岗梅磺酸基转移酶基因的克隆与体外表达

目的药用植物岗梅Ilex asprella含有多种活性磺化三萜类成分,克隆岗梅中的磺酸基转移酶编码(sulfotransferase,ST)基因,以了解其独特的磺化机制。方法利用RT-PCR技术,由岗梅叶片RNA扩增获得了2个可能的磺酸基转移酶基因IaST1和IaST2,利用生物信息学工具对其进行分析,并将其转化至大肠杆菌E. coli进行原核表达。结果序列分析显示,IaST1与IaST2各包含1个开放阅读框,分别长1002bp和993bp,编码333和330个氨基酸,理论相对分子质量为55500和54700。二者均具有ST的5个保守结构氨基酸序列,与黄顶菊Flaveriabidentis的黄酮醇C-3磺酸基转移酶亲缘关系较近。SDS-PAGE显示在E. coli中成功表达了IaST1和IaST2蛋白。结论首次从岗梅中克隆了ST基因,为后续阐明其功能及其在岗梅三萜磺化中的作用奠定了基础。

大豆GmSOT1基因克隆、载体构建及初步表达研究

磺酸基转移酶(sulphotransferase,简称SOT)是硫代葡萄糖苷(glucosinolate,简称硫苷)核心结构合成途径中的关键酶之一。本研究采用反向遗传学方法从大豆基因组中克隆Gm SOT1基因并对其功能进行初步研究。首先采用PCR方法扩增大豆Gm SOT1基因,并将其连接到pRNAi载体上的35S(Ca MV35S)启动子后面;将35S:Gm SOT1基因片段从pRNAi载体上双酶切下来,连接到植物双元表达载体p CAMBIA2301的多克隆位点上,且命名为p CAMBIA2301-35S:Gm SOT1;采用根癌农杆菌介导的遗传转化方法转化大豆成熟胚,并考察其初步表达结果。结果表明:大豆GmSOT1基因的编码区(coding sequences,简称CDS)由1 014 bp的核苷酸组成,编码一个长度为337个氨基酸残基的蛋白质;35S:Gm SOT1被成功导入大豆胚细胞,初步观察发现Gm SOT1过量表达导致大豆胚根明显膨大弯曲。