹法(Westernblotting)测定上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)蛋白表达。结果转染miR-425-5p inhibitor后的宫颈癌Caski细胞miR-425-5p表达量降低[(0.96±0.15)比(0.32±0.04)],增殖[(0.47±0.05)比(0.23±0.04)]、侵袭[(95.32±7.86)比(63.17±5.22)]及迁移[(140.88±13.94)比(89.64±9.57)]能力降低,E-cadherin表达上调[(0.29±0.05)比(0.65±0.07)],N-cadherin表达下调[(0.59±0.04)比(0.30±0.04)]。miR-425-5p靶向负调控PTEN表达。PTENsiRNA可以逆转下调miR-425-5p对宫颈癌Caski细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论下调miR-425-5p靶向PTEN抑制宫颈癌Caski细胞侵袭和迁移。

磷酸酶-张力蛋白基因在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的:了解磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)在非小细胞肺癌组织及癌周正常组织中的表达及意义。方法:选用18例肺癌新鲜标本,用实时定量PCR法(RT-PCR法)检测PTEN基因,并结合临床病理分期、类型,不同分化程度和不同大小来研究PTEN基因表达对疾病发生发展的影响。结果:肺非癌组织PTEN基因的表达明显高于癌组织(P<0.05)。不同病理类型、病理分期,分化程度和不同大小肺癌中PTEN基因表达的比较差异无显著性(P>0.05)。结论:PTEN基因丢失与肺癌的发生密切相关,其表达水平是反映肺癌发展生物学行为的有用标志物。

miR-130a靶向磷酸酶-张力蛋白基因/磷酸酰肌醇3激酶/蛋白激酶B轴对糖尿病肾脏疾病大鼠肾组织细胞凋亡影响的研究

目的 探讨miR-130a靶向磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)/磷酸酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对DKD大鼠肾组织细胞凋亡的影响。方法 通过高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射STZ构建DKD大鼠模型。将72只大鼠分为正常对照(NC)组、模型组(DKD组)、miR-130a激动剂阴性对照组(NC agomir组)、miR-130a激动剂组(miR-130a agomir组)、miR-130a激动剂+PTEN过表达物阴性对照组(miR-130a agomir+pcDNA组)、miR-130a激动剂+PTEN过表达物组(miR-130a agomir+pcDNA-PTEN组),每组各12只。尿微量白蛋白试剂盒检测各组24 h UAlb,全自动生化分析仪检测FPG、血清肌酐(Scr)、BUN,HE染色检测各组肾组织病理变化,ELISA法检测各组IL-6、TNF-α,TUNEL染色检测各组肾组织细胞凋亡,qRT-PCR检测各组miR-130a表达,Western blot法检测各组B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)及PTEN/PI3K/AKT通路相关蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证miR-130a与PTEN靶向关系。结果 与DKD、NC agomir组比较,miR-130a agomir组24 h UAlb、FPG、Scr、BUN、IL-6、TNF-α、肾组织细胞凋亡率、Bax蛋白表达、PTEN蛋白表达降低(P<0.05),miR-130a、Bcl-2、p-AKT/AKT蛋白表达升高(P<0.05)。与miR-130a agomir组比较,miR-130a agomir+pcDNA-PTEN组24 h UAlb、FPG、Scr、BUN、IL-6、TNF-α、肾组织细胞凋亡率、Bax蛋白表达、PTEN蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-2、p-AKT/AKT蛋白表达降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-130a与PTEN有结合位点。结论 过表达miR-130a可能通过下调PTEN激活PI3K/AKT通路抑制DKD大鼠肾细胞凋亡。

大肠癌中磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶和磷酸酶-张力蛋白同源体的表达及其临床意义

目的 检测大肠腺癌组织磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶（pAKT）、第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白同源体（PTEN）表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学SP法检测112例大肠癌pAKT和PTEN蛋白的表达.结果 大肠癌pAKT和PTEN的阳性表达率分别为79.5％（89/112）和47.3 ％（53/112）,与在大肠癌旁组织和腺瘤组织pAKT和PTEN的阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.01）.pAKT的阳性表达与大肠癌肿瘤浸润深度、临床分期和淋巴结转移密切相关,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.PTEN的阳性表达同肿瘤浸润深度、肿瘤组织分化程度、临床分期和淋巴结转移密切相关,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）.pAKT蛋白表达与PTEN蛋白表达呈负相关（P＜0.01）.结论 pAKT和PTEN与大肠癌发生、发展和转移密切相关,提示阻断PTEN-磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）-AKT信号转导通路可能对大肠癌的治疗提供新的靶点.

支气管肺癌组织中包含氧化还原酶的WW域还原蛋白、同源性磷酸酶-张力蛋白的表达及临床意义

目的探讨包含氧化还原酶的WW域抗原(WWOX)蛋白与同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)在支气管肺癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化法检测WWOX与PTEN蛋白在87例支气管肺癌组织标本与23例正常肺组织标本中的表达,分析WWOX与PTEN蛋白表达与支气管肺癌患者临床病理特征之间的关系,并探讨两者在支气管肺癌组织中的表达相关性。结果 WWOX与PTEN蛋白在支气管肺癌组织中的的阳性表达均显著低于正常组织中的表达(χ2=14.810,P<0.001;χ2=17.363,P<0.001)。WWOX蛋白表达与患者的性别、癌组织分化程度、临床分期、是否发生淋巴结转移均有关(P<0.05),但与年龄、肿瘤大小无关(P>0.05);而PTEN蛋白则只与是否发生淋巴结转移有关(P<0.05),与其他临床病理参数均无关(P>0.05)。WWOX与PTEN蛋白的表达之间不存在关联性(χ2=2.098,P=0.147)。结论 WWOX与PTEN蛋白可能都参与了支气管肺癌的发生与恶性发展,但两者是通过不同的途径发生作用。

上皮性卵巢癌磷酸酶-张力蛋白和突变型P53表达的临床意义

目的探讨磷酸酶-张力蛋白(PTEN)、突变型P53(m tP53)表达与上皮性卵巢癌病理学特征的关系及二者在卵巢癌发生、发展、转移中的相互作用,为预测诊断卵巢癌提供理论基础。方法利用免疫组织化学技术分别检测32例正常卵巢者及31例卵巢良性肿瘤、74例上皮性卵巢癌患者PTEN、m tP53表达情况。结果①PTEN在上皮性卵巢癌表达缺失率及m tP53表达率分别高于对照组(P<0.01);②PTEN在浆液性囊腺癌表达缺失率高于粘液性囊腺癌(P<0.05),晚期表达缺失率高于早期(P<0.01),G3表达缺失率高于G1+G2(P<0.05)。③m tP53在粘液性囊腺癌中表达率高于浆液性囊腺癌(P<0.05),晚期的阳性率高于早期(P<0.01);④PTEN蛋白表达与m tP53蛋白表达呈负相关(r=0.327,P<0.01)。结论PTEN表达缺失、m tP53表达在上皮性卵巢癌的发生发展和转移中有重要作用;PTEN、m tP53同时发生异常可作为评估卵巢癌恶性程度的重要生物学指标。

碱性成纤维细胞生长因子和第10号染色体缺失性磷酸酶-张力蛋白同源物基因在宫颈癌中的表达及其临床意义

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和第10号染色体缺失性磷酸酶-张力蛋白同源物基因（PTEN）在宫颈癌组织中的表达及临床意义.方法 采用组织芯片和免疫组化技术检测143例宫颈浸润癌（ICC）和20例癌旁正常宫颈上皮（NCE）中bFGF和PTEN的表达,分析bFGF和PTEN表达与病理分级、临床分期和淋巴结转移等临床病理因素的关系.采用SPSS 13.0统计软件包进行统计学分析,相关性分析采用Spearman等级相关分析.结果 bFGF在ICC和NCE中的阳性表达率分别为88.8%（127/143）和25.0%（5/20,P=0.000） PTEN在ICC和NCE中的阳性表达率分别为67.1%（96/143）和100.0%（20/20,P=0.000）.bFGF的表达与淋巴结转移（r=0.239,P=0.004）和病理分级（r=0.369,P=0.000）呈正相关,PTEN的表达与临床分期（r=-0.189,P=0.024）、病理分级（r=-0.211,P=0.011）和淋巴结转移（r=-0.321,P=0.000）呈负相关.bFGF和PTEN在ICC中的表达强度呈负相关（r=0.261,P=0.002）.随着ICC恶性程度增高,PTEN的表达强度逐渐下降,bFGF的表达则呈上升趋势.结论 bFGF和PTEN在ICC中的异常表达与肿瘤的分化、侵袭和发展有关,联合检测bFGF和PTEN可用于评估ICC的生物学行为.

同源性磷酸酶-张力蛋白、缺氧诱导因子-1α在肾细胞癌组织中表达及与临床病理特征关系研究

目的探讨同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在肾细胞癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法选取2015年3月至2016年12月西安医学院附属宝鸡医院收治的94例肾细胞癌患者为研究对象。分别采集94例患者的肾细胞癌组织标本(肾细胞癌组)及癌旁组织标本(癌旁组)。利用免疫组化法检测各组组织中PTEN及HIF-1α的水平,并分析其与肾细胞癌临床病理特征之间的关系。结果肾细胞癌组PTEN高表达阳性率低于癌旁组,HIF-1α高表达阳性率高于癌旁组,组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。PTEN与HIF-1α的高表达率在不同肾细胞癌的病理类型中比较,差异无统计学意义(P>0.05);在不同Robson分期、Fuhrman分级、有无淋巴结转移、有无远处转移的肾细胞癌组织中比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。经Spearman秩相关分析,肾细胞癌组织中PTEN和HIF-1α的表达水平呈显著负相关(r=-0.716,P<0.05)。结论 PTEN、HIF-1α在肾细胞癌组织中异常表达,二者联合检测有助于早期诊断肾细胞癌及评估患者的病情进展。

环氧合酶-2、第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因在肝胆管结石合并胆管癌组织中的表达及意义

目的探讨环氧合酶-2（COX-2）、第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN）在肝胆管结石合并胆管癌（hepatobiliary calculus with cholangiocarcinoma，HCWC）中的表达及其意义，研究COX-2、PTEN与HCwC发生、发展的关系，为HCWC的临床防治提供依据。方法研究分三组：正常胆管组（肝血管瘤或肝外伤切除标本）10例（A组），肝内结石所在胆管组30例（B组），HCWC组37例（C组）。应用免疫组织化学SP法，通用二步法检测各组COX-2、PTEN的表达情况，并对检测结果进行分析。结果C0X-2在A、B、C三组中的表达阳性率分别为10．0％、33．3％和70．3％，癌组织中的表达阳性率明显高于对照组胆管组织（P〈0．01）。PTEN在A、B和C三组中的表达阳性率分别为90．0％、80．0％和35．1％，癌组织中的表达阳性率明显低于对照组胆管组织（P〈O．01）。在COX-2阳性表达的HCWC组织中，P丁EN有较低表达。Kendall相关分析表明HCwc组织中COX-2与PTEN表达呈显著负相关（r=-0．323，P〈0．05）。结论COX-2高表达可能与HCWC形成有关。在HCWC中，COX-2和PTEN表达呈负相关。COX-2高表达、PTEN低表达可能提示HCwC更易发生淋巴转移或肝外转移。

PTEN、mt-p53及VEGF蛋白表达与卵巢癌的生物学意义

目的探讨PTEN基因表达在上皮性卵巢癌发生、发展、转移中作用及其与mt-p53、VEGF表达的相互关系。方法利用SP法对正常卵巢(32例)、卵巢良性肿瘤(31例)、上皮性卵巢癌(74例)PTEN、mt-p53、VEGF基因蛋白的表达进行检测。结果①PTEN在上皮性卵巢癌表达缺失率及mt-p53、VEGF表达率分别高于对照组(P<0.01);②PTEN在浆液性囊腺癌表达缺失率高于黏液性囊腺癌(P<0.05),晚期表达缺失率高于早期(P<0.01),G3表达缺失率高于G1+G2(P<0.05)。③mt-p53在黏液性囊腺癌中表达率高于浆液性囊腺癌(P<0.05),晚期的阳性率高于早期(P<0.01);④VEGF晚期的阳性率高于早期(P<0.05)。淋巴结转移阳性组高于阴性组(P<0.05);⑤PTEN蛋白表达与mt-p53蛋白表达呈负相关,与VEGF表达不相关,mt-p53蛋白表达与VEGF表达呈正相关。结论 PTEN表达缺失、mt-p53、VEGF蛋白表达在上皮性卵巢癌的发生、发展、侵袭中有重要作用;PTEN、mt-p53、VEGF同时发生异常可作为评估卵巢癌恶性程度的重要生物学指标。

LncRNA GAS5通过miR-21调控脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制研究

目的 明确长链非编码RNA生长阻滞特异性转录因子5(LncRNA GAS5)与微小RNA-21(miR-21)的关系,阐明LncRNA GAS5调控miR-21参与脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制。方法 建立脊髓损伤大鼠和氧糖剥夺复氧(OGD/R)处理的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC-12)模型;沉默和过表达GAS5,构建下调shGAS5表达的慢病毒,通过生物信息学分析预测LncRNA GAS5与miR-21存在结合位点等。通过双荧光素酶报告基因实验等探究GAS5与miR-21的结合位点;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-21、GAS5、同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)基因、半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2相关X基因(Bax)、Bcl-2和蛋白激酶B(AKT)的RNA表达水平;Western blot检测Cleaved caspase 3、Bax、Bcl-2、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白表达水平;TUNEL技术检测神经细胞凋亡程度。结果 大鼠脊髓损伤后脊髓中miR-21、Bcl-2及pAKT表达水平降低(P<0.05),GAS5、PTEN、Bax及Cleaved caspase-3表达均升高(P<0.05)。PC-12体外培养与OGD/R损伤后出现与大鼠脊髓损伤模型类似结果,且于OGD/R处理后2 h最显著。GAS5可通过碱基互补配对方式结合miR-21,进而调控下游PTEN信号通路。下调GAS5或过表达miR-21可抑制PC-12细胞凋亡(P<0.05)。结论 GAS5通过结合miR-21,上调PTEN并抑制AKT磷酸化,进而促进脊髓损伤诱导的神经细胞凋亡。

非诺贝特对糖尿病小鼠视网膜神经组织中miR-26a-5p/PTEN表达的影响

目的:研究非诺贝特对糖尿病小鼠视网膜神经损伤的保护作用并观察其对miR-26a-5p及其靶基因PTEN的影响。方法:构建糖尿病小鼠模型,并进行非诺贝特灌胃,H&E及透射电镜观察视网膜神经损伤情况,Real-time PCR检测视网膜组织中miR-26a-5p的表达,Western blotting检测同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)在视网膜组织中的表达,并观察NF-κB及IL-1β的水平及视网膜神经上皮的结构变化。结果:与糖尿病组相比,非诺贝特治疗组糖尿病小鼠视网膜神经节细胞损伤及神经纤维层萎缩明显减轻,视网膜中miR-26a-5p表达升高,PTEN mRNA和蛋白表达下降,炎性介质NF-κB及IL-1βmRNA表达水平下降(P<0.05)。结论:非诺贝特通过上调miR-26a-5p抑制PTEN的表达,降低炎症因子水平,减轻视网膜细胞损伤,发挥糖尿病视网膜神经保护作用。

澳洲茄碱通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3信号通路促进非小细胞肺癌发生凋亡

目的 探讨龙葵活性成分澳洲茄碱对非小细胞肺癌细胞PC9增殖、凋亡的影响。方法 体外培养PC9细胞,设对照组(0μmol/L)及澳洲茄碱不同剂量组(0、2、5、10、15、20、25μmol/L),CCK-8试剂盒检测澳洲茄碱对PC9细胞的增殖抑制作用;TMRE检测线粒膜电位;caspase3/7活性试剂盒联合GreenNuc?Caspase-3/Annexin V-mCherry染色检测caspase-3活性;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;给药处理或者使用PTEN抑制剂后,Western blot检测细胞中相关蛋白的表达量。结果 与对照组相比,经澳洲茄碱干预24、48、72 h后,PC9细胞的活力均明显降低(P<0.05);经澳洲茄碱干预24 h后,细胞线粒体膜电位明显降低,而细胞凋亡比例明显升高(P<0.05);caspase-3/7活力、活细胞Caspase-3活性及cleaved caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.01);PI3K和Akt磷酸化水平降低(P<0.05);而PTEN、Bax蛋白表达上调(P<0.05);抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达下调(P<0.05)。结论 澳洲茄碱可通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3通路及其上游蛋白活性而抑制PC9细胞增殖,促进其凋亡。

miRNA-32通过下调PTEN表达促进食管癌细胞的增殖

目的通过检测miR-32在食管癌组织和食管癌细胞系中的表达,探讨miR-32对食管癌增殖和凋亡的影响及分子机制。方法使用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测47例食管癌组织和7种食管癌细胞系中miR-32表达水平;生物信息学预测miR-32下游靶基因磷酸酶-张力蛋白基因(phosphatase and tensin homologue,PTEN),并通过荧光素酶报告基因法验证其结合状态;通过miR-32 mimics来研究其对PTEN的mRNA和蛋白表达的影响及其对食管癌细胞系KYSE-410增殖和凋亡的影响;通过PTEN回补实验进一步验证miR-32对其的作用。结果 89%(42/47)的食管癌肿瘤组织中miR-32表达明显上调,在低分化的食管癌细胞系KYSE-410中表达程度最高(P<0.05);生物信息学预测miR-32可靶向作用于PTEN,高表达miR-32可明显抑制PTEN 3’UTR荧光素酶活性(P<0.05);高表达miR-32可明显促进KYSE-410增殖,并抑制其凋亡,抑制率28%(P<0.05);高表达miR-32对PTEN mRNA表达无明显影响(P>0.05),但可明显抑制其蛋白表达,抑制率48%(P<0.05);相较于miR-32单独处理组,PTEN补救实验可部分恢复PTEN蛋白的表达,同时也可逆转其对凋亡的抑制作用,此外,在96 h组可明显抑制食管癌细胞增殖(P<0.05),在其他时间点与miR-32组无明显差异(P>0.05)。结论 miR-32可通过下调PETN的表达促进食管癌细胞的增殖。