分子印迹TiO_2的制备及其对抗生素磺胺甲氧嘧啶的光催化降解

以磺胺甲氧嘧啶(SMD)为模板分子、甲基丙烯酸为功能单体,采用表面分子印迹技术在TiO_2表面合成SMD-分子印迹聚合物,制备分子印迹TiO_2(MIP-TiO_2)。考察了模板分子、功能单体、交联剂的摩尔比以及TiO_2的用量对分子印迹TiO_2光催化性能的影响,确定了最佳制备条件。采用傅里叶变换红外光谱、扫描电镜对分子印迹性TiO_2进行了表征,研究分子印迹TiO_2对磺胺甲氧嘧啶的光催化性能。结果表明,分子印迹性TiO_2的最佳制备条件为:模板分子、功能单体、交联剂的摩尔比为1︰4︰8,TiO_2的质量为0.05 g。分子印迹TiO_2对SMD的光催化效果明显高于TiO_2,光催化降解SMD的最适pH值为5,催化剂用量为0.4 g/L,光照时间为100 min。在此条件下,初始质量浓度为5 mg/L的SMD降解效率达100%,与TiO_2相比,提高了20%。

磺胺间二甲氧嘧啶纳米抗体免疫磁珠的制备及其鉴定

基于纳米抗体(nanobody,Nb)和磁小体(bacterial magnetic particles,BMPs)的免疫磁珠在污染物分离分析中具有良好的应用前景,然而,不同长度柔性连接肽(linker)对免疫磁珠性能的影响尚未见相关报道。为了探究柔性连接肽长度对免疫磁珠的性能影响,本研究使用pET-28a作为载体,在磺胺间二甲氧嘧啶(sulfadimethoxine,SDM)Nb基因上融合了不同长度的柔性连接肽,分别为pET28a-SDM-Nb-(G4S)1-Cys和pET28a-SDM-Nb-(G4S)4-Cys,并使用大肠杆菌BL21(DE3)作为重组工程菌进行表达,最终获得Nb-(G4S)1-Cys和Nb-(G4S)4-Cys重组蛋白质。利用异源双功能试剂3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithiol)propionate,SPDP),分别将重组蛋白质与BMPs进行偶联,构建了免疫磁珠。利用免疫印迹对偶联结果进行了初步鉴定,并对偶联条件进行了优化。同时,使用透射电镜和Zeta电位分析仪对免疫磁珠的水合粒径、Zeta电位和分散性进行了分析。研究结果表明,SPDP能有效地将Nb-(G4S)1-Cys和Nb-(G4S)4-Cys定向固定在BMPs表面。通过差值法计算发现,Nb-(G4S)1-Cys与BMPs的偶联效率高于Nb-(G4S)4-Cys与BMPs的偶联效率。进一步表征结果显示,BMP-(G4S)1-Nb的Zeta电位绝对值更高,水合粒径更小,并且具有较低的多分散性指数,说明其在水相体系中具有更强的胶体稳定性。综上所述,利用BMPs和Nb-(G4S)1-Cys构建的免疫磁珠性能优于BMPs和Nb-(G4S)4-Cys构建的免疫磁珠。这为今后选择合适长度的连接肽构建高效的免疫磁珠分离分析SDM提供了理论依据。

基于双金属材料的电化学适体传感器用于磺胺二甲氧嘧啶检测

开发能够精准检测磺胺二甲氧嘧啶(SDM)的方法在食品安全领域至关重要。该研究利用具有优异电化学活性的镍锌双金属微花(Ni-Zn MFs)作为生物传感平台,同时,引入金锰纳米粒子(AuMn NPs)修饰的还原氧化石墨烯(rGO)作为电信号抑制单元(AuMn/rGO,AMG)。在此基础上,设计了一种用于测定SDM的高灵敏生物传感器。当目标物SDM存在时,能与SDM的结合适配体(Apt)标记的AMG(AMG-Apt)特异性结合,将电信号抑制单元带离电极表面,放大氧化还原探针[Fe(CN)_(6)]^(3-/4-)的电化学信号变化。提出的用于检测SDM的适配体传感器在1 pg/mL~100 ng/mL范围内表现出良好的线性关系,检出限(LOD)低至0.26 pg/mL。此外,该生物传感器在牛奶样品中也表现出令人满意的结果,有望在食品安全分析中应用。

不同方法构建磺胺二甲氧嘧啶免疫抗原的比较研究

为探讨合成磺胺二甲氧嘧啶 (SDM)免疫抗原的有效途径 ,采用重氮偶合法和戊二醛法分别合成SDM免疫抗原 ,并对其结构特征、光谱特征和SDM结合比进行比较。结果表明 ,在合成SDM_BSA中采用重氮偶合法比戊二醛法好。

磺胺二甲氧嘧啶与牛血清白蛋白相互作用的研究

应用荧光光谱法和紫外吸收光谱法研究了在生理条件下(pH=7.4)磺胺二甲氧嘧啶(SDM)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用模式.研究表明,磺胺二甲氧嘧啶对BSA内源性荧光的猝灭属于形成了复合物的单一静态猝灭过程,其猝灭速率常数为7.35×1012L.mol-1.S-1,结合常数为1.04×105L.mol-1,结合位点数为1.03.并考察了金属离子Fe3+、Mn2+、Ca2+、Zn2+、Cu2+存在下,对磺胺二甲氧嘧啶与BSA结合常数的影响.

磺胺二甲氧嘧啶单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定

用重氮化法将SDM(磺胺二甲氧嘧啶)偶联于载体蛋白BSA和OVA,合成免疫原BSA-SDM和包被原OVA-SDM,并用紫外扫描(UV)、SDS-PAGE进行鉴定;用BSA-SDM免疫BALB/C小鼠,间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术建立分泌SDM mAb细胞株,用体内诱生腹水法制备SDM mAb;对SDM mAb的效价、亲和性、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。结果表明,BSA-SDM人工抗原制备成功,分子结合比约为1∶12.1;筛选出1B43、D9、4E1共3株敏感特异的杂交瘤细胞,间接ELISA效价细胞培养上清分别为1∶3.2×102、1∶5.12×102、1∶8.1×102,腹水分别为1∶2.56×105、1∶2.56×1051、∶5.12×105,4E1亲和常数(Ka)为1.25×1010L/mol;4E1株对SDM的IC50为16.64ng/ml,与磺胺-6-甲氧嘧啶交叉反应率为5%,与其他磺胺类药物无交叉反应性。本试验获得了抗SDM高价、敏感、特异的mAb,可用于SDM残留检测的免疫学试验。

HPLC同时测定复方二甲硝咪唑可溶性粉中地美硝唑、甲氧苄啶、磺胺对甲氧嘧啶的含量

建立同时测定复方二甲硝咪唑可溶性粉中地美硝唑、甲氧苄啶、磺胺对甲氧嘧啶含量的高效液相色谱法。采用Discovery C18色谱柱(250 mm×4.60 mm,5μm);以0.1%磷酸溶液-乙腈(90∶18)为流动相;检测波长为230 nm;流速为1.0 mL/min;进样量为10μL。地美硝唑在20μg/mL^100μg/mL浓度范围内,其峰面积与浓度呈良好的线性关系(r=1,n=5),平均回收率为99.87%(RSD=0.73);甲氧苄啶在5μg/mL^30μg/mL浓度范围内,其峰面积与浓度呈良好的线性关系(r=0.999 9,n=6),平均回收率为99.83%(RSD=1.46);磺胺对甲氧嘧啶在20μg/mL^100μg/mL浓度范围内,其峰面积与浓度呈良好的线性关系(r=1,n=5),平均回收率为99.57%(RSD=0.85)。该方法简便可行、准确、快速,可用于复方二甲硝咪唑可溶性粉中上述3种成分的含量测定。

酶联免疫吸附法检测磺胺对甲氧嘧啶残留

用戊二醛法将磺胺对甲氧嘧啶 (SMD)与载体蛋白牛血清白蛋白 (BSA)偶联制备合成抗原 SMD- BSA用作免疫原 ,同法合成包被抗原 SMD- OVA(卵清蛋白 ) ,免疫家兔获得抗血清 ,用双向琼脂扩散试验和 EL ISA法对抗血清进行了定性定量测定。结果表明 ,抗血清特异性地针对 SMD,其效价为 1∶ 2 5 6 0。用所制备的抗血清建立了间接竞争EL ISA法。优选的 EL ISA的工作条件 :包被抗原最佳包被质量浓度为 5 0 mg/ L ,抗血清最佳稀释度为 1∶ 10 0 ,酶标抗体的最适工作稀释度为 1∶ 5 0 0。标准工作曲线表明 ,抗血清检测在 10～ 2 0 0 0 μg/ L 范围内呈良好的线性关系 ,超过2 0 0 0μg/ L则线性关系较差 ;该法检测底限为 6 3μg/ L ,低于国际规定残留限量 (10 0μg/ kg)和国内规定残留限量 (30 0μg/ kg)的要求。按建立的 EL ISA法测定了方法的回收率 ,无基础本底的牛奶样品回收率为 94 .7%。按药典剂量给鸡肌肉注射 SMD,连续注射 3d,在第 0～ 7天分别采血 ,按建立的 EL ISA方法测定了血清中的

磺胺对甲氧嘧啶和二甲氧苄啶在肉鸡体内的残留消除

采用高效液相色谱-串联质谱法研究磺胺对甲氧嘧啶（SMD）和二甲氧苄啶（DVD）预混剂在白羽肉鸡体内各组织中的残留消除规律。对48只健康白羽肉鸡连续饲喂添加1 000mg/kg磺胺对甲氧嘧啶和二甲氧苄啶预混剂（含SMD 200mg,DVD 40mg）的全价饲料10d,在停药后4h,1、3、6、9、12、15d分别宰杀6只鸡,采集各组织进行药物残留测定。通过空白样品添加回收试验,所有基质中SMD和DVD的定量限分别为10μg/kg和5μg/kg,SMD和DVD分别在50、100、200μg/kg和25、50、100μg/kg 3个添加水平下的平均回收率为71.7%~102.3%,相对标准偏差为1.0%~11.9%。结果表明,磺胺对甲氧嘧啶和二甲氧苄啶预混剂在肾脏中残留量最高,肝脏其次;肌肉和皮脂中的残留量显著低于肝脏和肾脏,停药9d时,残留量低于药物残留限量。综合各组织中总残留量和最高残留限量规定,建议磺胺对甲氧嘧啶和二甲氧苄啶预混剂在鸡的休药期为7d。

酶免疫法测定磺胺对甲氧嘧啶残留的研究──抗磺胺对甲氧嘧啶抗体的制备

ＳＭＤ常用于治疗畜禽细菌性疾病及球虫病。为了检测动物组织中的ＳＭＤ残留物，将ＳＭＤ的芳香胺基与兔血清白蛋白偶联形成全抗原。经此全抗原高免的兔子血清中含有高滴度抗半抗原ＳＭＤ的琼脂扩散和ＥＬＩＳＡ的特异性抗体。相信以此种特异性抗血清为基础的检测方法可以检出组织中的ＳＭＤ残留。

磺胺二甲氧嘧啶钠对斑点叉尾鮰血清生化指标和组织的影响

采用灌喂方法,研究不同剂量磺胺二甲氧嘧啶钠(SMS)100、200、400mg/kg对斑点叉尾鮰门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酐(CRE)、尿素(UREA)等血清生化指标以及肝脏和肾脏组织的影响。结果表明:连续灌药5d后,对照组与给药组斑点叉尾鮰血清中的AST、ALT、ALP、LDH和UREA均无显著性变化,按400mg/kg体质量给药组的肌酐存在显著性变化(P<0.05)。连续灌药10d后,与对照组相比,给药组AST、ALT、ALP、LDH、CRE、UREA均有显著性变化。SMS可导致肝细胞核溶解或细胞溶解,肾脏肾小管上皮细胞局部坏死,且浓度越高,损害越大。试验表明,100mg/kg的剂量对斑点叉尾鮰在较长时间的使用过程中毒副作用较小,在5d内使用是安全的;200mg/kg的剂量在较短时间内使用是安全的,但是不能长时间使用,否则会对肝脏及肾脏造成损伤;而高剂量的400mg/kg对斑点叉尾鮰在较短时间内仍具有较大的毒副作用,表现在肾脏上的损伤。

构建磺胺二甲氧嘧啶完全抗原的研究

采用重氮偶合法将磺胺二甲氧嘧啶(SDM)与载体牛血清白蛋白(BSA)偶联,构建SDM完全抗原,以紫外扫描光谱进行鉴定。并对重氮偶合法反应体系中SDM浓度,NaNO2浓度,及pH对SDM-BSA结合比的影响进行了观察。

鸡组织中磺胺对甲氧嘧啶和二甲氧苄啶残留的HPLC-MS/MS测定

建立了同时测定鸡组织中残留的磺胺对甲氧嘧啶(SMD)和二甲氧苄啶(DVD)了的高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)。样品经乙腈提取,取部分提取液用正己烷脱脂后于氮气吹干,残渣用流动相溶解并定容后上机检测,外标法定量。采用C18色谱柱,流动相为乙腈和1mL/L甲酸水溶液。选择1个母离子和2个子离子进行反应监测,对磺胺对甲氧嘧啶和二甲氧苄啶残留进行定性,选择信号最强的子离子进行定量。结果显示,SMD和DVD分别在1ng/mL^200ng/mL和0.5ng/mL^100ng/mL范围内呈良好线性关系,相关系数R2>0.992。通过空白样品添加回收试验,所有基质中SMD和DVD的定量限分别为10μg/kg和5μg/kg,SMD和DVD分别在50、100、200μg/kg和25、50、100μg/kg 3个添加水平下的回收率为71.7%~115.0%,相对标准偏差为1.8%~13.2%,该方法定量限低,灵敏度高,重现性好,符合相关研究的要求。

磺胺间二甲氧嘧啶人工抗原的合成与鉴定

用重氮化方法将SDM偶联于载体蛋白BSA和OVA上,合成免疫抗原BSA-SDM和包被抗原OVA-SDM,通过紫外扫描(UV)、SDS-PAGE凝胶电泳试验。结果显示:BSA-SDM和OVA-SDM的UV与BSA、SDM的相比均发生了改变,出现了明显的特征峰。这表明半抗原和载体偶联成功。用BSA-SDM免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗上清(pAb)效价。结果表明,获得了高效价的pAb,为SDM残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。

磺胺邻二甲氧嘧啶在牙鲆体内的代谢动力学

采用超高效液相色谱法(UPLC)测定磺胺邻二甲氧嘧啶(Sulfadinoxine,SDM’)在牙鲆Paralichthy solivaceus血浆、肌肉和肝脏中浓度随时间的变化,通过DAS 2.0版药物代谢动力学软件研究了SDM’在牙鲆体内的药代动力学。研究结果表明,以200mg/kg的剂量进行单次口灌,SDM’在血浆、肌肉和肝脏中的代谢过程均符合二室模型,药-时曲线呈现单峰变化;达到Cmax的时间分别是24、24、8h,Cmax分别是158.09、43.04和6.71mg/kg;消除半衰期分别为48.9、501.5和116.1h。SDM’在牙鲆体内消除较慢,残留时间较长。

基于纳米金标记-适配体识别对鱼中磺胺二甲氧嘧啶的定量检测

纳米金因具有独特的光学效应,已成为极具应用前景的标记材料。适配体对目标分子具有较强特异识别能力,被广泛应用于分析检测领域。本文利用纳米金标记适配体,构建了一种磺胺二甲氧嘧啶的可视化检测新方法。利用该方法对磺胺二甲氧嘧啶进行定量分析,在添加水平分别为2、7 ng/m L下,测得回收率为89.86%和85.64%,日内日间相对标准偏差分别为4.00%、5.28%和5.88%、6.67%。方法的检测线性范围为1~10 ng/m L,检测限为1 ng/m L。以上结果表明该方法准确度高,精密度好,将其应用于鲈鱼、鲶鱼等实际水产样品中磺胺二甲氧嘧啶的定量分析具有可行性。

基于SPR技术的磺胺二甲氧嘧啶高灵敏检测

磺胺类药物的过量使用会对人体造成过敏性反应,并可能具有致癌性,而磺胺二甲氧嘧啶 （Sulfadimethoxine,SDM）在食品中磺胺类药物的使用中占有很大的比例,因此基于表面等离子体 共振（Surface plasmon resonance,SPR）技术建立了奶粉样品中SDM的快速、高灵敏检测方法.通 过待测样品与SPR芯片表面修饰的SDM抗体分子特异性识别引起金膜表面折射率变化,进而 导致SPR角的变化以实现检测.建立SPR响应信号和SDM浓度间的标准曲线,最低检测限达 到0.19 ng/mL,奶粉样品添加回收率在94.0%-98.3%.和传统方法相比,SPR技术具有较高的灵 敏度、准性 ,SPR传感芯片完整性好且可重复用于实际样品检测中.

HPLC法测定复方磺胺对甲氧嘧啶片中磺胺对甲氧嘧啶的含量

建立了兽药复方磺胺对甲氧嘧啶片中磺胺对甲氧嘧啶含量的高效液相色谱测定法。以C18为固定相，0．1％磷酸溶液-乙腈（80∶20）为流动相，流速为1．0 mL/min，柱温40℃，检测波长为270 nm，采用外标法进行定量。磺胺对甲氧嘧啶的线性范围为5．0～100μg/mL，回归方程为Area＝33．56＆#215;Amt-12．15（n＝5），相关系数大于0．999。从高（0．25 g）、中（0．20 g）和低（0．15 g）三个添加水平的检测结果可以看出，磺胺对甲氧嘧啶的回收率为97．9％～100．6％。该方法简单，准确，精密度好，回收率高，可以用于测量复方磺胺对甲氧嘧啶片中磺胺对甲氧嘧啶的含量。

磺胺—5—甲氧嘧啶在猫体内的药动学研究 第二报:SMD与猫、免、鸡的血清蛋白结合率比较试验

用平衡透析法测定SMD与猫、兔、鸡的血清蛋白结合率(f_b)分别为41.28±13.32(60.95～24.58)％、62.61±27.01(92.76～22.90)％、43.82±17.86(70.11～21.97)％。数据经Woolf作图法得到猫、兔、鸡结合参数βp分别为:6.91±1.5、8.84±0.93、46.16±1.02um/g;Kap分别为593.64±214.38、37.59±8.17、218.51±49.54um/l。各动物的f_b均随药物浓度的增高而降低,高浓度时呈现饱和现象。f_b的种属差异极显著(P<P_(0.01)F检验)。提示在临床对此等小动物按每公斤体重相同剂量给药是不合理的,必须考虑种属差异,猫和鸡还要考虑个体差异。

磺胺对甲氧嘧啶在肉鸡组织中的残留研究

将艾维茵肉鸡100羽随机分成4组,在基础日粮中分别添加不同水平的磺胺对甲氧嘧啶(从第Ⅰ到第Ⅳ组分别添加0、500、1000、2000mg/kg),连喂3d后停药,并于停药后第1、2、3、5、10d时每组各捕杀鸡10只,迅速取出肝脏、肾脏、肌肉组织,用高效液相色谱法测定这些组织中磺胺对甲氧嘧啶的残留。结果表明,停药后10d内,肌肉、肝脏和肾脏中均有浓度不一的残留,其检测限达0.005mg/kg,回收率在87%以上。