细胞因子诱导人脐血间充质干细胞分化过程中细胞巢蛋白、神经丝亚单位和端粒酶逆转录酶mRNA的表达

目的:观察细胞因子EGF和bFGF联合诱导人脐血间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化过程中细胞 巢蛋白(nestin)、神经丝亚单位M(NF M)和端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的变化。方法:采集健康自然分娩产 妇脐血,密度梯度离心分离单个核细胞(MNCs),PBS洗涤2次后重悬于含体积分数20%胎牛血清的DMEM/F12 中,接种于T 75培养瓶内(细胞密度为1×106ml-1),一组加入细胞因子EGF和bFGF,终浓度各为10μg/L,另一 组不加细胞因子,剩余细胞用液氮冻存。培养24h倾去全部液体以除去未贴壁细胞,以后每3d全量换液1次,倒 置显微镜下观察细胞形态。分别收集培养1d、4d、7d、14d贴壁细胞和冻存细胞,采用RT -PCR方法检测nestin、 NF M、hTERTmRNA的表达。结果:未培养的脐血MNCs(内含MSCs)nestin、NF M、hTERTmRNA均表达阳性。培 养后nestin、hTERTmRNA表达下降,至第7d已不能检出;而NF MmRNA的表达随培养时间延长而增强。与对照 组相比,细胞因子组NF MmRNA表达较高,nestin、hTERTmRNA表达的下降趋势延迟。结论:细胞因子EGF和 bFGF在联合诱导脐血MSCs分化为神经细胞的过程中,能下调hTERTmRNA的表达。

血清磷酸化神经丝重亚单位水平与脓毒症休克患者并发谵妄的关系

目的探讨脓毒症休克患者血清磷酸化神经丝重亚单位(pNF-H)水平与谵妄发生的关系。方法选择海南医学院第二附属医院2020年1月至2022年3月收治的117例脓毒症休克患者。根据谵妄诊断标准将患者分为非谵妄组73例,谵妄组44例。采用单因素分析、二元logistic回归模型分析及受试者操作特征(ROC)曲线探讨脓毒症休克患者血清pNF-H水平与谵妄发生的关系。结果谵妄组序贯器官衰竭估计(SOFA)评分、机械通气占比、28 d病死率及血清pNF-H、白细胞介素-6(IL-6)高于非谵妄组,血清白蛋白水平低于非谵妄组(P<0.05)。经二元logistic回归模型分析,SOFA评分升高、机械通气及血清pNF-H、IL-6水平升高均为脓毒症休克患者谵妄发生的独立危险因素(P<0.05)。经ROC曲线分析pNF-H预测脓毒症休克患者谵妄发生的曲线下面积均高于IL-6和SOFA评分(P<0.05)。结论脓毒症休克患者血清pNF-H水平升高为谵妄发生的独立危险因素,可作为脓毒症休克患者谵妄的预测指标。

脐血单个核细胞培养前后神经细胞特有标志物的变化

目的 :探讨脐血单个核细胞培养前后神经细胞特有标志物的表达差异。方法 :采用RT PCR方法对脐血单个核细胞培养前后nestin ,神经丝亚单位M(NF M)及微管相关蛋白 2 (MAP2mRNA)的表达进行检测。结果 :nestin ,NF M及MAP2mRNA在培养前的脐血单个核细胞中表达呈阳性 ,培养后 3者表达增强。结论 :直接分离的脐血单个核细胞中存在着表达神经细胞特有分子的细胞 ,培养后 。

神经细胞特有分子在人脐血细胞中的表达

目的 :探讨神经细胞相关标志物nestin ,NF M及MAP2mRNA在脐血细胞中的表达情况。方法 :采用RT PCR方法对脐血单个核细胞进行检测。结果 :nestin ,NF M及MAP2mRNA表达在脐血单个核细胞中呈阳性。结论

人神经丝中分子量亚单位多肽的免疫原性及其抗体的特异性

目的研究人神经丝中分子量亚单位多肽(NFM)的免疫原性及其抗体的特异性,为NFM单克隆抗体(Mc Ab)的制备及ELISA检测方法的建立奠定基础。方法分析人、大鼠、小鼠NFM氨基酸序列,选择人NFM 4段肽P1、P2、P3、P4,人工合成并与匙孔槭血蓝蛋白(KLH)偶联,免疫小鼠收获血清,ELISA检测抗体效价,用Western blotting及免疫组化(IHC)检测各抗体与人、大鼠、小鼠及体外表达的NFM的反应性。结果 4种多肽具有较强的免疫原性,产生了高效价抗体,IHC结果显示,4种抗体均能与人脑组织胶质瘤、大鼠和小鼠脑组织中的NFM反应,Wesntern blotting结果显示,抗P1、P4抗体可与人脑组织胶质瘤、大鼠和小鼠脑组织中NFM反应,抗P1抗体出现2个条带;抗P1、P2、P3抗体均能与原核表达的NFM反应。结论所选择4段多肽具有较好的免疫原性,小鼠所产生抗体能与人、大鼠和小鼠脑组织及体外表达的NFM反应,可进一步用于NFM Mc Ab的制备。

胸腹主动脉夹层手术脊髓损伤标记物临床研究

目的探讨脑脊液生化指标监测对胸腹主动脉夹层术后脊髓缺血损害判断的临床意义。方法将50例胸腹主动脉夹层手术患者根据术后是否发生脊髓缺血损害并发症分成损伤组(SCI组,n=5)和无损伤组(NSCI组,n=45)。术前、术后分7个时点对脑脊液取样,对胶质纤维酸蛋白(GFAP)、S100β蛋白以及神经丝蛋白亚单位(NFL)等3个生化指标进行测定。比较分析上述3个生化指标在2组之间的变化。将无脊髓损伤患者据术式分为血管置换手术组(AR组,n=9)和腔内隔绝术组(EVGE组,n=36),同样比较分析上述3个生化指标在2组之间的差异。结果 SCI组术后6 h各项生化指标开始升高,48-72 h各项指标明显高于NSCI组(P<0.01)。术后6 h以后GFAP、S100β蛋白测定数值在2组之间数值无重叠。腔内隔绝术后各项指标无明显升高,血管置换术后6 h起GFAP、S100β开始升高,术后24 h达到峰值,较术前相比差异有统计学意义(P<0.05),同时高于腔内隔绝术后对应时点。血管置换术后(第24h4、8 h)时点NFL高于腔内隔绝术后对应时点(P<0.05)。结论脑脊液生化指标持续监测可以预判迟发性脊髓损害。GFAP、S100β蛋白比NFL诊断脊髓损伤有更高的预测价值。

脑脊液生化指标持续监测对胸腹部主动脉瘤手术脊髓缺血损伤判断的临床意义

目的探讨脑脊液生化指标监测对胸腹部及胸降部主动脉瘤手术中脊髓缺血损害判断的临床意义。方法对43例胸腹部及胸降部人工血管置换手术患者常规使用序贯阻断、左心房股动脉离心泵转流、远端主动脉灌注等脊髓保护措施,同时在蛛网膜下腔置管监测脑脊液压力。术中、术后分10个时点对脑脊液取样,对胶质纤维酸蛋白(GFAP)、神经丝蛋白亚单位(NFL)以及S100B蛋白等3个生化指标进行测定。根据术后是否发生脊髓损害并发症将研究对象分成损伤组和无损伤组,比较分析上述3个生化指标在2组之间的变化。结果损伤组术中各项检测指标无明显升高,但术后3～8 h以后开始升高,最高平均峰值与无症状组平均峰值相比GFAP上升了139倍、NFL上升了4.5倍、S100B上升了7.7倍,其中GFAP测定数值在术后3 h以后2组之间数值无重叠。4例中有2例生化指标异常出现时间分别早于脊髓损害出现时间6 h与19 h,采取积极治疗后,下肢肌力有明显改善。结论脑脊液生化指标持续监测可以预判迟发性脊髓损害,为积极治疗争取时间,其中胶质纤维酸蛋白测定是脊髓缺血损害预判的最具潜力指标。