活性依赖性神经保护蛋白在肿瘤中的研究进展

活性依赖性神经保护蛋白(ADNP)是一种转录因子。近些年来研究发现,ADNP具有染色质重塑、细胞周期与增殖调控、DNA损伤与修复、细胞运动与转移、化疗耐药等肿瘤相关生物学功能,在多种肿瘤中均存在不同程度的突变及异常表达,与肿瘤的发生、发展密切相关。本文综述了ADNP的分子结构、功能特点及其在多种肿瘤发生、发展中的研究进展,旨在为肿瘤的诊治研究方向提供新思路。

小鼠中缝背核向屏状核投射神经通路的形态学特征

目的探索小鼠中缝背核(DRN)向屏状核(CLA)投射神经通路的形态学特征。方法分别将逆行示踪剂594 retrobeads和顺行示踪剂生物素化的葡聚糖胺(BDA)注入CLA(n=3)和DRN(n=3),结合5-羟色胺(5-HT)免疫荧光染色,观察逆行标记神经元的分布和神经化学特征以及顺标神经纤维和终末在全脑和CLA内的分布;利用钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)-Cre、谷氨酸脱羧酶67(GAD67)-Cre动物结合狂犬逆行跨突触病毒(RV)标记,观察DRN-CLA通路的下游靶神经元类型。结果DRN的吻、中、尾段均能观察到594 retrobeads阳性神经元的胞体,中段的腹侧亚核(DRV)分布较多,且90%以上的逆行标记神经元为5-HT阳性。BDA顺标纤维密集分布于腹侧被盖区、束旁核、腹侧苍白球、杏仁中央核等区,CLA内的神经纤维和终末相对稀疏。RV跨突触逆行标记结果显示,CaMKⅡ-Cre动物的DRN中含有较多的突触前神经元,而GAD67-Cre动物DRN中突触前逆行标记神经元较少。结论DRN-CLA通路是以DRV分布为主的5-HT能投射通路,其在CLA内的纤维和终末较为稀疏,主要与CLA内的CaMKⅡ阳性神经元形成突触联系。

神经传导检查在电针治疗慢性酒精依赖性周围神经病中的应用

目的:通过神经传导检查(NCS),观察电针对慢性酒精依赖性周围神经病的治疗效果。方法:选择慢性酒精依赖病人40例,分为对照组和治疗组,分别给予西药治疗、电针配合西药治疗,治疗前后分别进行NCS,测定正中神经、尺神经、腓总神经、胫神经的运动神经传导速度(MCV)、感觉神经传导速度(SCV)。结果:与对照组比较,治疗组临床症状明显改善,MCV、SCV明显增加(P<0.05)。结论:电针可以提高慢性酒精依赖性周围神经病的神经传导速度,疗效确切,安全可靠,NCS可以作为慢性酒精依赖性周围神经病变的检测手段之一。

泛酸激酶依赖型神经退行性疾病1例报告及文献复习

患者,男,12岁。主因双眼视力下降7年伴言语不清,行走不稳2年余于2015年3月24日收住院。患者于7年前出现夜视差,随后双眼视力逐渐下降,行走时易摔倒,未予特殊诊治。2年前无明显诱因出现言语不清,伴行走不稳,口角及双上肢不自主运动,症状持续不缓解。6个月前出现流涎,偶有饮水呛咳,伴吞咽费力。查体：神志清楚,构音障碍,计算力下降,理解力差,双侧瞳孔直径3 mm,对光反射灵敏,双眼球运动自如。

雷米芬太尼的依赖性潜力

目的··:评价雷米芬太尼 (Rem)的依赖性潜力。方法·· :采用大、小鼠催促戒断模型、大鼠自然戒断模型、大鼠条件性位置偏爱模型和药物辨别模型进行评价。结果·· :(1)在催促戒断试验中 ,小鼠没有出现明显的戒断反应 (P>0.05);(2)大鼠催促戒断试验中 ,Rem在出现死亡的剂量下 ,只观察到轻微的戒断症状(P<0.05);(3)在自然戒断试验中 ,大鼠没有出现明显的戒断反应;(4)在条件性位置偏爱试验中 ,Rem5.0μg·kg-1形成了明显的条件性位置偏爱效应;(5)在大鼠药物辨别试验中 ,Rem20μg·kg-1 能完全替代大鼠对2.5mg·kg-1 吗啡的辨别效应。结论·· :Rem具有产生精神依赖性和身体依赖性的潜力 ,但由于其作用时间短 ,较难形成身体依赖性 ,而其精神依赖性的形成 。

给力依赖、受力依赖与快乐模型

根据快乐的概念,分析了在运动中产生快乐的原因和产生快乐的条件。并指出:当一个人从某项运动的过程中体验到快乐时,这种快乐事实上并不是由这项运动产生的,而是因为这个人在神经系统内部建立了足够数量的与这项运动相关的信息子。给力:向外界发送一个力;受力:从外界接受一个力。网球、标枪是一项给力运动,跳伞、蹦极是一项受力运动,足球、拳击是一项给力—受力运动。最后提出了运动依赖程度的调整方法。

神经保护蛋白同源基因在阿尔茨海默病大鼠海马中的表达

目的 探讨活性依赖性神经保护蛋白 (activity -dependentneuroprotectiveprotein ,ADNP)同源基因的表达与阿尔茨海默病的关系。方法 采用淀粉样β 肽注射大鼠脑室 ,制备阿尔茨海默病样损伤大鼠模型 ,15d后通过RT PCR方法检测大鼠脑海马胆碱乙酰转移酶 (cholineacetyltransferase,ChAT)基因、活性依赖性神经保护蛋白基因及Mn -SOD、Cu ,Zn -SOD基因的表达。结果 胆碱乙酰转移酶、ADNP基因的表达在实验组海马中均下降 ,Cu ,Zn -SOD基因的表达没有明显变化 ,而Mn -SOD则有所升高。结论 结果提示ADNP表达降低 ,使神经细胞缺乏保护因素 ,与阿尔茨海默病的发生发展相关。

大鼠三又神经脊束尾侧亚核内Cdk5/p39的表达与活性

目的:探讨周期依赖性蛋白激酶5(Cdk5)2种激活剂p35和p39在出生后各发育阶段大鼠三叉神经脊束尾侧亚核内的表达变化。方法:采用Western印迹分析、免疫沉降和Cdk5活性分析,检测出生后各发育阶段大鼠三叉神经脊束尾侧亚核内Cdk5的活性变化和Cdk5、p39的表达水平。采用SPSS11.0软件包中的两两比较和扩展t检验进行统计学分析。结果:在新生大鼠三叉神经脊束尾侧亚核组织中,p39表达较低;出生后2～3同时,p39的表达最高;到成体时,其表达降低到与新生大鼠三叉神经脊束尾侧亚核组织中的相同水平。在出生后各发育阶段,大鼠三叉神经脊束尾侧亚核内Cdk5的表达一致,而Cdk5的活性逐渐减弱,新生大鼠三叉神经脊束尾侧亚核内的Cdk5活性(115.5 Kcpm)比成体中的Cdk5活性(19.0 Kcpm)约高6倍,各组之间均有显著差异(P<0.01)。结论:在出生后各发育阶段,大鼠三叉神经脊束尾侧亚核内p39的表达与p35表达结果在时间上有差异.Cdk5/p39和Cdk5/p35在出生后各发育阶段大鼠三叉神经脊束尾侧亚核内可能扮演不同的角色。

hTERT对干预后人胚胎神经元cdk5 P-CREB表达影响的初步观察

目的对干预后人胚胎神经元周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase 5,cdk5)、cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,P-CREB)表达影响。方法人胚胎大脑皮质神经元原代培养后,用hTERT重组腺病毒转染神经元,用Aβ25-35干预转染后神经元。实验分为转染组和非转染组。Western-blot检测cdk5、p-CREB的变化。结果 Aβ25-35干预后,神经元内cdk5表达量明显增加,而hTERT基因转染组cdk5增加的低于非转染组。干预后神经元内p-CREB表达量明显降低,而hTERT基因转染组,p-CREB表达量高于非转染组。结论 Aβ25-35干预人胚胎大脑皮质神经元,可以导致cdk5的异常活化,p-CREB的降低;hTERT基因转染可有效抑制cdk5的异常激活,防止p-CREB的降低。

爱情、性行为、痛苦与快乐模型

根据神经系统在学习、记忆和遗忘过程中表现出的特征和心理感觉,构建了一个快乐模型。在快乐模型中,作者把自由、快乐、幸福和痛苦等心理感觉统一到一个数学公式中,并且提出了神经依赖和痛苦的阶段性消失特征。根据建立的快乐模型,分析了爱情文化和性文化的形成和发展过程。最后指出:爱情文化和性文化是快乐模型的两个应用案例,并且给出了可能会产生自由爱情的四个基本条件。

身体性别与心理性别

在想象中实施的身体性别差异实验结果表明:在女性和男性之间只存在很小的身体性别差异,女性和男性之间的共同性远远超出了差异性。为了提高两性之间的吸引力,人类创造出了丰富多彩的社会性别文化,从而使几乎每个人类成员在心理上都认为女性和男性是两种完全不同种类的生物,它们在各个方面都表现出看似天生的性别差异。在心理性别文化的影响下,由于女性和男性建立的与爱情相关信息库在结构和内容存在设计上的缺陷,从而使恋爱中的双方不能保持相对稳定的心理状态。在身体性别文化的影响下,虽然女性和男性的心理性别差异会明显减少,但是由于在许多领域取消了对性别的限制性条件,女性和男性的活动空间反而增加了,它们的创造性可以在新的领域得到发展。

活性依赖性神经保护蛋白基因新发突变致孤独症谱系障碍一例

本文报道了1例活性依赖性神经保护蛋白(ADNP)新发基因突变导致孤独症谱系障碍(ASD)的病例,2014年国外报道其是目前ASD基因流行病学调查中重复率最高的1个致病基因,提示基因突变对ASD病因学研究有重要意义,国内较少见报道。

NT4-ADNF-9融合基因原核表达载体的构建

目的 构建神经营养素 (NT4 )与活性依赖性神经营养因子 9(ADNF 9)融合基因的原核表达载体pBV2 2 0 /NT4 ADNF 9,为进一步对神经系统退行性疾病基因治疗的研究奠定基础。方法 采用非对称互补引物 /模板法 ,制备两端含有酶切位点的ADNF 9的cDNA ,将其连接到NT的信号肽和前导序列的 3′端 ,组成融合基因NT4 ADNF 9,再将该融合基因亚克隆于原核表达载体pBV2 2 0 ,构建为pBV2 2 0 /NT4 ADNF 9。结果 经DNA测序 ,限制性内切酶酶切等方法证实已成功地将ADNF 9重组到NT4信号肽和前导序列的 3′端 ,并将融合基因亚克隆于pBV2 2 0内。结论 成功构建了NT4与ADNF 9融合基因的原核表达载体pBV2 2 0 /NT4 ADNF 9。

ADNP在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨神经依赖性活性保护蛋白(ADNP)在膀胱尿路上皮癌中的表达情况及其临床意义。方法:收集中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院2019年6月1日至2019年7月15日手术切除的膀胱癌及其配对的癌旁组织标本各28例,采用qPCR检测20例膀胱癌组织和癌旁组织的ADNP mRNA表达水平,WB检测其余8对标本的ADNP蛋白表达水平。同时,回顾性分析我院2005年1月1日至2007年12月31日收治的膀胱尿路上皮癌患者221例的临床病理资料,免疫组化染色方法检相应患者手术切除的石蜡标本中ADNP的表达情况,并收集同期因其他膀胱疾病而手术患者的非肿瘤膀胱组织切片用作对照。卡方检验分析ADNP表达与不同临床病理因素之间的相关性,Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox比例风险回归模型对患者预后影响因素进行单因素及多因素分析。结果:膀胱尿路上皮癌组织中ADNP的转录和翻译水平均高于非肿瘤组织(均P<0.05),且ADNP的表达量与膀胱癌的组织学分级、临床分期及患者存活状态有着相关性(P<0.05)。纳入的221例患者随访中失访32例,ADNP高表达较低表达的膀胱患者有着不良的预后(5年OS:49.5%vs 78.6%,P<0.01;5年PFS:40.0%vs 72.2%,P<0.01;10年OS:26.6%vs 58.6%,P<0.01;10年PFS:25.3%vs 47.9%,P<0.01)。Cox单因素回归模型显示,ADNP表达量与膀胱癌的预后密切相关(P<0.05);同时Cox多因素回归也表明ADNP表达量(95%CI:1.300~2.905,P=0.001)是影响膀胱癌预后的独立危险因素。结论:ADNP在膀胱癌组织中的表达水平比非肿瘤的膀胱组织有显著的升高,组织学分级及临床分期与ADNP的表达水平有相关性,ADNP低表达的膀胱癌患者预后相对较好,ADNP有望成为膀胱癌的特异性治疗候选靶点。

腺伴随病毒介导ADNF-9基因转染对豚鼠卡那霉素致聋的治疗作用

目的:观察包装重组的腺伴随病毒(adeno-associated virus,AAV)r AAV-NT4-ADNF-9对卡拉霉素致聋豚鼠的治疗作用。方法:选用耳廓反射和听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)正常的白色红目豚鼠,在大腿内侧肌肉注射卡那霉素400 mg/(kg·d),连续注射6 d,制备耳聋模型。在全身麻醉的条件下,从豚鼠右耳背侧进路,打开听泡,用微量注射器由圆窗注入r AAV-NT4-ADNF-9 10μL,14 d后取术侧听泡。进行耳蜗毛细胞计数和耳蜗毛细胞的硬铺片,通过相差显微镜观察内耳毛细胞的结构。结果:r AAV-NT4-ADNF-9组治疗后ABR阈值较治疗前明显下降(P<0.05),相差显微镜观察到耳蜗基膜完整,外毛细胞呈点状缺失。而其余3组治疗前后ABR阈值无明显变化,人工淋巴液组与空载体组治疗后毛细胞呈片状缺失,空白对照组则无毛细胞缺失。ADNF组取景框内毛细胞平均数明显高于人工淋巴液对照组及空载体组(P<0.05)。结论:用r AAV-NT4-ADNF-9转染卡那霉素致聋豚鼠耳蜗组织,可促进耳蜗毛细胞修复和再生。

重组腺相关病毒rAAV-NT4-ADNF-9的构建及其对体外培养的大鼠耳蜗组织的转染

目的:包装携载神经营养素(NT4)与活性依赖性神经营养因子-9(ADNF-9)融合基因的重组腺相关病毒rAAV-NT4-ADNF-9,并观察该重组病毒对体外培养的耳蜗组织的转染。方法:使用pSSHG-CMV-NT4-ADNF-9,pGF140和pAAV/Ad 3种质粒共转染293包装细胞,制备ADNF-9重组腺相关病毒(recomb inate adeno-assoc iated virus,rAAV),应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度;体外分离培养新生SD大鼠的耳蜗毛细胞;将重组病毒感染体外培养的新生SD大鼠耳蜗毛细胞,于24 h后提取组织行反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)以检测rAAV-NT4-ADNF-9对耳蜗的转染。结果:应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度为2×1013cfu/m l,表明成功地构建了重组AAV载体。成功分离培养新生SD大鼠的耳蜗毛细胞后,经RT-PCR反应,琼脂糖凝胶电泳检测结果显示NT4-ADNF-9在耳蜗组织得到了表达。结论:构建的重组病毒rAAV-NT4-ADNF-9,在体外可成功转染耳蜗组织,用于基因治疗的研究。