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题名岗梅磺酸基转移酶基因的克隆与体外表达
被引量:2
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作者
林青
小芸
官慧儿
纪晓宇
徐晖
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机构
广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室
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出处
《中草药》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第11期2683-2689,共7页
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基金
广东省自然科学基金项目(2015A030313347)
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文摘
目的药用植物岗梅Ilex asprella含有多种活性磺化三萜类成分,克隆岗梅中的磺酸基转移酶编码(sulfotransferase,ST)基因,以了解其独特的磺化机制。方法利用RT-PCR技术,由岗梅叶片RNA扩增获得了2个可能的磺酸基转移酶基因IaST1和IaST2,利用生物信息学工具对其进行分析,并将其转化至大肠杆菌E. coli进行原核表达。结果序列分析显示,IaST1与IaST2各包含1个开放阅读框,分别长1002bp和993bp,编码333和330个氨基酸,理论相对分子质量为55500和54700。二者均具有ST的5个保守结构氨基酸序列,与黄顶菊Flaveriabidentis的黄酮醇C-3磺酸基转移酶亲缘关系较近。SDS-PAGE显示在E. coli中成功表达了IaST1和IaST2蛋白。结论首次从岗梅中克隆了ST基因,为后续阐明其功能及其在岗梅三萜磺化中的作用奠定了基础。
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关键词
岗梅
磺酸基转移酶基因
序列分析
基因克隆
体外表达
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Keywords
Ilex asprella(Hook.et Arn.)Champ.ex Benth.
sulfotransferase
sequence analysis
gene cloning
in vitro expression
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分类号
S567.19
[农业科学—中草药栽培]
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题名大豆GmSOT1基因克隆、载体构建及初步表达研究
被引量:1
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作者
谢璐遥
李晓琳
罗利
文涛
朱木兰
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机构
四川农业大学农学院
中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所/国家植物基因研究中心(上海)
上海大学生命科学学院/上海市能源植物育种与应用重点实验室
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出处
《大豆科学》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第6期815-819,共5页
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基金
国家高技术研究发展计划"863计划"(2013AA102704)
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文摘
磺酸基转移酶(sulphotransferase,简称SOT)是硫代葡萄糖苷(glucosinolate,简称硫苷)核心结构合成途径中的关键酶之一。本研究采用反向遗传学方法从大豆基因组中克隆Gm SOT1基因并对其功能进行初步研究。首先采用PCR方法扩增大豆Gm SOT1基因,并将其连接到pRNAi载体上的35S(Ca MV35S)启动子后面;将35S:Gm SOT1基因片段从pRNAi载体上双酶切下来,连接到植物双元表达载体p CAMBIA2301的多克隆位点上,且命名为p CAMBIA2301-35S:Gm SOT1;采用根癌农杆菌介导的遗传转化方法转化大豆成熟胚,并考察其初步表达结果。结果表明:大豆GmSOT1基因的编码区(coding sequences,简称CDS)由1 014 bp的核苷酸组成,编码一个长度为337个氨基酸残基的蛋白质;35S:Gm SOT1被成功导入大豆胚细胞,初步观察发现Gm SOT1过量表达导致大豆胚根明显膨大弯曲。
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关键词
大豆
磺酸基转移酶
硫代葡萄糖苷
基因克隆
载体构建
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Keywords
Soybean
Sulfotransferase(SOT)
Glucosinolate
Gene cloning
Vector construction
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分类号
S565.1
[农业科学—作物学]
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