APP17肽对DM大鼠海马神经元胰岛素和凋亡信号传导通路相关蛋白的影响

目的 观察糖尿病大鼠海马脑区胰岛素和凋亡信号传导通路中某些相关蛋白的表达及 APP17肽对其表达的影响。方法 链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病模型 ,并用 APP17肽治疗。用免疫沉淀和 Western- blot法分析海马中信号传导及部分凋亡相关蛋白 ;电镜观察大鼠脑组织超微结构。结果 DM大鼠 IGF- IRα、Akt/ PKB、CREB表达明显降低 ,APP17肽治疗后明显上调 (P <0 .0 5 ) ,GSK- 3β、PP- 1及凋亡相关蛋白 Bax、AIF表达增加 ,治疗后则明显降低 (P <0 .0 5 ) ;超微结构表明 APP17肽治疗后兴奋性突触小泡明显减少。结论 糖尿病大鼠海马脑区胰岛素和凋亡信号传导通路中某些重要蛋白表达异常 ,APP17肽部分纠正这些蛋白的异常表达 ,这可能是其保护

进行性脊髓性肌萎缩症患者神经元存活基因及神经元凋亡抑制蛋白基因的缺失

目的研究中国人群中进行性脊髓性肌萎缩症 (spinal muscular atrophy, SMA)患者中神经元存活基因（ survival motor neuron, SMN）外显子 7及神经元凋亡抑制蛋白基因（ neuronal apoptosis inhibitory protein gene, NAIP）外显子 5缺失情况，进一步探讨这 2个 SMA候选基因与 SMA的关系。方法应用 PCR- SSCP分析技术对 55个 SMA患儿家系及 40例正常人个体的 SMN基因外显子 7区域和 55例患儿 NAIP基因外显子 5的缺失进行检测。结果 SMN基因外显子 7区域纯合缺失率分别为： SMA I型 92％（ 23/25）；Ⅱ型 90％（ 27/30）。患儿双亲中有 2例母亲和 1例父亲也有纯合缺失。在 55例 SMA患儿中未检测到有 NAIP基因外显子 5的纯合缺失，仅发现 2例杂合性缺失。结论中国人 SMA患者中 SMN基因外显子 7的纯合缺失率高，而在正常人中未见有缺失，表明其与 SMA发生密切相关； NAIP基因外显子 5的杂合性缺失率在本实验中仅约为 4％。

脊髓损伤后神经细胞凋亡相关抑制蛋白表达的实验研究

目的:探讨大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后,应用免疫组化染色观察神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)、存活素(Survivin)在ASCI后的表达和脊髓损伤的关系,并进一步探讨脊髓损伤后神经细胞凋亡抑制相关蛋白表达的重要意义。方法:取SD大鼠50只制作急性脊髓夹压伤动物模型,损伤后1、3、7天于损伤节段脊髓组织取材,NAIP、Survivin免疫组化染色,正常大鼠为正常对照组。计算机图像分析仪定量分析,观察急性脊髓损伤与NAIP、Survivin表达的相关性。结果:正常脊髓内NAIP、Survivin有微弱的表达,损伤后1、3、7天脊髓灰质、白质及室管膜细胞内均有阳性表达。NAIP的表达1D时最显著(P<0.05),表达强弱的顺序是:1天>3天>7天(P=0.202)。Survivin的表达3D时最显著(P<0.05),表达强弱的顺序是:3天>7天(P=0.011)>1天(P=0.015)。结论:哺乳类动物急性脊髓损伤后启动了以神经元凋亡抑制蛋白、存活素表达为特征的自我保护与修复机制,且神经元凋亡抑制蛋白、存活素表达的程度与脊髓损伤的程度呈正相关。

左旋四氢巴马汀对局灶性脑缺血再灌注大鼠凋亡蛋白P53、HSP70表达的影响

目的:观察左旋四氢巴马汀(L-THP)对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及对神经元凋亡蛋白P53、HSP70表达的影响,探讨L-THP的神经保护作用及机制。方法:采用改良Longa法建立局灶性脑缺血再灌注模型,11分法对大鼠进行神经行为症状评分,比色法测定大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)活力,HE染色观察大鼠脑组织神经元病理形态学变化,免疫组织化学染色法分别检测缺血侧海马CA1区P53、HSP70阳性细胞表达。结果:L-THP能够明显改善局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠神经行为症状以及脑组织形态结构,降低血清LDH活力,并且能够降低大鼠海马CA1区P53蛋白的阳性表达,在再灌注早期增强HSP70的阳性表达。结论:L-THP对局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制凋亡蛋白P53的表达,增强HSP70的表达有关。

人参皂甙Rb1阻止大鼠局灶性脑缺血细胞凋亡和诱导NAIP表达(英文)

人参皂甙Rb1(GRb1)是人参中一个最重要的有效成分(人参属五加科中一属),能减少大鼠暂时性脑缺血梗塞面积和改善神经功能缺失症状,这种神经保护作用的机制不完全清楚。本实验研究GRb1的神经保护作用是否与防止神经元凋亡和调控神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)的表达有关。通过阻塞大鼠大脑中动脉建立局灶性脑缺血模型,再灌注开始后立即给予腹腔注射GRb1(40mg/kg)。具有神经功能缺失的大鼠被随机分成2组:缺血组和GRb1组,每个组根据再灌注时间(3h,12h,1d,2d,3d,5d,10d,n=4/每时间点)分为亚组。正常大鼠和假手术组做为对照组。TUNEL标记分析凋亡细胞,用免疫组织化学的方法检测NAIP的表达。结果显示再灌注3h凋亡细胞数量开始升高,24h达高峰,后下降,但再灌注10d的凋亡细胞数量显著高于对照组(P<0.01)。与缺血组相比,GRb1各亚组的凋亡细胞数减少,但再灌注12h至3d,其差异具有统计学意义。在对照组,NAIP弱或阴性的免疫反应广泛出现在脑实质神经元。再灌注3h,NAIP阳性细胞增加,12h时达高峰,后下降。再灌注5d,NAIP阳性细胞数量比对照组少(P<0.05)。NAIP阳性神经元出现缺血性改变如扇形或三角形,纹状体星形胶质细胞强表达NAIP。在GRb1组,NAIP阳性细胞数量从再灌注12h到10d,显著高于缺血组。本实验结果提示大鼠局灶性脑缺血时,GRb1能减少细胞凋亡,其机制可能与增加NAIP的表达有关。

胞二磷胆碱对大鼠弥漫性轴索损伤后神经元保护作用的研究

目的探讨胞二磷胆碱对大鼠弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)后脑细胞功能变化的影响,评估药物的治疗价值。方法采用大鼠头部瞬间旋转损伤装置制备DAI模型,通过胞二磷胆碱及神经元凋亡通路抑制剂辛伐他汀干预控制,对比观察胞二磷胆碱对DAI大鼠神经修复的作用,于术后24、48、72 h及7d提取脑组织标本,western blot法检测SDF-1和神经元凋亡及死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)的表达变化,并检测β-APP的表达来指示轴突的损伤程度,用免疫荧光染色指示Rh OA和NOGO-A表达的相关性。结果 DAI模型组24 h后均出现明显的神经细胞坏死和轴突变性等病理改变;大脑皮层Rh OA、NOGO-A、SDF-1和DAPK1随着DAI后时间的延长而增加,经免疫荧光双染色显示两者在脑内的表达有显著的同一性;胞二磷胆碱及辛伐他汀能明显降低SDF-1和DAPK1的表达,胞二磷胆碱作用更加显著。结论胞二磷胆碱可明显改善DAI后神经功能并减轻轴突损伤。

左旋四氢巴马汀对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤后海马CA_1区Fas和FasL蛋白表达的影响

目的探讨左旋四氢巴马汀(L-THP)对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的保护作用及对海马CA1区凋亡蛋白Fas、FasL表达的影响。方法参照改良Longa法建立局灶性脑缺血-再灌注模型,应用ImageProPlus6.0专业图像分析软件测定脑梗死体积,比色法测定肌酸激酶(CK)活力,用免疫组化法分别检测缺血侧海马CA1区Fas、FasL阳性表达。结果与模型组比较,L-THP能够缩小局灶性脑缺血-再灌注损伤大鼠脑梗死体积,降低血清CK活力,降低缺血侧海马CA1区Fas、FasL凋亡蛋白的表达。结论 L-THP可能通过抑制神经元凋亡蛋白Fas、FasL表达,而对脑组织起到保护作用。

猕猴脑胱天蛋白酶-3活化及其靶蛋白的体外研究(英文)

凋亡的主要生化过程包括胱天蛋白酶的活化及其对细胞内蛋白质的选择性切割 .在已知的胱天蛋白酶中 ,可被多种凋亡刺激信号激活的胱天蛋白酶 3备受注目 .为进一步揭示灵长类动物神经组织中未知的胱天蛋白酶 3靶蛋白 ,采用成年猕猴脑组织粗提物作为无细胞体系 ,通过加入 granzymeB引发凋亡途径的部分反应 ,如胱天蛋白酶 3的活化及随后发生的蛋白质水解 .经蛋白质印迹分析发现 ,与 granzymeB共孵育后 ,猕猴脑胱天蛋白酶 3以两步方式从酶原转化为活性酶 .对猕猴脑组织自身蛋白质的进一步分析显示 ,多聚ADP 核糖聚合酶 (PARP)被水解为长 85ku的片段 ,此片段提示胱天蛋白酶 3的特异切割活性 .此外 ,神经元凋亡抑制蛋白 (NAIP)也被切割 ,产生长约 4 0ku的小片段 ,但是它的出现不被胱天蛋白酶 3特异性抑制剂Ac DEVD CHO阻断 ,因此可能是 granzymeB直接作用于NAIP所致 .以上结果提示 ,凋亡相关酶切反应可在成年猕猴脑组织提取物中得到重现 ;NAIP可能是granzymeB而非胱天蛋白酶 3的作用靶点 .

芍药苷活化Nrf2/ARE通路减轻Aβ_(1-42)诱导的大鼠海马神经元损伤

Aβ（1-42）是阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）脑内老年斑的主要成分，其诱导氧化应激反应是邶致脑内神经元损伤和死亡的机制之一。芍药苷是中药芍药的主要有效单体成分，具有抗炎、抗氧化、抑制细胞内钙超载、保护神经元等功能。

替莫唑胺对胶质瘤干细胞抗凋亡与多重耐药基因及细胞周期的影响

目的分析替莫唑胺（TMZ）对胶质瘤U251细胞及其干细胞livin、MRP基因表达及细胞周期的影响。方法分离培养U251细胞及其干细胞后，不同浓度的TMZ（0、25、50、100、200、400μmol／L）干预72h，CCK-8检测细胞增殖变化趋势，流式细胞术（FCM）检测细胞周期变化，RT-PCR技术检测livin、MRP1、MRP3mRNA表达。结果本研究成功从U251细胞中分离出U251干细胞；与未干预组相比，25μmol／L的TMZ干预U251细胞及其干细胞后其增殖率分别为0．952±0．011（t=-8．219，P=0．001）、0．937±0．029（t=-3．822，P=0．019）和100μmol／L的TMZ干预U251细胞及其干细胞后其增殖率分别为0．750±0．018、0．887±0．039（t=5．480，P=0．005）；正常情况下，livin基因在U251细胞及其干细胞中的表达量分别为（0．411±0．025）×10^-3、（0．571±0．040）×10^-3（t=-3．348，P=0．004），MRP1基因的表达量分别为（0．295±0．018）×^-3、（0．481±0．034）×10^-3（t=-8．439，P=0．001），MRP3基因的表达量分别为（1．128±0．117）×10^-3、（0．963±0．059）×10^-3（t=2．176，P=0．095）；200μmol／L的TMZ干预U251细胞及其干细胞后livinmRNA表达量在分另0为（0．020±0．002）×10^-3（t=27．123，P=0）、（0．066±0．007）×10^-3（t=21．345，P=0）；200μmol／L干预后MRP1 mRNA表达量为（0．556±0．041）×10^-3（t=-10．214，P=0．001）、（0．6094-0．044）×10^-3（t=-3．98，P=0．016）；200μmol／L干预MRP3mRNA表达量为（1．397±0．192）×10^-3（t=-2．073，P=0．107）、（1．496±0．302）×10^-3（t=-2．993，P=0．040）；100μmol／L干预后细胞周期U251细胞G2／M期百分比为11．353±0．516、39．1±1．2（t=-37．1，P=0）和U251干细胞S期百分比为21．1±1．0、30．2±1．7（t=-8．07，P=0．001）。结论替莫唑胺能有效降低U251及其干细胞中livin基因的表达，并使细胞分裂周期停滞，降低细胞增殖率，促进细胞凋亡。MRP1和MRP3可能分别是原发胶质瘤与复发胶质瘤耐药的主要原因之一。

人参皂苷Rb1对大鼠脑缺血再灌注损伤中NAIP表达的影响

目的:观察人参皂苷Rb1对神经元凋亡抑制蛋白(neuronal apoptosis inhibitory protein,NAIP)在脑缺血再灌注损伤中表达的影响,探讨人参皂苷Rb1对缺血性脑病的防治机制。方法:线栓法阻断大鼠大脑中动脉2h,再灌注3h～5d制备脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学方法标记NAIP阳性细胞,观察人参皂苷Rb1对NAIP阳性细胞数的影响。结果:缺血再灌注后,缺血半暗带内的NAIP阳性细胞表达增加,海马CA1区等部位的NAIP阳性细胞数量也明显增加,而缺血中心区无NAIP阳性细胞的表达。实验对照组中NAIP阳性细胞数量随再灌注时间延长逐渐升高,12h达到高峰,至5d时NAIP阳性细胞数量表达低于正常水平。实验用药组中NAIP阳性细胞数量在2d时达到高峰,且其高峰值明显高于实验对照组中的高峰值,后随再灌注时间的延长而逐渐下降,至5d时仍处于较高水平。结论:脑缺血再灌注后,NAIP表达增加是脑组织对损伤的一种保护性反应,其对缺血区周围的神经细胞的保护作用更为明显。NAIP在脑组织中的表达具有一定的时间规律性,并且人参皂苷Rb1可能通过上调NAIP的表达发挥对受损脑组织的保护作用。

脊肌萎缩症的分子遗传学研究进展

脊肌萎缩症(SMA)是一组常见的常染色体隐性遗传病,居致死性常染色体隐性遗传病的第二位。近年来,在SMA的分子遗传学研究方面取得了重大进展,其发病可能与运动神经元存活基因、神经元凋亡抑制蛋白基因和P44基因的突变有关。

瑞芬太尼对缺氧复氧所致大鼠脑损伤的保护及对脑组织NAIP和AQP-4表达的影响

目的探讨瑞芬太尼对缺氧复氧所致大鼠脑损伤的保护及对脑组织神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)和水通道蛋白4(AQP4)表达的影响。方法清洁级雄性SD大鼠25只,采取四动脉隔断法制作大鼠缺氧复氧损伤模型。成功建模缺氧复氧大鼠21只,按照随机数字表法分为3组—模型组、地佐辛组与瑞芬太尼组,每组7只。瑞芬太尼组给予腹腔注射瑞芬太尼10μg/kg,地佐辛组给予腔注射地佐辛10μg/kg,模型组给予腹腔注射相同体积的0.9%氯化钠溶液。检测脑组织NAIP和AQP-4表达变化情况。结果所有大鼠在建模过程中均出现典型的绕池壁现象。地佐辛组与瑞芬太尼组缺氧复氧后1、3、7 d的逃避潜伏期、神经功能缺陷评分均显著低于模型组,瑞芬太尼组也显著低于地佐辛组,差异均有统计学意义(P<0.05)。地佐辛组与瑞芬太尼组缺氧复氧后1、3、7 d的血清SOD活性显著高于模型组,血清MDA含量显著低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05);与地佐辛组相比,瑞芬太尼组SOD活性也显著升高,MDA含量显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。地佐辛组与瑞芬太尼组缺氧复氧后7 d的脑组织NAIP和AQP-4蛋白相对表达水平高于模型组,瑞芬太尼组高于地佐辛组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论瑞芬太尼在缺氧复氧所致大鼠中的应用有利于促进脑组织NAIP和AQP-4蛋白的表达,有利于维持机体的氧化与抗氧化平衡,能减轻大鼠的神经功能缺陷,提高大鼠的记忆能力。

脊肌萎缩症的分子遗传学研究进展

脊肌萎缩症(SMA)是一组常见的常染色体隐性遗传病,居致死性常染色体隐性遗传病的第二位。近年来,在SMA的分子遗传学研究方面取得了重大进展,可能与运动神经元存活基因、神经元凋亡抑制蛋白基因和P44基因的突变有关。

NAIP及其与某些神经系统疾病的关系

NLR家族(nucleotide-binding domain,leucine rich repeat containing family)是一个胞浆蛋白家族,参与对细胞内病原相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs)的识别,这个家族的成员之一——NAIP在许多神经系统疾病中发挥重要作用,参与这些疾病的发生、发展的调控。本文将对人NAIP基因及其同源基因鼠Naip基因以及两者编码的蛋白在相关疾病当中的作用进行综述。

视神经损伤后法舒地尔修复作用的实验研究

目的探讨法舒地尔（Fasudil）在大鼠视神经不完全损伤后的修复再生作用及其对神经元凋亡抑制蛋白（NAIP）表达的影响。方法成年雄性大鼠60只，随机分为3组，正常组12只，对照组、治疗组各24只，正常组不做任何处理。对照组和治疗组大鼠分别建造右眼视神经不完全损伤模型，于造模成功1h后治疗组腹腔注射法舒地尔10mg／kg，对照组腹腔注射等量生理盐水，并在损伤后3、7、14及21d随机抽取两实验组各6只大鼠，正常组3只大鼠，做大鼠视盘上方2mm视网膜切片，行HE染色，观察视网膜组织损伤情况；行免疫组化染色，分析视网膜平均光密度值（AOD），AOD值越高，表明NAIP的表达量越高。结果HE染色切片光镜下观察可见正常组切片上RGCs数量高于两实验组，而治疗组各阶段细胞数都高于对照组，差异有统计学意义（t=16．00～21．05，P=0．0008—0．0027）。免疫组化染色切片上可见治疗组切片的NAIP表达量明显高于对照组切片，差异均有统计学意义（t=31．89～56．40，P=0．0001—0．0004）。结论法舒地尔能对大鼠视神经不完全损伤具有一定的修复再生作用，能增强NAIP在受损视网膜组织中的表达。