血管性痴呆患者血清神经调节蛋白1、神经元正五聚蛋白2的表达及临床意义

目的探究血清神经调节蛋白1(NRG-1)、神经元正五聚蛋白2(NPTX-2)水平与血管性痴呆(VaD)患者认知功能、神经功能和预后的关系。方法选取100例VaD患者为VaD组,同期选取100名健康体检者为正常对照组。采用ELISA法检测两组血清NRG-1和NPTX-2水平,应用Pearson相关性分析其与VaD患者MMSE评分、NIHSS评分、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分以及日常生活活动量表(ADL)评分的关系,并进行单因素分析。采用Logistic回归分析并绘制ROC曲线,探究其与VaD患者预后功能障碍分级差的关系及其预测意义。结果正常对照组血清NRG-1和NPTX-2水平显著高于VaD组(均P<0.05)。随着MMSE评分、MoCA评分、ADL评分降低和NIHSS评分升高,VaD组血清NRG-1和NPTX-2水平降低,组间两两比较差异有统计学意义(均P<0.05)。Pearson相关性分析显示,VaD患者血清NRG-1和NPTX-2水平与MMSE评分(r=0.413,P=0.021;r=0.566,P=0.000)、MoCA评分(r=0.522,P=0.000;r=0.463,P=0.000)以及ADL评分(r=0.419,P=0.018;r=0.488,P=0.000)呈正相关,与NIHSS评分(r=-0.385,P=0.035;r=-0.427,P=0.014)呈负相关。非条件Logistic回归分析显示,血清NRG-1、NPTX-2水平升高是VaD预后差的保护因素(均P<0.05,均OR<1),而高龄、合并关键基础疾病、吸烟是VaD预后差的危险因素(均P<0.05,均OR>1)。血清NRG-1、NPTX-2联合应用时曲线下面积为0.886,高于其单独应用,诊断效能较高。结论VaD患者的血清NRG-1和NPTX-2水平下降,且其改变幅度与认知功能、神经功能和预后具有明显相关性。检测血清NRG-1和NPTX-2可为临床诊治VaD、预测病情进展和评估预后提供一定的参考依据。

神经元正五聚蛋白2在结直肠癌组织的表达及对其侵袭迁移的调控

目的探讨神经元正五聚蛋白2(NPTX2)在结直肠癌组织的表达以及对结直肠癌细胞侵袭和迁移的调控.方法应用免疫组织化学(IHC)检测101例结直肠癌及配对癌旁组织石蜡包埋标本NPTX2蛋白表达水平,观察其与患者临床病理学参数的关系;再以实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测18对新鲜配对结直肠癌和癌旁组织NPTX2蛋白和mRNA表达水平,最后利用小干扰RNA(siRNA)检测NPTX2沉默对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响及其机制.结果NPTX2在101例结直肠癌中表达明显高于配对的癌旁正常组织(Z=-6.083,P<0.01).NPTX2高表达与结直肠癌患者肿瘤大小(x^2=7.324,P<0.01)、T分期(x^2=5.811,P<0.05)及TNM分期(x^2=4.791,P<0.05)呈明显正相关.NPTX2高表达结直肠癌患者预后不良(P<0.01).NPTX2在18例结直肠癌中mRNA和蛋白表达均明显高于配对的癌旁组织(t=2.612、2.533,P<0.05).且NPTX2沉默抑制SW480肠癌细胞侵袭和迁移力,并同时伴随E-钙黏蛋白表达上调,及N-钙黏蛋白和Snail表达下调.结论NPTX2在结直肠癌中高表达与患者肿瘤大小、T分期、TNM分期及不良预后密切相关,NPTX2可能通过调控上皮细胞间质转化促进结直肠癌侵袭和迁移.

基于数据挖掘分析神经元正五聚体蛋白2在肾透明细胞癌中的表达及意义

目的:通过数据挖掘分析神经元正五聚体蛋白2(NPTX2)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达及意义.方法:通过Oncomine、基因表达谱交互分析(GEPIA),以及人类蛋白质表达图谱(HPA)分别从mRNA水平和蛋白质水平上分析NPTX2在正常肾组织和ccRCC组织中的表达情况.使用GEPIA分析NPTX2与ccRCC临床分期及预后的相关性.经MethHC数据库分析NPTX2在ccRCC中的甲基化水平,利用String-DB分析NPTX2与上下游蛋白的相互作用.结果:在mRNA水平上,NPTX2在ccRCC组织中较正常肾组织显著高表达,且其表达水平与ccRCC病理分期呈正相关.TCGA数据分析结果显示,NPTX2高表达患者的总体生存率以及无病生存率明显低于低表达患者.免疫组化结果证实,NPTX2蛋白在ccRCC中也较正常肾组织高表达,且其启动子区甲基化水平明显增高.同时,NPTX2与AVP、MT-ATP6、MT-ATP8、NPAS4、RCN2等蛋白存在相互作用,并参与氧化磷酸化、ATP代谢过程等生物过程.结论:通过对肿瘤基因数据库的信息挖掘,发现NPTX2在ccRCC组织中呈高表达,且其高表达与患者预后有关.

人NPTX2基因原核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化

目的在大肠埃希菌中表达人神经元正五聚蛋白2(NPTX2),并对该重组蛋白进行纯化、鉴定。方法双酶切pReceiv-er-M15 NPTX2质粒获得人NPTX2全长cDNA,经NotI和EcoRI双酶切后,连接至谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合表达载体pGEX-4T-1中,经限制性酶切、PCR和测序验证正确后,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导重组蛋白表达,采用Western blotting鉴定表达产物,亲和层析法纯化GST-NPTX2蛋白。结果经酶切与测序鉴定证实原核重组载体pGEX4T-1-NPTX2构建成功,表达产物相对分子量为70kD左右,与预期值相符,Western blotting证实该蛋白具有免疫反应特异性,亲和层析法获得了纯化的GST-NPTX2蛋白。结论构建了pGEX-4T-NPTX2原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21中诱导表达了GST-NPTX2融合蛋白。亲和纯化获得较高纯度的GST融合蛋白,为下一步继续研究NPTX2的生物学功能奠定了基础。

AD患者血清NPTX2、Netrin-4水平与认知障碍的关系

目的分析阿尔茨海默病(AD)患者血清神经元正五聚蛋白2(NPTX2)、轴突生长诱向因子4(Netrin-4)水平与认知障碍的关系。方法选取2021年11月至2022年11月首都医科大学附属北京天坛医院神经病学中心收治的85例存在认知障碍AD患者作为研究组,另外选取同期80例认知功能正常的健康体检者作为对照组。所有对象入院后检测血清NPTX2、Netrin-4水平,并进行各组比较。采用Pearson相关性分析血清NPTX2、Netrin-4水平与MMSE评分的关系,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清NPTX2、Netrin-4对AD患者认知障碍的评估价值,采用多因素Logistic回归分析影响AD患者认知障碍的相关因素。结果研究组患者血清NPTX2、Netrin-4水平明显低于对照组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,AD患者血清NPTX2、Netrin-4水平与MMSE评分均呈正相关(rNPTX2=0.485、rNetrin-4=0.425,均P<0.001)。ROC曲线结果显示:血清NPTX2评估AD患者认知障碍的曲线下面积为0.845,截断值为20.52,敏感度、特异度分别为92.94%、61.25%;Netrin-4评估AD患者认知障碍的曲线下面积为0.872,截断值为73.56ng·mL^(-1),敏感度、特异度分别为92.94%、67.50%;血清NPTX2联合Netrin-4评估AD患者认知障碍的曲线下面积为0.929,敏感度、特异度分别为85.88%、86.25%。多因素Logistic回归分析显示,血清NPTX2、Netrin-4、年龄均为影响AD患者认知障碍的相关因素(P<0.05)。结论AD患者血清NPTX2、Netrin-4水平均降低,并与患者认知障碍密切相关,可作为AD患者认知障碍的评估指标。

胰腺癌细胞株中NPTX2基因的甲基化情况研究

目的探讨神经元正五聚蛋白2(NPTX2)基因在胰腺癌中低表达的分子机制。方法利用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测2例正常胰腺组织及ASPC1、BxPC3、CFPAC、PaTu8988、PANC-1、SW1990等6株胰腺癌细胞株中NPTX2基因的甲基化情况,并对产物进行测序验证。利用DNA甲基化转移酶(DNMT)抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理细胞株ASPC1及PANC1,再运用qRT-PCR及SYBR Green荧光掺入甲基化特异性定量PCR法检测NPTX2基因的mRNA水平及甲基化程度。结果MSP结果显示正常胰腺组织中NPTX2基因未发生甲基化,而在6株胰腺癌细胞株中NPTX2基因均有不同程度的甲基化。胰腺癌细胞株ASPC1及PANC-1在5-Aza-dC处理前的甲基化指数(MI)分别为0.964、0.472,mRNA表达的相对值(RQ)分别为5.251和0,而处理后的MI分别为0.531、0.226,RQ分别为5.965和1.076。结论NPTX2基因启动子的高甲基化是该基因在胰腺癌中表达下降的主要原因之一。

NPTX2基因甲基化与年龄推断的相关性研究

目的:探讨神经元正五聚蛋白2(neuronal pentraxinⅡ,NPTX2)基因启动子区Cp G位点甲基化与年龄的关系。方法:提取170例活体外周血样本的基因组DNA,经甲基化修饰试剂盒修饰后,利用甲基化特异性-PCR(methylation specific-PCR,MSP)检测其NPTX2基因启动子区甲基化情况,并分析其与性别、年龄的关系。结果:以每个样本年龄、性别为自变量,是否甲基化为因变量,用二分类的logistic回归分析显示,是否甲基化与性别因素不具有统计学意义(P=0.843),表明性别因素对NPTX2基因甲基化影响不明显;而是否甲基化与年龄因素则具有统计学意义(P=0.000),表明年龄因素显著影响该基因的甲基化。以五岁为一个年龄段,对其定性情况进行线性回归分析显示男性(P=0.001)、女性(P=0.000)、总体(P=0.000)均存在线性关系,表明甲基化率是随年龄段的增加而呈线性增长的。结论:NPTX2基因启动子区甲基化程度随年龄的增加而增加。可进一步研究建立回归模型,进行年龄推断。

NPTX2基因在透明细胞性肾细胞癌中的表达及其临床意义

目的检测并分析神经元正五聚体蛋白2(neuronal pentraxin 2,NPTX2)基因在透明细胞性肾细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)中的表达情况及其临床意义。方法运用q PCR、western blot或免疫组织化学法分别从mRNA水平和蛋白质水平上对ccRCC细胞系和组织中NPTX2基因的表达情况进行检测。对体外培养细胞系(人肾小管正常上皮细胞系HK-2、人肾透明细胞癌原发灶细胞系786-O和胸水转移灶细胞系ACHN):采用q PCR和western blot法检测NPTX2在细胞系中的mRNA及蛋白的表达情况,并分析其在正常与癌细胞系中的表达差异。对组织标本:(1)c DNA芯片(15例ccRCC癌及对应癌旁正常组织):采用q PCR法检测并分析NPTX2 mRNA在两者中的表达情况及差异;(2)新鲜组织(4例ccRCC癌及对应癌旁正常组织):采用western blot法检测并分析NPTX2蛋白在两者中的表达情况及差异;(3)组织蜡块(70例ccRCC癌及对应癌旁正常组织):采用免疫组化En Vision法进一步验证NPTX2蛋白在两者中的表达情况及差异,并分析NPTX2蛋白表达与ccRCC患者的重要临床参数及预后之间的关系。结果在ccRCC细胞系及癌组织中,NPTX2的mRNA水平和蛋白质水平均明显高于正常细胞系及癌旁正常组织,其差异有统计学意义(P<0. 05)。NPTX2蛋白表达水平与ccRCC肿瘤WHO/ISUP病理分级相关(P<0. 05),与患者的性别、年龄、TNM分期和肿瘤大小尚不能认为相关(P>0. 05)。Kaplan-Meier单因素分析及log-rank检验显示NPTX2蛋白表达水平高低与患者的生存相关(P=0. 04):高表达组患者同期生存率低于低表达组,预后较差。结论 NPTX2在ccRCC癌组织中异常高表达,与ccRCC肿瘤WHO/ISUP病理分级及患者的预后相关,可作为潜在的ccRCC诊断及判断预后的生物标志物。