大鼠Somatostatin基因重组慢病毒载体的构建与检测

目的克隆大鼠生长抑素somatostatin（SST）基因和神经元突触素Synapsin（Synl）的启动子序列，构建神经元特异性表达SST基因的重组慢病毒载体。方法采用RT—PCR法和PCR法分别扩增SST基因和Synl的启动子序列，并将其克隆至重组慢病毒载体系统（Lenti—EGFP），构建出以Synl启动子序列为启动子、携带SST基因的表达质粒Lenti—pSyn—SST-2A—EGFP；再将该表达质粒与pMDL、pRey和pVSVG用磷酸钙共沉淀法共转染HEK293T细胞，获得重组的慢病毒载体，将病毒注射人大鼠海马，检测EGFP和SST的表达效果。结果经测序克隆的SST和Synl启动子与GenBank上的序列相比完全一致，并测得SST重组慢病毒纯化后病毒滴度为1．5×10^9TU／ml，该病毒注射人海马可以转染神经元并表达SST。结论成功构建出以Synl启动子序列为启动子，携带SST基因的重组慢病毒载体。