活性依赖性神经保护蛋白在肿瘤中的研究进展

活性依赖性神经保护蛋白(ADNP)是一种转录因子。近些年来研究发现,ADNP具有染色质重塑、细胞周期与增殖调控、DNA损伤与修复、细胞运动与转移、化疗耐药等肿瘤相关生物学功能,在多种肿瘤中均存在不同程度的突变及异常表达,与肿瘤的发生、发展密切相关。本文综述了ADNP的分子结构、功能特点及其在多种肿瘤发生、发展中的研究进展,旨在为肿瘤的诊治研究方向提供新思路。

环鸟苷酸依赖性蛋白激酶拮抗酒精性中枢神经细胞毒性机制研究

目的探讨环鸟苷酸依赖性蛋白激酶对酒精致鼠小脑颗粒细胞(cerebellargranulecells,CGC)毒性作用的影响机制。方法通过光学显微镜观察一氧化氮(NO)释放剂,环鸟苷酸及环鸟苷酸依赖性蛋白激酶抑制剂对鼠小脑颗粒细胞存活的影响。结果NO释放剂,环鸟苷酸在无酒精组中促进细胞的生存,并能对CGC产生保护作用,减少酒精对细胞的杀死。环鸟苷酸依赖性蛋白激酶抑制剂可抑制二者对细胞的作用。结论环鸟苷酸依赖性蛋白激酶在NO释放剂和环鸟苷酸促鼠小脑颗粒细胞的存活和抵抗酒精性神经毒性过程中具有重要的作用。

响应面法优化北豆根粗多糖的除蛋白工艺及其神经保护活性研究

为研究北豆根粗多糖的最佳除蛋白方法和工艺,探究北豆根粗多糖的神经保护活性。实验比较了酶法、Sevage法、酶-Sevage法、三氯乙酸(TCA)-正丁醇法、酶-TCA-正丁醇法除蛋白效果,筛选出了北豆根粗多糖的最佳除蛋白方法,并用响应面法对该方法进行优化。经响应面分析,以综合评分为指标,考查TCA与正丁醇体积比、北豆根粗多糖溶液与TCA-正丁醇溶液体积比和振摇时间对北豆根粗多糖TCA-正丁醇法除蛋白工艺的影响。用H_2O_2诱导PC12细胞损伤,探究了北豆根粗多糖的神经保护作用。结果表明,北豆根粗多糖的最佳除蛋白方法为TCA-正丁醇法。经响应面优化,确定最优除蛋白工艺为TCA:正丁醇=1∶10.4,北豆根粗多糖溶液:TCA-正丁醇溶液=1∶1.77,振摇时间为36.5 min。采用该工艺对北豆根多糖进行除蛋白,其蛋白清除率为73.1%,综合评分为92.1。神经保护研究结果表明,北豆根粗多糖对H_2O_2诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用。本研究表明TCA-正丁醇法可以有效的除去北豆根粗多糖中的蛋白质且北豆根粗多糖具有神经保护活性。

补肾方含药血清对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内游离钙浓度及钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ磷酸化的影响

目的:运用中药血清药理学方法,研究补肾复方含药血清(BS)对谷氨酸(Glu)诱导凋亡的PC12细胞胞浆内游离钙离子浓度([Ca2+]i)及钙信号转导通路下游的关键信号分子钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)磷酸化的影响。方法:采用谷氨酸诱导PC12细胞造成凋亡模型,以荧光探针Fluo-3/AM对活细胞染色,结合流式细胞技术观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内[Ca2+]i的影响;采用Western-blotting技术观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞CaMKⅡ磷酸化的影响。结果:20%浓度BS含药血清能够拮抗谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内钙离子浓度的升高,抑制CaMKⅡ的磷酸化水平增高。结论:补肾中药神经保护作用的机制可能与减轻钙超载,调控钙信号通路关键信号分子的磷酸化有关。

神经保护蛋白同源基因在阿尔茨海默病大鼠海马中的表达

目的 探讨活性依赖性神经保护蛋白 (activity -dependentneuroprotectiveprotein ,ADNP)同源基因的表达与阿尔茨海默病的关系。方法 采用淀粉样β 肽注射大鼠脑室 ,制备阿尔茨海默病样损伤大鼠模型 ,15d后通过RT PCR方法检测大鼠脑海马胆碱乙酰转移酶 (cholineacetyltransferase,ChAT)基因、活性依赖性神经保护蛋白基因及Mn -SOD、Cu ,Zn -SOD基因的表达。结果 胆碱乙酰转移酶、ADNP基因的表达在实验组海马中均下降 ,Cu ,Zn -SOD基因的表达没有明显变化 ,而Mn -SOD则有所升高。结论 结果提示ADNP表达降低 ,使神经细胞缺乏保护因素 ,与阿尔茨海默病的发生发展相关。

活性依赖性神经保护蛋白基因新发突变致孤独症谱系障碍一例

本文报道了1例活性依赖性神经保护蛋白(ADNP)新发基因突变导致孤独症谱系障碍(ASD)的病例,2014年国外报道其是目前ASD基因流行病学调查中重复率最高的1个致病基因,提示基因突变对ASD病因学研究有重要意义,国内较少见报道。

电刺激小脑顶核对持续局灶性脑缺血时钙蛋白酶活性的影响(英文)

目的观察电刺激小脑顶核(FN)对持续局灶性脑缺血钙蛋白酶活性的影响,以阐明其神经保护作用机制。方法健康雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组(PO)、FN刺激假手术组(PO-FN)、持续缺血组(PI)及持续缺血-FN刺激组(PI-FN),后两组又分为缺血1,3,6,12及24h组。建立大鼠电刺激FN及持续局灶性脑缺血模型,应用Western印迹半定量各组缺血核心区Mr=150000FBDP含量(表示钙蛋白酶活性),并应用尼氏体染色对缺血核心区神经元数量及形态进行分级评分。结果PO组及PO-FN组钙蛋白酶活性相似(P>0.05),处于低水平。PI组钙蛋白酶活性从缺血1h犤(3670±600)A/μg总蛋白犦开始即显著增高(t=6.338,P<0.001),以后随着缺血时间延长,钙蛋白酶活性不断增高,直至缺血24h犤(9180±360)A/μg总蛋白犦仍有持续增高趋势(缺血12,24h,t=14.673,16.632,P<0.001)。PI-FN组随着缺血时间的延长,钙蛋白酶活性从缺血1h犤(2510±460)A/μg总蛋白犦也开始增高,以后随着缺血时间延长,钙蛋白酶活性不断增高,但各时点组与其相应PI组相比,其增高程度明显减低,差别具有显著意义(缺血1,24h,t=1.875,2.134,P<0.05)。PO组及PO-FN组神经元形态及数量正常,评分均为0分。PI组从缺血1h(0.8±0.3)开始,神经元形态、数量即出现轻度改变,其评分增高(z=2.443,P<0.01)。

异丙酚对缺氧复氧鼠脑神经元NOS活性和HSP70家族表达的影响

目的：通过观察不同浓度异丙酚对原代培养胎鼠大脑神经元缺氧复氧过程的影响，探讨异丙酚的部分脑保护机制。方法：培养12天的胎鼠大脑神经元，随机分为四组：Ⅰ组正常对照组；Ⅱ组缺氧复氧组；Ⅲ组14μmol／L异丙酚组；Ⅳ组56μmol／L异丙酚组。Ⅲ组和Ⅳ组于缺氧前分别换入含有14μmol/L和56μmol／L异丙酚的培养液，随后缺氧30min。四组于缺氧后1h、2h、4h、6h和24h用分光光度法分别比较各组神经元NOS(一氧化氮合成酶)活性，同时四组于缺氧后1h、3h、6h、8h、24h、48h和72h分别用原位杂交法和免疫组化法观察Hsp70(热休克蛋白70)mRNA、Hsc70(热休克同源蛋白70)mRNA及Hsp70的表达。结果：①本研究的缺氧复氧过程可使神经元NOS活性增强，并可诱导Hsp70 mRNA、Hsc70mRNA和Hsp70表达，且表达高峰分别为24h、24h和48h；②在14μmol／L和56μmol／L异丙酚组，缺氧复氧鼠脑神经元NOS活性在复氧后4h内降低；③14μmol／L和56μmol／L异丙酚组的缺氧复氧鼠脑神经元Hsp70mRNA和Hsc70mRNA的表达高峰分别提前至8h和6h，而只有56μmol／L异丙酚组的缺氧复氧鼠脑神经元Hsp70的表达高峰才提前至24h。结论：异丙酚可抑制缺氧复氧引发的神经元NOS活性增强，同时异丙酚可从转录和翻译两个水平上促进鼠脑神经元热休克蛋白70家族的表达。

异丙酚对氯胺酮所致大脑皮质神经元损害保护作用的机制

目的：观察异丙酚对氯胺酚诱导的c-fos基因在大鼠大脑后扣带回皮质区表达的影响，探讨异丙酚预防或减轻氯胺酚所致精神症状及神经损害的机制。方法：雄性Wistar大鼠30只，随机分为生理盐水5ml组，氯胺酚100mg·kg^-1组,异丙酚100mg·kg^-1组，异丙酚50mg·kg^-1-氯胺酚100mg·kg^-1组。异丙酚100mg·kg^-1组-氯胺酚100mg·kg^-1组。异丙酚与氯胺酚用药间隔15min，所用药物用盐水配至5ml经腹腔注射。各组动物于用药后2h，断头处死，分离脑组织，用半定量RT-PCR技术和免疫组织化学方法检测各组c-fos mRNA与c-fos蛋白在大鼠后扣带回皮质区表达的变化。结果：氯胺酚可明显诱导c-fos mRNA与c-fos蛋白在大鼠后扣带回皮质区表达：异丙酚自身不能诱导c-fos mRNA与c-fos蛋白的表达，预先给予异丙酚可显著抑制氯胺酚诱导的c-fos mRNA与c-fos蛋白在这一区域的表达，且抑制效应成剂量依赖性。结论：异丙酚可抑制氯胺酚诱导的c-fos mRNA与c-fos蛋白在大脑后扣带回皮质区的表达，这可能是其预防或减轻氯胺酚所致精神症状和神经损害的机制之一。

活性依赖性神经营养因子和活性依赖性神经保护蛋白神经保护作用研究进展

近年来，人们发现一些分子质量〈1000ku的神经肽可自由通过血脑屏障，可经外周给药，因此，研究者和药物开发者对此高度关注。这类物质生物活性很强，具有极强的神经营养作用，目前称为神经保护肽或神经营养肽。目前已经证明活性依赖性神经营养因子（ADNF）是一种由血管活性肠肽（VIP）NI]激神经胶质细胞分泌的神经保护性多肽（14ku），具有以下特性：（1）以1×10-15mol／L（fmol／L）级别发挥在体内的神经保护作用。

CaMKⅡγ和CaMKⅡδ通过PI3K/Akt/Erk信号通路减轻小鼠神经元缺血再灌注损伤

目的观察钙/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的同工型CaMKⅡγ和CaMKⅡδ对鼠神经元细胞缺血缺氧再灌注损伤的影响,并探究其作用机制。方法分离胚胎期第18天胎鼠大脑用于提取原代神经元,在5%CO_(2)、37℃条件下培养,分为常规培养的对照组、空白对照组(si-NT)、CaMKⅡγ敲除组(si-CAMK2G)和CaMKⅡδ敲除组(si-CAMK2D)。研究组神经元转染处理后,更换为无糖培养基,并将其置于缺氧环境中模拟氧糖剥夺(OGD/R)条件,持续1 h,随后复原标准培养环境。通过对神经元裂解物行免疫蛋白印迹检测磷脂酰肌醇-3-激酶/细胞外信号调节激酶(PI3K/Akt/Erk)信号通路构件的表达量,并建立小鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,通过对比假手术组(Sham)(n=25)和MCAO组(n=25)PI3K/Akt/Erk信号通路表达来进行验证。结果si-CAMK2G组的胎鼠神经元细胞在OGD/R 12、24、48、72 h的生存率明显低于si-NT组(P<0.01或0.001),并可逆转OGD/R介导的胎鼠神经元细胞CaMKⅡγ表达上调。si-CAMK2G组和si-CAMK2D组与si-NT组相比,PI3K/Akt/Erk信号通路表达受到明显抑制(P<0.01)。在MCAO模型中,MCAO组小鼠脑CaMKⅡδ和CaMKⅡγ的表达显著增加并激活了PI3K/Akt/Erk信号通路,CaMKⅡδ和CaMKⅡγ,Erk、磷酸化Erk、Akt和磷酸化Akt在MCAO造模成功再灌注后24、48、72和96 h的表达显著高于Sham组再灌注24 h(P<0.05,0.01或0.0001)。结论CaMKⅡγ和CaMKⅡδ在神经元细胞发生缺血缺氧损伤时的神经保护作用可能是通过PI3K/Akt/Erk信号通路介导的。

转录因子ZFP580对大鼠星形胶质细胞中活性依赖的神经保护蛋白表达的影响

【目的】研究锌指转录因子ZFP580对大鼠星形胶质细胞中活性依赖的神经保护蛋白(activity-dependent neuroprotective protein,ADNP)表达的影响。【方法】培养大鼠星形胶质细胞,分别以不同浓度TGF-β1和SB431542刺激细胞一定时间后,RTPCR、Western blotting检测ZFP580和ADNP的表达。再以同一浓度TGF-β1和SB431542刺激细胞不同时间后,RT-PCR、Western blotting检测ZFP580和ADNP的表达。【结果】不同浓度TGF-β1刺激4 h后,ZFP580和ADNP mRNA和蛋白的表达均随TGF-β1浓度的升高而上升;同一浓度TGF-β1刺激细胞不同时间后,ZFP580和ADNP mRNA和蛋白的表达呈先上升后下降的趋势;不同浓度SB431542刺激细胞6 h后,ZFP580和ADNP mRNA和蛋白的表达均随SB431542浓度的升高而降低;同一浓度SB431542刺激细胞不同时间后,ZFP580和ADNP mRNA和蛋白的表达总体呈逐渐下降趋势。【结论】转录因子ZFP580在调节神经胶质细胞ADNP的表达中具有重要作用,其机制可能通过活化了TGF-β1/ALK5/Smad2/3信号通路。

虾青素通过JNK和p38MAPK通路抑制Aβ诱导的神经毒性损伤

目的探讨虾青素(astaxanthin,ATX)抑制Aβ诱导的神经毒性损伤的机制。方法利用体外培养Aβ处理的SH-SY5Y细胞为模型,诱导细胞损伤,用MTT法检测细胞存活率;荧光探针H2DCF-DA测定细胞内活性氧(ROS);Western blot方法检测pJNK和pp38MAPK的激活蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,Aβ处理使SH-SY5Y细胞的存活率显著降低(P<0.01),细胞内ROS的产生增加;与Aβ单独处理组相比,Aβ+ATX组中,SH-SY5Y细胞的存活率显著升高(P<0.01),ROS的产生显著降低;Aβ激活JNK和p38MAPK,使磷酸化的二者水平升高,而ATX预处理可以降低pJNK和pp38MAPK的蛋白水平。结论虾青素通过JNK和p38MAPK通路抑制Aβ诱导的神经毒性损伤。

东海海参胶原蛋白酶解物的制备与抗氧化活性及其对神经细胞损伤的保护作用

目的:研究木瓜蛋白酶酶解东海海参胶原蛋白的最优化条件,测定酶解产物的抗氧化活性及其对神经细胞损伤的保护作用。方法:以水解度为指标,通过响应面法优化东海海参胶原蛋白的酶解条件,确定最佳酶解参数。通过测定酶解产物对超氧自由基、羟基自由基和DPPH自由基的清除能力,研究其抗氧化能力。通过测定SK-N-SH神经细胞的存活率并进行形态观察,研究酶解产物对由H2O2造成的神经细胞损伤的保护作用。结果:木瓜蛋白酶酶解东海海参胶原蛋白的最佳条件为:底物含量34.3 g/g酶,温度43.2℃,pH 7.12,在该条件下东海海参胶原蛋白的水解度为16.73%。东海海参胶原蛋白酶解产物对超氧自由基、羟基自由基和DPPH自由基具有较好的清除作用,且与其浓度呈剂量依赖关系。酶解产物清除上述3种自由基的IC50值分别为34,25和24 mg/mL。胶原蛋白酶解产物对由H2O2造成的神经细胞SK-N-SH的损伤具有较好的保护作用。结论:研究结果为东海海参胶原蛋白的开发和利用奠定了良好基础。

RING finger蛋白146／Iduna神经保护作用及其在疾病中的促生存活性

背景RING（really interesting new gene）finger蛋白146／Iduna是一种内源性促生存蛋白，可通过与多聚ADP核糖聚合物（poly ADP-ribose，PAR）结合，有效干预兴奋毒性和氧化应激引起的多聚ADP核糖聚合酶1（poly ADP-ribosepolymerase1，PARPl）依赖性神经细胞死亡。另有研究发现，Iduna具有E3泛素化连接酶活性，参与DNA损伤修复，同时可能通过Wnt通路在很多疾病发生、发展中发挥调节作用。目的了解RING finger 146hduna蛋白生物特性及其在疾病中的作用。内容就RING finger蛋白146dduna的神经保护作用、在不同疾病和细胞损伤模型中发挥内源性促生存活性的可能机制进行综述。趋向随着对RING finger蛋白146hduna蛋白生物学功能的不断研究，关于它在疾病中扮演的角色也将会被不断揭示。

丝素肽对Aβ_(25-35)致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及机制研究

探讨丝素肽对Aβ_(25-35)所致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其相关机制。建立Aβ_(25-35)损伤SH-SY5Y细胞模型,并以丝素肽干预。MTT法检测丝素肽对Aβ_(25-35)致SH-SY5Y细胞损伤的干预作用;Western blot检测丝素肽对Aβ_(25-35)致神经元Tau蛋白多位点过度磷酸化的影响及其作用机制;DCFH-DA探针法检测丝素肽对Aβ_(25-35)致SH-SY5Y细胞胞内活性氧(ROS)异常升高的影响。结果表明,丝素肽可改善Aβ_(25-35)致SH-SY5Y细胞损伤。丝素肽可通过抑制GSK-3β活性、增强PP2A活性,改善Aβ_(25-35)引起的神经元Tau蛋白异常磷酸化水平,提示丝素肽可通过调节Tau蛋白的磷酸化发挥神经保护作用。同时,丝素肽可降低Aβ_(25-35)引起的SH-SY5Y细胞胞内升高的ROS水平,提示丝素肽还可通过调节氧化应激反应途径保护神经元。

第十四届中国神经精神药理学学术会议论文摘要

2010年10月15-18日,南京神经损伤001大黄酚聚氰基丙烯酸丁酯纳米囊对脑缺血再灌注小鼠学习记忆障碍的保护作用李超,张丹参,薛贵平(河北北方学院药理学教研室,

ADNP在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨神经依赖性活性保护蛋白(ADNP)在膀胱尿路上皮癌中的表达情况及其临床意义。方法:收集中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院2019年6月1日至2019年7月15日手术切除的膀胱癌及其配对的癌旁组织标本各28例,采用qPCR检测20例膀胱癌组织和癌旁组织的ADNP mRNA表达水平,WB检测其余8对标本的ADNP蛋白表达水平。同时,回顾性分析我院2005年1月1日至2007年12月31日收治的膀胱尿路上皮癌患者221例的临床病理资料,免疫组化染色方法检相应患者手术切除的石蜡标本中ADNP的表达情况,并收集同期因其他膀胱疾病而手术患者的非肿瘤膀胱组织切片用作对照。卡方检验分析ADNP表达与不同临床病理因素之间的相关性,Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox比例风险回归模型对患者预后影响因素进行单因素及多因素分析。结果:膀胱尿路上皮癌组织中ADNP的转录和翻译水平均高于非肿瘤组织(均P<0.05),且ADNP的表达量与膀胱癌的组织学分级、临床分期及患者存活状态有着相关性(P<0.05)。纳入的221例患者随访中失访32例,ADNP高表达较低表达的膀胱患者有着不良的预后(5年OS:49.5%vs 78.6%,P<0.01;5年PFS:40.0%vs 72.2%,P<0.01;10年OS:26.6%vs 58.6%,P<0.01;10年PFS:25.3%vs 47.9%,P<0.01)。Cox单因素回归模型显示,ADNP表达量与膀胱癌的预后密切相关(P<0.05);同时Cox多因素回归也表明ADNP表达量(95%CI:1.300~2.905,P=0.001)是影响膀胱癌预后的独立危险因素。结论:ADNP在膀胱癌组织中的表达水平比非肿瘤的膀胱组织有显著的升高,组织学分级及临床分期与ADNP的表达水平有相关性,ADNP低表达的膀胱癌患者预后相对较好,ADNP有望成为膀胱癌的特异性治疗候选靶点。