胞质磺基转移酶2B成员1影响动脉粥样硬化进展的机制研究

目的研究胞质磺基转移酶2B成员1(SULT2B1)在动脉粥样硬化(AS)发展中的影响及机制。方法选取12只8周龄载脂蛋白E敲除(apoE^(-/-))雄性小鼠高脂饮食饲料喂养12周后,根据注射的腺相关病毒(AAV)随机分为对照腺相关病毒(AAV-GFP)组和敲低SULT2B1的腺相关病毒(AAV-shSULT2B1)组,每组6只,采用油红O染色评估主动脉和主动脉根部斑块形成,检测血清炎性因子和血脂水平;RAW264.7细胞中根据转染的腺病毒分为对照腺病毒(Ad-GFP)组和敲低SULT2B1的腺病毒(Ad-shSULT2B1)组(n=3)进行RNA测序检测下游RNA变化;筛选出长链非编码RNA(LncRNA)gga3-204作为下游研究对象,在RAW264.7细胞中根据转染的小干扰RNA(siRNA)分为si-NC组、si-SULT2B1组、si-Lncgga3-204组和si-SULT2B1+si-Lncgga3-204组(n=3),检测炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平。结果AAV-GFP组与AAV-shSULT2B1组小鼠高脂喂养后体质量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。AAV-shSULT2B1组小鼠血清TC、TG、LDL-C、主动脉斑块面积占比[(8.38±1.33)%vs(11.83±1.04)%,P=0.000]、主动脉根部斑块内TG含量[(12.29±1.54)%vs(17.67±1.53)%,P=0.000]显著低于AAV-GFP组。AAV-shSULT2B1组小鼠血清IL-1β、IL-6水平显著低于AAV-GFP组,差异有统计学意义(P<0.01)。si-SULT2B1组IL-1β、IL-6mRNA水平显著低于si-NC组,差异有统计学意义(P<0.01)。Ad-shSULT2B1组LncRNAgga3-204表达显著高于Ad-GFP组,差异有统计学意义(P<0.01)。si-SULT2B1组Lncgga3-204水平显著高于si-NC组,差异有统计学意义(2.32±0.60vs1.19±0.21,P=0.036)。si-Lncgga3-204组IL-1β、IL-6mRNA水平显著高于si-NC组,差异有统计学意义(P<0.01);si-SULT2B1+si-Lncgga3-204组IL-1β、IL-6mRNA水平显著高于si-SULT2B1组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SULT2B1通过Lncgga3-204影响巨噬细胞炎性反应,进而影响AS的进展。

酪氨酸磺基转移酶1在luminal B型晚期乳腺癌侵袭和转移中作用

目的研究酪氨酸磺基转移酶1(TPST1)在luminal B型晚期乳腺癌侵袭和转移中的作用。方法收集luminal B型晚期乳腺癌女性患者组织标本169例(含癌组织和对应癌旁正常组织),平均年龄55.2岁。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测luminal B型晚期乳腺癌组织及其对应癌旁正常组织中TPST1的表达量,分析表达量与乳腺癌患者临床特征之间的关系。通过过表达TPST1的表达后检测乳腺癌细胞系增殖、转移和侵袭能力的改变。结果 TPST1在luminal B型晚期乳腺癌组织中表达量高于对应癌旁正常组织(t=2.376,P=0.018 6);其高表达与患者年龄(χ~2=3.903,P=0.048)、吸烟(χ~2=8.601,P=0.003)、饮酒(χ~2=4.099,P=0.043)、临床分期(χ~2=8.512,P=0.004)、淋巴结转移(χ~2=16.205,P <0.001)、远端转移(χ~2=6.139,P=0.013)、HER-2(χ~2=4.797,P=0.029)相关;能够缩短患者生存期(χ~2=6.737,P <0.001);过表达TPST1基因后能够促进TPST1蛋白质表达(F=92.84,P <0.001);过表达TPST1后能够促进乳腺癌细胞系增殖(P均<0.05)、迁移(F=14.11,P=0.001)和侵袭(F=36.95,P <0.001)。结论 TPST1在luminal B型晚期乳腺癌中高表达,且能够缩短患者生存期,促进乳腺癌细胞增殖、转移和侵袭。

醛酮还原酶1成员B1(AKR1B1)激活NF-κB通路诱导小鼠BV-2小胶质细胞活化抑制视网膜神经节细胞活性

目的探讨醛酮还原酶1成员B1(AKR1B1)在调控小胶质细胞极化中的机制及其对视网膜神经节细胞(RGC)活性的影响。方法利用脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞极化,分别利用AKR1B1小干涉RNA(siRNA)和抑制剂泊那司他(ponalrestat/Statil)作用BV-2细胞;实时定量PCR检测BV-2小胶质细胞AKR1B1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、环加氧酶2(COX2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA表达,ELISA检测BV-2小胶质细胞培养上清液TNF-α、IL-1β含量。采用BV-2条件培养基处理原代RGC,免疫荧光细胞化学染色检测RGC脑特异性同源盒蛋白3a(Brn-3a)的表达以确定RGC活性,TUNEL染色检测RGC凋亡;Western blot法检测RGC核因子κBp65(NF-κBp65)、核因子κB抑制物激酶(IKK)蛋白磷酸化情况。结果LPS诱导BV-2细胞中TNF-α、IL-1β、COX2和iNOS的mRNA表达增加,培养液上清中TNF-α、IL-1β含量增加。BV-2细胞条件培养基导致RGC活力降低、凋亡增加;敲低AKR1B1后,可阻断BV-2细胞M1型极化,恢复RGC活力;敲低AKR1B1可阻断LPS诱导的IKK磷酸化和NF-κBp65的入核。结论AKR1B1可通过激活NF-κB通路诱导小胶质细胞的活化,进而降低RGC的活力并促进其凋亡。

干扰SULT2B1抑制人肝癌细胞BEL-7402的上皮间质化

目的研究羟基类固醇硫酸基转移酶SULT2B1与人肝癌细胞BEL-7402上皮间质转化的关系及其作用机制。方法细胞分为空白对照组(NC)、阴性对照组(control-siRNA)和SULT2B1干扰组(SULT2B1-siRNA),LipofectamineTM2000脂质体转染细胞,real-time PCR和Western blot检测干扰效果。Western blot检测紧密连接蛋白(ZO-1)、波形蛋白(vimentin)和转录因子ZEB1的表达。结果 SULT2B1干扰BEL-7402细胞后其mRNA与蛋白表达均显著降低(P<0.05),ZO-1表达水平升高(P<0.05),vimentin的表达及ZEB1的蛋白水平均降低(P<0.05)。结论干扰SULT2B1通过下调ZEB1的表达抑制人肝癌细胞BEL-7402的上皮间质化。

干扰SULT2B1对小鼠H22肝癌细胞增殖抑制作用的实验研究

目的研究羟基类固醇硫酸基转移酶SULT2B1对小鼠H22肝癌细胞增殖能力的影响及作用机制。方法用不同MOI值(50,100)的SULT2B1慢病毒干扰载体感染H22细胞,CCK-8法检测干扰SULT2B1对H22细胞增殖能力的影响,采用Real-time PCR和Western blot检测增殖相关基因BCL2和MYC的mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组相比,干扰SULT2B1显著抑制H22细胞在不同时间点的增殖能力(MOI=100)(P<0.05)。不同MOI值(50,100)感染显著抑制H22细胞中SULT2B1基因的表达,并降低BCL2与MYC的mRNA及蛋白水平(P<0.05),但不同MOI值间各项指标的差异不明显(P>0.05)。结论干扰SULT2B1可抑制H22细胞的体外增殖能力,其作用主要与下调BCL2和MYC基因的表达水平有关。

SULT2B1影响小鼠Hepa1-6肝癌细胞的HIF-1α,糖酵解及血管新生

目的研究羟基类固醇硫酸基转移酶SULT2B1对小鼠Hepa1-6肝癌细胞HIF-1α、糖酵解及血管新生能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法分别用SULT2B1过表达及干扰载体感染Hepa1-6细胞,采用Real-time PCR和Western blot检测过表达/干扰SULT2B1对HIF-1α表达水平的影响,同时检测糖酵解相关基因HK-Ⅱ和LDH的mRNA表达水平。CCK-8法检测干扰SULT2B1的肿瘤条件培养基(tumor conditioned medium,TCM)对小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3增殖能力的影响,并检测VEGF的mRNA表达水平。建立Hepa1-6细胞裸鼠移植瘤模型,免疫组化染色检测裸鼠瘤组织中CD34的表达水平。结果过表达/干扰SULT2B1可分别上调/下调HIF-1α的mRNA及蛋白表达水平,且干扰SULT2B1可使HK-Ⅱ和LDH的mRNA表达水平降低,过表达发生相反的变化(P<0.05)。干扰SULT2B1的TCM可抑制bEnd.3细胞的增殖能力,并降低VEGF的mRNA表达水平(P<0.05)。同时,干扰SULT2B1可降低Hepa1-6细胞移植瘤在裸鼠体内的生长并降低瘤组织中的微血管密度(P<0.05)。结论干扰SULT2B1可抑制Hepa1-6细胞的糖酵解及血管新生能力,其作用主要与下调HIF-1α、HK-Ⅱ、LDH及VEGF的表达水平有关。

PD-L1、SULT2B1、CD44和CapG在胃癌组织中表达及临床意义

目的探讨程序性死亡因子1及其配体(PD-L1)、胞质磺基转移酶(SULT)2B1、CD44和巨噬细胞加帽蛋白(CapG)在胃癌组织中表达及临床意义。方法选取行手术胃癌患者的癌组织及癌旁组织73例。采用免疫组化法测定胃癌组织及癌旁组织PD-L1和SULT2B1蛋白表达;采用Western印迹测定胃癌组织及癌旁组织CD44和CapG蛋白表达。比较癌组织与癌旁组织PD-L1和SULT2B1蛋白表达阳性率、CD44和CapG蛋白表达灰度值;比较癌组织不同临床分期淋巴结转移PD-L1和SULT2B1蛋白表达阳性率;比较癌组织不同临床分期、淋巴结转移CD44和CapG蛋白表达灰度值。结果癌组织PD-LA、SULT2B1表达率显著高于癌旁组织(P<0.001)。癌组织CD44和CapG蛋白表达灰度值显著高于癌旁组织(P<0.001)。TNMⅢ~Ⅳ期患者癌组织PD-L1和SULT2B1蛋白表达阳性率、CD44和CapG蛋白表达灰度值显著高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.001),淋巴结转移阳性患者均显著高于无淋巴结转移(P<0.001)。结论胃癌组织中PD-L1、SULT2B1、CD44和CapG蛋白高表达,且与临床分期和淋巴结转移密切相关。

干扰SULT2B1下调MMP-2抑制Hepa1-6肝癌细胞的体外迁移与侵袭

目的研究羟基类固醇硫酸基转移酶(SULT2B1)对小鼠肝癌细胞Hepa1-6体外迁移与侵袭的影响及分子机制。方法分别用SULT2B1慢病毒干扰载体和对照载体感染Hepa1-6细胞,设立干扰组和对照组。Transwell法检测细胞的侵袭与迁移能力,Real-time PCR法检测MMP-2、MMP-9和TIMP-2的mRNA水平,明胶酶谱法检测肿瘤条件培养基(TCM)中MMP-2和MMP-9的活性。结果 SULT2B1干扰组穿过未铺和铺Matrigl胶滤膜的细胞数较对照组明显减少(P<0.05),干扰SULT2B1下调MMP-2、上调TIMP-2的mRNA水平(P<0.05),干扰SULT2B1的TCM降低MMP-2的活性(P<0.05)。结论干扰SULT2B1可抑制Hepa1-6细胞的迁移与侵袭能力,其机制主要与降低MMP-2,升高TIMP-2的表达水平有关。

干扰SULT2B1对Hepa1-6肝癌细胞凋亡的影响及机制研究

目的研究羟基类固醇硫酸基转移酶SULT2B1对小鼠Hepa1-6肝癌细胞凋亡的影响及作用机制。方法SULT2B1慢病毒干扰载体感染Hepa1-6细胞(MOI=100),Real-time PCR检测其干扰效果。采用流式细胞仪通过Annexin V-APC/7-ADD染色检测干扰SULT2B1后Hepa1-6细胞凋亡率的改变,Western blot检测FAS和p-JNK的蛋白表达水平。结果构建的SULT2B1干扰载体可显著抑制Hepa1-6细胞中SULT2B1的表达(P<0.05)。Hepa1-6细胞中干扰SULT2B1后其凋亡率较对照组相比显著增加(P<0.05),干扰SULT2B1后可显著增加FAS和p-JNK的蛋白表达水平(P<0.05)。结论干扰SULT2B1可促进Hepa1-6细胞的凋亡,其作用主要与增加FAS和p-JNK的蛋白表达水平有关。

醛酮还原酶家族1成员B10过表达的宫颈癌细胞株Hela增殖、周期、侵袭和迁移观察

目的观察醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)过表达的宫颈癌细胞增殖、周期侵袭和迁移情况。方法将Hela细胞分为观察组和对照组,观察组用慢病毒系统转染AKR1B10过表达质粒,对照组转染空质粒。采用Western blotting法检测两组细胞AKR1B10、p53、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、波形蛋白(Vimentin)蛋白;采用MTT法、克隆形成实验观察两组细胞增殖情况,结果分别用OD570、形成细胞克隆数量表示;采用流式细胞术检测两组细胞周期分布;采用划痕实验观察两组细胞迁移情况,结果以划痕愈合百分比表示;采用Transwell小室实验观察两组细胞侵袭情况,结果以穿膜细胞数表示。结果观察组细胞AKR1B10蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05)。MTT法测得继续培养24、48、72 h观察组细胞OD570均低于对照组(P均<0.05),克隆形成实验观察组克隆数量少于对照组(P<0.05)。与对照组相比,观察组G0~G1期细胞比例上升(P<0.05),G2~M期和S期细胞比例下降(P均<0.05)。观察组划痕愈合百分比低于对照组(P<0.05)。观察组穿膜细胞数低于对照组(P<0.05)。观察组p53蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05),MMP-2和Vimentin蛋白相对表达量均低于对照组(P均<0.05)。结论 AKR1B10过表达可抑制宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭和迁移,阻滞细胞周期于G0~G1期,p53、MMP-2和Vimentin途径可能在其中发挥作用。

SCNN1B、YAP1、ABCG2在非小细胞肺癌组织中的表达及相关性

目的分析SCNN1B基因、Yes相关蛋白1(YAP1)、ATP结合膜转运蛋白超家族G成员2(ABCG2)在非小细胞肺癌组织中的表达、相关性及联合检测对此病的预测价值。方法选取2019年7月—2020年7月秦皇岛市第一医院收治的120例非小细胞肺癌患者,取癌组织标本,另外纳入通过手术切除的肺组织良性病变标本120例,分析SCNN1B、YAP1、ABCG2在非小细胞肺癌组织中的表达、相关性及三者联合检测对非小细胞肺癌的预测价值。结果与肺良性病变组织相比,癌组织中SCNN1B、YAP1、ABCG2表达量均较高(P<0.05)。SCNN1B、YAP1、ABCG2表达与非小细胞肺癌患者性别、年龄、病理类型无关,差异无统计学意义(P>0.05);SCNN1B、YAP1、ABCG2表达与非小细胞肺癌患者肿瘤直径、TNM分期、有无淋巴结转移、分化程度相关,肿瘤直径≥3cm、Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移、中低分化患者SCNN1B、YAP1、ABCG2表达量较高(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,SCNN1B与YAP1之间呈正相关(r=0.301,P<0.001);SCNN1B与ABCG2之间呈正相关(r=0.277,P=0.002);YAP1与ABCG2之间呈正相关(r=0.372,P<0.001)。ROC曲线分析SCNN1B、YAP1、ABCG2对非小细胞肺癌的预测价值显示,与SCNN1B、YAP1、ABCG2单项相比,三项联合对非小细胞肺癌的预测价值较高(P<0.05)。结论SCNN1B、YAP1、ABCG2在非小细胞肺癌组织中表达升高,且三者呈正相关,联合检测对非小细胞肺癌的诊断价值较高。

MiR-106b对子宫肌瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及与SULT2A1的靶向关系

目的:探讨微小RNA(miR)-106b在子宫肌瘤细胞增殖、侵袭和凋亡中的作用与潜在机制。方法:将体外培养的人子宫肌瘤细胞分为阴性对照(NC)组(转染miR-106b模拟物阴性对照)、miR-106b组(转染miR-106b模拟物)、反义(anti)-NC组(转染miR-106b抑制剂阴性对照)和anti-miR-106b组(转染miR-106b抑制剂),采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞中miR-106b的表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,平板克隆实验检测细胞的克隆形成能力,Transwell小室检测细胞侵袭,流式细胞仪检测细胞凋亡;生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因实验检测miR-106b和磺基转移酶2A1(SULT2A1)的靶向关系,免疫印迹(Western blotting)法检测miR-106b对SULT2A1蛋白的调控作用。结果:与NC组比较,miR-106b组细胞中miR-106b的表达水平、细胞存活率、克隆形成率、侵袭细胞数均明显升高,细胞凋亡率和SULT2A1蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);与anti-NC组比较,anti-miR-106b组细胞中miR-106b的表达水平、细胞存活率、克隆形成率、侵袭细胞数均明显降低,细胞凋亡率和SULT2A1蛋白的表达水平均明显升高(P<0.05)。生物信息学软件Target Scan预测到miR-106b与SULT2A1 3’UTR存在互补的结合位点;双荧光素酶报告基因实验证实SULT2A1是miR-106b的靶基因。结论:miR-106b可促进子宫肌瘤细胞增殖、侵袭并抑制其凋亡,其作用机制可能与靶向调控SULT2A1表达有关。

免疫抑制性受体LILRB2对白血病细胞系增殖和凋亡的影响

目的探讨免疫抑制性受体—白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员2(LILRB2)在人白血病细胞系中的表达、功能和相关机制,为白血病的靶向治疗提供新的方向。方法采用流式细胞术和Western blotting等方法确定LILRB2在THP1、U937、K562等白血病细胞系中的表达情况;以LILRB2高表达的THP1细胞为研究对象,利用特异性靶向LILRB2的shRNA慢病毒载体(带GFP标记)包装病毒并感染THP1细胞,使用流式细胞分选技术获得GFP+的稳定表达细胞株,并分别在mRNA水平和蛋白水平检测shRNA干扰效率,同时监测LILRB2敲除后不同时间点细胞增殖、凋亡等细胞命运的变化,分析LILRB2敲除后其下游调控信号改变等相关分子机制。结果 3株细胞系均表达LILRB2,其中又以THP1的表达最高;通过Real-Time PCR及Western blotting方法表明所构建的4个shRNA慢病毒干扰质粒中,shLILRB2-717及shLILRB2-1312能显著下调LILRB2的表达;抑制LILRB2在THP1细胞中的表达可导致细胞增殖明显减缓并出现大量坏死细胞。流式细胞术分析显示:shLILRB2-717和shLILRB2-1312组细胞早期凋亡率分别为(7.90±1.61)%和(24.80±1.32)%,显著高于对照组(Scramble组)的(3.96±0.64)%(P<0.05);两组细胞的晚期凋亡率分别为(13.80±0.98)%和(23.60±1.03)%,均显著高于Scramble组的(10.80±0.48)%(P<0.05);LILRB2敲除可导致SHP1和磷酸化SHP1(p-SHP1)表达的显著下调,提示LILRB2可能通过SHP1调控白血病细胞系的增殖和凋亡。结论免疫抑制性受体LILRB2可表达在多种白血病细胞系,抑制LILRB2的表达可引起THP1细胞中SHP1和p-SHP1的显著下调并导致细胞大量凋亡,揭示SHP1可能对白血病的演变具有正向调控作用。

SULT1C2在肝癌中表达及其与预后关系生信分析

目的研究磺基转移酶1C2(SULT1C2)基因在肝癌中的表达情况及其与病人临床预后的关系,探讨SULT1C2基因在肝癌中作用的分子机制。方法从癌症基因组图谱(TCGA)和基因表达综合(GEO)数据库下载泛癌和肝癌原始RNA测序数据及病人的临床资料,利用R4.0.2提取SULT1C2基因表达值并在肝癌分子图谱数据库(HCCDB)和肝癌组织中验证,结合临床肝癌样本分析SULT1C2基因在肝癌组织中表达及其与病人预后的关系。通过基因富集分析(GSEA)分析SULT1C2基因相关的生物学功能和信号通路,采用Pearson相关性分析检验SULT1C2与信号通路间的相关性。结果TCGA、GEO和HCCDB数据集以及临床肝癌样本检测结果显示,SULT1C2在泛癌和肝癌组织中表达水平显著上调(P<0.05);Kapalan-Meier生存分析显示,SULT1C2表达与病人不良预后相关(P<0.05)。GSEA分析显示,SULT1C2在不同肿瘤中发挥抑癌或促癌的双重作用。在肝癌组织中,SULT1C2表达的同时可激活转录因子E2因子(E2F)、G2M检查点和MYC信号通路。结论SULT1C2基因在肝癌中高表达,它可能通过激活E2F、G2M检查点和MYC信号通路诱导肝癌病人的不良预后,有望成为肝癌潜在的诊断和治疗新靶点。

基于生物信息学数据库的肺腺癌组织中HMGB1表达及相关下游通路分析

目的:通过生物信息技术探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)促进肺癌进展的潜在关键通路和环节。方法:UALCAN数据库分析HMGB1表达相关的基因和相关基因的生存分析。STRING数据库分析蛋白质-蛋白质相互作用。AnimalTFDB3.0和JASPAR数据库预测转录因子以及结合位点。KEGG数据库分析相关信号通路。结果:生物信息分析结果显示细胞周期蛋白依赖激酶1(CDK1)、H2A组蛋白家族成员Z(H2AFZ)与HMGB1的表达在肺腺癌(LUAD)中呈正相关关系,且CDK1和H2AFZ与LUAD的不良预后有关。预测到SOX2和SP1是CDK1或H2AFZ的转录因子。信号通路分析结果显示Akt和ERK可以调控SOX2的表达。结论:CDK1、H2AFZ可能是HMGB1参与LUAD进展的重要节点,HMGB1-Akt/ERK-SOX2-CDK1/H2AFZ可能是HMGB1促进LUAD进展的关键通路。

硫酸类肝素-3-0-磺基转移酶B1对乙型肝炎病毒复制的影响

目的研究硫酸类肝素3O磺基转移酶Bl（HS3ST381）对HBV复制的影响。方法以HepG2细胞为阴性对照组，转染2．5ugpCH9HBV（HBV表达质粒）的HepG2细胞为阳性对照组；转染了2．5μgpCH9HBV、1．5μgpcDNA3．1（HS3ST3Bl表达质粒载体）和2．0μgpTZU6＋1（干扰质粒构建载体）的HepG2细胞为对照组；转染了2．5μgpCH9HBV、1．5μgpCDNA3．1-HS3ST381和2．0μgpTZU6＋1的HepG2细胞为实验组A；转染了2．5μgDCH9-HBV、1．5ugpCDNA3．1-HS3ST3Bl和2．0μgpshll26（HS3ST3Bl的干扰质粒）的HepG2细胞为干扰组A。转染了2．5μgpCH9-HBV和2．0μgpTzu6＋1的HepG2细胞为实验组B；转染了2．5μgpCH9HBV和2．0μgpshll26的HepG2为干扰组B。采用Southernblot和实时聚合酶链式反应技术检测HS3ST381共转染处理及未共转染处理的细胞内HBV复制中间体含量和病毒总RNA表达量，用双荧光素酶报告系统检测这种变化与HBV启动子[核心启动子（cp）、x蛋白启动子（xp）、包膜蛋白启动子l（spl）、包膜蛋白启动子2（sp2）]活性的关系。采用SPSSl7．0统计软件进行单因素方差分析，P〈0．05为差异有统计学意义。结果以对照组HBVDNA含量为l，实验组A、干扰组AHBVDNA含量分别为10％±2％、31％±4％，对照组与实验组A比较，F=20．8，p=0．034，差异有统计学意义。实验组A与干扰组A比较，F=24．9，p=0．021，差异有统计学意义。与干扰组B比较，试验组BHBVDNA水平上升了130％±11％。在HBV稳定表达细胞株中转染pCDNA3．1-HS3ST381分别为0．5、1．0、1．5ug时，HBVDNA水平分别是对照组的90．0％±3．1％、82．0％±2．3％、21．0％±1．9％，与对照组比较，F值分别为22．7、20．3、26．5，尸值分别为0．029、0．041、0．015，差异均有统计学意义。实验组AHBV总RNA量为对照组总RNA量的17．0%±2．7％，两组比较，F=25．6，p=0．018，差异有统计学意义。干扰组AHBV总RNA的量恢复到对照组的74．0％±3．9％，实验组A与干扰组A比较，F=21．3，p=0．032，差异有统计学意义。但HS3ST381对总RNA的下调与HBV的启动子活性无关。结论HS3ST381对HBV复制和HBV总RNA水平均有下调作用，但总RNA的下调不是HS3ST381直接作用于HBV启动子的结果。

磺基转移酶2A1蛋白、miR-23、孕激素受体在子宫肌瘤发生、发展中的作用机制研究

目的分析磺基转移酶2A1(SULT2A1)、微小核糖核酸-23(miR-23)、孕激素受体(PR)在子宫肌瘤发生、发展过程中的表达变化,探讨其作用机制,为子宫肌瘤患者的诊断及治疗提供新路径。方法选择2017年1月-2017年12月收治的50例子宫肌瘤手术切除患者为观察组,同期行子宫切除的非子宫肌瘤患者50例为对照组。两组患者术前取外周静脉血,采用酶联免疫法测定血清PR水平,采用PCR检测血清miR-23、SULT2A1水平。采用Western Blot法检测所有组织中的PR、SULT2A1表达,采用实时荧光定量PCR技术检测miR-23表达。结果观察组患者血清PR水平明显高于对照组,SULT2A1、miR-23水平均明显低于对照组(均P<0.05)。观察组肌瘤组织中miR-23、SULT2A1表达低于肌层组织和对照组,PR表达高于肌层组织和对照组(P<0.05),观察组子宫肌瘤外膜肌层组织中SULT2A1、miR-23表达与对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05),但PR表达高于对照组(P<0.05)。PR在子宫肌瘤组织和肌瘤外膜肌层组织中的表达与子宫肌瘤发生率呈正相关,而SULT2A1、miR-23表达与子宫肌瘤发生率呈负相关。结论SULT2A1和miR-23蛋白活性降低,PR高表达与子宫肌瘤发生、发展密切相关,三者共同作用可能导致子宫肌瘤发生、发展。

NF-κB通过Slc1a2调控树突状细胞成熟及功能的研究

目的研究核因子-κB(NF-κB)通过溶质载体家族1成员2(Slc1a2)对树突状细胞(DC)成熟及功能的调控作用。方法采用Slc1a2特异性的siRNA以及过表达Slc1a2真核表达载体转染小鼠骨髓来源的DC,实时荧光定量RT-PCR和Western Blot检测敲降及过表达效率,采用流式细胞术检测DC表面分子CD40、CD80及主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)的表达和酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞因子白细胞介素(IL)-12、IL-6和转化生长因子-β(TGF-β)的分泌考察敲降Slc1a2对DC成熟和功能的影响,并考察过表达Slc1a2对DC成熟和功能的影响以及采用混合淋巴细胞培养检测Slc1a2对T细胞增殖能力的影响及ELISA检测IL-17A的分泌水平,通过流式细胞术分析DC的FITC相对荧光强度变化考察过表达Slc1a2对抗原吞噬的能力,最后采用NF-κB抑制剂甲苯酰苯丙氨酸氯甲基酮(TPCK)预处理DC,考察TPCK对DC内Slc1a2的表达及DC成熟的影响。结果脂多糖刺激成熟的DC中Slc1a2高表达(P<0.001)。在DC中敲降Slc1a2降低了DC成熟及刺激CD4^(+)T细胞增殖的能力(P<0.001),抑制了IL-17的分泌(P<0.01)。过表达Slc1a2增强了DC成熟及刺激CD4^(+)T细胞增殖的能力,促进IL-17A的分泌(均P<0.01)。NF-κB抑制剂TPCK预处理DC抑制了脂多糖诱导的Slc1a2在mRNA和蛋白水平的表达。结论NF-κB调控了DC内Slc1a2的表达,其表达水平影响了DC的成熟及功能。

干扰素治疗增生性瘢痕机理的研究

目的在体外研究干扰素2b(INF-α2b)对瘢痕组织成纤维细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、血小板衍化生长因子-BB(PDGF-BB)以及糖基转移酶(ppGalNAc-T2)基因表达的作用,以求阐明干扰素对增生性瘢痕的作用机理。方法组织块法培养瘢痕组织成纤维细胞,传代后分成3组:①空白对照组:只加生理盐水处理;②低浓度组:用100 u/mlINF-α2b处理;③高浓度组:用10 000 u/ml INF-α2b处理。RT-PCR检测TGF-β1、MMP-1、PDGF-BB和ppGalNAc-T2表达。结果体外培养瘢痕成纤维细胞经100 u/ml及10 000 u/mlINF-α2b处理后,RT-PCR检测TGF-β1、PDGF-BB及ppGalNAc-T2mRNA表达降低,MMP-1mRNA表达升高,呈显著差异,且具有浓度依赖性。结论干扰素对瘢痕成纤维细胞具有抑制作用,其机理可能与多种细胞因子有关,如TGF-β1、PDGF-BB。

心室重构相关生化标志物的研究进展

心室重构是导致冠心病、心肌病等进行性发展,引起恶性心律失常、心力衰竭甚至心源性猝死的重要因素。其进展过程中伴随的相关生化标志物改变可帮助临床医师及早识别无临床症状患者心室重构的发生,并为处于不同疾病阶段的患者提供积极的个体化治疗方案,对延缓心室重构的进展,改善患者的预后发挥着不可估量的作用。近年来,与心室重构相关的生化标志物的研究是心血管最为活跃的研究领域之一,并取得了丰硕成果。现对近年来心室重构相关生化标志物的研究进展予以综述。