新磺酰脲药物BGW刺激SMMC7721细胞对葡萄糖的吸收

目的:观察新磺酰脲药物1-{4-[2-(3-乙基-4-甲基-2-氧-3-吡咯啉-1-甲酰胺基)乙基]-苯磺酰基}-3-(1,4-四亚甲基)脲(BGW)刺激SMMC7721细胞对葡萄糖的吸收作用及对葡萄糖吸收相关酶蛋白激酶B(PKB/Akt)活性的影响。方法:体外培养SMMC7721细胞,设计对照组、格列苯脲、胰岛素、BGW和BGW+胰岛素刺激组,利用液闪计数法检测SMMC7721细胞对葡萄糖的吸收作用;用Western blotting法检测蛋白激酶B的活性变化。结果:与对照组比较,格列苯脲、胰岛素、BGW及BGW+胰岛素均可显著增加SMMC7721细胞对葡萄糖的吸收(P<0.01),分别增加22%、108%、60%和400%;BGW刺激的葡萄糖吸收效率较格列苯脲增高(P<0.01),并且对胰岛素刺激的葡萄糖吸收有显著的增强作用(P<0.01)。BGW可剂量依赖性地增加细胞内的Akt磷酸化水平。结论:BGW具有刺激葡萄糖吸收以及促进胰岛素的作用,可作为糖尿病治疗的潜在药物。

磺酰罗丹明B法和噻唑蓝法检测皮肤来源细胞活力比较

目的比较两种细胞活力检测方法 ,即磺酰罗丹明B(SRB)法和噻唑蓝(MTT)法在皮肤来源细胞中的应用。方法选用几种化妆品研究中常用的皮肤来源细胞系,包括角质细胞Ha Ca T、黑色素细胞B16及成纤维细胞BALB/C 3T3,分别应用MTT法和SRB法检测细胞活力,并对两种方法进行比较,包括线性范围、信噪比、变异系数、信号稳定时间等。结果 SRB法的线性范围大于MTT法,变异系数小于MTT法,信号稳定时间比MTT法长。SRB法检测过程中可以暂停,有利于进行批量检测。SRB法可以进行重复检测,如果检测过程中发生意外或者对检测结果存有质疑,可以通过重复检测进行补救。结论在3种皮肤来源细胞系中,使用SRB法检测细胞活力,实验方法灵活、高效,检测结果稳定、精确,可以与MTT法互为补充使用,尤其是在大批量样本检测中具备优势。

同步荧光法研究Hg(Ⅱ)-罗丹明B酰肼与牛血清白蛋白的相互作用

在三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液条件下(pH 5.0),用同步荧光和紫外-可见分光光度法研究了Hg(Ⅱ)-罗丹明B酰肼(RBH)与牛血清白蛋白(BSA)相互作用的机理。实验结果表明,BSA的加入可猝灭Hg(Ⅱ)-罗丹明B酰肼(RBH)的荧光。由摩尔比法求得Hg(Ⅱ)-罗丹明B酰肼(RBH)光谱探针与BSA的结合比约为5:1,结合常数K△=1.0×10~6L·mol^(-1)(25℃)。不同温度下(298,308K)实验得到的热力学参数(△H~θ=-29.5kJ·mol^(-1),△S~θ=16.3J·mol^(-1)·K^(-1))表明维持Hg(Ⅱ)-罗丹明B酰肼(RBH)与BSA的相互作用力主要是以静电作用力为主。通过对Hg(Ⅱ)-罗丹明B酰肼(RBH)和牛血清白蛋白结合反应的研究,建立了一种检测蛋白质的新方法。

SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖试验最佳条件的筛选

【目的】探讨磺酰罗丹明B法(Sulforhodamine B,SRB)检测鸡外周血T淋巴细胞增殖反应的最佳条件。【方法】体外培养鸡外周血T淋巴细胞,选用SRB法对淋巴细胞含量(1×105,1×106,2.5×106,5×106,7.5×106和1×107 mL-1)、ConA质量浓度(5.0,7.5,10.0,12.5和15.0μg/mL)、培养时间(36,48,60h)3个因素进行组合设计培养T淋巴细胞,每个组合设3个重复,SRB显色后用酶标仪在492nm波长处测量OD492值,计算刺激指数(Stimulation index,SI),筛选SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖的最佳条件。【结果】SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖试验的最佳条件为:淋巴细胞含量1×106 mL-1,ConA质量浓度5.0μg/mL,培养时间48h。【结论】确定了体外培养鸡外周血T淋巴细胞增殖的最佳ConA质量浓度、培养时间及淋巴细胞含量,证实用SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖结果可靠,是切实可行的淋巴细胞数量与活性检测方法。

二(α-甲基-噻吩甲烯-2)肼及过渡属配合物的合成及性质研究

合成了配体二 (α-甲基 -噻吩甲烯 -2 )肼及其过渡金属 Cu2 +、Fe3+的配合物。用 MS、1HNMR对配体进行了确认。通过元素分析、摩尔电导率、红外光谱、紫外光谱等手段对配合物进行了表征。并利用 MTT法和 SRB法对它们进行了抗肿瘤活性体外筛选实验。发现配合物 1较配合物 2的活性好 ,前者比配体的活性好 。

斑蝥素酸镁对肺癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨斑蝥素盐类衍生物——斑蝥素酸镁在体外对肺癌细胞增殖的抑制作用。方法采用磺酰罗丹明染色法(SRB法)考察斑蝥素酸镁对H-1299和A-549两种人肺腺癌细胞的体外抗肿瘤活性;采用流式细胞术测定斑蝥素酸镁对H-1299细胞周期的影响;利用细胞集落形成实验,检测斑蝥素酸镁对单个肿瘤细胞形成克隆的影响。结果斑蝥素酸镁对H-1299、A-549两株肿瘤细胞具有比较明显的抑制效果,其半数抑制浓度(IC50)分别为1.59μg.ml-1、1.39μg.ml-1,且抑制率随药物浓度的增加而升高,呈剂量效应关系。细胞周期实验显示H-1299细胞在受试药物的作用下S期和G2/M期的细胞比例呈明显减少(P<0.05),G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.05),细胞周期阻滞于G0/G1期。细胞集落形成实验结果表明,当斑蝥素酸镁的浓度达到2.10μg.ml-1时,肿瘤克隆就不能形成。结论斑蝥素酸镁对肺腺癌细胞具有非常明显的抗肿瘤活性,可做进一步研究。

苦白蹄乙醇提取物体外抗肿瘤活性研究

探讨苦白蹄乙醇提取物在体外的抗肿瘤活性。采用磺酰罗丹明染色法(SRB法)考察苦白蹄乙醇提取物对人肝癌细胞BEL-7404、人肺腺癌细胞H-1299、人胃腺癌细胞SGC-79013种人恶性肿瘤细胞的体外抗肿瘤活性。结果显示,苦白蹄乙醇提取物对BEL-7404、SGC-7901两株肿瘤细胞具有比较明显的抑制效果,其半数抑制浓度(IC50)分别为73.5、80μg·mL-1,且抑制率随药物浓度的升高而增大,呈剂量效应关系,但对H-1299的抑制率相对较低。细胞周期实验显示,BEL-7404细胞在苦白蹄乙醇提取物的作用下,G2/M期的细胞比例呈下降趋势,S期细胞比例增大,细胞周期阻滞于S期。苦白蹄乙醇提取物具有比较明显的体外抗肿瘤活性。

4-硫-5-(2-噻吩基)尿苷体外对黑色素肿瘤细胞增殖作用的影响

目的探究新化合物4-硫-5-(2-噻吩基)尿嘧啶核苷酸体外对黑色素瘤细胞的增殖作用影响。方法利用MTT法和磺酰罗丹明B染色法对比考察该化合物对人黑色素瘤细胞(A375)、小鼠黑色素肿瘤细胞(B16)和人正常皮肤细胞体外增殖的影响,并利用流式细胞术检测不同药物浓度下该化合物对人黑色素瘤细胞(A375)周期的影响。结果 4-硫-5-(2-噻吩基)尿嘧啶核苷酸苷体外对人和小鼠的黑色素瘤细胞无种属特异性,均表现出剂量依赖性的抑制作用,但对正常皮肤细胞却无抑制作用;流式细胞术显示:4-硫-5-(2-噻吩基)尿苷导致剂量依赖性的G2细胞累积,抑制细胞有丝分裂;同时具有诱导细胞凋亡的作用。结论 4-硫-5-(2-噻吩基)尿嘧啶核糖核苷酸对黑色素瘤有明显抑制作用,对正常皮肤细胞无抑制作用表明该化合物对细胞作用时具有选择性,有可能成为新型靶向抗癌药物的候选者。

裂蹄木层孔菌醋酸乙酯萃取物抗肿瘤活性初探

目的探讨裂蹄木层孔菌醋酸乙酯萃取物的体外抗肿瘤活性。方法采用磺酰罗丹明染色法(SRB法),对人肝癌细胞株BEL-7404、人肺癌细胞株H-1299、人胃癌细胞株SGC-7901、人肺腺癌细胞株A-549等4种常见的人恶性肿瘤细胞进行体外抗肿瘤实验。结果裂蹄木层孔菌乙酸乙酯萃取物对BEL-7404、H-1299、SGC-7901、A-549 4株肿瘤细胞都表现出比较明显的抑制效果,且抑制率随萃取物浓度的升高而增大,呈剂量效应关系;其半数抑制浓度(IC50)分别为26.05,41.26,34.47,60.34μg.ml-1。细胞周期实验显示BEL-7404细胞在萃取物的作用下,随着萃取物浓度的增大,G0/G1期细胞分布出现大幅度降低;S期细胞和G2/M期细胞分布出现不同程度的增加,且都与萃取物浓度呈正相关。当萃取物浓度为IC50时,G2/M期细胞分布显著增多,细胞出现G2/M期阻滞。结论裂蹄木层孔菌乙酸乙酯萃取物具有比较明显的体外抗肿瘤活性。

裂蹄木层孔菌乙酸乙酯萃取物对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用研究

目的:探讨裂蹄木层孔菌乙酸乙酯萃取物在体外的抗肝癌活性。方法:采用磺酰罗丹明染色法(SRB法),对人肝癌细胞SMMC-7721进行体外抗肿瘤实验。结果:裂蹄木层孔菌乙酸乙酯萃取物对人肝癌细胞SMMC-7721表现出比较明显的高浓度杀死和中低浓度抑制的效果,且抑制率随萃取物浓度的升高而增大,呈剂量效应关系;其半数抑制浓度(IC50)为21.5μg.mL-1。结论:裂蹄木层孔菌乙酸乙酯萃取物对人肝癌细胞SMMC-7721具有比较明显的抑制作用。

旱生香茶菜总二萜对人肝癌细胞株增殖、荷人肝癌细胞株裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的:研究旱生香茶菜总二萜(IXD)对人肝癌细胞株(CA)增殖、荷CA裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法:体外试验采用磺酰罗丹明B(SRB)法测试IXD对CA的IC50值,体内试验测定IXD不同剂量对荷CA裸鼠移植瘤增殖的抑制率。结果:IXD对CA的IC50值为6·17μg/ml,其在剂量为100、200(mg·kg)/d应用12d时抑制率分别为33·52%、38·19%,与生理盐水阴性对照组比较具有显著性差异(P<0·05)。结论:IXD对CA有较强的细胞毒活性,对荷CA裸鼠移植瘤生长具有一定的抑制作用。

基于局部肿瘤药物与探针同步释放的纳米诊疗胶束的体外研究

目的以维生素E(VE)修饰的吉西他滨(GEM-VE)、VE修饰的紫杉醇(PTX-VE)为药物,以VE修饰的磺酰罗丹明B(SRB-VE)为荧光探针,以单甲氧基聚乙二醇外消旋聚乳酸乙醇酸共聚物(MPEG-PLGA)、聚乙二醇-维生素E嵌段共聚物(PEG-VE)、叶酸-聚乙二醇-维生素E(FA-PEGVE)分别为载体包载上述2种药物及探针,制备了3种纳米诊疗胶束并对其进行表征及体外释放试验。方法首先采用溶剂挥发法制备胶束,之后采用动态光散射法及透射电镜对纳米胶束进行表征,建立药物与探针的体外分析方法,最后研究药物及探针的体外释放度,并采用f2相似因子法对每种胶束中药物与探针的释放曲线进行拟合。结果制备的3种胶束为类球形或球形,MPEG-PLGA胶束的粒径为118.9 nm,PEG-VE胶束的粒径为95.58 nm,FA-PEG-VE胶束的粒径为96.93 nm,且均呈单峰分布;体外释放试验表明3种胶束中所包载的药物与探针可同步释放。结论所制备胶束分布均匀,体外分析方法准确可靠,体外释放的结果表明药物和探针达到了同步释放。

白藜芦醇脂质体对C6胶质瘤细胞的抑制作用分析

目的:制备白藜芦醇脂质体并对其体外抗肿瘤作用进行评价。方法:通过薄膜分散-硫酸铵梯度法制备白藜芦醇脂质体,使用粒度仪对脂质体进行表征;确定C6胶质瘤细胞对数生长期;通过磺酰罗丹明B蛋白(SRB)法评价游离白藜芦醇及其脂质体对C6胶质瘤细胞的抗增殖作用,利用流式法考察白藜芦醇及其脂质体对C6胶质瘤的凋亡作用,以及C6胶质瘤细胞对白藜芦醇和其脂质体的摄取作用。结果:白藜芦醇脂质体的平均粒径(139.97±0.64)nm,Zeta电位(-7.00±0.74)m V;游离白藜芦醇和白藜芦醇脂质体对C6胶质瘤细胞的抑制率最高分别可达(73.30±0.56)%和(91.70±0.60)%,差异有统计学意义(P<0.05);游离白藜芦醇和白藜芦醇脂质体对C6胶质瘤细胞的诱导凋亡率分别为(20.03±0.85)%和(27.18±0.96)%,差异有统计学意义(P<0.05);C6胶质瘤细胞对游离白藜芦醇和白藜芦醇脂质体的摄取率分别为(67.79±1.19)%和(77.61±1.67)%。结论:相比于游离的白藜芦醇,白藜芦醇脂质体对C6胶质瘤细胞的抗增殖作用更明显,具有更强的诱导C6胶质瘤细胞凋亡作用。白藜芦醇脂质体可以更多地被C6胶质瘤细胞摄取,这在一定程度上促进了其对C6胶质瘤细胞的抗增殖作用和诱导凋亡能力。说明白藜芦醇脂质体具有较强的体外抗C6胶质瘤作用。

新疆阿魏树脂不同分离部位对结肠癌细胞HCT116的抑制作用

目的:分析新疆阿魏树脂不同分离部位对结肠癌细胞HCT116抑制作用的活性,并确定其有效活性部位。方法:通过磺酰罗丹明B比色法(SRB)与流式细胞术以细胞密度1×105个mL,药物质量浓度250,125,62.5,31.25,15.6 mg·L-1(流式细胞术药物浓度为62.5 mg·L-1),检测新疆阿魏树脂不同分离部位(石油醚部位、乙酸乙酯部位,甲醇部位)对结肠癌细胞HCT116药物作用24 h后的增殖抑制与凋亡作用,以IC50和总凋亡率作为指标衡量其各分离部位抑制肿瘤的活性效能。结果:石油醚部位:对结肠癌细胞HCT116增殖抑制IC5068.7 mg·L-1,总凋亡率为(43.4±1.1)%;乙酸乙酯部位:IC5043.7 mg·L-1,总凋亡率为(56.2±0.9)%;甲醇部位:IC5059.6 mg·L-1,总凋亡率为(46.7±3.1)%。结论:新疆阿魏树脂乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位对结肠癌细胞HCT116细胞毒性作用较强并能促进其大量凋亡,初步确定为新疆阿魏树脂抗肿瘤活性部位。

增溶剂对九类人癌细胞的影响作用

目的抗肿瘤药物筛选常用各种增溶剂或者溶剂混合物增溶难溶化合物。本实验系统考察了各类常见助溶剂对9类人癌细胞生长的影响,为溶解低水溶性抗肿瘤化合物选取适当溶媒提供参考。方法 采用磺酰罗丹明B法,研究聚乙二醇400(PEG400)、聚山梨酯类(聚山梨酯20、聚山梨酯80)、乙醇、丙三醇、聚氧乙烯环氧蓖麻油(Cremophor EL)、二甲基亚砜及前六种溶剂与二甲基亚砜不同配比的共19种溶剂组合对生长相对较快的A549(人肺癌细胞株)、HCT116(人肠癌细胞株)、786-0(人肾癌细胞株)、OVCAR-3(人卵巢癌细胞株)、K562(人白血病细胞株)、SF295(CNS)、DU-145(人前列腺癌细胞株)、MCF7(人乳腺癌细胞株)及UACC-257(人黑色素瘤细胞株)等9种人癌细胞生长的影响。结果 细胞生长率>90%(percentagegrowth)时视为溶剂对细胞生长无明显抑制作用;80%<细胞生长率<90%时视为弱抑制作用;细胞生长率<80%时视为强抑制作用。本实验认为具有弱抑制作用或者无明显抑制作用(细胞生长率>80%)的溶剂系统可用于筛选。当二甲基亚砜终体积分数小于0.1%时对9种测试细胞均显示弱抑制作用或无明显抑制作用;单独PEG400及乙醇终体积分数为0.25%以及丙三醇终体积分数为0.5%时,对9种测试人癌细胞呈弱抑制作用;PEG400、乙醇及丙三醇与二甲基亚砜比例为1∶1(体积比),在终体积分数为0.25%时对9种人癌细胞呈弱抑制作用;PEG400与二甲基亚砜比例为1∶9(体积比),终体积分数为0.1%、乙醇及丙三醇与二甲基亚砜比例为1∶9(体积比),终体积分数为0.25%时对九种细胞的作用为弱抑制作用;单独聚山梨酯20、聚山梨酯80、Cremophor EL以及三者与二甲基亚砜比例为1∶1(体积比)时,在体积分数0.1%对所有的测试癌细胞均表现出显著的强抑制作用;当比例为1∶9(体积比)时,三者中仅Cremophor EL/二甲基亚砜在终体积分数为0.1%时可选择性用于A549、786-0、OVCAR-3、SF295、DU-145和UACC-257等5种细胞的筛选。结论 利用上述9种人癌细胞筛选抗癌化合物时,乙醇、丙三醇、PEG400及三者与二甲基亚砜不同比例配伍(1∶1及1∶9)时,推荐使用终体积百分比不高于0.5%(0.25%/0.25%及0.05%/0.45%);单独二甲基亚砜使用终体积分数低于0.25%为宜;不建议使用或添加聚山梨酯20、聚山梨酯80及Cremo-phor EL等三种溶剂,但必要时可在低比例混合溶剂条件下小心使用Cremophor EL助溶。不同细胞的敏感度不同,人白血病细胞K562对所有溶剂均较敏感,人乳腺癌细胞MCF7尤其对二甲基亚砜敏感,使用时应特别注意。

格列苯脲调控HSP70/p-Akt/MMP-9/COX-2炎性信号通路保护脑缺血再灌注损伤大鼠的神经血管单元

目的探讨磺酰脲类受体1(SUR1)-转化受体电位阳离子通道亚家族M成员4(TRPM4)特异性抑制剂格列苯脲对脑缺血再灌注损伤大鼠神经血管单元的保护作用及其机制。方法采用随机数字表法将120只雄性SD大鼠分为假手术组、模型组及格列苯脲组,每组40只。后2组采用线栓法制备成急性局灶性大脑中动脉闭塞缺血2 h再灌注模型,其中模型组于缺血2 h后给予单次腹腔注射含0.05%二甲基亚砜的生理盐水,格列苯脲组给予单次腹腔注射10 μg/kg格列苯脲(5 μg/mL)。再灌注后8 h时,采用免疫荧光双标染色及Western blotting检测各组大鼠脑组织中SUR1、TRPM4的表达,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)含量。再灌注后24 h时,采用Zea Longa评分法评估各组大鼠的神经功能缺损程度,采用干湿重法检测脑组织含水量,采用伊文思蓝(EB)染色检测血脑屏障通透性,采用尼氏染色检测脑组织中存活神经元数量,采用免疫组化染色检测IgG渗出量及离子钙接头蛋白-1(Iba-1)、环氧化酶-2(COX-2)阳性细胞的表达,采用Western blotting检测热休克蛋白70(HSP70)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)蛋白的表达。结果(1)再灌注后8 h时,与假手术组比较,模型组大鼠脑组织中SUR1、TRPM4蛋白表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05),且该两种蛋白存在共定位;与模型组比较,格列苯脲组的SUR1、TRPM4蛋白表达降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠的MMP-9含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,格列苯脲组的MMP-9含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)再灌注后24 h时,与假手术组比较,模型组大鼠的神经功能缺损评分明显升高,脑组织含水量明显升高,EB渗出量明显升高,IgG渗出量明显升高,尼氏染色阳性神经元数量明显降低,Iba-1、COX-2阳性细胞数量明显升高,HSP70、p-Akt蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,格列苯脲组的神经功能缺损评分明显降低,脑组织含水量明显降低,EB渗出量明显降低,IgG渗出量明显降低,尼氏染色阳性神经元数量明显升高,Iba-1、COX-2阳性细胞数量明显降低,HSP70、p-Akt蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论SUR1-TRPM4在脑缺血再灌注损伤后表达升高,而其抑制剂格列苯脲对脑缺血再灌注损伤诱导的神经元及血脑屏障等神经血管单元损伤具有一定的保护作用,机制可能与调控HSP70/p-Akt/MMP-9/COX-2炎性信号通路有关。

低氧高二氧化碳对大鼠肺动脉平滑肌细胞KATP通道表达的影响及其与p38MAPK通路的关系

本文旨在探究ATP敏感性钾通道(KATP)在大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)中的表达及其与p38 MAPK信号通路的关系。体外培养SD大鼠PASMCs,复制低氧高二氧化碳模型,采用RTPCR技术及免疫印迹法检测KATP亚基磺酰脲类受体2B(sulfonylurea receptor 2B,SUR2B)和内向整流钾通道6.1(Kir6.1)mRNA及蛋白的表达水平。结果显示:(1)与常氧组(N组)、低氧高二氧化碳组(H组)、低氧高二氧化碳+溶剂DMSO对照组(HD组)、低氧高二氧化碳+p38 MAPK通路抑制剂SB203580组(HS组)相比,低氧高二氧化碳+p38 MAPK通路激动剂茴香霉素(Anisomycin)组(HA组)Kir6.1 mRNA与蛋白表达均明显降低(P<0.01),N组、H组、HD组、HS组间Kir6.1 mRNA与蛋白表达差异不显著(P>0.05);(2)与N组相比,H组、HD组、HS组、HA组SUR2B mRNA与蛋白表达均明显上升(P<0.05),H组、HD组、HS组、HA组间SUR2B mRNA与蛋白表达差异不显著(P>0.05)。以上结果提示:(1)低氧高二氧化碳、SB203580均没有引起Kir6.1 mRNA与蛋白表达变化,而茴香霉素下调Kir6.1 mRNA与蛋白表达,Kir6.1可能受其它类型的MAPK通路的调节;(2)低氧高二氧化碳明显上调SUR2B mRNA与蛋白表达,而SB203580、茴香霉素不影响低氧高二氧化碳所引起的SUR2B表达上调,低氧高二氧化碳引起的SUR2B表达的升高可能是非p38 MAPK通路依赖性的。

4种细胞毒活性方法评价紫草素体外肿瘤细胞抑制作用效果

目的研究4种细胞毒活性测定方法对紫草素体外肿瘤细胞抑制作用的评价效果,对紫草萘醌为代表的天然色素在细胞毒活性评价中常出现的假阴性现象进行对比分析。方法将紫草素与其高敏感株急性早幼粒白血病HL-60细胞和低敏感株人非小细胞肺癌A549细胞体外共培养,通过台盼蓝法、磺酰罗丹明B(SRB)法、Cell Counting Kit-8(CCK-8)法和四甲基偶氮唑盐(MTT)法进行平行实验,测定紫草素在0.4～128μmol/L抑制细胞生长的量效关系曲线。结果台盼蓝法、SRB法、CCK-8法、MTT法测得紫草素对HL-60细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为0.57、0.77、1.36、1.01μmol/L,对A549细胞的IC50分别为6.30、10.38、13.48、15.24μmol/L。紫草素浓度分别在3.2、32μmol/L以下时,4种检测方法得到其对2种细胞的抑制率均呈线性增长,超过此浓度即出现差异。其中台盼蓝法与SRB法结果一致性良好,而MTT法与CCK-8法测得的抑制率较低。对于HL-60细胞,紫草素12.8μmol/L时,CCK-8测得抑制率为81%,台盼蓝法为96%;对于A549细胞,紫草素128μmol/L时,MTT法测得抑制率为89%,台盼蓝法为99%。紫草素的吸收光谱与甲臜在波长400～600 nm存在重叠,最大重叠峰在550～570nm,CCK-8试剂与紫草素对HL-60细胞存在协同抑制效应。台盼蓝法结果显示高浓度紫草素几乎完全杀死板孔内细胞,相比对照组差异显著,但MTT法和CCK-8法结果出现假阴性。结论紫草萘醌为代表的天然色素的细胞毒活性评价不建议使用MTT法和CCK-8法,推荐使用SRB法和台盼蓝法。