神经丝轻链多肽与疾病的关系研究进展

神经丝轻链多肽(NEFL)是组成神经细胞骨架的关键成分,并与对神经细胞塑形至关重要的多个蛋白靶点有相互联系,在维持神经细胞形态及使有髓鞘的轴突再生方面起关键性作用,与多种运动神经元性疾病密切相关。最近研究发现,在某些神经系统外组织发生恶性肿瘤时可出现NEFL异位表达,且其表达量可能与肿瘤的发生、发展和预后及治疗有关,从而可能成为某些肿瘤表观遗传学的标志物。因此,研究NEFL与肿瘤的关系,在肿瘤的早期诊断、预后评价及指导临床治疗等方面有着重要意义。

外周血神经丝蛋白轻链多肽含量与神经压迫性疼痛程度相关性研究

目的探讨外周血神经丝蛋白轻链多肽(Nefl)水平与神经根性颈椎病(CSR)疼痛程度的相关性,并评估其是否可作为CSR进展的生物标志物。方法健康SD大鼠18只,随机数字表法分为2组,Sham组(9只)和大鼠坐骨神经慢性压迫损伤模型(CCI)组(9只)。Sham组暴露坐骨神经后缝合皮肤,CCI组暴露坐骨神经后先环扎再缝合皮肤;于术前,术后1、3、7、14 d采用电子测痛仪检测2组大鼠机械缩足反应阈值(MWT);并采集外周血进行定量蛋白质组分析,采用ELISA方法检测Nefl蛋白表达水平。将80例CSR患者作为研究组,同期体检的24例健康人群作为对照组,收集疼痛视觉模拟评分(VAS)结果,采用ELISA方法检测外周血Nefl蛋白表达;Spearman秩相关系数法评价外周血Nefl表达水平随疼痛程度的变化规律。结果CCI组大鼠术前,术后1、3、7、14 dMWT持续下降;3、7、14 d时MWT显著低于Sham组(P<0.01);TMT标记定量蛋白质组分析显示Nefl蛋白表达显著上调,Log(foldchange)=1.14,P<0.05;CCI组大鼠术前,术后1、3、7、14 d外周血Nefl蛋白表达量持续上升,Sham组3、7、14 d逐渐下降,MWT与大鼠外周血Nefl蛋白表达量呈负相关(r=-0.662,P<0.01)。CSR患者外周血Nefl表达显著高于健康人群(P<0.01),VAS为8分患者显著高于VAS为6分的患者(P<0.01),VAS与外周血Nefl呈正相关(r=0.41,P<0.01)。结论CCI模型大鼠和CSR患者外周血Nefl表达显著增加,且与疼痛程度相关,Nefl可作为临床上CSR病情进展评估的生物标志物。

血清神经丝蛋白轻链多肽水平预测急性颅脑损伤患者临床预后的研究

目的:探讨血清神经丝蛋白轻链多肽(NF-L)水平预测急性颅脑损伤患者临床预后应用价值。方法:选取100例急性颅脑损伤患者和50例健康人群分别作为观察组和对照组,检查并且比较2组患者入院后1～12 d血清NF-L水平和S100B水平,对观察组进行CT分级并分析CT分级和血清NF-L、S100B水平的相关性,根据观察组1年后生存和预后情况分为生存亚组和非生存亚组,预后良好亚组和预后不良亚组,比较亚组间血清NF-L水平,采用Spearman相关性分析软件分析血清NF-L水平和GOS评分相关性,并分析血清NF-L水平预测急性颅脑损伤预后的ROC曲线。结果:观察组受伤后D0、D1、D2、D3、D4、D6、D8-9和D10-12血清NF-L平均显著高于对照组(均P<0.05),对照组仅D0、D1、D2、D3和D4血清S100B水平均显著高于对照组(均P<0.05)。相关分析显示观察组受伤后D0血清NF-L水平与CT分级呈显著正相关(r=0.386,P=0.001)。非生存亚组受伤后24 h和1～12 d血清NF-L水平均显著高于生存亚组(P<0.05);预后不良亚组受伤后24 h血清NF-L平显著高于预后良好亚组(P<0.05);相关分析显示血清NF-L水平和患者1年后GOS评分呈显著负相关(r=-0.367,P=0.008)。入院当天血清NF-L预测急性颅脑损伤的AUC为0.99,且在入院后6 d AUC上升到1.00;入院当天血清NF-L预测急性颅脑损伤生存的最佳截断值为412 pg/mL,灵敏度和特异度分别为71%和88%;入院24 h血清NF-L预测急性颅脑损伤预后的最佳截断值为217 pg/mL,灵敏度和特异度分别为86%和56%。结论:血清NF-L水平与急性颅脑损伤患者临床预后呈显著负相关,检测血清NF-L水平有利于敏感预测急性颅脑损伤后神经元损伤的严重程度。

神经丝蛋白轻链多肽在脑损伤评估中的应用进展

神经丝蛋白轻链多肽(NF-L)是神经丝的重要组成成分之一,与轴突神经冲动传导有关。血清NF-L水平在创伤性脑损伤与非创伤性脑损伤患者中均显著升高,且脑脊液与血清NF-L变化具有一致性,同时NF-L水平升高不受血脑屏障通透性影响。血清和脑脊液中NF-L水平越高,预示脑损伤程度越严重,且与其他同类生物标志物相比,NF-L在不同脑损伤中的敏感性更高。因此,NF-L可用于预测、诊断神经系统疾病、监测疾病进展、评估患者预后,未来有望成为脑损伤的常规生物标志物。

急性颅脑损伤病人血清外泌体中泛素碳末端水解酶L1和神经丝蛋白轻链多肽的表达及意义

目的探讨急性中、重度创伤性脑损伤(TBI)病人血清外泌体中泛素碳末端水解酶L1(UCH-L1)及神经丝蛋白轻链多肽(NF-L)的表达及临床意义。方法我院2017年1月~2020年8月就诊的中、重度TBI病人94例为观察组,同期健康体检者52例作为对照组。分别于受伤后2小时、12小时、24小时、48小时、72小时抽取外周血约5 ml,提取外泌体,用蛋白酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测各时间点外泌体中UCH-L1及NF-L浓度。结果观察组病人外周血外泌体中UCH-L1蛋白浓度于伤后12小时达到高峰,后逐步下降,但各时间点均高于对照组,NF-L蛋白浓度逐渐升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。UCH-L1及NF-L蛋白浓度与年龄、性别及是否合并脑水肿无关,UCH-L1与病灶是否弥漫性轴索病变或局灶性病变亦无关,但NF-L能很好区分弥漫性轴索损伤或局灶性轴索损伤,差异有统计学意义(P<0.05)。入院后1周内死亡病人中,外泌体UCH-L1蛋白的浓度变化呈持续升高趋势,与未死亡病人比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论在中、重度TBI病人发病早期,外周血外泌体中UCH-L1及NF-L升高;NF-L可以很好地区分弥漫性或局灶性轴索损伤,UCH-L1可以预测发病早期死亡率。外泌体UCH-L1及NF-L有可能成为TBI预测疾病程度及预后的理想生物标志物。

神经丝蛋白轻链多肽在神经纤维瘤病变组织中的表达及意义

目的研究神经丝蛋白轻链多肽(NEFL)在I型神经纤维瘤病变(NF1)组织中的表达及意义。方法回顾性分析2017年1月~2019年6月本院收治的I型神经纤维瘤患者34例为研究对象,收集手术或病理活检切除的神经纤维瘤瘤变组织,另取因整容或其他皮肤疾病手术患者术中切除的正常皮肤组织34例为对照组,采用荧光定量PCR(RT-qPCR)检测NF1及正常皮肤组织中NEFL mRNA、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA及其下游效应分子转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达水平,采用免疫印迹(WB)检测NEFL、CTGF、TGF-β1蛋白表达水平,采用Pearson相关性分析NF1组织中NEFL蛋白水平与CTGF、TGF-β1蛋白的相关性。结果与正常皮肤组织比较,NF1瘤变组织中NEFL、CTGF、TGF-β1 mRNA及蛋白水平均显著增加(P<0.05)。Pearon法分析结果显示,NF1瘤变组织中NEFL蛋白水平与CTGF、TGF-β1蛋白水平均正相关(r=0.471、0.610,P<0.05)。结论NEFL在I型神经纤维瘤组织中高表达,可能通过组织纤维化参与NF1发生发展。

新生儿缺氧缺血性脑病血清神经丝蛋白轻链多肽表达水平及与预后的关系

目的观察新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)血清神经丝蛋白轻链多肽(neurofilament light polypeptide,NF-L)表达水平及与预后的关系。方法选取2018年3月至2019年3月青海省妇女儿童医院收治的124例HIE患儿纳入研究组,根据HIE临床严重程度分为轻度(n=41)、中度(n=47)、重度(n=36);并将同期出生的125例健康新生儿纳入对照组。血清NF-L水平采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)进行检测,比较研究组与对照组、不同严重程度HIE患儿的NF-L水平,采用受试者操作特性(receiver operator characteristic,ROC)曲线分析其对HIE患儿预后不良的预测价值。统计学方法采用t检验、单因素方差分析、χ^(2)检验。结果研究组患儿血清NF-L水平明显高于对照组[(145.9±30.8)与(1.3±0.4)ng/L],差异有统计学意义(t=52.460,P<0.05)。不同严重程度HIE患儿性别、出生胎龄、出生体质量比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。轻、中、重度患儿血清NF-L水平[(116.4±15.7)、(153.2±20.9)与(170.0±28.2)ng/L]比较,差异有统计学意义(F=61.996,P<0.001);进一步两两比较,重度和中度患儿血清NF-L水平均高于轻度患儿,重度患儿血清NF-L水平高于中度患儿(P值均<0.05)。轻、中、重度HIE患儿预后不良比例[0.0%(0/41)、34.0%(16/47)与61.1%(22/36)]比较,差异有统计学意义(χ^(2)=34.093,P<0.001);进一步两两比较,重度和中度患儿预后不良比例均高于轻度患儿,重度患儿预后不良比例高于中度患儿(P值均<0.05)。预后不良患儿血清NF-L水平高于预后良好患儿[(169.8±26.7)与(135.3±20.4)ng/L],差异有统计学意义(t=7.872,P<0.001)。ROC曲线分析显示,血清中NF-L水平预测HIE患儿不良预后的曲线下面积为0.889(95%CI:0.827~0.951),截断值为140.6 ng/L,其灵敏度为85.7%、特异度为79.8%。结论不同严重程度HIE患儿的预后情况不同,NF-L可作为判定预后的血清指标,在临床上具有一定的参考价值。

血清神经丝蛋白轻链多肽水平与急性脑卒中预后的相关性分析

目的探究血清神经丝蛋白轻链多肽水平与急性脑卒中预后的相关性。方法选取徐州医科大学附属医院2018年9月—2020年9月收治的急性脑卒中患者120例作为研究组,选择同期100例健康人群为对照组。按照改良Rankin量表(mRS)评分进行分组,将120例患者分为预后良好组77例(mRS评分为0~2分)和预后不良组43例(mRS评分为3~5分),测定并比较不同组别之间血清神经丝蛋白轻链多肽和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,采用Pearson相关性分析软件分别对血清神经丝蛋白轻链多肽水平、TNF-α水平与mRS评分的相关性进行分析,通过受试者工作特征(ROC)和曲线下面积(AUC)分析血清TNF-α和神经丝蛋白轻链多肽水平对患者预后的预测价值,并对影响患者预后的相关因素采用Logistic回归分析。结果研究组患者血清神经丝蛋白轻链多肽水平和TNF-α水平明显高于对照组(P<0.05);而急性脑梗死和急性脑出血患者血清神经丝蛋白轻链多肽水平和TNF-α水平比较均无明显差异(P>0.05)。与预后良好组患者相比,预后不良组年龄≥60岁、糖尿病、高血压、高血脂比例,美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分及血清神经丝蛋白轻链多肽水平、TNF-α水平显著升高(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示:血清神经丝蛋白轻链多肽水平(r=0.641,P<0.05)和TNF-α水平(r=0.498,P<0.05)都与mRS评分呈中等强度正相关关系;ROC曲线结果显示:血清神经丝蛋白轻链多肽水平的AUC为0.852(95%CI:0.777~0.926),截断值是132.942 pg/mL,此时灵敏度和特异性分别为79.1%,77.9%;血清TNF-α水平的AUC为0.777(95%CI:0.674~0.881),截断值为0.186 mg/L,对应的灵敏度和特异性分别为79.1%,84.4%;Logistic回归分析结果表明:年龄≥60岁、高血压、NIHSS评分(OR=2.129,95%CI:1.347~3.365,P<0.05)、血清神经丝蛋白轻链多肽水平(OR=2.639,95%CI:1.925~3.618,P<0.05)及TNF-α水平(OR=2.117,95%CI:1.385~3.236,P<0.05)均是影响急性脑卒中患者预后的危险因素。结论急性脑卒中预后不良患者血清神经丝蛋白轻链多肽水平明显升高,且其与患者预后mRS评分呈正相关,可作为预测急性脑卒中患者预后的指标。

神经丝蛋白轻链多肽在肺癌组织中的表达及其意义

目的探讨肺癌细胞株及肺癌组织中神经丝蛋白轻链多肽（NEFL）的表达与肺癌患者临床病理特征和生存期之间的相关性。方法链菌素抗生物素蛋白一过氧化物酶（SP）免疫组织化学法检测108例肺癌组织中NEFL的表达，并对108例肺癌患者进行随访观察。非参数秩和检验检测两个独立样本的NEFL的表达差异；Cox比例风险模型分析预后，应用SPSS13．0软件进行统计学分析。结果NEFL的阳性表达率在淋巴结转移阳性和阴性的肺癌患者中，分别为9．4％和32．7％，差异有统计学意义（x20.25.t=8．74，P〈0．01），而与性别、吸烟、组织类型、分化程度、肿瘤分期、肿瘤大小无相关。Cox比例风险模型多因素预后分析显示，肿瘤患者的性别[相对危险度（RR）：-1．030，P〈0．01]、肿瘤分期（RR：0．474，P〈0．01）、淋巴结转移（RR=0．675，P〈0．05）和NEFL表达（RR=-1．147，P〈0．05）与死亡有关（P〈0．05）。结论NEFL的表达与肺癌淋巴结转移有关系，其阳性表达与患者预后呈正相关。

重型颅脑损伤病人血清NF-L和TIMP-2水平变化及临床意义

目的探讨重型颅脑损伤(TBI)病人血清神经丝蛋白轻链多肽(NF-L)、组织基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2的水平变化及临床意义。方法2019年8月~2021年8月前瞻性收集重型TBI共122例,采用酶联免疫吸附试验检查入院血清NF-1和TIMP-2水平;伤后6个月,应用GOS评分评估预后,其中4~5分为预后良好,1~3分为预后不良。结果伤后6个月,预后良好72例,预后不良50例。预后不良组血清NF-L以及TIMP-2水平明显高于预后良好组(P<0.05)。入院血清NF-L水平(r=-0.585)、TIMP-2水平(r=-0.542)与入院GCS评分呈明显负相关(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,血清NF-L、TIMP-2水平增高是重型TBI伤后6个月预后不良的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示血清NF-L1≥54.60 pg/ml联合血清TIMP-2≥42.59 ng/ml预测重型TBI伤后6个月预后不良的曲线下面积为0.854(95%CI 0.789~0.919),灵敏度为82.0%,特异度为70.8。结论重型TBI病人血清NF-L、TIMP-2水平明显增高,是伤后6个月预后不良的危险因素;两者联合应用对病人预后具有较高的预测价值。

β-APP和NF-L在评估弥漫性轴索损伤大鼠损伤程度中的价值

目的利用自制装置建立轻、中、重度的弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)大鼠模型,观察不同时间点β-淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,β-APP)及神经丝蛋白轻链多肽(neurofilament light polypeptide,NF-L)的变化与恢复期的学习记忆能力的相关性。方法健康成年SD大鼠100只,随机分为正常对照组和A、B、C(轻、中、重型致伤)DAI组。伤后6、24、72 h及1、2周取脑组织切片行β-APP免疫组织化学染色;24 h时脑组织切片行HE染色和NF-L免疫组织化学染色;2周时行水迷宫测试。将损伤后24 h各组脑组织切片感兴趣区内测定的β-APP和NF-L累积光密度(IOD)值与损伤后恢复期大鼠的学习记忆能力做相关性分析。结果伤后24 h取脑组织肉眼观察致伤组大脑表面、蛛网膜下腔、脑室等区域未见出血,光镜下可见A、B、C组大鼠的胼胝体区神经束疏松、紊乱,血管淤滞,空泡形成,神经元肿胀变性,细胞核显示不清,突触结构模糊等经典DAI病理特征,NF-L免疫组化鉴定实验组均有典型中线部位轴索损伤改变。实验组伤后6、24、72 h及1、2周与对照组相比各时间点胼胝体β-APP均有升高(P<0.05),组内各时间点呈动态变化,于伤后24 h最高。伤后24 h,实验组NF-L免疫组化染色大脑水管水平脑干轴突和神经元胞体阳性染色较正常组增强,半定量分析A、B、C3组间差异有统计学意义(P<0.05)。水迷宫测试与正常对照组比较,A组大鼠学习记忆功能无明显下降;B、C两组下降明显(P<0.05)。损伤后24 h,A、B、C 3组脑组织切片感兴趣区内测定的β-APP和NF-L累积光密度(IOD)值与损伤后恢复期大鼠的学习记忆能力呈负相关(r分别为-0.937、-0.939)。结论β-APP和NF-L不仅可以反映DAI动物模型轴索损伤的程度,还可以早期预测损伤后大鼠的学习记忆恢复能力,可能成为DAI损伤的特异性分子探针。

血清SAA、NSE联合NF-L对重型颅脑损伤神经功能预后不良的预测探讨

目的:探讨血清淀粉样蛋白A(SAA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)联合神经丝蛋白轻链多肽(NF-L)对重型颅脑损伤(STBI)神经功能预后不良的预测价值。方法:选取2021年1月-2023年3月本院收治的157例STBI患者为疾病组,另选取同期在本院健康体检的健康志愿者157例为对照组,比较疾病组、对照组血清SAA、NSE、NF-L水平。对疾病组患者随访3个月,根据格拉斯哥预后评分(GOS)将其分为预后不良组和预后良好组,比较预后不良组和预后良好组患者的一般资料及血清SAA、NSE、NF-L水平。采用多因素logistic回归分析STBI患者神经功能预后不良的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清SAA、NSE联合NF-L水平对STBI患者神经功能预后不良的预测价值。结果:疾病组血清SAA、NSE、NF-L水平均高于对照组(P<0.05);预后不良率为37.16%,入院时高格拉斯哥昏迷指数(GCS)评分为STBI患者神经功能预后不良的保护因素(P<0.05),入院时高生理与慢性健康(APACHE-Ⅱ)评分、鹿特丹CT评分及SAA、NSE、NF-L水平均为STBI患者神经功能预后不良的危险因素(P<0.05);血清SAA、NSE、NF-L联合预测STBI患者神经功能预后不良的灵敏度、特异度、曲线下面积(AUC)分别为94.55%、86.02%、0.943,且联合预测AUC高于单独预测(P<0.05)。结论:血清SAA、NSE、NF-L为STBI患者神经功能预后不良的影响因素,且三者联合对STBI患者神经功能预后不良的预测效能更好。

弥漫性轴索损伤患者的血清NF-L表达变化

目的:探讨弥漫性轴索损伤(DAI)患者血清中的神经丝蛋白轻链多肽(NF-L)的浓度与DAI病情的严重程度和预后的相关性。方法:选择DAI患者95例(DAI组)和健康体检者65例(正常对照组),采用ELISA检测2组血清中NF-L的浓度。结果:损伤后7 d内,DAI组血清中NF-L的浓度均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线显示血清NF-L浓度>3.85 ng/m L对于辅助诊断DAI的敏感性与特异性最高。DAI死亡患者血清NF-L浓度明显高于存活患者。结论:血清NF-L浓度与DAI损伤严重程度及患者预后具有相关性。

海马注射miR-181c对CCI模型大鼠机械痛和NF-L表达的影响

目的:在坐骨神经缩窄性损伤(CCI)大鼠海马背侧CA1区给予miR-181c激动剂及抑制剂,观察大鼠机械痛阈以及海马神经微丝轻链多肽(NF-L)表达变化。方法:雄性SD大鼠分为假手术组(sham)、CCI组+生理盐水组、CCI+miR-181c激动剂组和CCI+miR-181c抑制剂组。在术前和术后第1、3、5、7、10和14 d测定机械缩足反射阈值(MWT);免疫组化观察NF-L表达,Western Blot检测三结构蛋白2(TRIM2)、NF-L和N-甲基-D天门冬氨酸受体NR1亚单位(NMDAR1)的表达。结果:与sham组相比,CCI+生理盐水组MWT降低(P <0.05);与CCI组相比,miR-181c激动剂组MWT明显升高(P <0.05),而miR-181c抑制剂组MWT进一步降低(P <0.05)。免疫组化观察到,与sham组相比,CCI+生理盐水组NF-L阳性纤维减少;与CCI组相比,CCI+miR-181c激动剂组NF-L阳性纤维增多,而CCI+miR-181c激动剂组NF-L阳性纤维减少。Western Blot实验显示,与sham组相比,CCI+生理盐水组海马TRIM2的表达升高(P <0.05),而NF-L与NR1的表达下降(P <0.05);与CCI组相比,CCI+miR-181c激动剂组TRIM2表达下降(P <0.05)而NF-L与NMDAR1(NR1)表达上升(P <0.05);而CCI+miR-181c抑制剂组TRIM2表达上升(P <0.05),NF-L与NR1表达下降(P <0.05)。结论:海马CA1区给予miR-181c可以减轻CCI大鼠机械痛敏,抑制海马TRIM2表达,促进NF-L与NR1表达上调,减轻海马神经元损伤。