真武汤调节鞘氨醇激酶1-磷酸鞘氨醇信号通路抗阿霉素肾病大鼠肾损伤的作用研究

目的:研究真武汤对阿霉素肾病(Adriamycin Nephropathy,AN)模型大鼠鞘氨醇激酶1(Sphingosine Kinase 1,SphK1)-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)信号分子的影响,探讨真武汤治疗阿霉素肾病大鼠蛋白尿的机制。方法:常规检测各试验组动物血脂、血浆白蛋白、24小时尿蛋白含量;实时聚合酶链反应(Real-time Polymerase Chain Reaction,RTPCR)检测肾组织中SphK1基因表达;免疫印迹法(Western Blot)检测肾组织中SphK1蛋白表达;液相色谱-串联质谱法(Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry,LC-MS/MS)检测SphK1、S1P活性。结果:模型组大鼠血脂水平、24小时尿蛋白含量显著升高,血浆白蛋白水平显著降低(P<0.05),肾脏SphK1酶活性、蛋白表达及S1P含量显著升高(P<0.05);与模型组相比,各给药组血脂水平、24小时尿蛋白含量明显降低,血浆白蛋白水平明显升高(P<0.05),肾脏SphK1酶活性、基因和蛋白表达及S1P含量明显下降(P<0.05),各治疗组之间差异无统计学意义。结论:真武汤可减少AN模型大鼠肾组织的SphK1酶活性、蛋白表达及S1P含量,改善其蛋白尿、血脂及血浆白蛋白水平。其作用可能与抑制SphK1、S1P信号分子的表达有关。

亚砷酸钠对人脐静脉内皮细胞损伤及鞘氨醇激酶1/1-磷酸鞘氨醇信号轴的影响

背景:血管内皮细胞是砷毒作用的关键靶点,砷致内皮细胞损伤的分子机制有待进一步研究。目的:研究亚砷酸钠对人脐静脉内皮细胞的损伤及鞘氨醇激酶1/1-磷酸鞘氨醇(SPHK1/S1P)信号轴的影响。方法:分离培养并鉴定人脐静脉内皮细胞,将人脐静脉内皮细胞暴露于含0,5,10,15,20,25μmol/L亚砷酸钠的培养液24 h,CCK-8法检测细胞存活率;倒置显微镜观察细胞形态;荧光探针DCFH-DA染色检测细胞内活性氧含量;Annexin V-FITC/PI双标记结合流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡;ELISA检测细胞内1-磷酸鞘氨醇含量;实时荧光定量PCR、Western blot分别检测血管细胞黏附分子1、鞘氨醇激酶1、1-磷酸鞘氨醇受体1的mRNA和蛋白表达。结果与结论:①与对照组(0μmol/L亚砷酸钠)相比,随着亚砷酸钠浓度的增加:细胞存活率逐渐降低,且呈剂量-效应关系;细胞融合率逐渐降低,细胞间隙逐渐增宽,脱落漂浮的细胞逐渐增多;细胞内活性氧含量逐渐升高;细胞凋亡率逐渐升高;细胞内1-磷酸鞘氨醇含量逐渐升高;血管细胞黏附分子1、鞘氨醇激酶1 mRNA和蛋白的相对表达量逐渐升高,1-磷酸鞘氨醇受体1 mRNA和蛋白相对表达量逐渐降低。②结果提示,亚砷酸钠诱导的人脐静脉内皮细胞损伤可能与SPHK1/S1P信号轴激活、1-磷酸鞘氨醇受体1下调有关。SPHK1/S1P信号轴可能成为砷致心血管损伤的新靶点。

鞘氨醇激酶-磷酸鞘氨醇轴在血管生成相关性疾病中的作用

血管生成是指在原有血管的基础上形成新血管的过程。病理性血管生成是癌症、心血管类疾病和视网膜病变等一系列疾病的标志。1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate, S1P)是一种信号脂质,由鞘氨醇激酶(sphingosine kinases, SPHK)合成,通过5种G蛋白偶联受体(sphingosine-1-phosphate receptors, S1PR1-5)发挥其不同的生物学和病理生理作用,并通过激活受体启动各种信号级联反应,影响细胞命运、血管张力、内皮功能和完整性以及淋巴细胞的运输等。其产生和信号的失衡与内皮功能障碍和异常血管生成等病理过程密切相关。越来越多的证据表明,SPHK-S1P轴在血管生成中发挥重要作用,尤其在癌症的发生发展与肿瘤微环境、动脉粥样硬化、心肌梗死等心血管类疾病,以及糖尿病和视网膜病变中具有重要意义。研究其相关作用与功能,可为治疗血管生成相关疾病提供新见解和药物治疗靶点。本文就SPHK-S1P轴通过SPHK以及S1PR1-5影响内皮细胞和平滑肌增殖、内皮细胞迁移以及由内皮细胞、周细胞和平滑肌细胞等形成管腔的分子机制进行阐述,同时进一步阐述SPHK-S1P轴如何通过鞘氨醇激酶以及S1PR1-5影响肿瘤、心血管类疾病、糖尿病以及视网膜病变中血管生成,旨在通过理解SPHK-S1P轴在血管生成中的分子机制为相关疾病提供新的治疗思路。

外源性1-磷酸神经鞘氨醇(S1P)对大鼠骨骼肌成肌细胞DNA合成的影响

目的观察外源性1-磷酸神经鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)对大鼠骨骼肌成肌细胞增殖的影响。方法分离和培养大鼠骨骼肌成肌细胞,通过制备S1P脂质体使S1P转运到骨骼肌成肌细胞内或直接加入外源性S1P,采用3 H-TdR渗入法检测S1P进入细胞内和在细胞外对骨骼肌成肌细胞DNA的合成;进一步使用磷酸神经鞘氨醇激酶(sphingosine kinase,SphK)活性抑制剂N,N-二甲基鞘氨醇(N,N-dimethyl sphingosine,DMS)和HACPT[2-(p-hydroxyanilino)-4-(p-chlorophenyl)thiazole],观察其对S1P促进DNA合成作用的影响。结果 S1P脂质体转入可明显促进骨骼肌成肌细胞DNA合成。100～1 000nmol/L剂量范围内S1P脂质体使细胞胸腺嘧啶核苷(3 H-TdR)的摄入量较对照组增加12.3%～50.7%(P<0.01),并与剂量呈正相关。该促进作用不会被SphK活性抑制剂DMS和HACPT所阻断。S1P直接加入培养液同样能促进细胞DNA合成(P<0.01),500和1 000nmol/L剂量组3 H-TdR的摄入量较对照组分别增加18.8%(P<0.05)和26.5%(P<0.05),增幅低于同剂量的S1P脂质体。该促进作用可被DMS和HACPT所阻断。结论外源性S1P可促进体外培养的大鼠骨骼肌成肌细胞增殖,其作用可能与细胞内SphK活性增加引起细胞内S1P生成增多。

1-磷酸神经鞘氨醇对大鼠骨骼肌成肌细胞分化的影响

【目的】观察1-磷酸神经鞘氨醇(S1P)对大鼠骨骼肌成肌细胞向成熟肌细胞分化、形成肌管的作用,探索定向诱导肌分化的途径及其分子机制。【方法】分离和培养大鼠骨骼肌成肌细胞,含不同浓度S1P的高糖DMEM培养基培养,收集细胞,在相差显微镜和共焦显微镜下观察形态变化,并通过免疫细胞化学方法分别检测成肌细胞分化的早期特异性标志—肌球蛋白和生肌素表达的改变。使用磷酸神经鞘氨醇激酶(SphK)活性抑制剂DMS和HACPT后观察S1P对骨骼肌成肌细胞的生肌素表达的作用。【结果】S1P能明显促进骨骼肌成肌细胞细胞形成肌小管,诱导2～3 d开始有肌管形成,之后肌管越来越多,到6～7 d达高峰;同对照组相比随S1P浓度增高,细胞核生肌素阳性率逐渐增高(P<0.01);SphK活性抑制剂抑制S1P促进骨骼肌成肌细胞生肌素阳性率的增高(P<0.01)。【结论】体外S1P可能通过提高SphK活性调节成肌细胞向成熟肌细胞分化。

大成散对成纤维细胞增殖活性及鞘氨醇激酶/1-磷酸鞘氨醇通路的影响

目的研究大成散对体外培养人皮肤成纤维细胞(HFF-1)增殖及鞘氨醇激酶/1-磷酸鞘氨醇(SPHK/S1P)通路的影响,并初步探讨其作用机制。方法制备大成散药液,采用CCK-8法检测不同浓度大成散药液对HFF-1细胞增殖活性的影响,确定最佳干预时间与浓度进行后续实验,Western Blot法检测大成散药液对HFF-1细胞转化生子因子-β1(TGF-β1)、SPHK1、SPHK2、S1P蛋白表达的影响,qRT-PCR法检测大成散药液对HFF-1细胞TGF-β1、SPHK1、SPHK2 mRNA表达的影响。结果5×10^(-2)g/L的大成散干预48h可促进HFF-1细胞的增殖,提高细胞活力;与对照组比较,大成散可以增加HFF-1细胞中TGF-β1、SPHK1、SPHK2、S1P蛋白表达水平(P<0.05),提高HFF-1细胞中TGF-β1、SPHK1、SPHK2 mRNA表达水平(P<0.05)。结论大成散可通过促进成纤维细胞增殖,上调TGF-β1表达,激活SPHK1/S1P通路,促进血管新生,发挥抗炎效应,或通过激活SPHK2,催化产生S1P,启动缺氧预处理机制,从而保护皮肤成纤维细胞,提高成纤维细胞的增殖能力,进而加速创面愈合。

鞘氨醇激酶/1-磷酸鞘氨醇信号通路在糖尿病及其并发症中作用的研究进展

全球糖尿病及其并发症发病率不断增加, 对公共卫生构成重大威胁, 开发对糖尿病及其并发症有效的治疗方法十分必要。鞘氨醇激酶(SphK)/1-磷酸鞘氨醇(S1P)信号轴是鞘脂代谢途径中重要的信号通路。越来越多的证据表明, SphK/S1P信号通路在糖尿病和相关并发症中起着关键作用。该文就SphK/S1P信号通路在糖尿病及其并发症中作用的研究进展作一综述, 以期为其治疗靶点提供思路。

鞘氨醇激酶及1-磷酸鞘氨醇信号参与大鼠肝窦微循环保护

目的:探讨鞘氨醇激酶/1-磷酸鞘氨醇(SphK/S1P)信号通路在肝脏缺血再灌注损伤(IRI)中肝窦微循环的保护作用。方法:2015年9月至2019年9月,将40只适龄雄性大鼠(购自常州卡文斯实验动物有限公司),信封法随机分4组包括,假手术(Sham)组,IRI+等体积生理盐水组(IRI组),IRI+SphK激动剂组(PMA组)和IRI+SphK阻断剂组(DMS组)。建立大鼠IRI模型,通过对SphK/S1P信号激动和阻滞后,应用苏木精-伊红(HE)和细胞凋亡染色原位缺口末端标记法(TUNEL)技术观察肝窦间隙、肝窦内皮细胞(LSEC)和肝细胞的形态学改变及其细胞凋亡程度,酶联免疫吸附(ELISA)和蛋白质印迹法(Western blot)对细胞间黏附分子(ICAM-1)和髓过氧化物酶(MPO)的表达进行评价。应用SPSS 17.0统计软件行χ2检验和单因素方差分析。结果:HE染色显示SphK激动剂(PMA)可改善缺血肝脏损伤,减轻肝窦异常扩张,LSEC损伤程度得到改善,其阻断剂反而加重LSEC的损伤。与Sham组(3.46±0.27)比较,IRI组大鼠血清S1P升高(4.71±0.42,t=4.336,P<0.05);与IRI组比较,PMA组血清S1P显著升高(36.01±10.13,t=5.347,P<0.01),DMS组血清S1P显著降低(15.83±3.14,t=6.080,P<0.05)。与Sham组[(10.09±1.05)%]比较,IRI组肝脏细胞凋亡率显著升高(28.83±2.06)%,t=14.040,P<0.05];与IRI组比较,PMA组肝脏细胞凋亡率显著降低[(13.59±3.02)%,t=7.221,P<0.05],而DMS组肝细胞凋亡率显著升高[(61.92±7.72)%,t=7.173,P<0.01]。与IRI组比较,PMA组肝脏S1PR的蛋白表达升高(S1PR:1.65±0.12比2.50±0.09,t=9.930,P<0.05),MPO、ICAM-1的蛋白表达降低(ICAM-1:3.21±0.39比1.52±0.26,t=6.245,P<0.05;MPO:2.51±0.20比1.09±0.13,t=10.310,P<0.05);而DMS组肝脏S1PR的蛋白表达降低(S1PR:1.65±0.12比1.31±0.09,t=3.926,P<0.05),MPO、ICAM-1蛋白表达升高(ICAM-1:3.21±0.395.92±0.22,t=7.855,P<0.05;MPO:2.51±0.20比5.21±0.43,t=9.861,P<0.05)。结论:SphK/S1P信号通过减少细胞凋亡,减少MPO和ICAM-1表达,减少白细胞和LSEC的黏附,从而改善肝窦微循环。

胡黄连苷Ⅱ对非小细胞肺癌恶性进展的影响

目的探讨胡黄连苷Ⅱ对非小细胞肺癌(NSCLC)恶性进展的影响及机制。方法将A549细胞分组为对照组,胡黄连苷Ⅱ低、中、高浓度组,K6PC-5[鞘氨醇激酶1(SPHK1)激活剂]组,胡黄连苷Ⅱ高剂量+K6PC-5组,检测细胞增殖、迁移、侵袭情况,以及细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、SPHK1、1-磷酸鞘氨醇受体3(S1PR3)及胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白的表达情况。以BALB/c裸鼠为对象,通过皮下接种A549细胞悬液建立NSCLC裸鼠移植瘤模型,并将其分为裸鼠-对照组,裸鼠-胡黄连苷Ⅱ低、中、高剂量组,裸鼠-K6PC-5组,裸鼠-胡黄连苷Ⅱ高剂量+K6PC-5组(每组5只),考察胡黄连苷Ⅱ对其瘤体质量及体积的影响。结果与对照组比较,胡黄连苷Ⅱ低、中、高浓度组的细胞OD450值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率、细胞侵袭数及PCNA、MMP-2、MMP-9、SPHK1、S1PR3、ERK1/2蛋白的相对表达量均显著降低;与裸鼠-对照组比较,裸鼠-胡黄连苷Ⅱ低、中、高剂量组裸鼠体内的瘤体质量及体积均显著降低或缩小,上述指标均呈浓度/剂量依赖性变化(P<0.05);K6PC-5组细胞和裸鼠-K6PC-5组裸鼠对应指标的变化趋势则相反(P<0.05)。与胡黄连苷Ⅱ高浓度组或裸鼠-胡黄连苷Ⅱ高剂量组比较,胡黄连苷Ⅱ高浓度+K6PC-5组细胞和裸鼠-胡黄连苷Ⅱ高剂量+K6PC-5组裸鼠的上述定量指标均显著升高或增大(P<0.05)。结论胡黄连苷Ⅱ可能通过抑制SPHK1/1-磷酸鞘氨醇/S1PR3信号通路来抑制NSCLC的恶性进展。

羟基喜树碱脂质体调节SphK1/S1P信号通路对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

【目的】探讨羟基喜树碱脂质体(LHCPT)调节鞘氨醇激酶1(SphK1)/1-磷酸鞘氨醇(S1P)信号通路对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。【方法】SD大鼠分为对照组、模型组、羟基喜树碱(HCPT)组、LHCPT组、卡托普利组、LHCPT+K6PC-5(SphK1激活剂)组,每组12只。除对照组外,其他组大鼠均需通过腹腔注射阿霉素的方法构建心力衰竭大鼠模型,建模成功后,进行给药处理,给药一天一次,持续4周。彩色多普勒超声仪检测大鼠左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF);HE、Masson染色分别检测大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化;ELISA法检测大鼠心肌组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;qRT-PCR检测大鼠心肌组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、I型胶原蛋白(Collagen I)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)表达;Western blot检测大鼠心肌组织中SphK1、S1P蛋白表达。【结果】与对照组比较,模型组大鼠心肌组织病理损伤及纤维化严重,LVESD、LVEDD、TNF-α、IL-6水平、TGF-β1、Collagen I、CollagenⅢmRNA表达及SphK1、S1P蛋白表达升高,LVEF降低(P<0.05);与模型组比较,HCPT组、LHCPT组、卡托普利组大鼠心肌组织病理损伤及纤维化减轻,LVESD、LVEDD、TNF-α、IL-6水平、TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA表达及SphK1、S1P蛋白表达降低,LVEF升高(P<0.05);与LHCPT组比较,LHCPT+K6PC-5组大鼠心肌组织病理损伤及纤维化加剧,LVESD、LVEDD、TNF-α、IL-6水平、TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA表达及SphK1、S1P蛋白表达升高,LVEF降低(P<0.05)。【结论】LHCPT可能通过抑制SphK1/S1P信号通路抑制心力衰竭大鼠心肌纤维化。

连翘苷调节SphK1/S1P/S1PR1信号通路对流感病毒肺炎大鼠肺损伤的影响

目的 探究连翘苷(KD-1)对流感病毒肺炎大鼠肺损伤的影响以及对鞘氨醇激酶1(SphK1)/1-磷酸鞘氨醇(S1P)/鞘氨醇1磷酸酯受体1(S1PR1)信号通路的调节机制。方法 将Wistar雄性大鼠分为对照组(灌胃等量0.9%NaCl)、模型组(灌胃等量0.9%NaCl)、阳性药物组(灌胃0.02 g·kg^(-1)利巴韦林)、PF-543组(灌胃10 mg·kg^(-1)SphK1抑制药PF-543 Citrate)和低、高剂量实验组(分别灌胃6.5、13 mg·kg^(-1)KD-1)。除对照组外,其余各组大鼠用流感病毒滴鼻建立流感病毒感染肺炎模型。测量大鼠的肺指数,用苏木精-伊红(HE)染色法观察大鼠肺组织的病理损伤情况,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-6的含量,用蛋白质印迹法检测大鼠肺组织中SphK1、S1P、S1PR1蛋白的表达水平。结果 低、高剂量实验组和PF-543组、阳性药物组、模型组、对照组的肺指数分别为(7.62±0.51)、(5.34±0.46)、(6.53±0.52)、(5.48±0.43)、(12.46±0.87)和(4.41±0.32)mg·g^(-1),IL-1β含量分别为(47.26±2.05)、(25.18±1.58)、(35.75±1.50)、(27.31±1.67)、(62.37±2.51)和(13.28±1.04)ng·L^(-1),TNF-α含量分别为(76.58±4.73)、(51.82±3.90)、(64.81±4.15)、(53.06±3.86)、(98.47±4.92)和(42.71±3.52)ng·L^(-1),IL-6含量分别为(57.62±4.29)、(39.06±3.86)、(48.75±3.83)、(41.23±3.61)、(76.92±5.24)和(28.56±3.17)ng·L^(-1),SphK1蛋白相对表达水平分别为1.07±0.08、0.51±0.04、0.65±0.05、0.53±0.04、1.28±0.09和0.36±0.03,S1P蛋白相对表达水平分别为1.21±0.10、0.57±0.05、0.73±0.06、0.58±0.05、1.39±0.11和0.39±0.03,S1PR1蛋白相对表达水平分别为0.45±0.03、0.83±0.07、0.64±0.05、0.81±0.07、0.28±0.02和1.03±0.07。模型组的上述指标与对照组比较,低、高剂量实验组、PF-543组、阳性药物组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 KD-1可能通过抑制SphK1/S1P/S1PR1信号通路减轻流感病毒肺炎大鼠的肺损伤。

基于SphK1/S1PR2通路探讨肾必宁颗粒对IgA肾病大鼠肾组织的保护作用

目的:探讨肾必宁颗粒通过鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1,SphK1)/1-磷酸鞘氨醇受体2(sphingosine 1 phosphate receptor 2,S1PR2)通路改善IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)大鼠肾损伤的作用及机制。方法:将54只健康雄性SD大鼠按照完全随机分组法分为空白组(n=10)、模型组(n=10)、泼尼松组(n=10)、肾必宁低剂量组(n=12)和肾必宁高剂量组(n=12)。除空白组外,其余4组建立IgAN模型,第9周起治疗组灌胃给药,7周后生化检测血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、谷丙转氨酶(ALT)、血清白蛋白(ALB)、尿红细胞计数及24 h尿蛋白定量(24 h-UTP);苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠肾组织病理学变化;免疫荧光观察IgA沉积;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测SphK1、S1PR2蛋白表达;实时荧光定量PCR法(RTPCR)检测SphK1、S1PR2 mRNA表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠尿红细胞计数、24 h-UTP、SCr、BUN水平均显著升高(P<0.01或P<0.05),ALB水平显著降低(P<0.01),ALT水平有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05),有明显的肾脏病理损伤,免疫荧光可见大量IgA荧光沉积,肾组织SphK1、S1PR2蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,泼尼松组、肾低组、肾高组大鼠尿红细胞数、24 h-UTP、BUN水平均明显降低(P<0.01),ALB水平显著升高(P<0.01),各组ALT水平有所下降,但差异无统计学意义(P>0.05),肾低组SCr水平显著降低(P<0.05),肾脏病理有不同程度改善,IgA荧光沉积可见不同程度减少,肾组织SphK1、S1PR2蛋白及mRNA表达水平明显下降(P<0.01)。结论:肾必宁颗粒可能通过抑制SphK1/S1PR2通路来降低IgAN大鼠尿蛋白,减轻血尿并改善肾功能,从而起到保护肾脏、防治肾损害的作用。

SKI-Ⅱ联合顺铂对人胃癌裸鼠移植瘤抑制作用及其机制探讨

目的:研究鞘氨醇激酶-1(sphingosine kinase-1,SphK1)在胃癌裸鼠移植瘤血管生成中的作用及其作用机制。方法:建立人胃癌SGC7901裸鼠移植瘤模型后,将荷瘤小鼠随机分为4组,分别予以腹腔注射生理盐水、SKI-Ⅱ、顺铂和SKI-Ⅱ联合顺铂干预治疗,1次/周,共3周。每隔3d测1次肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率;蛋白质印迹法法检测瘤体中SphK1和VEGF的表达;免疫组化方法检测瘤体SphK1、VEGF和CD34的表达情况及计算瘤体内瘤体微血管密度(microvessel densitv,MVD)。结果:与生理盐水组相比,3组治疗组均有抑制肿瘤生长作用,SKI-Ⅱ组和顺铂组抑瘤率分别为(48.69±1.39)%和(75.24±1.19)%;其中以SKI-Ⅱ联合顺铂组抑瘤作用最为明显,抑瘤率达(90.25±1.53)%,各组抑瘤率之间差异有统计学意义,F=1865,P<0.001。免疫组化结果示,SKI-Ⅱ和SKI-Ⅱ联合顺铂组SphK1蛋白表达分别为(45.62±7.54)%和(20.50±5.96)%,VEGF蛋白表达分别为(45.38±7.82)%和(22.25±4.74)%,瘤体内的MVD为15.12±1.55和9.38±1.92,与对照组差异有统计学意义,P<0.001。单用顺铂对SphK1表达(82.50±5.95)%)、VEGF的表达(83.25±4.40)%及瘤体内MVD(24.50±5.42)的影响差异无统计学意义,P>0.05。Pearson相关分析显示,瘤体组织SphK1与VEGF的表达呈正相关,r=0.968,P<0.001;瘤体组织MVD计数与VEGF表达呈正相关,r=0.862,P<0.001。蛋白质印迹法检测结果示,SKI-Ⅱ及SKI-Ⅱ联合顺铂组可显著下调SphK1和VEGF的表达,P<0.001,单用顺铂对SphK1和VEGF的表达差异无统计学意义,P值分别为0.083和0.165。结论:下调SphK1的表达后,可减少VEGF合成与分泌,并抑制肿瘤血管生成,可能是抑制裸鼠胃癌移植瘤生长的途径之一。

木犀草素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠SPH/SPHK1/S1P1通路及神经元凋亡的影响

目的探讨木犀草素(Luteolin)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)大鼠神经酰胺-鞘氨醇(Sphingosine, SPH)/鞘氨醇激酶1(Sphingosine kinase 1,SPHK1)/1-磷酸鞘氨醇受体1(Sphingosine-1-phosphate 1,S1P1)通路蛋白表达水平及神经元凋亡的影响。方法取雌性Wistar大鼠,采用注射豚鼠脊髓免疫抗原法建立EAE模型,将造模成功的50只大鼠随机分为模型(EAE)组,Luteolin低(5mg/kg)、中(25 mg/kg)、高(50 mg/kg)剂量组,芬戈莫德(FTY720)阳性对照组(61.7 mg/kg),每组各10只;另取10只雌性Wistar大鼠,注射等量生理盐水,作为空白对照(Control)组;各组于造模15 d后开始给药,Luteolin低、中、高剂量组经腹腔注射相应剂量Luteolin药物,芬戈莫德(FTY720)阳性对照组灌胃给予相应剂量的FTY720,EAE组和Control组灌胃和腹腔注射等量生理盐水,各组连续给药14 d, 2次/d;各组大鼠于末次给药12 h后对大鼠EAE临床症状进行评分;取脊髓组织,用苏木精-伊红染色(Hematoxylin eosin, HE)及固蓝(Luxol fast blue, LFB)染色法检测大鼠髓鞘组织病理表现及脱髓鞘面积;原位缺口末端转移酶标记法(TdT-mediated dUTP nick and labeling, TUNEL)法检测髓鞘组织中神经元的凋亡情况并计算凋亡率;以蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测髓鞘组织中通路蛋白SPHK,SPH,S1P1及凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(Cystein-asparate protease-12,Caspase-12)蛋白相对表达水平。结果与Control组比较,EAE组大鼠EAE临床症状评分、脊髓组织炎性细胞浸润和髓鞘脱失程度、神经元凋亡率、髓鞘组织中SPH,SPHK1,S1P1及Caspase-12蛋白表达水平均升高(P<0.05);与EAE组比较,Luteolin低、中、高剂量组及芬戈莫德(FTY720)阳性对照组大鼠EAE临床症状评分、脊髓组织炎性细胞浸润和髓鞘脱失程度、神经元凋亡率、髓鞘组织中SPH,SPHK1,S1P1及Caspase-12蛋白表达水平均降低(P<0.05),且Luteolin各剂量组上述指标水平呈剂量依赖性;Luteolin高剂量组与芬戈莫德(FTY720)阳性对照组的上述指标水平均无明显差异(P>0.05)。结论 Luteolin可能通过抑制EAE模型大鼠髓鞘组织SPHK,SPH,S1P1蛋白表达来抑制EAE大鼠脱髓鞘病变及神经元凋亡。

Sphk/S1P轴与S1PR在心肌纤维化中的研究进展

心肌纤维化是循环系统或心脏自身在心脏缺血、全身性疾病、药物或其他损伤性刺激的影响下出现的间质性心肌胶原网的数量和质量变化。其是多种心血管疾病的共同病理结果,与心律失常、心功能不全和心力衰竭等多种疾病的发生有关,探索心肌纤维化相关通路对于防治心肌纤维化等心血管疾病具有重要意义。有研究显示,鞘氨醇激酶/1-磷酸鞘氨醇(Sphk/S1P)轴和1-磷酸鞘氨醇受体(S1PR)在心肌纤维化中发挥重要作用。本文主要对SphK/S1P轴介导的下游信号通路及S1PR在纤维化中的作用进行综述,并简要介绍S1PR亚型调节剂在心功能和纤维化治疗方面的进展。