长期远隔后适应对脑缺血再灌注大鼠脑组织神经中丝200表达的影响

目的研究长期远隔缺血后适应对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织神经中丝200(NF200)表达的影响。方法应用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注损伤模型,再灌注即刻给予远端肢体缺血后适应,即双侧股动脉夹闭10 min/放开10 min,反复3次。此后每天给予一次远端肢体缺血后适应。实验分为4组:缺血再灌注7 d组(C7组);缺血再灌注后适应7d组(P7组);缺血再灌注28 d组(C28组);缺血再灌注后适应28 d组(P28组)。每组6只大鼠。采用免疫印迹法研究各组大鼠脑组织中NF200蛋白的表达水平,并采用免疫荧光法观察大鼠脑组织NF200蛋白的表达部位。结果 P7组大鼠脑组织内NF200表达比C7组明显增高(P<0.05),P28组大鼠脑组织内NF200表达比C28组及P7组明显增高(P均<0.05),而C28组大鼠与C7组相比脑组织内NF200表达无明显变化。免疫荧光染色结果显示NF200在神经元胞体及轴突中均有表达。结论长期远隔缺血后适应可增加大鼠脑组织内NF200的表达,可能与减轻脑缺血损伤相关。

大鼠脊髓半切损伤后外源性NEP1-40对神经中丝NF200表达的影响

目的探讨外源性Nogo受体拮抗剂(NEP1-40)在脊髓损伤修复过程中的作用及机制。方法将60只雌性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组各20只。后两组均建立大鼠T10脊髓右侧半横断损伤模型,治疗组通过损伤处置管从术后第1天开始每天予NEP1-4015μg溶于PBS缓冲液25μl,连续7d;模型组予等量的PBS缓冲液;假手术组仅去除椎板,不做脊髓半横断,术后不埋管,不用药。分别于术后7、14、21、28d采用Basso-Beattie-Bresnahan运动(BBB)评分法行大鼠行为学表现评分,免疫组化染色法检测受损节段脊髓中NF200的表达。结果治疗组各个时间点的BBB评分均高于模型组,NF200阳性细胞的数目均高于模型组(P均<0.05)。BBB评分与NF200阳性细胞数量呈明显正相关(r=0.937,P<0.01)。结论脊髓损伤后注射NEP1-40可增加NF200阳性神经元数目,促进轴突再生及运动功能恢复。

骨髓间充质干细胞及补脑Ⅰ号处理后血清对小鼠海马神经元缺氧缺糖模型ICAM-1、NF200表达的影响

目的观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)、补脑Ⅰ号血清对小鼠海马神经元缺氧缺糖(OGD)模型神经中丝200(NF200)、细胞间黏附因子-1(ICAM-1)的影响。方法分离培养BMSCs、海马神经元,对海马神经元进行OGD造模。制备补脑Ⅰ号血清与正常血清。经MTT法筛选补脑Ⅰ号血清对海马神经元OGD模型干预的最佳浓度为10%,时间为72 h。实验分为正常组、模型组、BMSCs组、正常血清组、中药血清组、BMSCs+正常血清组、BMSCs+中药血清组。qRT-PCR检测细胞NF200、ICAM-1 mRNA表达;Western Blot检测细胞NF200、ICAM-1蛋白表达。结果与正常组比较,模型组、BMSCs组、正常血清组、BMSCs+正常血清组、中药血清组、BMSCs+中药血清组ICAM-1、NF200 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,BMSCs组、BMSCs+正常血清组、中药血清组、BMSCs+中药血清组NF200 mRNA及蛋白表达升高,ICAM-1 mRNA及蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);BMSCs+中药血清组较BMSCs组、正常血清组、中药血清组及BMSCs+正常血清组的NF200 mRNA及蛋白表达升高,ICAM-1 mRNA及蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论BMSCs和补脑Ⅰ号血清可能通过抑制炎症、促进神经再生及双重作用修复OGD损伤的海马神经元,两者联合应用效果优于单独使用。

Neuritin蛋白对大鼠急性脊髓损伤后神经元轴突再生的作用

目的研究Neuritin蛋白对大鼠急性脊髓损伤后神经元轴突再生的作用。方法成年健康Wistar大鼠54只,雌雄各半,体重250～300g,用改良Allen打击法制备大鼠T10节段脊髓损伤模型。将动物随机分为3组,实验组A、B组(n=24)分别于损伤后每天经蛛网膜下腔导管注入Neuritin、His蛋白各100μL(6μg);假手术组C组(n=6)仅打开椎板不损伤脊髓,蛛网膜下腔置空管。A、B组分别于损伤后3、7、14、28d各取6只动物,C组于损伤后7d取动物,行BBB运动功能评分、HE染色、神经中丝蛋白200(neurofilament 200,NF-200)及生长相关蛋白43(growth associated protein43,GAP-43)免疫组织化学染色观察。结果术后各时间点A、B组BBB评分总体呈增高趋势,从术后14d起BBB评分A组显著高于B组(P<0.05);C组高于各时间点A、B组(P<0.05)。HE染色示术后C组可见正常脊髓组织;从7d开始,A组较B组尼氏小体染色加深,空泡细胞减少,神经突触数量增多。NF-200和GAP-43免疫组织化学观察显示,C组仅见少量阳性表达;A、B组从7d开始,脊髓内均可见NF-200和GAP-43阳性表达。经图像分析,从7d开始,各时间点NF-200和GAP-43平均积分吸光度(IA)值A组均高于B组,比较差异有统计学意义(P<0.05);C组低于各时间点A、B组,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论局部给予外源性Neuritin蛋白能促进大鼠急性脊髓损伤后伤区轴突再生,并能促进大鼠后肢运动功能的恢复。