大株红景天联合氧自由基清除剂对急性脑梗死患者神经功能及神经凋亡的影响

目的:探讨大株红景天联合氧自由基清除剂对急性脑梗死患者神经功能及神经凋亡的影响。方法:选取本院收治的急性脑梗死患者,经随机数表法分为对照组、大株红景天组。对照组在常规治疗同时加入氧自由基清除剂治疗,大株红景天组患者在常规治疗同时接受大株红景天联合氧自由基清除剂治疗。对比两组治疗前(T0)、治疗1周后(T1)、治疗2周后(T2)血清中神经营养指标、神经损伤指标、神经凋亡指标含量的差异。结果:T0时,两组血清中神经营养指标、神经损伤指标、神经凋亡指标含量的差异不显著。T1、T2时,大株红景天组血清中神经营养指标IGF-1、bFGF、BDNF、GDNF的含量高于对照组;血清中神经损伤指标RBP4、H-FABP、SAA、NPY的含量低于对照组;血清中神经凋亡指标Bcl-2的含量高于对照组,Bax、caspase-3的含量低于对照组。结论:急性脑梗死患者接受大株红景天联合氧自由基清除剂治疗,可有效优化患者的神经功能并抑制神经凋亡。

亚低温辅助运动通过抑制脑神经凋亡改善缺氧缺血性脑损伤大鼠幼崽脑神经功能的机制探讨

目的探讨亚低温辅助运动通过抑制脑神经凋亡改善缺氧缺血性脑损伤大鼠幼崽脑神经功能的机制。方法选择无特定病原体(SPF)级新生7日龄Wistar大鼠,采用手术结扎左颈总动脉法建立缺氧缺血性脑损伤幼鼠模型。按照随机数字表法分为假手术组(假手术幼鼠,正常饲养不进行任何干预)、HIE模型组(HIE模型幼鼠,正常饲养不进行任何干预)和HIE模型+亚低温和运动干预组(HIE模型幼鼠,亚低温和运动干预),每组大鼠幼崽各5只,共干预63 d。分别于治疗前以及治疗后第42天和第63天,通过旋转脚架性能测试检测3组幼鼠平衡能力变化、去除胶带测试检测3组幼鼠行为能力变化;治疗结束后,采用蛋白质印迹(Western blotting)法检测治疗前后模型幼鼠的脑部凋亡相关蛋白因子细胞色素c(Cyt C)、活化型半胱天冬酶-3(cleaved-Caspase 3)、半胱天冬酶-3前体(pro-Caspase 3)、聚ADP核糖聚合酶1(PARP-1)、蛋白酶激活受体(PAR)的表达情况。结果第42天和第63天,与假手术组相比,HIE模型组和HIE模型+亚低温和运动干预组幼鼠平衡维持时间均显著缩短,去除胶带所用时间、海马组织中凋亡相关蛋白Cyt C、cleaved-Caspase 3、PARP-1和PAR相对表达量均显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与HIE模型组相比,HIE模型+亚低温和运动干预组幼鼠平衡维持时间均显著延长,去除胶带所用时间、海马组织中凋亡相关蛋白Cyt C、cleaved-Caspase 3、PARP-1和PAR相对表达量均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论亚低温辅助运动治疗能够显著改善缺氧缺血性脑损伤大鼠幼崽的行为能力,其作用机制可能与调控幼鼠海马组织凋亡蛋白及PARP-1、PAR的表达有关,其治疗效果虽较为显著但要达到完全康复,仍存在疗效差距。

miR-124通过抑制TLR4/NF-κB/CCL2对脑梗死大鼠神经元凋亡的影响

目的探讨微小RNA(miR)-124通过抑制Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB/CC类趋化因子配体(CCL)2对脑梗死(CI)大鼠神经元凋亡的影响。方法通过线栓闭塞大脑中动脉法建立CI大鼠模型60只,以随机数表法平均分为5组:模型组、miR-124激活剂(miR-124 agomir)组、TLR4过表达质粒组、miR-124 agomir阴性对照+空载质粒组、miR-124 agomir+TLR4过表达质粒组,另取12只大鼠只分离颈动脉,作为假手术组。分组干预后,评测大鼠神经功能缺损情况,比较各组神经功能缺损评分;采用三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠CI情况,比较各组CI面积;采用TUNEL染色检测海马神经元凋亡情况,比较各组海马神经元凋亡率;采用试剂盒测量各组血清活性氧(ROS)及炎症因子环氧合酶(COX)-2、白细胞介素(IL)-17水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)实验检测各组脑组织miR-124表达;采用Western印迹实验检测各组脑组织凋亡及TLR4/NF-κB/CCL2通路蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组、miR-124 agomir阴性对照+空载质粒组、miR-124 agomir+TLR4过表达质粒组脑组织miR-124与B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)蛋白表达水平显著降低(P<0.05),神经功能缺损评分、CI面积、海马神经元凋亡率、血清ROS及炎症因子COX-2、IL-17水平、脑组织Bcl-2相关X蛋白(Bax)、TLR4、核内NF-κB p65、CCL2蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组、miR-124 agomir+TLR4过表达质粒组分别比较,miR-124 agomir组脑组织miR-124与Bcl-2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),神经功能缺损评分、CI面积、海马神经元凋亡率、血清ROS及炎症因子COX-2、IL-17水平、脑组织Bax、TLR4、核内NF-κB p65、CCL2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),而TLR4过表达质粒组脑组织miR-124与Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),神经功能缺损评分、CI面积、海马神经元凋亡率、血清ROS及炎症因子COX-2、IL-17水平、脑组织Bax、TLR4、核内NF-κB p65、CCL2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与模型组相比,miR-124 agomir阴性对照+空载质粒组各指标水平无显著变化(P>0.05)。结论miR-124可通过下调TLR4/NF-κB/CCL2通路蛋白表达,抑制炎症,减轻脑组织梗死及海马神经元凋亡,修复CI大鼠神经功能。

miR-138靶向HIF-1α介导NLRP3炎症小体对脑卒中大鼠神经元凋亡的影响

目的探究微小RNA(miR)-138对缺氧诱导因子(HIF)-1α和Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白(NLRP)3通路的调控作用及对脑卒中大鼠神经元凋亡的影响。方法收集60例脑卒中患者及20例健康体检者血清,qRT-聚合酶链反应(PCR)法检测miR-138表达。中动脉线栓阻塞法建立大鼠脑卒中模型,设置假手术组、模型组、miR-138激动剂(miR-138 agomir)组、agomir-NC组、HIF-1α激活剂组、miR-138 agomir+HIF-1α激活剂组,每组15只。改良神经功能损害程度评分(mNSS)检测神经功能缺损症状;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测脑梗死面积;尼氏及TUNEL染色法检测神经元损伤及凋亡;免疫组化法检测海马组织M1型巨噬细胞极化表面标志物CD11c、NLRP3阳性表达;Western印迹检测HIF-1α、NLRP3、白细胞介素(IL)-1β、IL-18、半胱天冬蛋白酶(Caspase)-1、pro-Caspase-1蛋白表达。结果miR-138在脑卒中患者血清中表达较健康者显著降低(P<0.05)。与假手术组相比,模型组海马组织神经元损伤及凋亡加重,促炎表型的巨噬细胞浸润明显(CD11c阳性表达升高),脑梗死面积及神经功能缺损评分升高,miR-138表达降低,HIF-1α活化介导的NLRP3炎症小体活性升高,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-138 agomir干预治疗可缓解脑卒中大鼠神经元损伤及凋亡,降低脑梗死面积及神经功能缺损评分,抑制HIF-1α活化介导的NLRP3炎症小体激活发挥的促炎作用,差异有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α激活剂可加重脑卒中大鼠神经元损伤及凋亡,并削弱miR-138 agomir发挥的抗HIF-1α/NLRP3活化、抗炎及抗凋亡作用,差异有统计学意义(P<0.05)。结论上调miR-138表达,可通过抑制HIF-1α介导的NLRP3炎症小体活化,发挥抗脑卒中后神经元凋亡作用。

巴豆霜干预脑缺血再灌注损伤大鼠皮质区JNK/p38 MAPK及神经元凋亡的机制

背景:巴豆霜能够激活ERK通路、对神经元细胞具有抗凋亡作用,是否具有抑制JNK、p38通路的激活而发挥抗凋亡的协同效应尚不清楚。目的:探讨巴豆霜对脑缺血再灌注损伤大鼠缺血侧皮质区神经元损伤和凋亡的影响及机制。方法:①将90只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,巴豆霜低、中、高剂量组,尼莫地平组,每组15只,除假手术组外,剩余各组均采取线栓法制备大脑中动脉栓塞大鼠模型,巴豆霜各组大鼠分别按剂量20,40,60 mg/kg灌胃;假手术组和模型组大鼠给予等量生理盐水,1次/d,连续给药7 d。运用神经功能缺损评分、TTC染色、脑组织含水量、苏木精-伊红染色及尼氏染色筛选出最佳浓度即巴豆霜高剂量。②将120只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、巴豆霜组、JNK抑制剂组、巴豆霜+JNK抑制剂组、p38 MAPK抑制剂组、巴豆霜+p38 MAPK抑制剂组和尼莫地平组,每组15只,除假手术组外,剩余各组大鼠均制备大脑中动脉栓塞大鼠模型,在造模之前30 min,将10μL JNK抑制剂SP600125或10μL p38 MAPK抑制剂SB203580分别注射到大鼠侧脑室,巴豆霜各组大鼠灌胃60 mg/kg巴豆霜,7 d后,采用Western Blot、TUNEL染色及流式细胞术检测各组大鼠脑组织JNK/p38 MAPK信号通路及凋亡相关蛋白水平及细胞凋亡情况。结果与结论:①与假手术组相比,模型组神经功能缺损评分、脑含水量、脑梗死体积、细胞凋亡率显著升高(P<0.05),神经细胞呈散乱分布;与模型组相比,巴豆霜中、高剂量组和尼莫地平组大鼠神经功能缺损评分、脑组织含水量、脑梗死体积显著降低(P<0.05),神经细胞病理形态明显改善;②与JNK抑制剂组相比,巴豆霜+抑制剂组大鼠脑组织p-JNK/JNK、p-p38/p38、Bax表达显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),而Bcl-2表达显著升高(P<0.05);③结果提示,巴豆霜可能通过抑制JNK/p38 MAPK信号通路的激活、减少神经元凋亡等途径,达到对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用。

补体分子调控TGFβ1/smad通路减少蛛网膜下腔出血后神经元凋亡的作用及机制

目的 探讨补体分子对蛛网膜下腔出血(SAH)后神经元凋亡的影响及可能的机制。方法 将90只大鼠随机分为假手术组、SAH模型组、SAH模型+补体分子组,每组30只。采用枕大池单次注射自体血的方法建立SAH模型,SAH后24 h采用Garcia评分和平衡木试验评分评定神经功能缺损程度。成功建模24 h后,称取脑组织湿质量和干质量,计算脑组织含水率。绘制伊文思蓝标准曲线,评估血-脑屏障通透性。采用免疫荧光染色观察各组小胶质细胞活化情况,蛋白质免疫印迹法(WB)检测各组补体C3、TGFβ1/smad蛋白的表达情况,TUNEL法检测神经元凋亡情况。结果 与假手术组相比,SAH模型组大鼠的Garcia评分和平衡木试验评分均降低,脑组织含水率和血-脑屏障通透性均增加,小胶质细胞活化程度增强,补体C3、TGFβ1/smad蛋白的表达水平升高,神经元凋亡率增加(P<0.05)。与SAH模型组相比,SAH模型+补体分子组大鼠的Garcia评分和平衡木试验评分均升高,脑组织含水率和血-脑屏障通透性均降低,小胶质细胞活化程度减弱,补体C3、TGFβ1/smad蛋白的表达水平降低,神经元凋亡率减少(P<0.05)。结论 补体分子可通过调控TGFβ1/smad通路抑制SAH后小胶质细胞活化,从而减少神经元凋亡,改善神经功能缺损。

基于ERK5信号通路探讨薯蓣健脾益智合剂对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:探讨薯蓣健脾益智合剂对血管性痴呆(VaD)大鼠海马神经元凋亡的影响以及相关作用机制。方法:采用改良双侧颈总动脉结扎(2-VO)法建立VaD大鼠模型,将120只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和治疗组,每组30只。治疗组予以10 mL/(kg·d)薯蓣健脾益智合剂灌胃,正常组、假手术组、模型组给予等量生理盐水灌胃,持续8周。观察大鼠一般状态,并于造模后第7天及造模后治疗4、8周分别进行行为学检测,苏木精-伊红(HE)染色观察海马神经元组织学改变,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色观察海马神经元凋亡情况,免疫组织化学法检测丝分裂原活化蛋白激酶K2(MEKK2)、丝分裂原活化蛋白激酶K3(MEKK3)和丝裂原激活蛋白激酶5(MEK5)、细胞外信号调节激酶5(ERK5)表达的变化,蛋白免疫印迹法检测MEKK2、MEKK3和MEK5、ERK5的蛋白表达。结果:与正常组及假手术组比较,模型组行为学表现差异显著,变性神经元增加,神经元凋亡率增加(P<0.01),MEKK2、MEKK3和MEK5、ERK5的表达减少;与模型组比较,治疗组行为学表现改善,变性神经元减少,神经元凋亡率降低(P<0.05或P<0.01),MEKK2、MEKK3和MEK5、ERK5表达增加。结论:薯蓣健脾益智合剂可能通过上调ERK5信号通路,抑制海马神经元凋亡,促进海马神经元的修复进而治疗VaD。

LncRNA HOTAIR调节细胞自噬对脊髓损伤模型神经元凋亡的保护作用

目的:探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)在脊髓损伤凋亡和自噬中的作用及相关机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)和模型组(SCI组)。构建缺氧缺糖诱导的SY-SH5Y细胞模型(OGD模型),将SY-SH5Y细胞分为Control组、OGD组、OGD+Vector组、OGD+pcDNA-HOTAIR组、OGD+pcDNA-HOTAIR+NC mimic组、OGD+pcDNA-HOTAIR+miR-17 mimic组。通过脊髓损伤运动功能(BBB)评分评估大鼠运动功能的恢复能力;通过双荧光素酶报告基因实验分别检测HOTAIR和miR-17、miR-17和Beclin-1之间的靶向关系;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测大鼠脊髓组织和细胞中HOTAIR、miR-17、Beclin-1 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠脊髓组织和细胞中Beclin-1、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、P62蛋白的表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果:与Sham组比较,SCI组大鼠BBB评分下降,脊髓组织中HOTAIR水平降低,miR-17水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Control组比较,OGD组处理的SY-SH5Y细胞中HOTAIR水平降低,miR-17水平升高,神经元凋亡率升高,LC3Ⅱ蛋白表达降低,P62蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与OGD+Vector组比较,OGD+pcDNA-HOTAIR组细胞中HOTAIR水平升高(P<0.05),神经元凋亡率降低(P<0.05),LC3Ⅱ蛋白表达升高(P<0.05),P62蛋白表达降低(P<0.05),而自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)逆转了这一结果(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,Beclin-1是miR-17的靶基因,miR-17是HOTAIR的靶基因。与OGD+pcDNA-HOTAIR+NC mimic组比较,OGD+pcDNA-HOTAIR+miR-17 mimic组细胞中miR-17表达明显升高,神经元凋亡率明显升高,Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白表达降低,P62蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:LncRNA HOTAIR通过靶向miR-17/Beclin-1通路增强自噬,从而减轻神经元凋亡和改善脊髓损伤。

柴胡疏肝散含药血清对衣霉素诱导神经元内质网应激模型细胞凋亡的影响

目的:探讨柴胡疏肝散(CSS)含药血清对衣霉素诱导的内质网应激(ERS)模型神经元凋亡的影响。方法:采用衣霉素对NG108-15神经细胞进行诱导,建立ERS细胞模型并分成5组,模型组(10%空白兔血清干预)、安理申(盐酸多奈哌齐片)组(10%安理申含药血清干预)、2.5%CSS含药血清(低剂量)组、5%CSS含药血清(中剂量)组、10%CSS含药血清(高剂量)组。同时设置正常空白血清孵育且未经衣霉素诱导的正常组,干预后采用流式细胞仪和荧光染色检测各组细胞凋亡率。结果:流式细胞仪检测结果显示,各干预组细胞凋亡率均低于模型组(P <0.05);同时高剂量CSS含药血清组细胞凋亡率明显低于中低剂量组(P <0.05)。联合荧光染色也证明高剂量CSS含药血清组细胞凋亡率明显低于中低剂量组。结论:CSS能够抑制衣霉素诱导的ERS模型神经元凋亡,且其抑制作用随着药物浓度升高而增强。

曲克芦丁调控核因子κB信号通路抑制脑梗死模型大鼠脑损伤及神经元凋亡

背景:目前已有研究发现曲克芦丁对脑部疾病有明显的改善作用,但是关于曲克芦丁对脑梗死治疗及神经元细胞影响的研究较少。目的:探究曲克芦丁调控核因子κB信号通路对脑梗死大鼠脑损伤及神经元凋亡的作用机制。方法:选取清洁级大鼠50只,将其随机分为健康组、模型组、曲克芦丁+核因子κB激动剂组、曲克芦丁组、核因子κB抑制剂组,后4组均采用动脉结扎法建立脑梗死大鼠模型。健康组及模型组采用等量生理盐水灌胃处理,曲克芦丁+核因子κB激动剂组采用72 mg/kg曲克芦丁灌胃+20 mg/kg RANK腹腔注射干预,曲克芦丁组采用72 mg/kg曲克芦丁灌胃处理,核因子κB抑制剂组采用120 mg/kg核因子κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷进行腹腔注射,各组给药均1次/d,均连续干预30 d。药物干预完成后24 h,采用Zea-longa检测大鼠神经功能损伤,苏木精-伊红染色观察脑组织病理改变,TUNEL法检测神经元凋亡,采用免疫印迹法及PCR检测核因子κB p65、核因子κB p50蛋白及mRNA表达水平。结果与结论:①与健康组比较,模型组大鼠神经功能评分、神经元凋亡率、核因子κB p65、核因子κB p50 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05);②与模型组比较,曲克芦丁+核因子κB激动剂组神经功能评分、神经元凋亡率、核因子κB p65、核因子κB p50 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05);③与曲克芦丁+核因子κB激动剂组比较,曲克芦丁组、核因子κB抑制剂组神经功能评分、神经元凋亡率、核因子κB p65、核因子κB p50 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),且曲克芦丁组与核因子κB抑制剂组比较无差异(P>0.05);④模型组大鼠脑组织有大量神经元细胞胞质空泡化,明显水肿和坏死现象及大量炎性细胞浸润现象;曲克芦丁+核因子κB激动剂组脑组织肿胀减轻,网状结构和固缩细胞减少,仍伴有部分水肿;曲克芦丁组及核因子κB抑制剂组脑组织肿胀和神经元水肿变性、细胞胞质空泡化及神经元细胞核固缩减少,炎症细胞浸润明显降低;⑤提示曲克芦丁能够降低脑梗死大鼠神经功能损伤表达、抑制神经元凋亡及改善其脑组织病理损伤,其作用机制可能与调控核因子κB及相关信号通路的表达相关。

金匮肾气丸对糖尿病性阿尔茨海默病模型小鼠脑神经元凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响

目的探讨金匮肾气丸对糖尿病性阿尔茨海默病(AD)小鼠脑神经元凋亡及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法50只APP/PS1转基因AD小鼠随机分为对照组、模型组、金匮低剂量组(0.35 g/kg)、金匮中剂量组(0.70 g/kg)、金匮高剂量组(1.40 g/kg),每组10只,除对照组正常饲养外,其余各组小鼠均构建糖尿病性AD小鼠模型,高脂饲料连续喂养4 w后一次性腹腔注射65 mg/kg链脲佐菌素(STZ)溶液,模型构建成功后按照各组给药剂量灌胃给药30 d,对照组、模型组以生理盐水替代;Morris水迷宫检测小鼠行为学变化,血糖仪检测各组小鼠血糖水平,血液流变分析仪测定小鼠全血黏度、血浆黏度、血细胞比容、红细胞变形指数,胰岛素酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒测定小鼠血清胰岛素水平,根据公式计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),小鼠β淀粉样蛋白(Aβ)42 ELISA试剂盒测定脑组织中Aβ42含量,原位末端标记法(TUNEL)测定小鼠海马组织神经元凋亡情况,Western印迹检测小鼠海马组织中凋亡相关、PI3K/Akt相关蛋白表达情况。结果与对照组相比,模型组小鼠潜伏期显著升高,穿台次数显著减少,全血黏度、血浆黏度、血细胞比容、红细胞变形指数、血糖水平、血清胰岛素水平、HOMA-IR、脑组织Aβ42含量、神经元细胞凋亡率、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Bcl相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平显著升高,B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、PI3K/Akt相关蛋白表达显著降低(均P<0.05);与模型组相比,金匮各剂量组小鼠潜伏期显著降低,穿台次数显著增多,全血黏度、血浆黏度、血细胞比容、红细胞变形指数、血糖水平、血清胰岛素水平、HOMA-IR、脑组织Aβ42含量、神经元细胞凋亡率、Caspase-3、Bax蛋白表达水平显著降低,Bcl-2、PI3K/Akt相关蛋白表达显著升高(均P<0.05),其中高剂量金匮肾气丸效果较好。结论金匮肾气丸可显著降低糖尿病性AD小鼠脑神经元凋亡,其机制可能与激活PI3K/Akt有关。

cAMP/CREB信号通路与七氟醚麻醉致大鼠认知功能损伤及神经细胞凋亡的关系探究

目的 探究环腺苷酸/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP/CREB)信号通路与七氟醚麻醉致大鼠认知功能损伤及神经细胞凋亡的关系。方法 将30只SD大鼠随机分为对照组、七氟醚组及cAMP/CREB信号通路激动剂8-溴-环腺苷酸(8-Br-cAMP)+七氟醚组,8-Br-cAMP+七氟醚组侧脑室注射8-Br-cAMP 10μL,注射10 min后,七氟醚组、8-Br-cAMP+七氟醚组大鼠吸入3%七氟醚6h,麻醉24 h后,比较各组大鼠行为学表现、海马组织神经元数量与凋亡情况、海马组织中氧化应激指标及cAMP/CREB信号通路蛋白表达水平。结果 与对照组比较,七氟醚组和8-Br-cAMP+七氟醚组大鼠逃避潜伏期、海马组织CA1区凋亡神经细胞数明显增加,穿越平台次数、海马组织CA1区尼氏小体数、SOD、GSH活性、cAMP、PKA、CREB及BDNF表达水平明显减少或降低(P<0.05);与七氟醚组比较,8-Br-cAMP+七氟醚组大鼠逃避潜伏期、海马组织CA1区凋亡神经细胞数明显减少,穿越平台次数、海马组织CA1区尼氏小体数、SOD、GSH活性、cAMP、PKA、CREB及BDNF表达水平明显增加或升高(P<0.05)。但三组大鼠自发活动总路程和悬吊时间的比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 cAMP/CREB信号通路可能参与七氟醚麻醉致大鼠认知功能损伤激神经细胞凋亡过程。

抑制AMPK介导上调Bim在大鼠蛛网膜下腔出血后早期皮层神经元凋亡中的影响

观察抑制AMPK介导上调Bim对大鼠SAH后早期皮层神经元凋亡的影响。方法 选择108只SPF级雄性大鼠,同一条件饲养1周后建立SAH模型,将大鼠随机分为假手术组、药物干预组、盐水对照组。进行AMPK mRNA、p-AMPK组织细胞定位,检测造模后不同时间点额底皮质相关蛋白表达情况。结果 SAH造模后AMPKα mRNA表达与盐水对照组、假手术组差异显著(P<0.05);SAH组p-AMPK、Bim、caspase-3蛋白在造模后不同时段呈高表达,组间比较P<0.05;与假手术组神经行为学评分相比,SAH组大鼠明显较低,经过Compound C干预,大鼠神经行为评分提升。结论 AMPK通路在大鼠SAH早期脑损伤所致皮层神经元凋亡中有参与作用,抑制AMPK介导上调Bim,可对神经元起到保护作用。

火针调控脊髓损伤后神经细胞凋亡靶点的实验研究

目的:观察火针对神经细胞凋亡及其相关靶点关键蛋白表达的影响,探讨火针改善脊髓损伤(SCI)后神经细胞凋亡的机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和火针组,每组分为1 d、3 d、7 d和14 d共4个时点。采用电动颅脑脊髓损伤撞击仪制备SCI模型,对火针组采用相应的干预方法,相应时点进行神经功能评分(BBB)、TUNEL检测和Western-blot检测。结果:BBB行为学评分显示,与假手术组比较,火针组在1 d、3 d、7 d及14 d神经运动功能情况均明显较低,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,火针组在1 d、3 d、7 d及14 d神经运动功能情况均明显较高,差异具有统计学意义(P<0.05)。神经细胞凋亡结果显示,SCI后,与假手术组相比,模型组凋亡细胞明显增多,凋亡指数明显增加;与模型组相比,火针组大鼠脊髓损伤部位凋亡细胞减少,凋亡指数明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且火针组凋亡指数14 d时最低。DAP12、p-PI3K及TGF-β蛋白表达结果显示,与假手术组相比,模型组大鼠DAP12蛋白相对表达量在各个时点均有增高的趋势,差异无统计学意义(P>0.05),与模型组比较,火针组在各个时点DAP12蛋白相对表达量有增高的趋势,7 d时增加最明显,差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组比较,模型组p-PI3K蛋白相对表达量在各个时点均有增高的趋势,仅在1 d时差异有统计学意义(P<0.05),与模型组比较,火针组在1 d、3 d和14 d时p-PI3K蛋白相对表达量降低,在7 d时p-PI3K蛋白相对表达量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与假手术组比较,模型组在1 d、7 d与14 d时TGF-β蛋白表达量均增高,仅在14 d时差异有统计学意义(P<0.05),与模型组比较,火针组在3 d、7 d时TGF-β蛋白表达量高于模型组,但仅在3 d时差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:火针能调控SCI后p-PI3K、TGF-β及DAP12蛋白的表达,从而改善神经细胞凋亡,促进SCI后神经运动功能恢复。

神经细胞凋亡与血管性痴呆疾病关系的研究进展

血管性痴呆(VaD)已成为继阿尔茨海默病(AD)之后第二大常见的痴呆类型,其特征是记忆和认知障碍。目前,因VaD的发病机制尚不完全明确,尚无VaD治疗的统一标准。VaD是由大脑血流受阻或减少导致的,这将剥夺神经元关键营养物质,这种剥夺最终导致神经元细胞凋亡或死亡,脑组织萎缩或坏死。神经细胞凋亡是神经退行性疾病的主要病理特征之一,其在VaD的研究中也越来越受到重视。文章主要对神经细胞凋亡与VaD关系的研究进展进行综述。

ATM失活诱导GADD45α依赖的小脑颗粒神经元凋亡

【目的】探究共济失调毛细血管扩张突变(ATM)激酶失活诱导神经元凋亡的具体分子机制。【方法】体外成熟7 d的小脑颗粒神经元(CGNs)分别用含25 mmol/L KCl(25 K)培养基、5 mmol/L KCl(5 K)培养基和含ATM特异性抑制剂(Ku55933,10μmol/L;Ku60019,15μmol/L)的25 K培养基后进行免疫印迹检测ATM、Caspase3、Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平或培养8 h后进行Hoechst染色分析。在C6细胞和CGNs中转染ATM和GADD45α特异性siRNA,q-PCR和免疫印迹验证其干扰效率。体外成熟5 d的CGNs通过磷酸钙转染ATM特异性siRNA和pCMV-EGFP 48 h后进行Hoechst染色和凋亡分析。体外成熟7 d的CGNs用含ATM特异性抑制剂的25 K培养基培养8 h后进行全转录组测序、差异表达基因鉴定和通路富集分析。体外成熟5 d的CGNs通过磷酸钙转染GADD45α特异性siRNA和pCMV-EGFP 48 h,用含15μmol/L Ku6的25 K培养基处理8 h或5 K培养基处理8 h后进行Hoechst染色和凋亡分析。【结果】与25 K组相比,5 K处理组和ATM特异性抑制剂处理组的CGNs ATM蛋白表达降低、Cleaved Caspase-3蛋白表达增加、细胞核固缩率增加。C6细胞和CGNs中转染ATM和GADD45α特异性siRNA后有效降低ATM和GADD45α的mRNA和蛋白的表达。与对照相比,CGNs转染ATM特异性siRNA后,细胞核固缩率升高。在Ku55933处理组中鉴定出835个基因表达上调,848个基因表达下调;在Ku60019处理组中鉴定出454个基因表达上调,314个基因表达下调;274个基因在Ku5处理组和Ku6处理组中共同上调,179个基因在Ku5处理组和Ku6处理组中共同下调,其中ATM下游靶标GADD45α表达上调;通路富集结果显示TNF信号通路、NF-κB信号通路和凋亡信号通路等被显著富集。与对照相比,抑制剂处理组和5K组GADD45α的mRNA和蛋白表达均升高。与对照相比,转染GADD45α特异性siRNA后用含15μmol/L Ku60019的25 K培养基处理8 h或5 K培养基处理后的CGNs细胞核固缩率降低。【结论】ATM活性降低诱导GADD45α依赖的神经元凋亡。

当归芍药散对血管性痴呆大鼠炎症因子及神经细胞凋亡的影响

目的:探讨当归芍药散对血管性痴呆模型大鼠炎症因子、神经细胞凋亡的影响。方法:采用双侧颈动脉永久结扎法制备血管性痴呆模型大鼠,随机分为假手术组、模型组、当归芍药散低剂量组、当归芍药散高剂量组、尼莫地平组。当归芍药散低剂量组给予当归芍药汤1.8 g/kg;当归芍药散高剂量组给予当归芍药汤7.2 g/kg;尼莫地平组给予尼莫地平片20 mg/kg;假手术组、模型组均给予等体积蒸馏水。各组大鼠给药频率为1次/d,持续灌胃4周。采用Morris水迷宫实验计算大鼠逃避潜伏期、穿越平台次数,测定大鼠认知功能;HE染色观察大鼠海马神经元病理变化及神经细胞凋亡情况;Western blotting检测大鼠Bcl-2、Bax蛋白表达;免疫组化染色检测大鼠Bcl-2、Bax平均吸光度值;ELISA测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)含量。结果:与假手术组相比,模型组病理学结构疏散,排列紊乱,逃避潜伏期时间延长,穿越平台次数减少。模型组大鼠炎症因子、Bax蛋白表达均高于假手术组,Bcl-2蛋白则较低,差异有统计学意义(均P<0.01)。与模型组相比,当归芍药散各剂量组病理学形态明显改善,逃避潜伏期时间缩短,穿越平台次数增加。当归芍药散各剂量组炎症因子、Bax蛋白均低于模型组,而Bcl-2蛋白则较高,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论:当归芍药散对血管性痴呆大鼠具有积极治疗效果,其机制与降低炎症因子、抑制神经细胞凋亡有关。

桑黄素通过抑制TXNIP/NLRP3/Caspase-1信号通路对脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡的影响

目的探讨桑黄素(Morin)通过调控硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶1(Caspase-1)信号通路,对脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡的影响。方法将60只大鼠随机均分为假手术组、模型组、Morin低剂量(Morin-L,10 mg/kg)组、Morin高剂量(Morin-H,40 mg/kg)组、Morin-H+pLVXNC组(40 mg/kg Morin+pLVX-NC)、Morin-H+pLVX-TXNIP组(40 mg/kg Morin+pLVX-TXNIP)。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型(除外假手术组),给药1 h后再灌注。再灌注72 h后,进行神经功能缺损评分;取出全脑进行脑含水量测定;苏木精-伊红(HE)染色观察脑皮质半暗带病理损伤情况;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)检测脑组织梗死面积;酶联免疫吸附试验检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-18含量;Western blot检测脑皮质中TXNIP/NLRP3/Caspase-1信号通路蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分,IL-1β、IL-18水平,脑含水量,梗死面积,TXNIP、NLRP3、Caspase-1蛋白表达均增加(P<0.05);与模型组比较,Morin-L组、Morin-H组神经功能缺损评分,IL-1β、IL-18水平,脑含水量,梗死面积,TXNIP、NLRP3、Caspase-1蛋白表达均降低(P<0.05);与Morin-H+pLVX-NC组比较,Morin-H+pLVX-TXNIP组神经功能缺损评分,IL-1β、IL-18水平,脑含水量,梗死面积,TXNIP、NLRP3、Caspase-1蛋白表达增加(P<0.05)。结论Morin可以减轻脑缺血再灌注大鼠脑损伤,抑制神经元凋亡,作用机制可能与抑制TXNIP/NLRP3/Caspase-1信号通路活化有关。

右美托咪定对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征大鼠海马神经元凋亡的影响及其机制研究

目的探究右美托咪定(Dex)对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)大鼠海马神经元凋亡的影响,并分析其作用机制。方法45只SD雄鼠随机选取10只作为对照组,其余大鼠复制OSAS模型,5只大鼠窒息死亡,剩余30只大鼠成功复制OSAS模型并随机分为OSAS组及Dex高、低剂量组,每组10只。Dex高、低剂量组分别腹腔注射Dex 2.5、0.5μg/(kg·d),对照组与OSAS组给予等剂量的生理盐水。连续干预4周后,采用神经监测仪监测大鼠呼吸暂停情况、平均及最低血氧饱和度,苏木精-伊红染色观察海马组织CA1区病理学改变,流式细胞术检测大鼠海马组织神经元凋亡,Western blotting检测核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO-1)通路相关蛋白的表达。结果与对照组比较,OSAS组呼吸暂停次数增多(P<0.05),平均及最低血氧饱和度降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),Nrf2、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及HO-1蛋白相对表达量升高(P<0.05);与OSAS组比较,Dex高、低剂量组呼吸暂停次数减少(P<0.05),平均及最低血氧饱和度升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),Nrf2、HIF-1α及HO-1蛋白相对表达量降低(P<0.05);与Dex低剂量组比较,Dex高剂量组呼吸暂停次数减少(P<0.05),平均及最低血氧饱和度升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),Nrf2、HIF-1α及HO-1蛋白相对表达量降低(P<0.05)。结论Dex能够改善OSAS大鼠呼吸暂停及血氧饱和度,抑制海马神经元凋亡,其机制可能与Nrf2/HO-1通路有关。

益肾调督针法对脑缺血再灌注模型大鼠大脑海马神经元凋亡及JNK、p-JNK表达的影响

目的:研究益肾调督针法对脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡的影响。方法:SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和益肾调督针法组,每组10只。除假手术组外,其余各组均应用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型。益肾调督针法组予针刺百会、风府、大椎、命门及双侧肾俞和太溪穴,于缺血再灌注24 h后针刺1次。应用Zea-Longa评分法评估各组大鼠神经功能,应用HE染色观察大鼠海马神经细胞病理形态学变化,应用TTC染色法观察大鼠脑组织梗死情况,TUNEL法检测海马神经细胞的凋亡情况,免疫荧光技术检测JNK、p-JNK的表达情况。结果:与假手术组比较,模型组的神经行为学评分显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01),大鼠海马神经细胞排列散乱,核固缩、深染,脑组织相对梗死体积百分比增大,差异具有统计学意义(P<0.05),凋亡神经元数量、JNK及p-JNK阳性表达均明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,益肾调督针法组大鼠的神经行为学评分显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01),海马神经细胞形态改善,脑组织相对梗死体积百分比明显缩小,差异具有统计学意义(P<0.05),凋亡神经细胞数目、JNK及p-JNK阳性表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:益肾调督针法能有效改善缺血再灌注大鼠神经功能缺损情况,下调海马区JNK和p-JNK的表达,减少神经细胞凋亡,这可能是其防治脑缺血再灌注损伤的机制。