缺氧新生鼠胼胝体神经元-胶质细胞抗原2、胶质纤维酸性蛋白表达观察

目的观察缺氧新生大鼠胼胝体神经元-胶质细胞抗原2(NG2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化。方法新生3 d的SD大鼠36只随机分为对照组、低浓度组(6%氧)、高浓度组(8%氧)各12只。对照组新生鼠不做任何处理。低、高浓度组制作缺血缺氧(HI)损伤模型。分别于造模2、3、4周时各组取4只大鼠,处死后断头取脑,切大鼠氧损伤侧及对照侧组织切片,采用免疫荧光染色法检测大鼠氧损伤侧及对照侧脑组织NG2、GFAP表达。造模4周时观察各组大鼠存活情况。结果与氧损伤对照侧比较,造模2、3周时低、高浓度组脑组织NG2阳性细胞数均增多(P <0. 05);与低浓度组氧损伤侧比较,造模2周时高浓度组脑组织NG2阳性细胞数增多(P <0. 05)。与氧损伤对照侧比较,造模2、3、4周时低、高浓度组脑组织胼胝体GFAP阳性细胞数均增多(P均<0. 05);与低浓度组氧损伤侧比较,造模2、3周时高浓度组脑组织胼胝体GFAP阳性细胞数均增多(P <0. 05)。造模4周时,低浓度组、高浓度组、对照组大鼠分别存活9、10、12只。与低浓度组比较,对照组、高浓度组大鼠存活数目多。结论 :缺氧可导致新生大鼠胼胝体NG2、GFAP表达升高。6%、8%氧浓度均可导致新生大鼠胼胝体NG2、GFAP表达升高,且8%氧浓度作用更强。

血清长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18、微小RNA-185-5p水平与老年2型糖尿病周围神经病变的关系

目的探究血清长链非编码RNA(LncRNA)人类白细胞抗原复合体18(HCG18)及微小RNA-185-5p水平与老年2型糖尿病(T2DM)周围神经病变(DPN)的关系及其预测价值评估。方法以2020年3月至2021年8月保定市第一中心医院收治的老年T2DM患者为研究对象,选择其中发生周围神经病变的75例患者为DPN组,选择未发生周围神经病变的82例患者为非DPN组。血清LncRNA HCG18、miR-185-5p的水平通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)进行检测;相关性通过Pearson法进行分析;T2DM合并DPN的影响因素通过多因素logistic回归进行分析;受试者操作特征曲线分析血清LncRNA HCG18、miR-185-5p对T2DM患者发生DPN的诊断价值。结果DPN组患者血清LncRNA HCG18水平高于非DPN组,血清miR-185-5p水平低于非DPN组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。DPN组患者血清LncRNA HCG18与miR-185-5p水平呈显著负相关(r=-0.407,P<0.001)。多因素logistic回归分析显示,LncRNA HCG18、miR-185-5p为T2DM合并DPN发生的影响因素(P<0.05)。血清LncRNA HCG18、miR-185-5p对T2DM患者发生DPN预测的曲线下面积分别为0.841(95%CI 0.775~0.906)、0.857(95%CI 0.793~0.922)。结论老年DPN患者血清LncRNA HCG18水平升高,miR-185-5p水平降低,对老年T2DM患者发生DPN有一定的诊断价值。

神经元特异性烯醇化酶、血清细胞角蛋白片段21-1和癌胚抗原在老年非小细胞肺癌中的诊断意义

目的探讨神经元特异性烯醇化酶(NSE)、血清细胞角蛋白片段(CYFRA)21-1和癌胚抗原(CEA)在非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断意义。方法 132例NSCLC老年患者作为观察组,同时选取肺部良性疾病患者和体检正常者132例作为对照组。采用电化学发光免疫(ECLIA)法检测NSE、CY21-1和CEA。结果观察组NSE、CYFRA21-1、CEA与对照组差异有统计学意义(P<0.01)。观察组CYFRA21-1、NSE、CEA的单项阳性率均明显高于对照组(P<0.05)。CYFRA21-1、NSE、CEA在鳞癌中的表达高于大细胞癌,但差异无统计学意义(P>0.05)。将肿瘤标志物两两联合,观察组阳性率均明显高于对照组(P<0.05),而3项肿瘤标志物联合检测的阳性率高达96.97%,与对照组差异显著(P<0.05)。结论 CYFRA21-1、NSE、CEA组合对NSCLC诊断灵敏度高,具有较高的临床应用价值。

JAK2-STAT3途径介导凝血酶诱导的小胶质细胞iNOS的激活致多巴胺能神经元变性

目的探讨JAK2-STAT3途径与凝血酶诱导多巴胺能神经元变性作用的关系。方法20U/ml凝血酶或AG490(10μmol/L)预处理+凝血酶(20U/ml)处理原代培养的小胶质细胞或中脑腹侧混合培养体系,用Westernblot检测小胶质细胞P-JAK1、P-JAK2、JAK2、STAT3、P-STAT3的表达;免疫荧光观察多巴胺能神经元的变性;Westernblot、RT-PCR及激光共聚焦观察iNOS的表达。结果凝血酶处理小胶质细胞2h后诱导JAK2、STAT3的磷酸化,2h和4h分别增加小胶质细胞iNOS的转录和表达,并且24h诱导中脑培养体系多巴胺能神经元变性。而AG490预处理显著地减少对应凝血酶处理组小胶质细胞JAK2和STAT3的磷酸化,抑制iNOS的表达,并且缓解多巴胺能神经元的变性。结论JAK2-STAT3途径介导凝血酶诱导的小胶质细胞iNOS的激活,导致多巴胺能神经元变性。

海马背侧注射β-淀粉样蛋白25～35激活胶质细胞和 p38丝裂原活化蛋白激酶诱导神经元凋亡

目的：探讨海马背侧注射β-淀粉样蛋白25～35（ Aβ25～35）后胶质细胞与p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）激活的关系，及Aβ25～35诱导神经元凋亡的可能机制。方法采用免疫组织化学及免疫印迹方法观察海马背侧注射Aβ25～35后不同时段小胶质细胞（ MG）、星形胶质细胞（ AS）的激活和磷酸化p38MAPK（ p-p38MAPK）在海马组织中的表达；酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）及白细胞介素-1β（ IL-1β）在海马组织中的含量；Nissl染色法观察海马神经元存活；TUNEL染色观察海马神经元凋亡。结果注射Aβ25～35后海马内抗特异性标记小胶质细胞（ox-42）、胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）、和p-p38MAPK的表达与TNF-α、IL-1β的含量同步增加，于7d达到高峰，而Nissl阳性神经元数量逐渐减少，TUNEL阳性神经元数量则逐渐增多，亦于7d达到高峰。结论海马背侧注射Aβ25～35可能通过激活胶质细胞和p38MAPK，使TNF-α，IL-1β含量增加导致海马神经元凋亡。

体外培养的皮层神经元和胶质细胞上COX-2的表达

目的观察环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在体外培养的皮层神经元和胶质细胞上的表达。方法在体外培养鼠的皮层神经元和神经胶质细胞,神经元培养第6、10、12d时收获细胞,神经胶质细胞传代后培养待细胞密度约为每毫升5×105时和6×105时收获细胞,然后进行免疫染色以观察神经元和胶质细胞上COX-2的表达。同时用免疫荧光双标记法对COX-2阳性的细胞类型进行了鉴定。结果体外培养6、10和12d时的胚鼠皮层神经元细胞均呈现OX-2免疫阳性,但不同时间点免疫染色强度不同,10d时免疫染色最强;而体外培养的新生鼠的皮层神经胶质细胞只有极个别细胞呈现COX-2免疫阳性;双标记结果表明这些胶质细胞既有星形胶质细胞,又有小胶质细胞。结论离体条件下COX-2主要在神经元上表达,而神经胶质细胞则很少表达,与在体研究结果基本一致。

2-甲氧基雌二醇对大鼠神经元及C6胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2-ME)对大鼠神经元及C6胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法:将神经元及C6胶质瘤细胞分为对照组和实验组,实验组按2-ME浓度不同分为1、5、10、15μmol/L 4个亚组。2-ME作用于大鼠神经元及C6胶质瘤细胞不同时间后,采用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,并在光镜及电镜下观察其形态学变化。结果:C6胶质瘤细胞经2-ME作用后细胞活性受到抑制,呈现时间变量依赖性,各亚组与对照组差异具有统计学意义(P<0.05)。2-ME可诱导C6胶质瘤细胞凋亡,各亚组与对照组差异具有统计学意义(P<0.05);可使C6胶质瘤细胞G1及S期细胞减少,G2期细胞增多,一定范围内呈现剂量依赖性,各亚组与对照组差异具有统计学意义(P<0.05)。神经元经药物作后,各亚组与对照组细胞活性差异无统计学意义。结论:2-ME可抑制C6胶质瘤细胞生长,诱导C6胶质瘤细胞凋亡,而对正常神经元无影响。

灯盏乙素通过环状GMP-AMP合酶-干扰素基因刺激因子通路抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症

目的探讨灯盏乙素对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症的影响。方法培养BV-2小胶质细胞系,将BV-2小胶质细胞分为对照组(Ctrl)、环状GMP-AMP合酶(cGAS)抑制剂RU320521(RU.521)组、LPS组、LPS+RU.521组、LPS+灯盏乙素预处理(LPS+S)组、LPS+S+RU.521组,共6组。Western blotting及免疫荧光双标染色法检测并观察BV-2小胶质细胞中cGAS、干扰素基因刺激因子(STING)、核因子κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、PYD结构域蛋白3(NLRP3)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化(n=3)。结果Western blotting和免疫荧光双标染色均显示,与对照组相比,LPS诱导后,BV-2小胶质细胞中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+S组中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著下降(P<0.05)。使用cGAS通路抑制剂RU.521后显示了与灯盏乙素预处理组相似的作用效果。此外,NF-κB在各组的变化不明显(P>0.05)。结论灯盏乙素干预抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症反应,可能与cGAS-STING信号通路有关。

血清细胞角质蛋白19片段抗原21-1、神经元特异性烯醇化酶、组织因子水平对肺癌患者术后发生肺栓塞的预测价值

目的探讨血清细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、组织因子(TF)水平与肺癌患者凝血功能指标的关系及对术后发生肺栓塞的预测价值。方法选取80例肺癌患者和80例肺良性病变患者,分别作为肺癌组和对照组,比较两组患者血清CYFRA21-1、NSE、TF水平及凝血功能指标[凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、D-二聚体(D-D)、血小板计数],依据是否继发肺栓塞,比较栓塞和未栓塞肺癌患者血清CYFRA21-1、NSE、TF水平。血清CYFRA21-1、NSE、TF水平与凝血功能指标的相关性采用Pearson相关分析;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估CYFRA21-1、NSE、TF单独及联合检测对肺癌患者术后发生肺栓塞的预测价值。结果肺癌组患者血清CYFRA21-1、NSE、TF、血小板计数、D-D水平均明显高于对照组(P﹤0.01),PT明显长于对照组(P﹤0.01)。80例肺癌患者中,发生肺栓塞16例,未发生肺栓塞64例,发生肺栓塞肺癌患者血清CYFRA21-1、NSE、TF水平均高于未发生肺栓塞患者(P﹤0.05)。Pearson相关分析结果显示,肺癌患者血清CYFRA21-1、NSE、TF水平与血小板计数、PT、D-D水平均呈正相关(P﹤0.05)。ROC曲线显示,CYFRA21-1、NSE、TF联合检测预测肺癌患者术后发生肺栓塞的AUC为0.847(95%CI:0.749~0.918),高于各指标单独检测。结论血清CYFRA21-1、NSE、TF水平在肺癌患者血清中异常升高,且与凝血因子D-D、PT、血小板计数均呈正相关,CYFRA21-1、NSE、TF联合检测对肺癌患者术后发生肺栓塞具有较高的预测价值。

星形胶质细胞来源的GJA1-20k在氧化应激后参与神经元保护作用的机制

目的:观察星形胶质细胞(astrocyte)通过上调神经元(neuron)内源性缝隙连接蛋白α1截短单体-20k(gap junction protein alpha 1 truncated monomer-20k,GJA1-20k)参与氧化应激损伤后神经保护作用的机制。方法:采用C57BL/6胎鼠以原代培养法获取神经元及星形胶质细胞,建立共培养模型,给予神经元过氧化氢(H2O2)损伤,及星形胶质细胞胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)受体阻滞剂AG1024,分别设立Neuron组、Neuron+Stress组、Neuron+Astrocyte+Stress组及Neuron+Astrocyte+Stress+AG1024组,通过Western blot测定神经元GJA1-20k、去磷酸化(non-phosphorylated,NP)-Cx43的表达,谷氨酸转运酶(glutamate transporter-1,GLT-1)、线粒体功能相关蛋白(PGC-1α、mtTFA、Tom20、CoxⅣ)、凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Caspases-9)的变化,采用酶联免疫荧光分析(ELFA)及ELISA法分别检测氧化应激因子NAPDH氧化酶活性和白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等炎性因子含量的变化,采用Annexin V-FITC/PI测定神经元凋亡。结果:星形胶质细胞共培养可明显上调在神经元氧化损伤后内源性GJA1-20k和NP-Cx43表达,抑制PGC-1α、mtTFA、Tom20、CoxⅣ的下调,上调凋亡抑制因子Bcl-2表达,下调凋亡促进因子Bax、Caspase-9表达,降低NAPDH氧化酶活性,降低炎性产物IL-1β、IL-6和TNF-α的水平及抑制神经元的凋亡(P<0.05)。在给予AG1024后,可明显抑制与以上因素相关的星形胶质细胞对神经元的保护作用(P<0.05)。结论:与IGF-1相关的星形胶质细胞对神经元的保护机制可能与增加神经元内源性GJA1-20k的含量及线粒体功能的保护有关。

miR-10b介导NKG2D调节脑胶质瘤细胞免疫效应的实验研究

目的:观察微小核糖核酸-10b(miR-10b)对脑胶质瘤细胞免疫效应的调节作用并探讨其作用机制。方法:取人脑胶质瘤细胞U251进行培养和传代,获得处于对数生长期的细胞。按照1.0×105个/ml浓度制备细胞悬液,并设置对照组、过表达组、低表达组、空白组,每组6个复孔。对照组、过表达组、低表达组分别采用脂质体转染法转染阴性对照、miR-10b模拟物、miR-10b抑制剂,空白组予以等量无菌生理盐水。分离和培养1例健康志愿者外周血自然杀伤(NK)细胞。MTT法检测不同效靶比时NK细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测各组NK细胞表面NK细胞激活受体(NKG2D)表达,并检测各组人脑胶质瘤细胞U251表面主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因A(MICA)、UL16结合蛋白2(ULBP2)、UL16结合蛋白3(ULBP3)表达。结果:对照组、过表达组、低表达组转染效率分别为(93.55±2.05)%、(95.67±3.14)%、(94.18±3.26)%;与对照组和空白组相比,过表达组miR-10b表达升高,低表达组miR-10b表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组和空白组miR-10b表达差异无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均降低、NKG2D表达降低,低表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均增高、NKG2D表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05),各组NK细胞杀伤活性均随效靶比增加而增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组相比,相同效靶比NK细胞杀伤活性、NKG2D表达差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均降低,低表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:抑制miR-10b表达能够增加NK细胞表面NKG2D和人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达,增强NK细胞对人脑胶质瘤细胞U251的杀伤活性。

Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞炎性反应对神经元细胞Mecp2蛋白表达的影响

目的:体外研究Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞炎症反应对海马神经元细胞甲基化Cp G结合蛋白(Mecp2)表达的影响。方法:(1)用不同浓度的Aβ_(1-42)(终浓度分别为0,5,10,20,30μmol/L)处理小胶质细胞系(N9),24h后取上清液,ELISA检测每组N9细胞培养上清中炎症因子TNF-α、IL-1β的含量,选择合适的Aβ_(1-42)的终浓度。(2)用Aβ_(1-42)(终浓度为20μmol/L)及TLR4拮抗剂TAK-242(终浓度为1μg/ml)处理小胶质细胞系(N9),分为3组:正常对照组(con组)、单纯Aβ_(1-42)处理组(Aβ_(1-42)组)、Aβ_(1-42)处理后TAK-242干预组(TAK-242组)。24 h后取上清液,ELISA检测每组N9细胞培养上清中炎症因子TNF-α、IL-1β的含量。(3)实验分组同(2),24 h后收集培养液,分别干预生长良好的海马神经元细胞系(HT-22)。24 h后,通过Western Blot、免疫荧光染色方法检测每组HT-22细胞中Mecp2蛋白的表达。结果:(1)ELISA结果显示:与con组相比,Aβ_(1-42)处理后,N9细胞分泌的TNF-α、IL-1β的表达量随Aβ_(1-42)浓度的增加而增加(P<0.05)。(2)ELISA结果显示:与con组相比,Aβ_(1-42)组的TNF-α、IL-1β的表达水平明显提高(P<0.05);TAK-242组的细胞分泌TNF-α、IL-1β水平较Aβ_(1-42)组显著降低(P<0.05)。(3)Western Blot结果显示:与con组相比,Aβ_(1-42)组HT-22细胞中Mecp2蛋白表达明显增加(P<0.05);与Aβ_(1-42)组相比,TAK-242组HT-22细胞中Mecp2蛋白表达明显减少(P<0.05)。(4)免疫荧光染色结果显示:与con组相比,Aβ_(1-42)组HT-22细胞中Mecp2蛋白表达明显增强;而与Aβ_(1-42)组相比,TAK-242组HT-22细胞中Mecp2蛋白表达减弱。结论:Aβ诱导的小胶质细胞发生炎性反应,导致神经元的损伤,可能是由于这种炎性反应使得神经元细胞中Mecp2蛋白的表达量增加,从而损伤神经元。

TGF-β1对Aβ_(1-42)诱导海马神经元-小胶质细胞共培养体系中细胞因子表达和分泌的影响

目的:探讨在海马神经元和小胶质细胞共培养体系中转化生长因子-β1(TGF-β1)对β淀粉样肽_(1-42)(Aβ_(1-42))诱导的小胶质细胞激活表达和分泌细胞因子的影响。方法:将大鼠海马神经元和小胶质细胞进行共同培养,于共同培养后第5日,加入TGF-β1(5 or 20 ng/ml),1 h后加入Aβ_(1-42)(5μmol/L),继续培养72 h后用于后续实验,Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的蛋白表达; Real-time PCR和ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和胰岛素样生长因子(IGF-1)的mRNA表达和分泌。结果:在共同培养的海马神经元与小胶质细胞体系中,Aβ_(1-42)诱导炎症因子i NOS、TNF-α和IL-1β的表达和/或分泌上调,神经营养因子IGF-1表达下调,TGF-β1预处理削弱上述Aβ_(1-42)的作用。结论:TGF-β1明显抑制Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞激活引起的炎性细胞因子的增加和神经营养因子的减少。

星形胶质细胞调控下红花黄色素对Aβ1-42介导的海马神经元突触损伤的保护作用研究

目的探讨星形胶质细胞存在下红花黄色素对Aβ1-42诱导的神经元突触损伤的保护作用。方法采用Aβ1-42损伤海马神经元模拟体外AD,不同浓度(0.01、0.1、1g/L)红花黄色素进行干预,MTT法测定细胞存活率选择最佳浓度。建立纯化海马神经元培养体系(NE-S)和星形胶质细胞和神经元共混合培养体系(MIX-S),两种培养体系分别设立正常对照组、Aβ1-42(15μmol/L)模型组、红花黄色素给药组。倒置显微镜下观察细胞形态;WesternBlot检测神经元内SAP102蛋白表达水平。结果(1)红花黄色素(0.01、0.1、1g/L)能够显著提高神经元的存活率,且具有剂量依赖性;(2)神经元形态结果显示在MIX-S的模型组中神经元突触萎缩状态较NE-S的模型组稍微有所改善。红花黄色素(1g/L)能明显改善NE-S和MIX-S中的神经元突触萎缩状态,但NE-S和MIX-S中的红花黄色素1g/L给药组神经元形态没有差异性;(3)WesternBlot结果显示在MIX-S的模型组中SAP102蛋白表达较NE-S的模型组有所增加。在NE-S和MIX-S中的红花黄色素1g/L给药组SAP102蛋白表达都明显上调,但NE-S和MIX-S中的红花黄色素1g/L给药组SAP102蛋白含量没有差异性。结论星形胶质细胞的存在可增加Aβ1-42损伤的神经元突触蛋白的表达,但并不提高SY对神经元突触损伤的保护作用。

巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1在大鼠2型星形胶质细胞中的表达

目的观察1型和2型星形胶质细胞(T1A、T2A)是否表达神经干细胞的标志物、是否具有神经干细胞的特性。方法取新生大鼠脑皮质,体外培养纯化的O-2A祖细胞、T1A和T2A,应用激光共焦双重免疫荧光标记技术检测巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)的表达;观察O-2A祖细胞、T1A和T2A在碱性成纤维生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)的培养液中生长方式的改变。结果巢蛋白在O-2A祖细胞和T2A中表达,T1A不表达;SSEA-1仅在T2A中表达。在干细胞培养基中培养10d,T2A形成能增殖和连续传代的细胞球,细胞球巢蛋白标记阳性,贴壁后分化细胞具有神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞样形态;但相同培养条件下的O-2A祖细胞和T1A生长方式无改变。结论巢蛋白和SSEA-1在两型星形胶质细胞中的表达存在差异,T2A具有神经干细胞的某些生物学特性。

细胞角质蛋白19片段抗原21-1、神经元特异性烯醇化酶和鳞状细胞癌抗原在非小细胞肺癌合并恶性胸腔积液患者中的表达及临床意义

目的探讨细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)在非小细胞肺癌(NSCLC)合并恶性胸腔积液患者中的表达及临床意义。方法选取107例NSCLC患者和130例健康体检者,分别作为研究组和对照组。根据是否合并恶性胸腔积液将NSCLC患者分为合并组和未合并组。比较研究组和对照组的CYFRA21-1、NSE和SCC-Ag水平,比较合并组和未合并组的CYFRA21-1、NSE和SCC-Ag水平,采用多元Logistic回归模型分析NSCLC患者合并恶性胸腔积液的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)分析CYFRA21-1、NSE、SCC-Ag单独及三者联合检测对NSCLC患者合并恶性胸腔积液的预测价值。结果研究组患者的CYFRA21-1、NSE和SCC-Ag水平均明显高于对照组(P﹤0.01)。107例NSCLC患者中,合并胸腔积液69例,未合并胸腔积液38例,合并组患者的CYFRA21-1、NSE和SCC-Ag水平均明显高于未合并组(P﹤0.01)。单因素及多因素分析结果显示,血性胸腔积液、临床分期为Ⅲ~Ⅳ期及CYFRA21-1、NSE、SCC-Ag水平异常升高均是NSCLC患者合并恶性胸腔积液的危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线分析结果显示,CYFRA21-1、NSE、SCC-Ag单独及三者联合检测预测NSCLC患者合并恶性胸腔积液的AUC分别为0.948、0.803、0.834及0.976,其中三者联合的预测价值最佳。结论NSCLC合并恶性胸腔积液患者中CYFRA21-1、NSE、SCC-Ag水平均异常升高,临床医师可通过加强监测这三项指标,有效预测恶性胸腔积液的发生。

重组人白细胞介素-6对缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元Bcl-2、Bax表达和神经元凋亡的影响

实验在培养的大鼠海马神经元中观察了重组人白细胞介素 6 (recombinanthumaninterleukin 6 ,rhIL 6 )对缺氧 复氧后Bcl 2、Bax表达和神经元凋亡的影响。把培养 12d的大鼠海马神经元分为对照组和rhIL 6组 ,同时于缺氧环境 (90 %N2 +10 %CO2 )中培养 2、4h后 ,再于常氧培养箱内复氧培养 2 4和 72h。于不同时间取出 ,分别用抗Bcl 2和Bax抗血清进行免疫组织化学染色 ,观察缺氧 复氧后大鼠海马培养神经元Bcl 2和Bax的表达 ,并用原位末端标记 (TUNEL)法和流式细胞术分别检测缺氧 复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响。结果可见 ,与缺氧前相比 ,缺氧 复氧后 2 4和 72h ,海马神经元Bcl 2表达明显减弱 ,Bax表达明显增强 ,凋亡神经元明显增多。经rhIL 6预处理的海马神经元与对照组相比 ,缺氧 复氧后 2 4和 72h ,Bcl 2表达明显增强 ,Bax表达明显减弱 ,凋亡神经元明显减少。本实验结果提示 ,rhIL 6对海马神经元缺氧

白介素-1α及与白介素-11、白血病抑制因子和胶质细胞源性神经生长因子联合诱导人神经干细胞向多巴胺神经元的分化

目的探讨细胞因子白介素-1α(IL-1α)及与白介素-11(IL-11)、白血病抑制因子(LIF)和胶质细胞源性神经生长因子(GDNF)联合应用对体外诱导人神经干细胞定向分化为多巴胺神经元的影响。方法采用无血清培养技术和单细胞克隆技术、免疫荧光双标技术。结果对照组仅有极少量的神经干细胞分化为不成熟的多巴胺神经元;IL-1α组分化的多巴胺神经元较多,但细胞形态欠成熟;联合因子组分化的多巴胺神经元最多,细胞较为成熟。结论IL-1α具有诱导人神经干细胞向多巴胺神经元分化的作用,联合应用IL-1α、IL-11、LIF和GDNF对人神经干细胞向成熟的多巴胺神经元分化具有协同作用。

血清细胞角蛋白19片段抗原21-1、神经元特异性烯醇化酶在结肠癌中的表达情况及与预后的关系

目的探讨血清细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)在结肠癌中的表达情况及与预后关系。方法检测78例结肠癌患者手术前后CYFRA21-1、NSE的表达水平,术后进行为期1年的随访,统计复发转移情况,比较不同临床特征结肠癌患者术后的血清CYFRA21-1、NSE表达水平,分析影响结肠癌患者术后复发转移的危险因素。结果结肠癌患者术后血清CYFRA21-1、NSE水平均明显低于手术前(P﹤0.01)。术后随访1年,有复发转移25例(32.05%),无复发转移53例(67.95%)。单因素分析结果显示,淋巴结转移情况、分化程度、CYFRA21-1水平、NSE水平均可能是结肠癌患者术后复发转移的影响因素(P﹤0.05),肿瘤部位、性别、年龄、饮酒史、吸烟史均可能不是结肠癌患者术后复发转移的影响因素(P﹥0.05)。将可能的影响因素带入Logistic回归模型进一步分析,结果显示,有淋巴结转移、分化程度低、术后CYFRA21-1高表达及NSE高表达均是结肠癌患者术后发生复发转移的危险因素(P﹤0.01)。结论血清CYFRA21-1、NSE水平在结肠癌患者中呈高表达,术后血清CYFRA21-1、NSE表达水平则明显下降,且血清CYFRA21-1、NSE表达与患者术后复发转移关系密切,对判断患者预后有重要临床价值。

寡聚态β-淀粉样肽_(1～42)可通过胶质-炎症反应损伤神经元

目的观察寡聚态β-淀粉样肽1～42(Oligo-Aβ1～42)诱导的小胶质细胞条件培养液对Neuro-2A神经元细胞的影响,探讨炎症介质在胶质介导的神经元损伤中的作用。方法以Oligo-Aβ1～42诱导BV-2细胞,制备小胶质细胞条件培养液,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定Neuro-2A神经细胞的活力,AO-EB染色荧光显微镜观察计数细胞凋亡和坏死率;酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定小胶质细胞培养上清中的肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)及前列腺素E2(PGE2)水平;Griess法检测上清NO水平;免疫印迹法测定小胶质细胞胞质环氧合酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达水平。结果Oligo-Aβ1～42诱导的小胶质细胞条件培养液(Aβ-CM)明显引起Neuro-2A神经细胞损伤,MTT法显示神经元活力随Aβ诱导剂量的增加而逐渐下降(P<0.01),并且浓度为1.0μmol/L和5.0μmol/L的Aβ-CM组比同浓度Aβ单纯组神经细胞的存活率更低,分别为(53.75±3.95)和(34.61±2.72)(Aβ-CM组与Aβ单纯组相比P<0.05,P<0.01);联合作用组(Aβ-CM+Aβ)神经细胞存活率下降更明显,两因素方差分析显示,Aβ诱导的小胶质细胞条件培养液与单纯Aβ(1.0μmol/L)有协同作用[F(3,39)=53.16,P<0.001]。AO-EB荧光观察计数显示,低浓度(0.2μmol/L)Oligo-Aβ1～42诱导的小胶质细胞条件培养液可引起神经细胞发生凋亡性损伤,较高浓度(1.0～5.0μmol/L)Oligo-Aβ1～42诱导不仅引起神经细胞凋亡,还引起细胞发生坏死性改变。进一步研究显示,低浓度(0.2～5.0μmol/L)的Oligo-Aβ1～42明显增加小胶质细胞培养上清中TNF-α、PGE2、NO的产量及胞质COX-2和iNOS蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),呈现一定的量效关系。结论低浓度Oligo-Aβ1～42可通过胶质-炎症反应加剧神经元损伤,其作用可能与Oligo-Aβ1～42诱导小胶质细胞产生炎症介质及胞质内COX-2、iNOS蛋白表达水平增高有关。