缓释的碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子对于水凝胶中内皮祖细胞集落形成单位的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)对于水凝胶中内皮祖细胞集落形成单位(EPCs)增殖、分化、成熟,以及血管化的影响。方法制备分别含有b FGF/VEGF和不含b FGF/VEGF的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)水凝胶,分为A、B 2组。同时包埋EPCs,流式细胞仪检测培养7 d后的细胞存活率,倒置显微镜观察EPCs的生长及长入水凝胶的情况并计数,分析b FGF、VEGF对EPCs存活率的影响。培养7 d后用定量实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测总RNA量,并检测PECAM1、CD34、KDR、Angiopoietin-2、pcdh12基因的表达。然后用酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测2组去水凝胶的培养上清液中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达,并用荧光法检测水凝胶的降解速度,b FGF、VEGF对EPCs释放MMP的影响。最后以鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)技术检测含有b FGF、VEGF的水凝胶体外诱导血管新生的作用。结果 A组水凝胶,消化7 d后,流式细胞仪检测发现39.43%的EPCs尚存,B组4.14%;两组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。水凝胶表面种植EPCs可观察到的细胞数A组为378.333 3,B组为302.333 3;两组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA法检测2组中MMP-2、MMP-9的表达,发现水凝胶中MMP-2和MMP-9随时间推移在72 h内持续释放,A组较B组释放浓度显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。荧光法检测水凝胶的降解发现,从第1天开始,A组水凝胶降解百分比急速升高,之后增长速度减缓,而B组呈继续增长之势,差异有统计学意义。定量RT-PCR检测发现A组较B组基因Ct值高,且差异有统计学意义(P<0.05)。CAM技术检测发现A组(空白组)、B组(不含b FGF、VEGF组)、C组(含b FGF、VEGF组)的新生血管总数分别为9、25、36;两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外研究证实,缓释的b FGF、VEGF不仅能促进水凝胶中EPCs增殖、分化、成熟,以及血管化,还能刺激血管新生。

四物汤及各单味药的含药血清对粒系-巨系造血祖细胞集落(CFU-GM)的影响

目的 :研究四物汤及各单味药对粒系 -巨系造血祖细胞集落 (CFU - GM)的影响 ,更近于真实地反映药物在体内作用的实际情况 ,以进一步探讨四物汤补血作用的配伍机制。方法 :采用血清药理学体外实验法。结果 :四物汤能明显促进造血祖细胞的增殖 ,单味药当归的作用最强 ,单味药熟地黄、川芎的作用也较正常对照组有增强趋势 ,而单味药白芍对 CFU - GM的增殖似无作用。几种受试药的作用强弱顺序可排列如下 :当归 >四物汤 >川芎 >熟地黄 >白芍。结论 :上述结果提示在促进 CFU - GM的增殖方面 ,四物汤的生血补血作用源于当归 ,川芎与熟地黄似有一定的协同作用 ,而白芍不表现协同作用。

Rhodamine123介导的光动力学疗法对小鼠淋巴细胞增殖及骨髓干祖细胞集落形成的影响

目的 探讨Rhodamine12 3(Rh12 3)介导的光动力学疗法对小鼠淋巴细胞增殖及骨髓干祖细胞集落形成的影响。方法 以C5 7B/ 6小鼠为供鼠 ,BALB/c小鼠为受鼠 ,脾脏淋巴细胞混合培养 ,比较单纯Rh12 3、单纯激光照射、光动力学疗法对小鼠混合淋巴细胞增殖 (MTT法 )及骨髓粒单核巨噬细胞集落形成 (CFU -GM)的影响 (甲基纤维素培养基法 ) ;流式细胞仪检测混合淋巴细胞中CD3+ CD6 9+ 阳性率。结果 Rh12 3组及单纯激光组对细胞增殖无显著影响 ,光动力学组 2 0mW/cm2 以下剂量激光对细胞增殖无明显影响 ,30mW/cm2 以上明显抑制细胞增殖 ;30mW/cm2 以下剂量对CFU -GM集落无明显影响。光动力学疗法后细胞培养 2 4h ,CD3+ CD6 9+ 表达明显下降。结论 光动力学疗法在 30mW/cm2 激光照射时可抑制淋巴细胞增殖 ,降低早期活化T细胞表达 ,但不影响骨髓CFU

急性髓系白血病祖细胞集落培养及其对化疗药物敏感性试验的临床意义

目的 观察急性髓系白血病 (AML)祖细胞集落生成的增殖潜能 ,及对化疗药物的敏感性试验与临床预后的关系。方法 采用液相—半固体相二步法 ,培养 30例AML的骨髓白血病祖细胞集落 (CFU -AML) ,按集落产率分成高、中和低三种生长类型 ,并检测其对高三尖杉酯碱、柔红霉素、阿糖胞苷和足叶乙甙四种化疗药物的敏感性 ,分析体外试验与临床疗效的符合率。结果 30例AML骨髓的平均CFU -AML集落为 14 2 2± 2 3 0 (2 7～ 5 5 6 ) / 2×10 5细胞。高、中和低生长类型分别为 4例、2 0例和 6例 ,临床缓解率为 2 5 %、6 0 %和 10 0 % ,各组间具有显著差异。化疗药物敏感试验与临床疗效的总符合率为 76 7% ,阳性符合率 80 0 % ,阴性符合率 70 0 % ,敏感度 84 2 % ,特异性 6 3 6 %。结论 白血病克隆增殖潜能与临床预后密切相关 ,低生长型预后最佳 ,高生长型预后差 ,中生长型介于两者之间。CFU -AML药敏试验与临床化疗缓解率有较好的相关性 。

小鼠骨髓巨核系祖细胞集落(CFU-MK)培养方法的建立及染色方法的改进

目的 :为深入探讨巨核系祖细胞增殖、分化的调控机制提供有效的技术途径。方法 :建立了小鼠骨髓CFU_MK的培养方法 ,并对影响集落形成及染色等条件进行了改进。结果与结论 :单因子rhIL_3,rhIL_6 ,rhGM_CSF ,rhEPO ,rhTPO和脾条件培养液及再障狗血清均具有不同程度的刺激CFU_MK生成的作用 ,尤以再障狗血清的刺激活性最强 ;接种细胞数为 (2～ 3)× 10 5 ml,培养 7～ 10d时CFU_MK的集落形成率较佳 ;采用改进后的不转移、不洗涤、原位复染并 4℃放置 2 4h的染色条件 。

重组血小板生成素对再生障碍性贫血患者巨核祖细胞的作用

应用重组血小板生成素(rTpo)对17例再生障碍性贫血(AA)患者进行CFU-MK和CFU-GM培养。研究结果表明:①Tpo 10ng/ml为CFU-MK培养的最佳浓度;②AA患者CFU-GM和CFU-MK增殖均明显低于正常人,P<0.001;③AA患者CFU-MK增殖较CFU-GM更低(CFU-MKx 3.2,CFU-GMx 17.5);④Tpo对骨髓小剂量照射后CFU-MK的增殖有促进恢复,对血小板的减少起到积极预防作用。

乌贼墨对小鼠造血干细胞、粒-单系祖细胞及外周白细胞的影响

目的探讨乌贼墨对小鼠造血干细胞、粒-单系祖细胞及外周血WBC的影响。方法用不同剂量的乌贼墨灌胃正常小鼠、环磷酰胺(Cy)和辐射骨髓损伤模型小鼠,采用造血祖细胞体外培养方法和实验血液学技术,检测小鼠骨髓造血干细胞生成数(CFU-S)、粒-单系祖细胞集落生成数(CFU-GM)和外周血WBC数量。结果乌贼墨能够显著提高正常小鼠CFU-S,CFU-GM和外周血WBC数量,有效拮抗模型小鼠体内CFU-S,CFU-GM及外周WBC的降低,并显著促进模型小鼠上述各指标的恢复。结论乌贼墨具有显著的促进小鼠骨髓粒系造血作用。其作用机制可能通过调节机体的免疫机能,诱导机体产生粒/单核细胞集落刺激因子和多种细胞因子,促进造血细胞的增殖,并诱导造血细胞向粒单系细胞分化。

当归补血汤及其组成药味的含药血清对造血祖细胞(CFUGM)的影响

当归补血汤水煎剂（归∶芪＝１∶５）６．６、１３．２、１９．８ｇ生药／ｋｇｉｇ小鼠１次，１小时后采集腹主动脉的血清０．４ｍｌ，加入小鼠造血祖细胞体外培养体系中培养６天，观察对ＣＦＵＧＭ的影响。结果随给药剂量的增加ＣＦＵＧＭ集落数增多，其量效方程为ｙ＝－９８．９３＋１５９．６６ｌｏｇｘ，最低起效量为４．１７ｇ饮片／ｋｇ。拆方研究表明促进ＣＦＵＧＭ增生功效的顺序是当归１．３２ｇ／ｍｌ＞当归０．２２ｇ／ｍｌ≥当归补血汤１．３２ｇ／ｍｌ＞对照≈黄芪１．１０ｇ／ｍｌ＞黄芪１．３２ｇ／ｍｌ。

不同血型脐血造血祖细胞混含培养的研究

采用单层琼脂法对脐血造血祖细胞培养进行了研究。结果：２０份新生儿脐血粒单祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）为９５．６±３６．５／１０￣６ＭＮＣ；两份不同血型的新生儿脐血细胞混合培养与单个新生儿脐血细胞培养比较，两者在祖细胞生成数量和生长特征方面无明显差别。本研究为临床混合不同血型的脐血造血祖细胞移植提供了一定的理论依据。

五例胎盘血收集及CFU－GM祖细胞体外培养的初步探讨

本文探索了五例胎盘血（ＰＢ）的收集及位一单系祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ体外培养观察。结果表明：每个胎盘可收集约８０±ｍｌ血。ＣＦＵ－ＧＭ培养３天后集落开始生长。１４天后体积增大，细胞数增多，多数集落细胞＞４０个。提示ＰＢ中有丰富的ＣＦＵ－ＧＭ祖细胞。因此，本实验将为我们下一步临床应用ＰＢ治疗有关疾病或重建造血功能打下基础。

益髓生血颗粒对辐射损伤小鼠骨髓细胞C/EBPα、GM-CSF、GM-CSFRα、MAFB mRNA表达的影响

目的观察益髓生血颗粒对辐射损伤小鼠骨髓细胞CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、粒-单系祖细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒-单系祖细胞集落刺激因子受体α(GM-CSFRα)、转录因子MAFB mRNA表达的影响,探讨该药调控骨髓造血的作用机制。方法采用随机数字表法将78只雄性昆明小鼠随机分为正常组、模型组、粒系祖细胞集落刺激因子(G-CSF)组及益髓生血颗粒高、中、低剂量组。益髓生血颗粒高、中、低剂量组先预防给药2 d,分别按12、6、3 g/(kg·d)灌胃。采用^(60)Co-γ射线全身一次性照射造模。造模第2天,G-CSF组按30μg/(kg·d)皮下注射G-CSF注射液,益髓生血颗粒高、中、低剂量组给药方法同预防给药,其余组均给予等量蒸馏水,连续14 d。进行小鼠骨髓细胞计数;采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测骨髓细胞C/EBPα、GM-CSF、GM-CSFRα、MAFB mRNA表达。结果益髓生血颗粒能明显提高辐射损伤小鼠骨髓细胞计数(均P<0.05),上调骨髓细胞GM-CSF、GM-CSFRα、MAFB m RNA表达(均P<0.05),以低剂量组效果最佳。结论益髓生血颗粒可促进骨髓造血,其机制与上调骨髓细胞GM-CSF、GM-CSFRα、MAFB mRNA表达有关。

灵芪红胶囊对放化疗所致小鼠白细胞减少症的治疗作用

目的研究灵芪红胶囊对环磷酰胺和60Co-γ射线照射所致小鼠白细胞减少症的治疗作用,及其升高白细胞的作用机理。方法采用环磷酰胺和60Co-γ射线造模,观察灵芪红胶囊对两个模型所致白细胞减少症的作用。分别测定骨骼造血干细胞脾脏节结(CFU-S)和人粒-巨噬系祖细胞集落(CFU-GM)及外周白细胞数和骨髓DNA。结果环磷酰胺和60Co-γ射线照射能使小鼠骨髓白细胞生成减少,灵芪红胶囊能减少环磷酰胺和60Co-γ对小鼠造血系统的损伤作用。结论灵芪红胶囊升白细胞的作用优于盐酸小檗胺。

自体外周血造血干细胞(APBSC)动员采集及冻存的研究

目的 评价自体外周血造血干细胞(APBSC)的动员、采集及冻存方法。方法 18例病例中,恶性淋巴瘤 16例(NHL14例,HD2例),睾丸肿瘤 2例。病人行诱导化疗完全缓解后,采用大剂量联合化疗加小剂量粒细胞集落刺激因子(G-CSF)进行外周造血干细胞动员。用CS-3000,Plus血细胞分离机采集外周血造血干细胞,将分离的单个核细胞 (MNC)经程序降温仪降至 -80℃后,冻存 -196℃液氮。冷冻前及解冻后分别行MNC计数和粒单系祖细胞集落(CFU-GM)培养。结果 动员后外周血WBC及MNC总数明显增加,与动员前比较,差异有显著性。冷冻前后,MNC计数,CFU-GM集落数无明显差异。结论 大剂量联合化疗加小剂量G-CSF动员方案是安全有效的。冷冻保存APBSC及复苏过程对细胞损伤较小,值得推广使用。

脐血单个核细胞与骨髓间充质干细胞滋养层的共培养

背景:骨髓间充质干细胞具有维持骨髓正常造血功能,在造血调控中发挥重要的作用。目的:观察骨髓间充质干细胞的生物学性状和多向分化能力,并检测其在体外支持造血的能力。方法:利用密度梯度培养法分离骨髓单个核细胞进行培养,流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞表型;接种脐血单个核细胞于骨髓间充质干细胞滋养层培养板上共培养,观察粒-单系祖细胞集落变化。结果与结论:骨髓间充质干细胞呈典型的成纤维样细胞形态,强表达CD44,CD29,不表达CD34和CD106。可促进脐血单个核细胞扩增并形成造血祖细胞集落。提示骨髓间充质干细具有造血支持作用。

丹参酮ⅡA对大鼠创面愈合瘢痕增生的抑制作用

目的探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对大鼠创面愈合瘢痕增生的抑制作用。方法取96只大鼠建立创面模型,随机分为模型组及TanⅡA低、中和高剂量组,其余24只为对照组。TanⅡA低、中和高剂量组分别按100、200和300 mg·kg^(-1)的剂量制成10 mL TanⅡA溶液腹腔注射,对照组、模型组腹腔注射DMSO 10 mL,连续注射14 d。比较各组大鼠创面组织瘢痕增生指数(HI)、单位面积的成纤维细胞数量(NA)、创面组织学、转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)、粒-单系祖细胞集落刺激因子(GM-CSF)mRNA及蛋白表达的差异。结果HE染色显示,注射14 d后对照组创面组织上皮完整、无炎性细胞浸润,模型组可见成纤维细胞(FB)肿胀、排列紊乱,有大量炎性细胞浸润;TanⅡA不同剂量组注射3 d即可见FB增生,高剂量组最明显;注射14 d后,TanⅡA高剂量组FB轻微肿胀,有少量炎性细胞浸润。TanⅡA不同剂量组在各注射时间创面愈合面积、TGF-β_(1)水平、IL-10、GM-CSF mRNA和蛋白水平较模型组升高(P<0.05),注射3、7 d后,HI、NA较模型组升高(P<0.05);愈合时间、TNF-α水平和注射14 d的TanⅡA中、低剂量组HI、NA较模型组降低(P<0.05)。随TanⅡA剂量增加,HI、NA、创面愈合面积、TGF-β_(1)水平、IL-10、GM-CSF mRNA和蛋白水平增加,创面愈合时间缩短,TNF-α水平降低(P<0.05)。结论TanⅡA对大鼠创面修复中增生性瘢痕的产生有较明显的抑制作用,其机制可能与IL-10、GM-CSF mRNA和蛋白的表达升高有关。

神经生长因子对正常和放化疗复合损伤小鼠粒-巨噬系血发生的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)对小鼠粒-巨噬系血细胞发生的影响。方法采用流式细胞术、祖细胞集落分析、血细胞计数、实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附分析法(ELISA),检测注射NGF对正常和经60Coγ射线照射+腹腔注射环磷酰胺(放化疗复合损伤)小鼠骨髓细胞(BMC)增殖周期、粒-巨噬系祖细胞集落(CFU-GM)产率、外周白细胞总数、骨髓细胞粒-巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)mRNA的表达及血清中GM-CSF和IL-3浓度的影响。并观察在体外培养体系中加入不同浓度的NGF时CFU-GM集落产率的变化及与GM-CSF的关系。结果在体外CFU-GM培养中,加入重组小鼠GM-CSF(rmGM-CSF)时,NGF剂量依赖性地提高集落产率。注射NGF7.5μg/(kg.d)或10μg/(kg·d)持续7d,正常和放化疗复合损伤小鼠外周血白细胞总数、小鼠骨髓细胞中S+G2/M期细胞比例、CFU-GM集落产率显著高于注射生理盐水的对照组;放化疗复合伤小鼠血清中的GM-CSF和IL-3也显著升高。结论NGF可与体外培养体系中的造血刺激因子协同作用,促进正常和放化疗复合损伤小鼠CFU-GM的形成。NGF在体内可促进正常和放化复合损伤小鼠骨髓细胞进入有丝分裂,促进造血干细胞向粒-巨噬系方向分化,促进CFU-GM的形成,提高外周血白细胞数;NGF还可刺激放化疗复合损伤小鼠体内GM-CSF和IL-3的分泌,这可能是NGF促进放化疗复合损伤后粒-巨噬系造血恢复的途径之一。

神经生长因子对小鼠红系造血的影响及内在机制研究(英文)

本研究探讨神经生长因子(NGF)对红系造血的影响及内在机制。采用流式细胞术、祖细胞集落测定、血细胞计数、实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附分析法(ELISA),对经大腿肌肉注射NGF一定时间后小鼠骨髓细胞的(BMC)增殖周期、BFU-E、CFU-E集落产率、外周血红细胞相关指标、肾脏EPO水平、骨髓细胞GM-CSF、脾脏EPO受体(EPOR)mRNA的表达及血清中EPO,GM-CSF和IL-1浓度进行检测,并观察培养体系中加入不同浓度的NGF时BFU-E、CFU-E集落产率的变化及与EPO、IL-3的关系。结果表明:注射NGF(7.5μg/kg)持续7天,骨髓细胞中S+G2/M期细胞比例、CFU-E和BFU-E集落产率、脾EPOR mRNA量显著高于注射生理盐水的对照组。持续13到19天,外周血网织红细胞比例、红细胞数、血红蛋白含量也有升高;在体外CFU-E培养中,无论是否加入EPO,加入的NGF均能剂量依赖性地促进集落的形成,且只加入NGF组的集落产率显著高于只加入EPO组。在BFU-E培养中加入NGF和IL-3时,集落产率显著高于加入EPO和IL-3组。结论:NGF可能通过提高造血细胞对EPO的反应性并可激活造血细胞上与EPO作用后一样的信号通路,进而促进骨髓细胞进入有丝分裂,促进造血干细胞向红系方向分化,促进BFU-E和CFU-E的形成,增加外周血中网织红细胞、红细胞、血红蛋白含量。

几种MK－CSA活性物质对小鼠CFU－MK体外形成的影响

几种ＭＫＣＳＡ活性物质对小鼠ＣＦＵＭＫ体外形成的影响黄成龙王亦流１柳晓兰邱丽玲张卿西毛秉智（军事医学科学院放射医学研究所，北京１００８５０；１海军总医院）自从１９７５年Ｍｅｔｃａｌｆ及１９７９年Ｖａｉｎｃｈｅｎｋｅｒ等人分别建立起小鼠和人类骨髓巨...

138例再生障碍性贫血发病机理的研究

本文对138例再生障碍性贫血患者进了156人次,粒-单系祖细胞体外培养分型,结果为干细胞缺损型111例,细胞免疫型2例,干细胞缺损兼细胞免疫型15例,干细胞缺损兼体液免疫型3例,造血微环境缺陷型7例,进一步证实了再生障碍性贫血发病机理中主要由干细胞缺损所致。

血小板生成素的生物学特性及对造血系统的影响

血小板生成素是造血生长因子家族中一个新的成员，体外培养中可明显促进巨核系造血祖细胞的增殖，体内应用后可明显升高外周血小板数及网织红细胞数。血小板生成素的问世，无疑为临床急性放射病或恶性肿瘤病人大剂量放疗。