牛膝多肽可能通过ERK1/2途径诱导PC12细胞向神经元分化

目的:研究牛膝多肽(ABPP)诱导PC12细胞向神经元分化的作用,初步探讨ABPP作用于PC12细胞的信号转导途径。方法:以体外培养的PC12细胞为研究模型,观察在低血清的情况下不同浓度ABPP(0.25、0.50、1.00μg/ml)诱导PC12细胞发生的形态学改变。采用免疫荧光细胞化学法,观察神经丝蛋白(NF-H)在ABPP诱导分化的PC12细胞中的表达;采用Western blot法观察ABPP(1.0μg/ml)加药后不同时间段(0、6、12h和1、2、3、7d)和不同浓度ABPP(0.25、0.50、1.00μg/ml)加药2 d后对PC12细胞ERK1/2活性的影响,同时应用ERK1/2特异性拮抗剂PD98059与ABPP共培养PC12细胞,分析ABPP对PC12细胞的作用与ERK1/2通路的关系。结果:ABPP处理3 d后,部分PC12细胞开始出现神经元样的形态。随着加药时间延长具有神经元样的细胞逐渐增多,到7 d时,可以见到神经生长因子(NGF)和ABPP处理组PC12细胞的突起都显著增多,能形成网络;14 d时,这种现象愈发显著。加药后7 d和14 d,ABPP各浓度组的细胞分化率以及细胞突起长度均明显提高,且存在明显的剂量反应关系。加药第7天和第14天,ABPP高剂量组与NGF组的PC12细胞均出现NF-H标记阳性的分化细胞。ABPP对ERK1/2的激活作用存在明显的量效关系,以1.0μg/ml作用2 d为最大。当用PD98059抑制ERK1/2的活化时,ABPP对ERK1/2的激活作用被部分阻断。结论:ABPP具有诱导PC12细胞神经元性分化的作用,此作用可能是通过ERK1/2信号转导途径实现的。

神经再生素对PC12细胞分化的影响

目的 探索神经再生素 (nerveregenerationfactor,NRF)诱导PC12细胞神经元性分化的潜在能力。方法 以NGF为阳性对照 ,采用细胞培养方法 ,观察NRF在低血清的情况下 ,诱导PC12细胞发生的形态学改变 ;同时 ,使用荧光免疫细胞化学方法 ,观察神经元标志性物质—低分子量神经丝蛋白 (NF L)在NRF诱导分化的PC12细胞中的表达。采用RT PCR方法观察NRF对无血清培养的PC12细胞即早基因c-fos的表达变化。结果 加药后第 14天 ,NRF组以及NGF组的PC12细胞呈现明显的形态学改变 :细胞胞体皱缩 ,且有明显的突起生长。空白对照组、NRF组 (0 0 1μg/ml、0 1μg/ml、 1μg /ml)、NGF组 (0 0 5 μg/ml)具有明显突起的分化细胞占总细胞的比例分别为 5 16 9%、 2 5 718%、4 3 32 5 %、 73 0 38%、 85 2 86 %。免疫荧光细胞化学结果显示NRF、NGF组的分化细胞基本都为NF L标记阳性的细胞 ;NRF能使c fos的表达上调 ,作用 2h后达峰值。结论 神经再生素具有诱导PC12细胞的神经元性分化作用 ,且能使c-fos表达上调。