事件相关电位P300和血清神经元PAS结构域蛋白4水平与脑小血管病患者认知障碍的相关性

目的探讨事件相关电位P300、血清神经元PAS结构域蛋白4(NPAS4)水平与脑小血管病(CSVD)患者认知功能障碍的相关性。方法选择2017年2月至2019年6月新乡医学院第二附属医院收治的98例CSVD患者为研究对象。采用简明精神状态量表(MMSE)评分评估患者认知功能,根据MMSE评分将患者分为轻度组(n=52,MMSE评分21~26分)和中重度组(n=46,MMSE评分<21分),同期选择健康体检者50例作为对照组(MMSE评分27~30分)。采用诱发电位仪检测3组受试者P300潜伏期和波幅,采用酶联免疫吸附法检测3组受试者血清NPAS4水平,采用Spearman相关分析患者P300电位、NPAS4水平与MMSE评分的相关性。结果中重度组患者血清NPAS4水平高于对照组和轻度组(P<0.05);轻度组患者血清NPAS4水平高于对照组(P<0.05)。轻度组和中重度组患者P300潜伏期长于对照组,P300波幅低于对照组(P<0.05);中重度组患者P300潜伏期长于轻度组,P300波幅低于轻度组(P<0.05)。MMSE评分与P300潜伏期、NPAS4水平呈负相关(r=-0.706、-0.425,P<0.05),与P300波幅呈正相关(r=0.758,P<0.05)。结论P300电位、血清NPAS4水平变化与CSVD患者认知障碍严重程度有关,P300电位和血清NPAS4水平可用于CSVD患者认知功能的早期评估。

miRNAs及血清神经元PAS结构域蛋白4、NSE、S100β蛋白水平对急性脑血管病患者认知障碍的影响

目的探讨miRNAs及血清神经元PAS结构域蛋白4(NPASDP-4)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S100β蛋白水平对急性脑血管病(ACVD)患者认知障碍的影响。方法选取延安大学附属医院神经内科2016年1月-2019年1月收治的167例ACVD合并认知功能患者进行临床实验,按其认知功能障碍严重程度将其分成A、B、C组(轻度组、中度组和重度组),各81例、51例和35例,将三组患者的各项临床指标均纳入SPSS21.0软件处理,分别比较三组miRNAs(miRNA-34、21、135)、NPASDP-4、NSE、S100-β蛋白水平差异,以上指标与ACVD患者MMSE评分关系用Spearman秩和分析,以上指标与ACVD患者认知障碍严重程度的关系采用ROC曲线评估。结果①A组miRNAs(34、21、135)低于B组、B组低于C组(P<0.05),A组NPASDP-4低于B组、B组低于C组,NSE、S100-β蛋白水平高于B组,B组高于C组(P<0.05);②Spearman秩和分析发现,除NPASDP-4与MMSE评分呈负相关(r=-0.442,P<0.01)外,miRNAs-135相对表达量及NSE、S100-β蛋白水平与MMSE评分均呈正相关(r=0.412、0.472、0.453,P<0.05),而miRNAs-34、21相对表达量与MMSE评分无相关性(P>0.05);③ROC曲线结果表明,ACVD合并认知障碍患者miRNAs-135、NPASDP-4、NSE、S100-β蛋白的AUC值分别为0.749、0.731、0.750、0.758,最佳截断值分别为0.70、2.04ml·L^-1、13.78U·mL^-1和0.23ug·L^-1。结论在ACVD合并认知障碍患者的认知功能判定中miRNAs-135、NPASDP-4、NSE、S100-β蛋白与其认知障碍严重程度相关,而miRNAs-34、21则与其认知障碍严重程度无关。

血清脑源性神经生长因子、神经元PAS结构域蛋白4和神经元特异性烯醇化酶水平与急性缺血性脑卒中患者认知障碍的关系

目的探讨血清脑源性神经生长因子(BDNF)、神经元PAS结构域蛋白4(NPAS4)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平与急性缺血性脑卒中(AIS)患者认知障碍的关系。方法选择2018年6月至2020年6月重庆市丰都县人民医院收治的AIS患者128例为研究对象。根据患者入院治疗7~10 d时的简易精神状态量表(MMSE)评分结果将患者分为认知正常组(n=60,MMSE评分≥27分)和认知障碍组(n=68,MMSE评分<27分)。入院后1周,抽取2组患者晨起空腹外周静脉血5 mL,采用酶联免疫吸附试验检测血清中BDNF、NPAS4、NSE水平。采用Pearson相关分析BDNF、NPAS4、NSE水平与MMSE评分的关系,采用单因素分析和多因素logistic回归分析AIS患者发生认知障碍的危险因素。结果认知障碍组与认知正常组患者的年龄、性别、起病至入院时间、脑梗死部位及合并高血压、冠状动脉性心脏病、房颤的比例比较差异均无统计学意义(P>0.05);认知障碍组患者的美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分、受教育年限、梗死病灶大小、合并糖尿病情况及血清BDNF、NPAS4、NSE水平与认知正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)。AIS患者血清NPAS4、NSE水平与MMSE评分呈正相关(r=0.442、0.486,P<0.05),血清BDNF水平与MMSE评分呈负相关(r=-0.395,P<0.05)。血清NPAS4、NSE水平及NIHSS、GCS评分和梗死病灶大小是AIS患者发生认知障碍的独立危险因素(P<0.05);血清BDNF水平和受教育年限是AIS患者发生认知障碍的保护因素(P<0.05)。结论AIS患者发生认知障碍受到多种因素的影响。血清NPAS4、NSE水平升高是AIS患者发生认知障碍的独立危险因素,血清中BDNF水平升高是AIS患者发生认知障碍的保护因素。

老年抑郁症患者芳香烃受体核转移蛋白和神经元PAS结构域蛋白表达与认知功能的关系

目的探讨老年脑卒中后抑郁和原发抑郁症患者芳香烃受体核转移蛋白(Arnt)2和神经元PAS结构域蛋白(Npas)4的表达与认知功能的关系。方法老年患者173例,依据汉密尔顿抑郁量表(HAMD)-24评分结合脑卒中病史分为:脑卒中后抑郁组(47例)、原发性抑郁组(52例)、脑卒中组(45例)、对照组(29例)。分别于入院1 w内和2 w后通过事件相关电位P300分析各组患者认知功能;取患者空腹外周静脉血分离白细胞,荧光定量PCR和Western印迹分别检测Arnt2、Npas4 mRNA和蛋白表达情况。结果与对照组相比,入院1 w内和2 w后的脑卒中后抑郁组、原发性抑郁组、脑卒中组P300潜伏期显著延长,P300波幅显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与原发抑郁组和脑卒中组相比,脑卒中后抑郁组P300潜伏期显著延长,P300波幅显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);入院2 w后脑卒中后抑郁组、原发性抑郁组、脑卒中组较入院1 w内P300潜伏期显著缩短,P300波幅显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。脑卒中后抑郁组和原发性抑郁组Arnt2 mRNA和蛋白的相对表达量明显高于脑卒中组和对照组,Npas4 mRNA和蛋白的相对表达量明显低于脑卒中组和对照组,差异有统计学意义(P<0.01);脑卒中后抑郁组Arnt2、Npas4 mRNA和蛋白的相对表达量与原发性抑郁组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论老年脑卒中后抑郁与原发抑郁症患者均存在认知功能障碍,前者更为严重;Arnt2高表达和Npas4低表达可通过诱导海马神经功能损伤来介导老年抑郁症患者认知功能障碍。

帕金森病患者血清NPASDP-4,MBP水平表达与认知功能障碍及严重程度的诊断价值研究

目的探讨帕金森病患者血清神经元PAS结构域蛋白4(neuronal Per-Arnt-Sim domain protein 4,NPASDP-4)、髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)水平表达与认知功能障碍(cognitive impairment,CI)及严重程度的诊断价值研究。方法选取中国人民解放军联勤保障部队第九〇九医院收治的138例帕金森病患者为帕金森病组,同期该院体检中心的健康体检者69例为健康对照组,并根据是否发生CI以及其严重程度进一步将帕金森病组患者分为认知功能正常组(n=55)、轻度CI组(n=51)和痴呆组(n=32)。收集受试者一般资料;ELISA法检测血清NPASDP-4和MBP水平;相关性分析采用Spearman等级相关或Pearson线性相关;诊断价值分析采用ROC曲线;影响因素分析采用多因素Logistic回归。结果与健康对照组比较,帕金森病组血清NPASDP-4(6.75±0.48ng/ml vs2.38±0.31ng/ml),MBP(8.34±0.65μg/L vs 3.54±0.42μg/L)水平升高,差异具有统计学意义(t=68.751,55.761,均P<0.05)。认知功能正常组、轻度CI组、痴呆组H-Y分期比较,差异有统计学意义(χ2=7.788,P<0.05)。UPDRS-Ⅲ评分与认知功能正常组(41.95±10.36分)比较,轻度CI组(47.92±11.63分)、痴呆组(50.78±13.69分)评分升高,差异具有统计学意义(H=6.672,均P<0.05)。认知功能正常组、轻度CI组、痴呆组病程(4.28±0.54,4.71±0.58和5.16±0.63年)及血清NPASDP-4(5.89±0.40,6.83±0.55和8.12±0.54ng/ml),MBP(6.65±0.56,8.94±0.69和10.27±0.70μg/L)水平依次显著升高(H=24.114,207.950,355.594,均P<0.05),MMSE评分(28.47±0.94,24.51±1.35和17.09±2.57分)、MoCA评分(27.45±1.03,20.18±1.92和11.75±2.53分)、GPCOG总分(13.47±0.69,10.25±1.04和8.97±0.82分)依次显著降低(H=515.005,775.933,327.584,均P<0.05),差异具有统计学意义。帕金森病患者血清NPASDP-4,MBP水平均与病程(r=0.316,0.358)、H-Y分期(r=0.345,0.384)、UPDRS-Ⅲ评分(r=0.371,0.396)呈显著正相关(P<0.05),与MMSE评分(r=-0.468,-0.517)、MoCA评分(r=-0.504,-0.569)、GPCOG总分(r=-0.527,-0.538)呈显著负相关(均P<0.05)。血清NPASDP-4,MBP水平及二者联合诊断帕金森病患者CI的曲线下面积(AUC)分别为0.850,0.930和0.960,诊断帕金森病患者CI严重程度的AUC分别为0.866,0.803和0.933。H-Y分期中期[OR(95%CI):4.725(1.742~12.814)],H-Y分期晚期[OR(95%CI):5.083(1.919~13.464)]、UPDRS-Ⅲ评分[OR(95%CI):3.257(1.464~7.246)]、NPASDP-4[OR(95%CI):5.324(1.516~18.701)]和MBP[OR(95%CI):5.769(2.459~13.533)]是帕金森病患者CI的影响因素(均P<0.05);NPASDP-4[OR(95%CI):4.768(2.382~9.543)],MBP[OR(95%CI):5.846(3.141~10.882)]是帕金森病患者CI严重程度的影响因素(均P<0.05)。结论帕金森病患者血清NPASDP-4和MBP呈高水平,且均与CI及其严重程度密切相关,可能具有一定的临床诊断价值。

化痰通遂汤联合督脉三针对脑卒中后吞咽障碍患者脂质过氧化及血清NPAS4、PARK7的影响

目的探讨化痰通遂汤联合督脉三针对脑卒中后吞咽障碍对患者脂质过氧化及血清NPAS4、PARK7的影响。方法研究将前瞻性选取2020年3月—2022年4月在医院诊疗的86例脑卒中后吞咽障碍患者为受试对象,根据数字表法将其分成试验组与对照组,各43例,对照组予以化痰通遂汤治疗,试验组予以化痰通遂汤治疗的同时采用督脉三针治疗,密切观察并对比两组研究对象的疗效,治疗前后的氧化应激和脂质过氧化指标,血清NPAS4、PARK7水平,NIHSS评分、FMA评分、SSA评分及SIS评分。结果应用化痰通遂汤联合督脉三针治疗后的试验组疗效明显高于单纯应用化痰通遂汤治疗的对照组(P<0.05);治疗后两组患者的SOD、iso-PGs指标较治疗前均上升(P<0.05),且试验组SOD指标高于对照组(P<0.05),但试验组iso-PGs指标较治疗前无明显差异(P>0.05),且试验组低于对照组(P<0.05),MDA指标治疗较治疗前显著下降(P<0.05),且试验组低于对照组(P<0.05);治疗前两组的NIHSS评分、SSA评分、FMA评分及SIS评分均无显著性差异(P>0.05),治疗后试验组患者的FMA评分及SIS评分均显著高于对照组(P<0.05),而NIHSS评分、SSA评分显著低于对照组(P<0.05);治疗前两组血清NPAS4、PARK7水平较治疗前均无显著性差异(P>0.05),且试验组患者血清NPAS4、PARK7水平均显著低于对照组(P<0.05)。结论应用化痰通遂汤联合督脉三针治疗脑卒中后吞咽障碍,效果极佳,联用能够改善氧化应激以及脂质过氧化指标,降低血清NPAS4、PARK7水平,提高患者生存水平,安全可靠,临床应用前景较为宽阔。

Npas4在小鼠原代神经元体外氧糖剥夺/复氧损伤中的保护作用及其可能机制

目的:探讨神经元PAS结构域蛋白4(Npas4)在小鼠原代神经元体外氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤中的作用及其可能机制。方法:建立小鼠原代培养的皮层神经元OGD/R损伤模型,检测OGD/R损伤后Npas4及突触后膜骨架蛋白Homer1a的mRNA和蛋白表达水平;实验分为对照组、OGD/R组、无关序列(scramble)+OGD/R组和Npas4短发夹RNA(Npas4-shRNA)+OGD/R组,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞的损伤程度,采用Westernblot法检测各组细胞Bax、Bcl-2、cleavedcaspase-3及Homer1a的蛋白表达水平。结果:与对照组比较,OGD/R损伤早期Npas4及Homer1a的mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);转染Npas4-shRNA可显著逆转OGD/R引起的Npas4蛋白水平上调;与scramble+OGD/R组相比,下调Npas4进一步加重OGD/R所致神经元活力降低、LDH释放及细胞凋亡(P<0.05),且神经保护分子Homer1a的蛋白表达水平也显著降低(P<0.05)。结论:Npas4可减轻小鼠原代培养的皮层神经元OGD/R损伤,且可能是通过上调神经保护分子Homer1a的表达发挥部分保护作用。

lncRNA MIAT通过miR-203调控NPAS4促进胃癌细胞增殖、侵袭、迁移的机制研究

目的 本研究通过体外培养胃癌细胞HGC-27,探究lncRNA MIAT能否通过靶向miR-203调控神经元PAS结构域蛋白4(NPAS4)促进胃癌细胞增殖、侵袭、迁移。方法 体外培养HGC-27与GES-1细胞,qRT-PCR法检测各细胞中lncRNA MIAT、miR-203、NAPS4 mRNA表达。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MIAT与miR-203、miR-203与NPAS4之间的靶向关系。将对数生长期HGC-27细胞分组并进行转染:对照组、si-NC组(转染si-NC)、si-MIAT组(转染si-MIAT)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-203组(转染miR-203)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-203组(转染anti-miR-203)、si-MIAT+anti-miR-NC组(转染si-MIAT+anti-miR-NC)、si-MIAT+anti-miR-203组(转染si-MIAT+anti-miR-203)、pc-NC组(转染pc-NC)、pc-NAPS4组(转染pc-NAPS4)、pc-NAPS4+miR-NC组(转染pc-NAPS4+miR-NC)、pc-NAPS4+miR-203组(转染pc-NAPS4+miR-203),qRT-PCR法检测lncRNA MIAT、miR-203、NPAS4 mRNA表达;MTT法检测细胞增殖活力;Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力;Western blot法检测MMP-3、MMP-9、CyclinD1、NPAS4蛋白表达。结果 与GES-1细胞比较,胃癌细胞HGC-27中lncRNA MIAT、NAPS4 mRNA表达显著升高,miR-203表达显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实,lncRNA MIAT能够靶向miR-203调控NAPS4(P<0.05)。沉默lncRNA MIAT可显著降低细胞活力以及迁移与侵袭能力,下调MMP-3、MMP-9、CyclinD1蛋白表达,降低NAPS4 mRNA和蛋白表达(P<0.05);过表达miR-203可显著降低NAPS4 mRNA和蛋白表达,降低细胞活力以及迁移与侵袭能力,下调MMP-3、MMP-9、CyclinD1蛋白表达(P<0.05);而抑制miR-203表达则与miR-203过表达作用相反,且抑制miR-203表达可显著逆转沉默lncRNA MIAT对细胞活力以及迁移与侵袭能力的抑制作用(P<0.05);过表达NAPS4可显著促进HGC-27细胞增殖、迁移与侵袭,上调MMP-3、MMP-9、CyclinD1蛋白表达(P<0.05),同时其对细胞恶性行为的促进作用可被miR-203过表达削弱(P<0.05)。结论 沉默lncRNA MIAT可通过靶向miR-203调控NAPS4表达,减弱胃癌细胞增殖、侵袭、迁移等细胞生物学行为过程。

miRNAs及血清神经元PAS结构域蛋白4、神经元特异性烯醇化酶、S100β蛋白水平与急性脑卒中患者认知障碍严重程度的关系研究

背景认知障碍可影响急性脑卒中患者主动参与社会活动、配合肢体功能训练及生活质量,因此寻找有效评估急性脑卒中患者认知障碍严重程度的指标具有重要意义。目的探讨miRNAs及血清神经元PAS结构域蛋白4(NPAS4)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S100β蛋白水平与急性脑卒中患者认知障碍严重程度的关系。方法选取2014年8月—2018年5月解放军三零七医院神经内科收治的急性脑卒中并认知障碍患者146例,根据认知障碍严重程度分为轻度组(n=101)、中度组(n=30)、重度组(n=15)。比较3组患者miRNAs(包括miRNA-34、miRNA-21、miRNA-135)相对表达量及血清NPAS4、NSE、S100β蛋白水平;miRNAs相对表达量及血清NPAS4、NSE、S100β蛋白水平与急性脑卒中患者认知障碍严重程度的相关性采用Spearman秩相关分析;绘制ROC曲线以评价miRNAs相对表达量及血清NPAS4、NSE、S100β蛋白水平对急性脑卒中患者认知障碍严重程度的评估价值。结果 (1)重度组患者miRNA-34、miRNA-21、miRNA-135相对表达量及血清NSE、S100β蛋白水平低于轻度组和中度组,血清NPAS4水平高于轻度组和中度组(P<0.05);中度组患者miRNA-34、miRNA-21、miRNA-135相对表达量及血清NSE、S100β蛋白水平低于轻度组,血清NPAS4水平高于轻度组(P<0.05)。(2)Spearman秩相关分析结果显示,miRNA-135相对表达量及血清NSE、S100β蛋白水平与急性脑卒中患者简明精神状态量表(MMSE)评分呈正相关(rs值分别为0.420、0.434、0.456,P<0.05),血清NPAS4水平与急性脑卒中患者MMSE评分呈负相关(rs=-0.448,P<0.01)。(3)ROC曲线分析结果显示,miRNA-135相对表达量评估急性脑卒中患者认知障碍严重程度的曲线下面积(AUC)为0.747,最佳截断值为0.71;血清NPAS4水平评估急性脑卒中患者认知障碍严重程度的AUC为0.729,最佳截断值为2.01 mg/L;血清NSE水平评估急性脑卒中患者认知障碍严重程度的AUC为0.751,最佳截断值为13.00 U/ml;血清S100β蛋白水平评估急性脑卒中患者认知障碍严重程度的AUC为0.755,最佳截断值为0.19μg/L。结论 miRNA-34、miRNA-21与急性脑卒中患者认知障碍严重程度无关,而miRNA-135及血清NPAS4、NSE、S100β蛋白水平与急性脑卒中患者认知障碍严重程度有关,且四者对急性脑卒中患者认知障碍严重程度具有一定评估价值。

脑小血管病患者外周血GPR30 mRNA、PLR、NPAS4表达及与认知功能、短期预后的关系

目的探讨脑小血管病(CSVD)患者外周血G蛋白耦联受体(GPR30)mRNA、血小板与淋巴细胞比值(PLR)、神经元PAS结构域蛋白4(NPAS4)表达及与认知功能、短期预后的关系。方法选取2019年1月—2021年2月收治的CSVD 200例,依据是否发生认知功能障碍分为发生组85例与未发生组115例。比较2组临床资料、外周血GPR30 mRNA、PLR、NPAS4表达水平,分析外周血GPR30 mRNA、PLR、NPAS4表达与CSVD患者认知功能障碍的关系,评价其对CSVD患者认知功能障碍的诊断价值及与CSVD发生认知功能障碍患者短期预后不良的关系。结果2组文化程度、腔隙性脑梗死病灶数目、脑白质病变及脑血管病面积比较差异有统计学意义(P<0.01);发生组外周血GPR30 mRNA水平低于未发生组,PLR、NPAS4表达水平高于未发生组(P<0.01);外周血GPR30 mRNA、PLR、NPAS4表达与CSVD患者认知功能障碍显著相关(P<0.01);外周血GPR30 mRNA、PLR、NPAS4表达联合诊断曲线下面积最大;CSVD发生认知功能障碍患者外周血GPR30 mRNA、PLR、NPAS4高表达时,短期预后不良发生风险是低表达的0.274、3.949、3.276倍。结论CSVD患者外周血GPR30 mRNA表达水平下调,PLR、NPAS4表达水平上调,且其表达与认知功能障碍及短期预后有关,可用于CSVD患者认知功能障碍诊断及短期预后预测。

HIPK2在脑胶质瘤中的表达及前神经元-间质亚型转化中作用的研究

目的探讨同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)在人脑胶质瘤中的表达及前神经元-间质亚型转化(PMT)中的作用。方法分析美国国立生物信息技术中心基因表达数据库(NCBI-GEO:GSE16011)中HIPK2 mRNA在低级别和高级别胶质瘤中的表达。基于GSE16011数据库进一步分析HIPK2 mRNA在前神经元型、间质型和经典型胶质瘤样本中的表达。根据HIPK2 mRNA的表达量将胶质瘤患者分为HIPK2低表达组和高表达组,并绘制Kaplan-Meier生存曲线,采用log-rank检验比较HIPK2低表达组与高表达组患者的生存差异。体外实验以人星形胶质细胞(NHA)为对照,通过蛋白质免疫印迹法(WB)验证HIPK2蛋白在胶质瘤细胞株H4、A172、U87和U251中的表达。在U87细胞中采用携带HIPK2 cDNA序列的过表达慢病毒载体构建过表达HIPK2的细胞株,以空载慢病毒载体构建对照细胞株。在H4细胞中采用siRNA转染敲低HIPK2的表达。通过划痕实验和Transwell实验探讨HIPK2表达改变对胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的影响。以WB实验检测HIPK2表达改变对FN1、CD44和SNAI2蛋白表达的影响。采用Pearson相关分析探讨HIPK2与FN1、CD44和SNAI2表达的相关性。结果HIPK2 mRNA在高级别胶质瘤中的表达水平低于低级别胶质瘤(t=6.86,P<0.001),且HIPK2 mRNA在间质型和经典型胶质瘤中的表达水平均低于前神经元型胶质瘤(均P<0.001)。对GSE16011数据库数据的分析显示,HIPK2高表达组患者的总体生存期长于低表达组[分别为(40.8±3.9)个月和(24.9±3.2)个月,P<0.001]。WB结果显示,与NHA比较,H4、A172、U87和U251细胞中HIPK2蛋白的表达水平均降低(均P<0.05)。U87细胞HIPK2过表达组HIPK2蛋白的表达较对照组显著上调(t=24.88,P<0.05),H4细胞HIPK2敲低组的HIPK2蛋白表达水平较对照组明显下调(t=26.72,P<0.001)。划痕实验结果显示,U87细胞HIPK2过表达组的细胞划痕修复率低于对照组[分别为(18.1±2.0)%和(45.6±4.2)%,t=10.23,P<0.001];而H4细胞HIPK2敲低组的细胞划痕修复率高于对照组[分别为(60.5±5.4)%和(37.9±4.0)%,t=5.83,P=0.004]。Transwell实验结果显示,U87细胞HIPK2过表达组的穿膜细胞数少于对照组[分别为(92.0±11.9)个和(193.1±16.2)个,t=8.75,P<0.001];而H4细胞HIPK2敲低组的穿膜细胞数高于对照组[分别为(204.0±16.9)个和(135.1±15.0)个,t=5.27,P=0.006]。WB实验结果表明,U87细胞HIPK2过表达组细胞中FN1、CD44和SNAI2蛋白的表达水平均低于对照组(均P<0.001);H4细胞HIPK2敲低组中FN1、CD44和SNAI2蛋白的表达水平均高于对照组(均P<0.001)。Pearson相关分析结果显示,胶质瘤中HIPK2的表达与FN1、CD44和SNAI2表达均呈负相关(均P<0.05)。结论HIPK2在高级别胶质瘤和间质型胶质瘤中呈低表达,低表达的HIPK2可能通过影响胶质瘤PMT促进胶质瘤细胞的迁移和侵袭。

盐酸右美托咪定联合酒石酸布托啡诺对老年创伤性颅脑患者应激状态及NPAS4、NSE的影响

目的探讨盐酸右美托咪定(DHI)联合酒石酸布托啡诺(BTI)对老年创伤性颅脑患者应激状态及血清神经元PAS结构域蛋白4(NPAS4)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)的影响。方法回顾性选取上海市浦东新区人民医院2017年1月至2019年1月收治的老年创伤性颅脑患者101例作为研究对象,按治疗方法不同分成A、B、C组,各35例、34例、32例,其中A组单纯予以DHI治疗,B组单纯予以BTI治疗,C组联合(DHI联合BTI)治疗。分析给药前、给药后1d、给药后3d时3组患者平均动脉压(MAP)、心率、C反应蛋白(CRP)水平、白细胞介素-6(IL-6)水平以及NPAS4和NSE蛋白表达的变化。结果①给药前3组患者MAP、心率、CPR水平、IL-6水平、NPAS4和NSE蛋白表达量比较,差异均无统计学意义(P>0.05);给药后1、3d时的MAP、心率、CPR水平、IL-6水平及NPAS4和NSE蛋白表达量均较给药前明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);A组与B组给药后1、3d时上述指标比较,差异无统计学意义(P>0.05);C组上述指标均显著低于A、B组,差异有统计学意义(P<0.05)。②Logistic回归分析发现,MAP、心率、CPR、IL-6与创伤性颅脑损伤呈正相关(OR=0.351、0.671、0.642、0.637,P<0.05),NPAS4、NSE与创伤性颅脑损伤呈负相关(OR=-0.692、-0.475,P<0.05)。结论在老年创伤性颅脑损伤患者的临床治疗中,科学、合理地予以DHI联合BTI治疗能有效地改善患者的应激状态及NPAS4、NSE蛋白表达量,有较好的临床应用与推广价值。

Nrf2/NLRP3信号通路在丙泊酚后处理减轻氧糖剥夺-复糖复氧大鼠海马神经元损伤中的作用

目的:评价核因子E2相关因子2/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nrf2/NLRP3)信号通路在丙泊酚后处理减轻氧糖剥夺-复糖复氧大鼠海马神经元损伤中的作用。方法:原代培养孕16~18 d Wistar大鼠胎鼠海马神经元7 d,采用随机数字表法分为4组(n=42):对照组(C组)正常培养;氧糖剥夺-复糖复氧组(O组)氧糖剥夺1 h后复糖复氧;丙泊酚后处理组(P组)复糖复氧即刻加入丙泊酚(终浓度1.2μg/ml)孵育2 h,更换为正常培养液;Nrf2 siRNA(-)转染组(N组)原代神经元培养第3天行携带Nrf2基因敲除的慢病毒转染,24 h后更换为正常培养液,第7天进行模型制备及丙泊酚后处理。于继续培养24 h时收集细胞,采用流式细胞术检测神经元凋亡率,RT-PCR法检测Nrf2和NLRP3 mRNA表达,Western blot法检测Nrf2和NLRP3表达,ELISA法测定TNF-α、IL-6和IL-1β浓度;试剂盒法检测还原性谷胱甘肽(GSH)、SOD和过氧化氢酶(CAT)活性。结果:与C组比较,O组和P组神经元凋亡率升高,TNF-α、IL-6和IL-1β浓度升高,GSH、SOD和CAT水平降低,Nrf2、NLRP3及其mRNA表达上调,Nrf2细胞核/浆比例增加(P<0.05);与O组比较,P组神经元凋亡率降低,TNF-α、IL-6和IL-1β浓度降低,GSH、SOD和CAT水平升高,Nrf2及其mRNA表达上调,Nrf2细胞核/浆比例增加,NLRP3及其mRNA表达下调(P<0.05);与P组比较,N组神经元凋亡率升高,TNF-α、IL-6和IL-1β浓度升高,GSH、SOD和CAT水平降低,Nrf2及其mRNA表达下调,Nrf2细胞核/浆比例降低,NLRP3及其mRNA表达上调(P<0.05)。结论:Nrf2/NLRP3信号通路参与了丙泊酚后处理减轻氧糖剥夺-复糖复氧大鼠海马神经元损伤的过程。

胞磷胆碱钠片联合电脑认知功能系统训练对脑卒中认知功能障碍患者血清NPAS4、γ-GGT及ICAM-1的影响

目的探讨胞磷胆碱钠片联合电脑认知功能系统训练对脑卒中认知功能障碍患者血清神经元PAS结构域蛋白4(NPAS4)、γ-谷酰转肽酶(γ-GGT)及细胞间黏附因子-1(ICAM-1)的影响。方法前瞻性选取2019年1月至2020年12月在四川大学华西医院康复医学中心治疗的脑卒中认知功能障碍患者136例,采用随机数字表法将患者分为观察组(n=67)和对照组(n=69)。对照组给予电脑认知功能系统训练,观察组在对照组基础上加用胞磷胆碱钠片治疗,治疗8周。观察两组简易精神状态检查表(MMSE)、日常生活活动能力量表(ADL)、SF-36量表及血清NPAS4、γ-GGT及ICAM-1的差异。结果观察组治疗8周后,MMSE和ADL评分分别为(22.43±1.94)、(77.80±9.62)分,明显高于对照组[(20.05±1.82)、(68.84±9.14)分],差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗8周后,SF-36量表生理功能、生理职能、总体健康、情感职能和心理健康得分分别为(77.86±6.80)、(81.14±5.74)、(78.81±6.40)、(72.24±5.84)、(81.10±6.90)分,明显高于对照组[(67.90±7.64)、(73.20±6.09)、(72.03±6.81)、(62.29±5.94)、(65.52±6.43)分],差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗8周后,血清NPAS4、γ-GGT及ICAM-1分别为(1.98±0.90)mg/L、(21.03±9.97)U/L和(184.13±51.60)μg/mL,明显低于对照组[(2.83±0.81)mg/L、(29.78±8.87)U/L、(228.40±60.43)μg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。NPAS4、γ-GGT及ICAM-1与MMSE评分呈负相关(P<0.05)。结论胞磷胆碱钠片联合电脑认知功能系统训练有助于脑卒中认知功能障碍患者康复,降低血清NPAS4、γ-GGT及ICAM-1水平,同时血清NPAS4、γ-GGT及ICAM-1水平与患者认知功能障碍有关。

节律基因NPAS2在急性髓系白血病中的表达及对细胞生长的影响

目的探讨神经元PAS结构域蛋白2(neuronal PAS domain protein 2,NPAS2)在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者和细胞系中的表达变化,及其对AML细胞生长的作用。方法收集陕西省西安市中心医院血液病研究所2013—2017年收治的初诊急性髓系白血病患者46例,实时定量PCR方法检测NPAS2在AML患者及正常对照组骨髓单个核细胞中的表达,Western blot方法检测AML细胞系及对照组中NPAS2的表达;统计学方法分析NPAS2表达高低对AML患者预后的影响;RNAi方法干扰AML细胞内NPAS2表达,利用CCK-8法检测NPAS2对细胞生长的作用。结果 NPAS2在AML患者及细胞系中的表达较对照组升高(P<0.05);在M1、M2、M3、M4、M5患者中NPAS2表达较对照组升高(P<0.05),在M6和M7患者中其表达较对照组差异无统计学意义(P>0.05);高表达NPAS2的AML患者其总体生存期较低表达患者短(P<0.05);AML细胞中干涉NPAS2后,与对照组比,干涉组细胞生长明显减慢(P<0.05)。结论 NPAS2在AML患者中表达上调并与AML患者预后负相关,同时NPAS2促进AML细胞生长。

Mir-106b对阿尔茨海默病昼夜节律调控的初步研究

目的探讨mir-106b在阿尔茨海默病发病中的作用。方法取6月龄APPswe/PSΔE9小鼠脑组织,进行microRNA芯片的检测;利用real-time PCR对芯片检测结果进行验证;构建mir-106b表达载体,将其转染至SH-SY5Y细胞中构建mir-106b稳定转染的稳转细胞系。用Targetsan、Pictar、miRanda等靶基因预测软件,对mir-106b的靶基因进行预测,根据靶基因的功能选择可能与AD发病相关的靶基因,并用Western blot对所选择的靶基因在稳转细胞中的表达进行验证。用双荧光素酶报告检测系统检测mir-106b与其靶基因的结合位点。结果芯片结果显示,与野生型小鼠相比,6月龄APPswe/PSΔE9小鼠脑组织中mir-106b的表达下降,经real-time PCR验证,mir-106b的表达在APPswe/PSΔE9小鼠脑组织中的表达较野生型小鼠升高,差别具有统计学意义(P=0.03)。mir-106b稳转细胞系较对照mir-106b的表达升高2～5倍。神经PAS结构域蛋白2(neuronal PAS domain protein2,NPAS2)在mir-106b稳转细胞中的表达明显下降。双荧光素酶报告实验证实:与对照相比,带有NPAS2的3'UTR的荧光素酶报告载体与mir-106b表达载体共转染,海肾荧光素酶/萤火虫荧光素酶的相对活性降低;荧光素酶报告载体的NPAS2-3'UTR突变后与mir-106b表达载体共转染,海肾荧光素酶/萤火虫荧光素酶的相对活性升高。结论mir-106b可能通过调节机体生物钟基因NPAS2的表达,影响阿尔茨海默病人的生活节律,参与阿尔茨海默病的发生。

生物节律基因NPAS2在肿瘤中的研究

生物节律是一种时间跟踪节律性生物系统,生物节律基因调节2%~10%的基因表达,使生物体能够预测环境变化并作出行为和生理功能的反应。神经元PAS结构域蛋白2(NPAS2)作为目前发现的最大的生物节律基因,可控制和调节睡眠、觉醒、内分泌、代谢、细胞增殖和凋亡以及免疫系统等过程,参与哺乳动物昼夜节律的周期调控,对于生理内环境稳定的维持至关重要。NPAS2功能的破坏可导致各种病理过程及疾病的产生,例如糖尿病、抑郁症、心血管问题,尤其可影响多种癌症的发生发展及预后。本文对生物节律基因NPAS2进行概述,并对其在生物节律调控中的作用以及在各类疾病尤其在肿瘤发生发展中的作用进行综述。