神经元特异核蛋白单克隆抗体的构建

目的 根据Pubmed报道的FOX3cDNA序列,构建神经元特异核蛋白（Neun）单克隆抗体。方法 获得FOX3cDNA序列,设计引物,PCR扩增,利用pcDNATM3.3-TOPO TA将纯化后的PCR产物插入真核表达载体中,得到FOX3蛋白,然后利用该蛋白免疫小鼠,免疫后小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合,筛选后获得的杂交瘤细胞小鼠腹腔接种,收获腹腔积液后进行相关检测。结果 所获得的腹腔积液经免疫印迹检测,在（46~48）×103处显示两条带,免疫荧光检测后细胞核显示阳性信号。结论 根据FOX3cDNA序列构建的抗体与商业化的抗Neun抗体在免疫荧光和免疫印迹上表现一致,Neun与FOX3为同一基因。

丹参酮ⅡA对Aβ_(1-42)处理的体外培养海马脑片组织神经元与胶质细胞的影响

目的观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)干预Aβ1-42处理体外培养的新生大鼠海马脑片组织中神经元特异核蛋白(NeuN)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和CD11b表达的影响。方法将大鼠海马脑片随机分为正常对照组、Aβ高、低剂量模型组和Aβ模型组联合TanⅡA高、低剂量组,共7组。其中正常组仍用完全培养液培养,Aβ高剂量模型组为完全培养基加5μg Aβ1-42,Aβ低剂量模型组为完全培养基加0.5μg的Aβ1-42,TanⅡA药物处理组分别为Aβ模型组加8μg或16μg TanⅡA。免疫组织化学染色法检测TanⅡA处理后各组NeuN、GFAP和CD11b表达水平的改变。结果与正常对照组比较,不同剂量Aβ处理组NeuN表达均减少,其中高剂量组下降明显(P<0.05),用高剂量TanⅡA干预后NeuN表达量均显著上升(P<0.05);对比正常对照组,Aβ处理组中GFAP和CD11b表达量均上升,其中高剂量Aβ处理组中两种蛋白表达量显著增高(P<0.05),TanⅡA处理组2种蛋白表达均下降,高剂量组下降明显(P<0.05)。结论 TanⅡA干预Aβ诱导的AD海马脑片模型,可有效的减少组织中GFAP和CD11b的表达水平,抑制胶质细胞的活化。

丹红注射液改善神经干细胞移植治疗脑缺血损伤效果的机制研究

目的探讨丹红注射液能否通过调控核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路增强神经干细胞(NSC移植修复脑缺血损伤的治疗效果。方法 40只雄性SD大鼠随机分为NSC移植治疗组(NSC组)、丹红注射液组(DH组)、NSC+丹红注射液组(N+D组)、NSC+丹红注射液组+ML385组(N+D+M组)和PBS对照组(PBS组),每组8只。所有大鼠均采用大脑中动脉栓塞法建立脑缺血模型,栓塞1.5 h后进行再灌注。再灌注后3 d对各组大鼠进行相应处理。在NSC移植术前和术后1、2、4周进行神经功能评分。术后4周后处死大鼠,检测氧化应激相关指标,并用免疫荧光染色检测神经元特异核蛋白(NeuN)和血管性血友病因子(vWF)的表达情况。结果在NSC移植术前,各组大鼠的神经功能评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。术后1、2、4周时,NSC组、DH组和N+D组大鼠的神经功能评分较PBS组和N+D+M组均降低(均为P<0.05)。与PBS组和N+D+M组比较,NSC组、DH组和N+D组的丙二醛(MDA)水平均降低,超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)水平均升高(均为P<0.05);N+D+M组的GPX水平较PBS组降低(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,移植到大鼠脑内的NSC能够迁移至脑梗死周边区域并存活,并表达神经元标志物NeuN和新生血管标志物vWF,而N+D+M组的NSC存活数量较其他组明显减少。结论丹红注射液可能通过调控Nrf2信号通路改善干细胞移植微环境,增加移植干细胞的存活率,提升NSC移植治疗脑缺血损伤效果。

中枢神经细胞瘤临床病理分析

目的：了解中枢神经细胞瘤镜下形态及神经元特异核蛋白（NeuN）、突触素（SYN）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、少突胶质细胞转录因子乏（Olig-2）、上皮膜抗原（EMA）和Ki-67的表达。方法：选择8例中枢神经细胞瘤外科手术标本及1例会诊标本，采用HE染色镜下观察其形态特点；采用免疫组织化学方法检测NeuN、SYN、GFAP、Olig-2、EMA和Ki-67的表达。结果：中枢神经细胞瘤细胞由单一圆形细胞围绕分支状的毛细血管呈蜂窝状排列；免疫组织化学示肿瘤细胞SYN及NeuN均为阳性，Ki-67增殖指数为1％～2％，GFAP灶性阳性，Oligo-2和EMA阴性。结论：中枢神经细胞瘤具有一定的病理形态特征，免疫组化标记有助于诊断。

Neun在神经纤维瘤和神经鞘瘤中的表达及意义

目的探讨Neun抗原在神经纤维瘤和神经鞘瘤中的表达及意义。方法筛选尸检脑组织标本3例;平滑肌瘤、孤立性纤维性肿瘤、纤维瘤、胃肠道间质瘤各5例;神经纤维瘤(27例)和神经鞘瘤(24例)行抗Neun抗体免疫荧光染色。结果在选择的各5例平滑肌瘤、孤立性纤维性肿瘤、纤维瘤、胃肠道间质瘤Neun染色均为阴性;27例神经纤维瘤中,抗Neun抗体阳性25例(92.59%);24例神经鞘瘤中,阳性17例(70.83%)。结论在中性甲醛溶液固定、石蜡包埋的组织中,Neun可以辅助神经鞘膜瘤包括神经纤维瘤和神经鞘瘤的诊断,精确病理诊断,对临床诊断也具有重要意义。

大脑皮质发育不良大鼠脑皮质和海马中的NeuN和GFAP表达研究

目的：探讨大脑皮质发育不良（DCD）大鼠大脑半球、海马的免疫组化病理学特点及其所致难治性癫痫（IE）的发生机制。方法：建立X-射线照射诱导的皮质下异位结节大鼠DCD模型，采用SP免疫组织化学方法检测神经元特异核蛋白抗原（NeuN）和星形胶质细胞特异抗原（GFAP）在大鼠脑皮质下和海马中异位结节的表达，阳性细胞计数，用SPSS10．0软件统计。结果：DCD组与正常对照或母鼠组白质比较，皮质下异位结节内NeuN免疫阳性神经元和GFAP免疫阳性细胞数密度分别增加30倍和16倍，差异有统计学意义（P〈0．05）。同龄而不同部位DCD病变组间脑皮质Ⅰ～Ⅲ层异位结节、皮质下异位结节和CA1区异位结节中NeuN、GFAP免疫阳性细胞数密度或阳性平均光密度值比较，差异无统计学意义。结论：DCD鼠脑NeuN及GFAP的分布证实了皮质下异位结节的内在属性，异位结节是灰质，主要是由神经元和星形胶质细胞构成。

安寐丹对睡眠剥夺大鼠海马CA1区细胞结构及神经元损伤的保护作用

目的:探讨安寐丹对睡眠剥夺大鼠海马神经元及相关蛋白表达的影响。方法:通过随机数字表法将SD大鼠分为空白组、模型组、安寐丹组和褪黑素组。空白与模型组给予等容生理盐水,安寐丹组给药9.09 g·kg^(-1)·d^(-1)。褪黑素组给药0.27 g·kg^(-1)·d^(-1)。自制睡眠剥夺箱造模4周。Ethovision XT视频分析系统监测大鼠自发活动状态,苏木素-伊红(HE)染色观察海马CA1区神经元形态,尼氏染色观察海马CA1区神经元及尼氏体变化,超微电镜观察海马细胞超微结构,免疫组化检测海马CA1区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、微管相关蛋白2(MAP2)、巢蛋白(Nestin)、神经元特异核蛋白(NeuN)的表达。结果:与空白组比较,模型组中心点移动距离延长,平均活动速度增加,中心点累计持续时间增加,身体填充平均值增加,活动频率更高(P<0.01),海马CA1区神经元数量减少,排列紊乱,核皱缩,细胞质深染,尼氏体数量减少,出现明显丢失,线粒体出现肿胀变形,嵴缩短,高尔基体囊泡肿胀,GFAP蛋白积分吸光度(IA)增加,MAP2、Nestin、NeuN蛋白IA下降(P<0.01);与模型组比较,安寐丹组中心点移动距离缩短,平均活动速度降低,中心点累计持续时间缩短,身体填充平均值降低,活动频率降低(P<0.05,P<0.01),海马CA1神经元损伤减轻,细胞数量增加,核仁清晰,胞浆明显,尼氏体数量增加,线粒体等细胞器损伤减轻,GFAP蛋白IA降低,MAP2、Nestin、NeuN蛋白IA升高(P<0.05,P<0.01)。结论:安寐丹改善睡眠剥夺大鼠海马CA1神经元结构损伤,并可能通过降低GFAP蛋白表达,增加MAP2、Nestin、NeuN蛋白表达而实现。

脑瘫模型的制作与鉴定

目的:制作新生小鼠脑瘫模型,并通过行为学、形态学检测模型的稳定性,为脑瘫的基础研究提供较为理想的动物模型。方法:将30只新生7天的昆明小鼠随机分为模型组和假手术组,模型组采用结扎一侧颈总动脉并缺氧来制作脑瘫模型。假手术组仅切开颈部皮肤,分离出单侧颈总动脉,不结扎,不剪断,然后缝合伤口,未置于缺氧环境。各组小鼠于模型完成后第28天,通过跳台实验观察行为变化、尼氏染色和神经元特异核抗原(Neuron specific nuclear protein,NeuN)的免疫组化染色结果。结果:被动回避性跳台实验中,模型组小鼠较假手术组小鼠学习记忆时间明显延长(P<0.05);尼氏染色结果显示,损伤侧海马各区细胞排列紊乱,尼氏小体数量减少,且CA3区神经元损伤情况最为严重;NeuN免疫组化染色显示模型组小鼠损伤侧海马阳性表达较假手术组同侧明显降低(P<0.05)。结论:应用一侧颈总动脉结扎联合缺氧的方法制作脑瘫模型稳定、可靠。